水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用Establishment and application of droplet digital PCR method for detection of canine distemper virus in mink
闫曼平,商金源,叶京飞,罗国良,王振军,易立,冯二凯,王春霞,赵宗正,陈明军,魏先力,高华,单晓枫,程悦宁
摘要(Abstract)：
为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus, CDV)的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法，以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持，本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理，建立了水貂CDV数字PCR方法，并优化了反应条件，评估了特异性、敏感性以及重复性。结果表明：ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增，其他常见病毒特异性检测结果均为阴性；重复性试验的变异系数均小于5%。采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测，检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高，重复性好，可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测，对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法。
关键词(KeyWords)： 水貂犬瘟热病毒;微滴数字PCR;N基因
基金项目(Foundation): 中国农业科学院科技创新工程资助项目(CAAS-ASTIP-2021-ISAPS);; 吉林省科技发展计划资助项目(20220508044RC)
作者(Author): 闫曼平,商金源,叶京飞,罗国良,王振军,易立,冯二凯,王春霞,赵宗正,陈明军,魏先力,高华,单晓枫,程悦宁
DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.12.07
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