曾婷婷,谢丽基,谢芝勋,罗思思,李孟,黄娇玲,张民秀,张艳芳,范晴,邓显文

• 1:广西壮族自治区兽医研究所

摘要(Abstract)：

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测技术具有快速、敏感、仪器简单的优势。为了达到多重鉴别检测的目的,将分子信标引入LAMP反应体系,建立一套鉴别不同毒力新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)的可视化双重荧光RT-LAMP方法。分别设计2套扩增不同毒力ClassⅡNDV F基因的LAMP引物,针对区分NDV毒力的分子标志F蛋白裂解位点的基序差异设计2条分子信标。中、强毒NDV分子信标5′端标记FAM荧光基团,3′端标记Dabcyl淬灭基团;弱毒NDV 5′端标记CY5荧光基团,3′端标记BHQ3淬灭基团。用经过条件优化的RT-LAMP体系对不同毒力NDV及其他病原进行鉴别检测,结果显示,LAMP引物能特异地扩增ClassⅡNDV,在荧光成像仪下,中、强毒NDV显示绿色荧光,弱毒显示红色荧光,混合感染显示黄色荧光,而其他家禽常见病原无荧光显示;以体外转录的NDV ssRNA片段为模板,建立的RT-LAMP反应体系最低检测限度为100 copies/μL;随机检测疑似NDV病料20份,鉴定结果与经分离、测序鉴定的结果一致。本研究建立的分子信标与LAMP结合的检测方法,可为NDV多重检测提供新的思路。

关键词(KeyWords)： 双重荧光RT-LAMP;分子信标;新城疫病毒;F基因

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广西创新驱动发展专项资助项目(桂科AA17204057);; 广西重点研发计划资助项目(桂科AB16380054);; 广西科技基地与人才专项资助项目(桂科AD17195083);; “广西八桂学者”专项资助项目(2019A50)

作者(Author): 曾婷婷,谢丽基,谢芝勋,罗思思,李孟,黄娇玲,张民秀,张艳芳,范晴,邓显文

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.10.03

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