- 金明兰;侯继波;郑其升;鲁会军;刘春霞;南文龙;任静强;韩松;金宁一;
应用纯化兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),接种小鼠、豚鼠、SPF鸡、仔猪4d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将上述动物进行3次免疫,三免后10d分离外周血淋巴细胞进行IFN-γ、IL-4、WST检测病毒刺激指数(SI)。结果显示,通过电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,而肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-4检测数高对照组。结果表明,RHDV在多种属动物分布规律相同,均能产生细胞免疫反应,为下一步试验奠定基础。
2013年05期 v.33;No.197 645-649页 [查看摘要][在线阅读][下载 313K] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：459 ] - 庄金秋;王金良;梅建国;沈志强;丁壮;
病料应用套式RT-PCR检测呈现PEDV阳性,经处理将其接种到含终质量浓度50mg/L胰酶的Vero细胞上进行病毒分离传代,盲传到10代左右开始出现局灶性CPE,20代以后特征性CPE稳定出现。将病毒Vero细胞培养物应用毒价测定及病毒中和试验、套式RT-PCR和间接免疫荧光进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为PEDV,并将其命名为PEDV SDbz株。
2013年05期 v.33;No.197 650-653页 [查看摘要][在线阅读][下载 492K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：511 ] - 刘婉思;高宏雷;秦立廷;杨波;么帅;高玉龙;曾祥伟;王笑梅;
利用MDCC细胞系从东北地区采集的死亡野生鸟类样品中分离获得1株禽类病毒,对该病毒进行特异性PCR、特异性间接免疫荧光法等系统鉴定后,证实该分离株为鸡贫血病病毒(CAV),命名为WDNE110501株。利用PCR方法克隆出其编码区基因片段,测序结果表明,WDNE110501株的编码区全长为1823bp,无碱基缺失或插入。并将该基因序列和推导的氨基酸序列与国内外已发表的34个CAV株编码区基因进行同源性和亲缘关系的比对分析,同源性为96.1%～99.8%;氨基酸的同源性为89.8%～99.7%,与国内毒株harbin的差异最小,与国外最近的是美国毒株98D02152。序列比较表明CAV的3个编码基因VP1、VP2和VP3均有一定程度变异,以VP1变异性最大,且在不同毒株间的这3个阅读框的氨基酸序列变异是互不相关的。这是首次在野生鸟类中分离出CAV病毒,提示了我们野生鸟类在鸡传染性贫血病病毒传播和分布中可能起到一定作用。
2013年05期 v.33;No.197 654-658+679页 [查看摘要][在线阅读][下载 858K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：667 ] - 王明月;窦文文;陈立坤;孙娜娜;李宏梅;赵鹏;崔治中;郭慧君;
本研究探讨不同检测方法或样品等因素对ALV检测结果的影响,为建立我国种鸡场禽白血病净化检测和临床鉴别诊断方法提供科学依据。我们对从我国不同种禽场获得的蛋清和泄殖腔棉拭子进行ALV抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)比较检测;对上述不同检测结果区间的鸡只使用细胞培养分离病毒方法进行比较检验检测;对血清、血浆和蛋清样品使用DF1细胞和CEF进行病毒分离比较检测。结果,使用泄殖腔棉拭子和蛋清检测ALV P27的ELISA之间存在高度相关性,且蛋清检测更为灵敏(线性关系方程为Y(蛋清)=1.3765 X(泄殖腔)+0.0363,相关系数为0.9588)。ELISA直接检测值(S/P值)不小于1.5(蛋清)或2.0(泄殖腔棉拭子)的鸡只,分离外源性ALV的比例为100%;检测值不小于1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)的鸡只,病毒分离比例在90%以上;检测值为0.2以上的鸡只,病毒分离比例仅为59%(蛋清)和32.4%(泄殖腔棉拭子);而且,至少10%得检测值小于0.2的鸡只仍能用细胞分离到病毒;另外,对相同鸡只,使用蛋清分离病毒的比例为21%,而血清为8.5%;从相同蛋清中使用DF1细胞分离病毒的比例为27.84%,而CEF为17.53%。结果表明,蛋清较泄殖腔棉拭子ELISA检测更敏感;90%以上检测值在1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)以上的鸡只,使用DF1细胞能够分离病毒;比较发现蛋清较血清,DF1细胞较CEF分离检测病毒更敏感。该研究结果结论对在我国种鸡群实施ALV净化建立包括泄殖腔棉拭子或蛋清进行ALV P27抗原ELISA检测以及细胞分离ALV方法相结合的综合检测方法提供科学依据。
2013年05期 v.33;No.197 659-663页 [查看摘要][在线阅读][下载 612K] [下载次数：285 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：515 ] - 贾启恒;温洁霞;王利月;林洪羽;张峰;王璐;孙岩;李秀锦;仲飞;
犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫增强作用。首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因,并将其插入到pcDNA3.1载体上,分别构建该基因的两个分泌型真核表达载体,即非融合表达载体pcDNA-cGMCSF和与Myc-His融合的表达载体pcDNA-cGMCSF/MH。用pcDNA-cGMCSF/MH载体转染HEK293T细胞以确定GM-CSF基因能否在真核细胞中进行分泌表达。然后用本室构建的VP2基因表达载体单免疫小鼠,用VP2表达载体与pcDNA-cGMCSF共免疫小鼠(pcDNA3.1空载体作为阴性对照)。免疫后用ELISA方法检测不同时间小鼠血清的抗体水平。用MTT法检测小鼠免疫后35d时淋巴细胞的增殖活性,同时用ELISA试剂盒检测小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。结果表明,本试验构建的表达载体能够介导重组GM-CSF在真核细胞中进行分泌表达。免疫实验表明,利用GM-CSF基因与VP2基因共免疫小鼠,抗体的水平明显高于VP2基因单免疫组(P<0.01)。共免疫组小鼠淋巴细胞的刺激指数和γ干扰素的表达水平均明显高于单免疫组(P<0.05)。由此可见,GM-CSF表达载体可明显提高CPV VP2DNA疫苗的免疫应答水平。
2013年05期 v.33;No.197 664-669页 [查看摘要][在线阅读][下载 626K] [下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：603 ] - 杨文涛;丁红研;付世新;邓清华;宋玉祥;史晓霞;张璐莹;张仁和;郭立辉;刘芳宁;刘兆喜;李心慰;陈灰;张良;赵晨旭;李小兵;王哲;
将携带有化学合成的SREBP-1c基因的质粒先用XbaⅠ酶切,Klenow补平突出末端,纯化回收后再用HindⅢ酶切,切胶回收目的基因片段;并将其克隆至用EcoRⅤ/HindⅢ酶切回收的pShuttle-EGFP-CMV(-)TEMP穿梭载体上。经酶切鉴定后,重组穿梭质粒和腺病毒pAdxsi质粒分别用I-CeuⅠ+I-SceⅠ双酶切处理,T4DNA连接酶连接,获得重组质粒pAdxsi-GFP-SREBP1c,酶切鉴定后经Pac I酶切线性化转染HEK293细胞,经包装扩增后用TCID50测定病毒滴度。以重组腺病毒感染犊牛原代肝细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达量。结果显示,重组腺病毒酶切鉴定正确,滴度可达1.2×1010,腺病毒感染犊牛原代肝细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达显著升高。结果表明,本试验成功构建了SREBP-1c基因过表达重组腺病毒,且SREBP-1c在犊牛原代肝细胞中高度表达。
2013年05期 v.33;No.197 670-674页 [查看摘要][在线阅读][下载 660K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：564 ] - 朱洪云;陈志虎;
鸭疫里默杆菌病给全世界养鸭业带来了严重的经济损失,但人们对其毒力因子以及致病的分子机理,尤其是宿主对感染的应答反应还缺乏深入认识。本研究利用抑制消减杂交技术(SSH)构建了鸭疫里默杆菌感染过程中鸭肝脏组织差减cDNA文库,通过PCR和斑点杂交筛选到45个在鸭疫里默杆菌感染过程中鸭肝脏组织差异表达的基因,这些基因的功能分为急性期反应、炎症反应、免疫和防御应答、损伤修复以及其他功能。利用real-timeRT-PCR对其中20个基因的在感染过程中不同时间段(8、24和48h)表达水平进行了验证,结果表明这些基因在鸭疫里默杆菌感染过程中表达水平都有不同程度的上调或下调(P<0.05或P<0.01)。试验结果表明,鸭疫里默杆菌感染引起鸭肝脏的一系列反应,包括急性期反应、炎症反应、免疫应答以及损伤修复等,通过对这些基因的差异调节,一方面维持机体的内环境平衡状态,另一方面启动机体的免疫系统识别和抵抗病原菌的侵袭。
2013年05期 v.33;No.197 675-679页 [查看摘要][在线阅读][下载 657K] [下载次数：64 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：398 ] - 孔德龙;潘晓燕;秦莹;殷玉鹏;安培培;陈玥;唐博;李子义;
本研究对金黄地鼠Kcnq1基因进行分子克隆与鉴定以及在多种器官组织的表达差异进行分析,旨在研究Kcnq1基因在地鼠各组织器官中的功能。提取金黄地鼠心脏组织总RNA,根据大鼠Kcnq1的保守序列区域设计引物TK1,用RT-PCR化后的cDNA在T4连接酶的作用下与pMD18-T载体特异性连接,转化感受态大肠杆菌DH5a中,筛选重组子并酶切鉴定,将鉴定后的重组子进行DNA测序。提取心、肝、脾、肺、肾各组织总RNA,并反转,将各组织cDNA做荧光定量检测,检测各组织表达量的差异。结果,克隆出金黄地鼠Kcnq1基因477bp的部分片段长度,推测出编码的159个氨基酸。与大鼠等物种Kcnq1基因比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性。荧光定量结果显示,Kcnq1在金黄地鼠心脏中表达量最高,在肺脏和肾脏中均有较高表达,在脾脏中低度表达,在肾脏中基本不表达。该研究结果为深入研究金黄地鼠KCNQ1基因功能奠定了基础。
2013年05期 v.33;No.197 680-683页 [查看摘要][在线阅读][下载 602K] [下载次数：73 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：400 ] - 苏倩倩;王肖祎;李恩扩;彭志成;胡敬东;
将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin 18,mChIL-18)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌中高效表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了mChIL-18蛋白,并获得2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1G9、2E6),其腹水ELISA效价分别为1:5.12×105和1:3.2×104,亚类鉴定结果均为IgM。Western blot结果显示,2株单抗均能特异性识别原核表达的mChIL-18蛋白,IFA分析表明它们均能与真核表达的mChIL-18发生特异性反应,ELISA叠加试验证实1G9与2E6针对2个不同的抗原表位。本研究所获单抗可以用于建立鸡IL-18的检测方法,为进一步开展其生物学功能研究奠定了基础。
2013年05期 v.33;No.197 684-688页 [查看摘要][在线阅读][下载 828K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：432 ] - 王金良;孙翠平;谢金文;祖立闯;魏凤;董炳梅;沈志强;
依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别。本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础。
2013年05期 v.33;No.197 689-692页 [查看摘要][在线阅读][下载 648K] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：423 ]
- 宫强;程茗;牛明福;秦翠丽;孙晓菲;
以限制性内切酶Sau3AⅠ酶切禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA,回收500～3000bp的DNA片段,连接真核表达载体pcDNA3.1(+),电转化于大肠杆菌感受态细胞TG1中,构建禽多杀性巴氏杆菌的基因组表达文库。将文库随机分为5个子文库(子文库Ⅰ-子文库Ⅴ),分别提取各子文库重组质粒,以pcDNA3.1(+)和PBS为对照进行动物试验,每组16只BALB/c小鼠,各子文库组和pcDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周。间接ELISA检测免疫小鼠的血清抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ的分泌情况。强毒攻击,计算小鼠的相对保护率。结果显示,动物免疫后子文库Ⅰ组质粒免疫的小鼠血清抗体水平及淋巴细胞增殖水平和IFN-γ分泌水平均持续上升,明显高于其他各组(P<0.05)。动物攻毒试验表明,各子文库组的重组质粒均可为免疫小鼠提供一定的保护,其中第Ⅰ组的保护效果最好,说明子文库Ⅰ组中含有较好的保护性抗原基因,这为进一步筛选相关的免疫原基因和研制新型疫苗奠定了的基础。
2013年05期 v.33;No.197 693-696页 [查看摘要][在线阅读][下载 693K] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：409 ] - 王莹;高云航;马红霞;裴志花;唐艳;
采用牛多杀性巴氏杆菌针刺法诱导3日龄家蝇幼虫,提取诱导后的家蝇幼虫总RNA并分离纯化得到高质量的mRNA。运用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建家蝇幼虫差异表达的cD-NA消减文库,并利用反向Northern杂交技术筛选差异表达基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆片段大小均在200～750bp,通过反向Northern杂交共筛选出183个差异表达基因,经BLAST比对分析后鉴定出大量与家蝇免疫防御功能相关的基因和一部分无同源性基因。
2013年05期 v.33;No.197 697-700页 [查看摘要][在线阅读][下载 662K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：419 ] - 齐萌;高庚渠;黄磊;徐利纳;乔亚辉;卫九健;菅复春;张龙现;宁长申;
为研究不同禽源贝氏隐孢子虫对雏鸡的致病性差异,人工感染3日龄雏鸡鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源贝氏隐孢子虫。结果发现,各感染组雏鸡潜隐期均为4d,显露期为11～18d,均未发生死亡,但其增重均受影响。鸡源C.baileyi(林州株)、C.baileyi(郑州株)和鸭源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡临床症状较为明显,发病率较高,分别为71.4%、85.7%和77.1%,剖检可见气管有较多粘液分泌物,法氏囊粘膜充血肿胀,平均增重较不感染对照组分别减少34.5、53.1和19.7g;鹌鹑源C.bailey(武陟株)和白文鸟源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡仅部分表现轻微临床症状,发病率分别为31.4%和28.6%,平均增重较不感染对照组分别减少39.7和43.1g。结果表明不同禽源C.bailey对雏鸡均有不同程度的致病性,以鸡源和鸭源C.baileyi致病性较强。
2013年05期 v.33;No.197 701-705页 [查看摘要][在线阅读][下载 739K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：385 ]
- 朱僧;李娜;孙长江;韩文瑜;雷连成;
血脑屏障是隔离外周体循环和中枢神经系统的屏障结构。它可以选择性允许血液中的一些物质通过脑微血管内皮细胞进入大脑中。除了脑微血管内皮细胞之外,血脑屏障的组成主要还有星型胶质细胞、周细胞、神经元和细胞外基质。本试验通过原代培养猪脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞,以Transwell细胞板为载体构建猪体外血脑屏障的共培养模型。经过4h渗漏试验和TEER电阻的测定试验显示所构建的猪体外血脑屏障的模型具备了血脑屏障基本的生物学特性,可以用于猪血脑屏障相关疾病尤其是人兽共患性疾病致病机制的研究。
2013年05期 v.33;No.197 706-709页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K] [下载次数：417 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：517 ] - 袁莉芸;朱丽;郭成志;薛立群;袁慧;
以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模板,研究了玉米赤霉烯酮(ZEA)对该细胞的毒性作用。结果表明,在所测浓度范围内,ZEA对卵巢颗粒细胞活性具有明显的抑制作用,且抑制作用随着浓度的增强而加大,并呈现剂量效应关系;60、90和120μmol/L的ZEA使细胞中的MDA含量均升高,呈现剂量效应关系;ZEA作用后,细胞中GSH-Px酶活力下降;TUNE检测发现凋亡细胞呈棕褐色,凋亡细胞间间隙明显加大,随着ZEA剂量的加大,棕褐色细胞逐渐增多,尤其是高剂量ZEA组,细胞核大部分被染成棕褐色,细胞皱缩,胞间几乎无连接;当Annexin标记FIFC、流式细胞仪检测发现,高剂量组(120μmol/L)ZEA处理后其凋亡率可达60.83%,坏死率很低,显示ZEA抑制猪卵巢颗粒细胞增殖主要是通过细胞凋亡,并非坏死途径。
2013年05期 v.33;No.197 710-714+726页 [查看摘要][在线阅读][下载 735K] [下载次数：405 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：382 ] - 刘兆喜;王建国;李玉;李心慰;杨文涛;陈灰;史晓霞;宋玉祥;周长领;王哲;刘国文;
评价氧化应激状态有助于理解奶牛代谢紊乱性疾病(如酮病等)的发病机制。本研究以牛肝细胞体外培养模型为基础,通过细胞培养液中添加不同浓度的β-羟丁酸(BHBA),运用分光光度方法和实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术,分别测定细胞裂解上清液中过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)的含量、总抗氧化能力(TCA)和过氧化氢酶(CAT)、总谷胱甘肽过氧化物酶(T-GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性,以及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达水平的变化。结果显示,随着BHBA浓度的增加,肝细胞中H2O2和MDA的含量呈剂量依赖性增加,添加BHBA 24h后,各组H2O2和MDA的含量均显著高于0、12和48h。各时间点TCA含量随添加BHBA浓度的增加而降低。添加BHBA 12h后,低浓度组(0.6mmol/L BHBA)T-SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达均显著高于对照组,高浓度组(1.2和2.4mmol/L BHBA)T-SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达均低于对照组;添加BHBA 24、48h后,T-SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mR-NA表达均随BHBA浓度的增呈剂量依赖性抑制。结果表明,添加低浓度的BHBA可以维持体外培养肝细胞中氧化抗氧化系统的动态平衡,但高浓度BHBA影响该动态平衡,导致肝细胞处于氧化应激状态,引起氧化应激损伤,进而影响肝细胞的正常生理功能。
2013年05期 v.33;No.197 715-721页 [查看摘要][在线阅读][下载 994K] [下载次数：388 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：560 ] - 颜晨;逯凯;张灿;刘文华;邹玲;任慧英;
为了研究噬菌体尾丝蛋白gp35、gp38在噬菌体宿主识别中的作用,扩增并克隆gp35、gp38基因,分别构建重组表达质粒,得到重组融合蛋白后免疫家兔制备多克隆抗体,并检测不同的抗血清对噬菌体增殖的影响。结果显示,经SDS-PAGE及Western blot鉴定证实得到含有GST标签的67000、53000的gp35、gp38重组融合蛋白;抗噬菌体Bp7尾丝蛋白gp38与gp35的抗血清均能明显抑制噬菌体Bp7的增殖,而其中gp38的抗血清更是能完全抑制Bp7增殖,证明gp35、gp38参与噬菌体Bp7的宿主识别过程。
2013年05期 v.33;No.197 722-726页 [查看摘要][在线阅读][下载 752K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：446 ] - 李乾学;夏志平;吴永魁;陈阳阳;
MTT法检测新鱼腥草素钠对脾细胞的增殖反应,胸腺细胞增殖法检测新鱼腥草素钠对脾细胞分泌IL-2的影响。在脾细胞培养液含有2.5mg/L ConA的条件下,128及256mg/L新鱼腥草素钠能够促进脾细胞增殖,与2.5mg/L ConA组对照,经统计学检验,差异有显著性(P<0.01)。64、128及256mg/L新鱼腥草素钠表现出提高脾细胞培养透析液中的IL-2水平的作用,与2.5mg/L ConA组比较,经统计学检验,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。
2013年05期 v.33;No.197 727-729+737页 [查看摘要][在线阅读][下载 716K] [下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：440 ] - 蓝田丰;艾纯旭;衣帅;高巍;袁宝;陈建;胡进平;杜小燕;任文陟;陈振文;
为了建立小鼠亚慢性镉中毒模型,本研究将20只C57BL/6J雄性小鼠随机分为4个剂量组和溶剂对照组,每组隔天分别腹腔注射含0.25、0.5、1和2mg/kg剂量的氯化镉溶液和等量去离子水(溶剂),共染毒4周,观察不同剂量的镉离子对雄性小鼠肝脏、肾脏、睾丸的损伤情况。结果各处理组小鼠体质量增长要比对照组慢,脏器系数与对照组相比也有显著差异,处理组小鼠肝脏、肾脏、睾丸中镉含量显著高于对照组。病理组织切片结果表明,各处理组中小鼠的肝脏、肾脏、睾丸组织均出现不同程度的损伤。氯化镉可以显著地抑制小鼠体质量增长,并对小鼠的脏器系数产生影响,腹腔注射后在肝脏、肾脏、睾丸组织中产生蓄积,并对其造成一定损伤。隔天腹腔注射2mg/kg剂量的氯化镉,4周可建立较理想的小鼠镉中毒模型。
2013年05期 v.33;No.197 730-733页 [查看摘要][在线阅读][下载 1136K] [下载次数：441 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：521 ] - 王娅;邓俊良;王哲;左之才;胡延春;
取体外培养单层生长良好脂肪细胞,培养介质中分别添加0、10、20、30、40、50μg/L的胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ),0、100、250、500、750、1000nmol/L的胰高血糖素样肽Ⅰ(GLP-Ⅰ),培养24h后提取总蛋白,每个处理3个重复,分别采用脂肪酶测定试剂盒检测HSL酶活性的影响。结果表明,IGF-Ⅰ、GLP-Ⅰ抑制脂肪细胞内HSL酶活性,存在剂量依赖性。
2013年05期 v.33;No.197 734-737页 [查看摘要][在线阅读][下载 637K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：399 ] - 付应霄;顾建红;赵鸿雁;刘伟;仝锡帅;刘学忠;卞建春;刘宗平;
旨在探讨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)对破骨细胞(osteoclast,OC)活性的影响。采用小鼠原代OC模型,在体外培养的基础上添加不同浓度OPG,通过TRAP阳性细胞计数、细胞骨架F-actin染色、骨吸收功能检测等手段,观察OPG对体外培养OC的作用。结果发现,OPG能够直接作用于OC,减少其数量,破坏其F-actin环,减弱其骨吸收活性,且随OPG浓度的增加,对OC的影响更加明显。结果表明,OPG能够减少OC数量并抑制其骨吸收活性,呈现剂量效应。
2013年05期 v.33;No.197 738-741页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K] [下载次数：199 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：457 ]
- 邓惠丹;陈仓良;邓俊良;陈张华;左之才;任志华;王娅;
为了研究复方中药"猪康散"对断奶仔猪体液免疫功能的影响,选取20日龄体质量相近的杜长大仔猪40头随机分为4组。21日龄免疫猪瘟弱毒苗,27～31日龄分别在基础日粮中添加0%、0.5%、1.0%、2.0%"猪康散"。在35、45、55、65日龄时各组随机选取4头猪前腔静脉采血,对体液免疫指标进行分析。结果表明,复方中药"猪康散"可通过提高猪瘟抗体水平、免疫球蛋白含量和增强B细胞的增殖反应等途径,增强机体的体液免疫功能,其中以"猪康散"1.0%添加组效果最佳。
2013年05期 v.33;No.197 742-745页 [查看摘要][在线阅读][下载 666K] [下载次数：265 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：437 ] - 尹柏双;李晓波;石星星;李志强;张建涛;高利;王洪斌;
研究阿替美唑对小型猪特异性麻醉剂(XFM)麻醉下大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达的影响,探讨阿替美唑颉颃XFM催醒大鼠与脑皮质c-jun基因的关系。将78只SD纯种大鼠随机分为XFM对照组、XFM+阿替美唑组、XFM+生理盐水组。采用蛋白质印迹法检测大脑皮质内c-jun蛋白表达量。结果表明,XFM麻醉大鼠大脑皮质内c-jun蛋白表达量逐渐增加,与给药前0min比较差异显著(P<0.01或P<0.05);XFM麻醉大鼠腹腔注射生理盐水,各时间点c-jun蛋白表达与对照组间比较无显著差异(P>0.05);阿替美唑注射后引起XFM麻醉大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达减少,与XFM对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05)。结果提示,大脑皮质c-jun基因参与了阿替美唑颉颃XFM麻醉作用。阿替美唑抑制XFM诱导大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达,可能是阿替美唑催醒XFM麻醉大鼠的重要机理之一。
2013年05期 v.33;No.197 746-749页 [查看摘要][在线阅读][下载 702K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：509 ] - 张鹏;杨自军;宋超;王亚垒;
2月龄雄性小尾寒羊12只,随机分为3组,Ⅰ组饲喂基础日粮(Mo 5.61mg/kg),Ⅱ、Ⅲ组饲喂高钼日粮(在基础日粮中分别添加30、60mg/kg的钼构成)。120d后取睾丸,检测精液品质,以流式细胞术和透射电镜的方法观察睾丸的变化。结果表明,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ组睾丸指数显著降低(P<0.01),精子密度和精子活力显著下降(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组之间差异显著(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组睾丸细胞G0/G1期显著升高,S期,G2+M期和增值指数(PI)显著降低(P<0.05或P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组之间各项指标差异极显著(P<0.01);Ⅱ、Ⅲ组睾丸细胞线粒体肿胀、空泡化,内质网扩张,胞核染色质边集,精子顶体膜模糊或缺损,Ⅲ组出现核溶解的现象。结论:日粮钼含量≥30mg/kg可造成小尾寒羊睾丸超微结构损伤,导致精液品质和生精功能下降。
2013年05期 v.33;No.197 750-753+758页 [查看摘要][在线阅读][下载 1305K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：439 ] - 张翠;张立艳;董海兵;白换力;伊鹏霏;付本懂;申海清;吕爽;吴帅成;宋舟;韦旭斌;
为了考察中药芪五加可溶性粉对靶动物的安全性。本试验将芪五加可溶性粉以每1kg体质量1.2、2、4g,相当于3、5和10倍于推荐剂量给鸡内服,连续用药7d,给药后详细观察受试鸡的一般临床表现、采食量与体质量变化、血液学及血清生化指标、剖检与病理组织学变化以及器官指数等。结果,3、5和10倍临床推荐剂量的芪五加可溶性粉未引起试验鸡发病、死亡和其他毒性反应。试验鸡精神状态、饮食欲及粪便无异常,生长发育良好,红细胞数、血红蛋白含量、白细胞总数和分类计数以及各项血清生化指标均在正常范围。心、肺、肝、肾、法氏囊各脏器的脏器指数与对照组相比均无显著差异(P>0.05),给药组鸡的法氏囊指数值较健康对照组有所增加。给药第3天时,3、5倍剂量组试验鸡的脾脏指数与健康对照组间有显著性差异(P<0.05),其余各时间段各试验组鸡脾脏指数与健康对照组间均无显著性差异(P>0.05)。组织切片观察,各脏器组织结构形态未发现有任何异常病变。以上结果表明,芪五加可溶性粉对靶动物具有较高的安全性。
2013年05期 v.33;No.197 754-758页 [查看摘要][在线阅读][下载 681K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：399 ] - 张义冉;胡迪;王家晶;王玲玲;姚路连;袁燕;顾建红;刘学忠;刘宗平;
为了研究镉对大鼠肝细胞系(BRL 3A细胞)DNA及线粒体损伤的作用,本研究选用0、10、20、40μmol/L的醋酸镉分别作用于BRL 3A细胞12h,利用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定细胞存活率,显微镜观察各组细胞形态,通过彗星试验法检测细胞DNA的损伤,用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,并检测细胞Caspase 3,9的活力。结果显示,随镉浓度的增大(10～40μmol/L),BRL 3A细胞存活率降低,拖尾率、尾长、尾部DNA含量、细胞Caspase 3,9的活力和线粒体变形肿胀以及空泡现象均呈增加趋势;表明镉可致BRL 3A细胞DNA及线粒体损伤,并呈剂量依赖关系。
2013年05期 v.33;No.197 759-763页 [查看摘要][在线阅读][下载 1249K] [下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：372 ] - 常馨月;张恩平;陈玉林;曾洁;
本研究旨在研究饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢及毛皮品质和KAP6.1基因时序表达的影响。选取120只90日龄健康獭兔随机分为4组(每组30个重复,每个重复1只兔),对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础饲粮中添加0.25%、0.35%、0.45%水平的半胱氨酸的试验饲粮,预饲期7d,正式期40d。结果,饲粮半胱氨酸水平0.25%、0.45%组末重显著高于0%、0.35%组(P<0.05)。饲粮半胱氨酸水平0.35%、45%组采食量(P<0.05)显著高于0%、0.25%组,对平均日增重、料重比无显著影响(P>0.05);半胱氨酸0.35%组食入氮、可消化氮极显著高于其他组(P<0.01),0.45%组的沉积氮显著高于对照组(P<0.05),对粪氮、尿氮、表观消化率、氮利用率、氮生物效价均无显著影响(P>0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45%组处理40d皮张面积显著大于其余各组(P<0.05)。饲粮半胱氨酸水平0.45%、0.35%组处理30d被毛密度显著高于0%、0.25%水平组(P<0.05),对皮张厚度无显著性影响(P>0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45%处理20d,KAP6.1基因在软骨、皮肤中表达量均显著高于其他组(P<0.05),而对处理10、30、40dKAP6.1基因在软骨、皮肤中表达量无显著影响(P>0.05)。综上所述,獭兔饲粮中半胱氨酸适宜添加量为0.45%,且110～120日龄使用效果最佳。
2013年05期 v.33;No.197 764-769页 [查看摘要][在线阅读][下载 851K] [下载次数：177 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：375 ] - 兰莹;欧阳五庆;吴小利;吴敬超;
本研究研制出一种以纳米乳为载体的质量稳定,高效的药物传递系统。通过伪三元相图法筛选配方,找到最佳配比;通过HPLC法及稳定性试验考察复方酮康唑纳米乳的稳定性;用大鼠皮肤及透皮扩散仪进行透皮试验,考察其体外透皮性能。复方酮康唑纳米乳是由EL-40,乙醇,2-苯乙醇,乙酸乙酯,酮康唑,丙酸氯倍他索,丁香酚,水构成的淡黄色澄清透明的液体,稳定性良好;其透皮速率与2.5%氮酮组相当,优于混悬液及复方酮康唑软膏。复方酮康唑纳米乳是一种质量稳定、高效的药物传递系统。
2013年05期 v.33;No.197 770-775页 [查看摘要][在线阅读][下载 1400K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：297 ] - 宋舟;张立艳;白换力;董海兵;吴帅成;毕文岩;吕爽;张翠;伊鹏霏;付本懂;申海清;韦旭斌;
为揭示中药香芪汤及其有效成分的体外抗炎作用机理,利用ELISA法研究了不同质量浓度(0.2、1、5mg/L)的香芪汤对细胞因子TNF-α分泌的影响,并运用Western blot法检测了香芪汤及其有效成分黄芪甲苷、α-香附酮和穿心莲内酯对ERK1/2和JNK1/2的影响。结果显示,1、5mg/L质量浓度的香芪汤能够极显著抑制RAW264.7巨噬细胞TNF-α的分泌(P<0.01),香芪汤及其有效成分能够极显著降低JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平(P<0.01)。由此推论,中药香芪汤及其有效成分可能通过抑制炎症因子的分泌,降低MAPK信号通路的活性发挥其抗炎作用。
2013年05期 v.33;No.197 776-779页 [查看摘要][在线阅读][下载 903K] [下载次数：303 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：451 ]
- 邱峥艳;郭将;张永宏;李传民;赵志辉;
在真核生物中DNA甲基化是一种重要的表观遗传学修饰方法,其对基因的表达调控起到非常重要的作用。本研究以高肌间脂肪含量猪地方品种莱芜猪与大白猪的正反杂交后代为研究对象,利用F-MSAP技术,应用筛选的16对引物扩增,检测其肌肉组织的全甲基化程度,揭示不同品种肌肉组织间基因组全甲基化水平差异。结果表明以莱芜猪为父本,大白猪为母本的正交一代找到2 031个甲基化位点,以大白猪为母本,莱芜猪为父本的反交一代检测到1 905个甲基化位点,总甲基化水平分别为57.20%、53.5%。并且反交一代半甲基化水平显著高于正交一代(P<0.05),正交一代全甲基化水平极显著高于反交一代(P<0.01)。
2013年05期 v.33;No.197 780-784页 [查看摘要][在线阅读][下载 906K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：372 ] - 赵伟;李传民;高峰;张晓军;王大力;白春燕;孙博兴;
运用荧光定量分析方法检测军牧1号白猪不同发育阶段睾丸组织miRNA-34b的表达量差异,结果:miRNA-34b在3月龄前的表达量都非常低,从5月龄开始表达量呈明显上升,7月龄达到峰值后开始明显下降。在猪的发育过程中,miRNA-34b的表达趋势曲线呈先增后降。结果表明miRNA-34b可能与猪雄性生殖发育相关。
2013年05期 v.33;No.197 785-787+794页 [查看摘要][在线阅读][下载 826K] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：435 ] - 高健;梁桂金;朴英姬;李方正;张文平;宋学雄;
采集健康猪股骨骨髓,利用percoll梯度离心法分离单个核细胞,进行体外原代和传代培养,并用不同代数细胞进行了细胞生长能力、膜表面抗原(CD105、CD90、CD45)及诱导分化能力的检测。结果显示分离培养的单个核细胞贴壁生长,形态呈成纤维细胞样及涡旋状克隆团;细胞传代至第17代生长状况仍然良好;用F 3代细胞进行膜表面抗原标记显示,CD90和CD105阳性表达率分别为(97.4±1.8)%和(99.6±0.9)%,而CD45阳性表达率仅为(1.8±0.55)%,证实这些细胞具有猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem Cells,MSCs)表面抗原;经地塞米松、维生素C和β-磷酸甘油等诱导F 3代细胞,21d后出现钙物质沉积细胞群,用茜素红和Von kossa染色呈阳性,证实这些细胞已分化形成成骨细胞;经地塞米松、IBMX、胰岛素及吲哚美辛等诱导F 3代细胞,21d后细胞质出现脂滴样结构,用油红O染色呈阳性,证实已分化形成成脂细胞;冷冻-解冻细胞的膜表面抗原及多能分化能力与未冻存细胞的检测结果基本一致。结果证实,从猪骨髓中分离培养及经传代扩增获得的贴壁细胞是纯化的MSCs。
2013年05期 v.33;No.197 788-794页 [查看摘要][在线阅读][下载 1559K] [下载次数：237 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：510 ] - 刘立文;马永和;李万宏;王春强;周虚;
本研究以牛输卵管黏膜上皮细胞为研究对象,利用荧光定量PCR方法检测NGF和酪氨酸激酶抑制剂K252α对输卵管粘膜上皮细胞膜促性腺激素受体FSHR和LHRmRNA表达的影响。添加30、60、100μg/L NGF可以显著增加FSHR mRNA的表达,添加30和60μg/L的NGF同样增加LHR mRNA的表达。添加抑制剂K252α后,LHR和FSHR的表达量均比对照组显著下降。该结果说明NGF可以通过其受体调节输卵管黏膜上皮细胞促性腺激素受体FSHR和LHR的表达。
2013年05期 v.33;No.197 795-798页 [查看摘要][在线阅读][下载 863K] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：380 ] 下载本期数据