• 猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因的克隆、序列测定及与其他HCV株的比较

    李红卫,涂长春,吕宗吉,孙明,金扩世,余兴龙,殷震

    应用RT-PCR扩增猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因,然后采用平端克隆法将扩增的cD-NA克隆到pUC19的SmaⅠ位点,用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他10株HCV相同基因区域用DNASIS计算机软件进行同源性比较和系统树分析,结果表明,大部分毒株为同一个型,该型共包括9个HCV株,以Brescia株为代表,石门(Shimen)株也属该型;而Alfort株和P97株与上述9个毒株差异较大,不属同一型。

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  • HIV-2gag基因在重组痘苗病毒中的表达

    王秀清,金宁一,田梅,毛春生,李体远,王宏伟,苏忠兰,殷震

    以痘苗病毒HA基因为侧翼,将HIV-2gag基因部分序列(简称G1)和全部序列(简称G2)分别插入牛痘病毒A型包涵体(ATI)和串联10个(与HA基因反向)或16个(与HA基因同向)痘苗病毒P7.5组成的复合型启动子下游,构建了4个重组痘苗病毒表达载体质粒。经脂质体转染、鸡红细胞吸附试验筛选和免疫荧光鉴定,获得4株能稳定表达目的蛋白的重组痘苗病毒。实验结果表明,以HA基因为侧翼构建重组病毒的重组率约为0.1%,阳性重组率为25%~100%。实验中还发现,以HA基因为侧翼的重组痘苗病毒能够引起细胞融合,其可作为筛选重组痘苗病毒的另一种标志。Westernblot结果表明,表达的Gag蛋白能被HIV-2血清中的特异性抗体所识别,并能诱导小鼠产生抗HIV-2Gag抗体。

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  • 氧氟沙星饮水治疗鸡败血霉形体大肠杆菌感染的药代动力学分析

    刘雅红,冯淇辉,曾振灵,方炳虎,孙永学,黄显会

    选用320只33日龄石岐杂健康鸡,分成健康对照、感染对照、氧氟沙星中剂量和高剂量4组。感染鸡接种霉形体和大肠杆菌后,中剂量和高剂量组分别以100mg/L和200mg/L氧氟沙星饮水给药,在试验开始后2~5d,每次给药后2h和8h剖杀,采用HPLC测定血药浓度。结果,血药浓度在中剂量组分别为(1.26±0.32),(0.75±0.23)mg/L,高剂量组分别为(1.68±0.42),(1.35±0.04)mg/L,中、高剂量组在给药后2~5d平均血药浓度分别为(1.01±0.27),(1.52±0.21)mg/L。停药后血药消除缓慢,两组t12分别为3.11,4.33h,AUC为4.76,6.40mg·L-1·h-1,Tcp(ther)为23.34,23.72h。本研究表明,氧氟沙星饮水给药对鸡霉形体和大肠杆菌合并感染具有显著的临床效果,从经济观点看,饮水给药以50~100mg/L,每天1次,连续4d为好。

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  • 动物遗传性受体病(续3)

    李毓义

    动物遗传性受体病(续3)*李毓义(解放军农牧大学兽医学院,长春130062)四、血小板无力性血小板病(thrombasthenicthrombopathia)即家族性血小板无力-血小板病-血小板减少症(familialthrombasthenia-t...

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  • 饲料微量元素添加剂的毒理学和公共卫生学

    齐德生,袁宗辉

    饲料微量元素添加剂的毒理学和公共卫生学齐德生袁宗辉(华中农业大学畜牧兽医学院,武汉430070)微量元素在保证动物机体健康生长和高效生产方面起着十分重要的作用。随着集约化养殖业的出现,微量元素以防病添加剂或生长促进剂的形式在动物饲料中得到广泛应用,对...

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  • 猪囊虫病免疫预防研究进展

    翟春生

    猪囊虫病免疫预防研究进展翟春生(南京军区军事医学研究所,南京210002)猪囊虫病的免疫预防研究是一个难度很大的课题。寄生虫的初次感染可使宿主获得对同种寄生虫再次感染的抵抗力。这种被称为“带虫免疫”的现象提示人们进行寄生虫病免疫预防的可能性。但是,仿...

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  • 核基质附着区(MAR)调控的人胰岛素样生长因子(hIGF-1)转基因兔的制备

    葛宝生,朱裕鼎,陈永福,沈孝宙,安民

    用EcoRI+HindⅢ双酶解含鸡α-珠蛋白基因5′端核基质附着区(MAR)、小鼠金属硫蛋白基因启动子(MT-1)和人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的pMTSMCAG质粒,0.6%琼脂糖凝胶电泳,玻璃乳回收纯化MAR/MT/hIGF-1片段(3.9kb),用该片段制备转基因兔。利用水平显微注射系统注射1-细胞兔胚胎468枚,移植到36只受体兔,有8只妊娠,共产下19只活仔兔。采仔兔耳样提取基因组DNA,应用PCR技术分析其外源基因整合情况,获得8只阳性兔(显示出约600bp外源DNA条带)。再对8只阳性兔的PCR产物进行Southern印迹杂交,得到5只整合有MAR/MT/hIGF-1外源基因的转基因兔,转基因整合率为26.3%(5/19)。用1只阳性转基因公兔(502号)繁殖了6窝,共获得42只仔兔。采仔兔耳样提取基因组DNA后,如上用PCR分析和做Southern印迹杂交,F1代中有5只整合有MAR/MT/hIGF-1融合基因。

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  • 透明质酸对猪精子活率、获能、顶体反应及体外受精穿透率的影响

    韩毅冰,邹纯霞,秦鹏春,杨增明,丹羽皓二

    采用具有高繁殖力的种公猪的新鲜精液及冷冻精液,加入不同获能剂咖啡因及透明质酸,在39.5℃、5%CO2培养箱中孵化培养。结果表明,透明质酸能够在体外条件下保持精子的活率,并维持在稳定的水平,鲜精为42.6%~47.8%,冻精为20.4%~25.6%。荧光剂Hoechst染色表明,透明质酸能够显著增加培养360min后的活精子率。在无蛋白来源的mBO培养液中,培养0~60min,精子发生自发的获能和顶体反应,而受获能剂影响,精子发生获能的时间带在各处理组之间显著不同:咖啡因处理组的获能时间带是60~360min,透明质酸处理组则是60~180min。体外受精试验表明,去除卵母细胞周围卵丘细胞时,透明质酸和咖啡因对精子穿透率的影响没有区别;而在卵丘细胞存在的前提下,咖啡因处理组的穿透率显著高于透明质酸处理组。

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  • Internet的汉语定名

    Internet的汉语定名1什么是Internet和internetInternet是专指一个全球最大的、开放的由许多规模不等的计算机网络互相联(连)结而成的网络,它是1969年由美国军方的高级研究计划局的阿帕网(ARPAnet)发展起来的,其后研究...

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  • 马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D基因的分离克隆、定序及其在大肠杆菌中的表达

    段玉友,崔治中,殷震

    用聚合酶链式反应(PCR)技术,从马立克氏病病毒(MDV)GA株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因1209bp编码序列。将该PCR扩增产物于EcoRI和KpnⅠ位点克隆进pUC18质粒载体中。将gD重组pUC18质粒DNA用Digoxigenin(Dig)标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA(含gD全基因)。重组质粒序列分析结果表明,MDVGA株gD与MDVRB1B株gD在DNA和氨基酸序列组成上略显差异。将gD基因从重组的pUC18质粒中切出,插入表达性质粒pEZZ18载体中的葡萄球菌A蛋白(SPA)的信号肽基因的下游。对含gD重组pEZZ18质粒插入序列进行部分测序,结果表明,gD阅读框与pEZZ18中SPA信号肽的阅读框是吻合的。gD重组pEZZ18质粒在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达gD,即gD与SPA的信号肽(14000)相连。根据SPA的信号肽可与IgG结合的特性,用兔IgG结合的Sepharose4B制备的亲和凝胶柱来纯化表达的gD融合蛋白。纯化的表达产物经SDS-PAGE鉴定后,?

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  • 禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

    陈化兰,于康震,田国斌,唐秀英,卢景良

    禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。

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  • 鸡T细胞表面抗原生物学特性

    李一经,刘宝全,贾永清,李海滨,卢景良

    对鸡T细胞特异性单克隆抗体(McAb)1B6识别的T细胞膜抗原的理化特性、组织学分布及相应T细胞的免疫学功能进行了研究。结果表明,由1B6McAb识别的T细胞膜抗原为1条60000~65000的单链蛋白;该抗原分布于63.3%的胸腺细胞、17.3%的脾细胞以及25%的外周血淋巴细胞。体外试验表明,采用补体介导的细胞溶解试验除去脾细胞中的1B6+T细胞后,其淋巴因子产生活性显著降低。由此证明,1B6+T细胞是淋巴因子产生的主要细胞。根据1B6McAb鉴定的T细胞理化特性、组织学分布及功能特性,1B6+T细胞属于CD4+T细胞。

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  • 传染性支气管炎病毒类M_(41)地方分离株S_1基因克隆及高变区序列分析

    步志高,江国托,刘思国,王秀荣,康丽娟,祁贤,陈万芳,卢景良

    传染性支气管炎病毒(IBV)分离株QD经RT-PCR扩增出约1.7kbS1糖蛋白基因cDNA,修饰后插入pUC18SmalⅠ/EcoRI位点构成质粒pUCQDS1。对克隆的S1基因5′端高变区序列测定显示,起始密码上游60碱基和下游380碱基中与参考株M41S1基因序列仅有1个碱基的差异,表明QD为一类M41分离株。

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  • 鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

    廖明,辛朝安,王林川

    将含有传染性支气管炎病毒(IBV)广东地方分离株D41的S1基因cDNA(从ATG到S前体蛋白裂解位点)的片段克隆到具有多角体启动子(PXIV)和人工合成启动子(Psyn)的杆状病毒转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,构建了重组转基因载体质粒pSXIVVI+X3-S1.D41。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-GDNA(occ-,gal+)共转染草地夜蛾(Sf9)细胞,筛选并纯化出既能表达S1基因又能形成多角体的重组病毒TnNPV-IBVS1-occ+(occ+,gal-)。通过间接ELISA和Western-blot等方法在感染了重组病毒的Sf9细胞中成功地检测到分子量约62000的S1基因表达产物。虽然该重组S1糖蛋白可能由于N-糖基化不完全而分子量小于天然蛋白,但它可以像正常病毒粒子一样,被鸡抗IBVD41株血清特异识别。

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  • DNA芯片

    DNA芯片DNA芯片,又称基因芯片、生物芯片或DNA探针系列。DNA芯片与同为20世纪值得大书特书的微电子芯片有着本质的不同,它是生物工程、微电子技术与信息科学完美结合的产物,是微型化的在DNA水平上进行测试分析的最新的人的基因测试的有力工具。如今,...

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  • 鸭源和鸡源减蛋综合征病毒(EDSV)酶切图谱的分析

    李刚,周锦屏,郑明球,蔡宝祥

    选用限制性内切酶HindⅢ、EcoRI、BamHI和BglⅠ进行鸭源减蛋综合征(EDS)病毒(JE1株)和鸡源EDS病毒(NE4株)的酶切图谱分析,发现鸭源EDS病毒的这些酶切片段分别为9,4,4,6条,而鸡源EDS病毒(NE4株)则为10,4,4,5条,两者的酶切图形和片段大小有些不同,说明EDS病毒宿主不同,即使血清型相同,基因型也有差异。

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  • 环境胁迫因子对鱼类免疫功能的影响

    李彦,江育林

    环境胁迫因子对鱼类免疫功能的影响李彦江育林(中国科学院水生生物研究所,武汉430072)与人类和其他脊椎动物一样,鱼类也是通过其免疫系统识别和消除异物,行使防御、自身稳定和免疫监督三大功能的。鱼病的发生是鱼体、病原和环境三者相互作用的结果。由于鱼类是...

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  • 犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较

    胡桂学,夏咸柱,金宁一,涂长春,殷震

    以犬胎原代细胞,采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法,从1例腹泻犬脾脏和1例临床健康犬肠内容物中分离出2株犬冠状病毒(CCVYS1,CCVCI1)。该2株病毒可使CRFK细胞出现典型的细胞融合病变,与从美国引进的CCVNL-18参考株形成的细胞病变相似;电镜负染和超薄切片观察,分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子,并形成胞浆内包涵体;经理化学、生物学鉴定,具有CCV的特性;间接免疫荧光试验鉴定,证明为CCV;动物回归试验证明,CCVYS1毒力较强,CCVCI1毒力较弱。利用RT-PCR技术,分别扩增了CCVNL-18、CCVYS1和CCVCI1株纤突蛋白(S)主要功能区基因片段,经克隆、序列测定、计算机比较核苷酸和推导的氨基酸序列,结果为:(1)CCVYS1和CCVCI1与国外发表的K378等5株CCV和CCVML-18株的同源性为91.7%~99.4%和92.0%~99.4%,而与TGEV和FIPV的同源性为90.2%和88.0%~90.0%;Ab抗原亚位点与CCV相同,不同于TGEV和FIPV,进一步证明本研究分离的病毒为CCV;(2)CCVYS1、CCVCI1株与K378等CCV强毒株同源?

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  • 旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达

    阎玉河,童光志,卢景良

    旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄-分泌物。为研制具有ES抗原功能的旋毛虫基因重组抗原,首先用AGPC法提取旋毛虫肌幼虫总RNA并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析,发现它缺少真核生物所具有的28SrRNA。根据编码45000和49000蛋白的基因结构,设计并合成2对PCR引物,用RT-PCR方法分别扩增出了2个目的基因(TSPG和TSPGⅡ)。序列分析发现,TSPG在第458到505位之间的核苷酸编码框架与结构基因P45的不同,此外,还有多处出现与P45不同的碱基。在TSPGⅡ核苷酸序列中只有1个碱基与P49不同。根据可识别的糖基化位点判定,TSPG和TSPGⅡ各含有1个N-型连接的糖基化位点。将构建的3个重组质粒转化大肠杆菌,通过温度诱导培养,分别在大肠杆菌中表达出37000、46000和34000的重组蛋白,三者的表达水平分别为22%、10%和8%;Westernblot分析和ELISA检测表明,它们均可被猪旋毛虫病阳性血清和单克隆抗体识别,但特异性有所不同。将TSPGⅡ克隆至E.coli-Yeast穿梭载体pHIL-S1上,经内切酶消化和Southernblot杂交鉴定后,?

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  • 家兔显微受精影响因素及显微受精胚胎超微结构

    李子义,周琪,邹啸环,文兴豪,谭景和

    以家兔为实验动物,利用胞质内精子注射技术和透明带下精子注射技术,对卵龄、精子获能、注射针管口径、操作室温和操作方法等影响显微受精的因素以及显微受精胚胎的超微结构进行了研究。结果显示:(1)胞质内单精子注射,hCG后15~17h卵的存活率为69.4%,显著(P<0.05)高于hCG后19~21h卵的存活率(47.3%);而受精率和卵裂率(分别为52.9%和41.2%)分别低于hCG后19~21h卵的受精率(65.4%)和卵裂率(46.2%)。(2)将5~10个在DM液中获能12~13h的精子注入卵子的透明带下,hCG后19~21h卵的受精率(49.2%)和卵裂率(40.7%)分别显著(P<0.05)高于hCG后15~17h卵的受精率(28.6%)和卵裂率(22.5%)。(3)以mHIS15min+mDM3~4h方法和HIS15min+DM5~6h方法获能的精子带下注射的受精率(分别为63.6%和51.0%)和卵裂率(分别为54.5%和43.1%)分别显著(P<0.05)高于或略高于其他方法获能的精子带下注射的受精率和卵裂率。(4)内径7μm的注射针管用于胞质内单精子注射,卵的存活率(69.4%)极显著(P<0?

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  • 动物基因组计划

    李善如

    动物基因组计划李善如(军事医学科学院实验动物中心,北京100071)自1915年在小鼠建立第1个脊椎动物连锁群以来,将基因定位于染色体上,完成基因组研究,一直是遗传学家所致力的目标[1]。随着分子生物学技术的日臻完善,尤其是Dulbecco[2]于1...

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  • 迈向21世纪前沿的南京农业大学动物医学院

    迈向21世纪前沿的南京农业大学动物医学院南京农业大学座落于风景如画的南京东郊风景区,与庄严雄伟的中山陵遥遥相望,北临宁沪高速公路,环境优雅。校园占地600hm2,校舍建筑面积30余万m2。图书馆藏书90万册。学校共有教职工2700人,专职教师900余...

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  • 传染性支气管炎病毒中国地方分离株RFLP基因分型的研究

    步志高,江国托,刘思国,王秀荣,康丽娟,祁贤,陈万芳,卢景良

    为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒(IBV)的基因分型,对分离自国内8个不同地域疫区的IBVQD、GZ、ZZ、TJ、DL、YC、JS1和JS2及参考株M41、H52和T的S1基因RT-PCR扩增cDNA进行HaeⅢ的RFLP分析。结果,QD与MD41、H52同属Massachussete基因型,GZ、ZZ、YC与T的基因型相同,DL、JS1和JS2则表现为各自独立的基因型,而TJ则为DL和T2种基因型毒株的混合感染,表明我国的广大地域内存在着Mass基因型、T基因型和可能的变异株IBV的流行。

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  • 噬菌体肽库的构建及抗狂犬病病毒肽的筛选

    李爱民,周志江,宋华宾,郑明光,杜念兴

    体外合成编码6肽的随机DNA片段以及用于随机。DNA片段扩增的1对PCR引物,经PCR扩增、BglⅠ酶切扩增产物,得到编码6肽的随机DNA克隆片段,将随机DNA克隆片段与噬菌体表面表达载体(FUSE5)相连接,连接产物电转化MC1061宿主菌,经抗性和插入复活筛选,获得1.6×108个独立克隆。文库经PCR扩增、斑点杂交、序列测定等综合鉴定,结果表明已成功构建了噬菌体6肽表面表达文库。用生物素化的抗狂犬病病毒单克隆抗体(9E6)同狂犬病病毒aG株作用,再同包被亲和素的反应板作用,以此系统对噬菌体6肽随机文库进行3轮亲和筛选,用人抗狂犬病病毒抗体和抗噬菌体抗体对第3轮筛选扩增物进行特异性鉴定,结果表明,得到的扩增物均能与狂犬病病毒aG株发生特异性结合。对2种鉴定系统均是阳性的噬菌体克隆进行序列测定,结果可分为4组核心序列,分别为TPPRPP(6P1-RV)、TPPIPP(6P2-RV)、IKPPPP(6P3-RV)、PPRPPR(6P4-RV)。将以上4组核心序列同蛋白数据库进行同源性比较,发现4组肽序列同已知的狂犬病病毒受体乙酰胆碱受体序列无同源性,提示为一组新的结合狂犬病病毒的短肽。4种混合噬菌体肽对狂犬?

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