检测羊肠道病毒RT-PCR方法的建立及初步应用Establishment and preliminary application of RT-PCR method for the detection of caprine/ovine enterovirus
董坤,胡俊英,李卓宸,蔡梦露,章凡,王玮玉,王浴光,王新平
摘要(Abstract):
羊肠道病毒(caprine enterovirus, CEV)感染为国内外新发疫病,其诊断方法尚缺乏研究。本研究依据CEV-JL14毒株的基因组序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测CEV的RT-PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行测定,同时应用该方法对疑似CEV感染的临床样品进行检测。结果显示,建立的检测CEV感染的RT-PCR方法具有特异性好、敏感性高、快速和简便等特点,最低检出限为1.13×10~(3 )copies/μL。以建立的RT-PCR方法对通过ELISA方法确定的6份阳性样品和22份阴性样品进行检测,结果显示两者的符合率为100%。本研究建立的RT-PCR方法可用于CEV感染的诊断和流行病学调查。
关键词(KeyWords): 羊肠道病毒;EV-G20;反转录-聚合酶链式反应
基金项目(Foundation): “十三五”国家重点研发计划资助项目(2016YFD0500904;2017YFD0500104)
作者(Author): 董坤,胡俊英,李卓宸,蔡梦露,章凡,王玮玉,王浴光,王新平
DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.10.10
参考文献(References):
- [1] BOROS A,PANKOVICS P,KNOWLES N J,et al.Natural interspecies recombinant bovine/porcine enterovirus in sheep[J].J Gen Virol,2012,93(9):1941-1951.
- [2] WANG M,HE J,LU H,et al.A novel enterovirus species identified from severe diarrheal goats[J].PLoS One,2017,12(4):e0174600.
- [3] 王明月,王新平,朱利塞,等.从暴发腹泻羊群中检出G种肠道病毒[J].中国兽医学报,2016,36(10):1692-1695.
- [4] CHANG X,LIN Q,HU J,et al.Discovery of a virus of the species Enterovirus F in goats[J].Arch Virol,2019,164(10):2551-2558.
- [5] 李欣,胡俊英,林倩,等.山东省某地区牛、羊肠道病毒感染的流行病学调查[J].中国兽医学报,2019,39(2):223-227.
- [6] 鲁海冰,胡俊英,张群,等.双抗体夹心ELISA检测羊肠道病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查[J].中国兽医学报,2017,37(4):653-657.
- [7] 邢泽黎,朱利塞,王新平,等.从吉林省肉牛场新发疫病分离出E种肠道病毒[J].中国兽医学报,2014,34(3):390-394.
- [8] STRAUB O C.Isolation of a bovine enterovirus from the genitalia[J].Dtsch Tierarztl Wochenschr,1965,72(3):54-55.
- [9] 王汝都,林倩,李欣,等.河南省羊肠道病毒的分离与序列测定[J].畜牧与兽医,2020,52(5):112-116.
- [10] LI X,ZHANG Z,CHANG X,et al.Disruption of blood-brain barrier by an Escherichia coli isolated from canine septicemia and meningoencephalitis[J].Comp Immunol Microbiol Infect Dis,2019,63(5):44-50.
- [11] 邢泽黎,朱利塞,郭昌明,等.吉林省某羊群暴发小反刍兽疫[J].中国兽医学报,2014,34(5):722-728.
- [12] LIN J Y,SHIH S R.Cell and tissue tropism of enterovirus 71 and other enteroviruses infections[J].J Biomed Sci,2014,21(1):18.
- [13] 林倩.新发羊肠道病毒的分离、全基因组测序及其遗传多样性分析[D].长春:吉林大学,2020.
- [14] 刘亚静.吉林省牛肠道病毒遗传多样性及与羊肠道病毒抗原性比较分析研究[D].长春:吉林大学,2018.
- [15] MOREIRA J C O,RODRIGUES D M,GILIOLI R,et al.A semi-nested RT-PCR assay for detection of norovirus in rat fecal samples[J].Exp Anim,2019,68(2):169-176.