• 洛美沙星对实验性鸡葡萄球菌病的药效研究

    方炳虎,王志强,陈杖榴,冯淇辉

    为了给兽医临床推广应用国内新近研制的氟喹诺酮类长半减期药物洛美沙星(Lomefloxacin),特别是用洛美沙星防治鸡葡萄球菌病提供依据,首先以试管2倍稀释法测定了洛美沙星及对照药对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,然后观察了洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星饮水给药5d对实验性鸡葡萄球菌病的疗效。结果,洛美沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素对鸡金黄色葡萄球菌C56011株的最小抑菌浓度分别为1.0、0.125、0.25、1.0、32mg/L。25、50、100mg/L洛美沙星饮水给药对鸡葡萄球菌病的治愈率分别为66.7%、80.0%、76.7%,有效率分别为90.0%、96.7%、96.7%。50mg/L环丙沙星、50mg/L恩诺沙星的治愈率则分别为76.7%、80.0%,有效率分别为93.3%、96.7%。50、100mg/L洛美沙星及50mg/L恩诺沙星3个饮水给药组的增重显著高于感染对照组。结果表明,洛美沙星饮水给药治疗鸡葡萄球菌病以50mg/L的剂量为宜。

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  • 双峰驼荐髂关节骨连接的过渡类型

    孟昭权,谢铮铭

    采用大体解剖学方法,对8例成年双峰驼的荐髂关节进行了形态结构研究。结果发现,双峰驼之荐髂关节较其他动物具有以下显著特征:(1)没有围绕两骨接触面边缘附着的荐髂关节囊;(2)没有完整的耳状面;(3)髂骨翼和荐骨翼间无活动性,属不动关节;(4)两骨间的连接以纤维束为主,有2例还伴有骨性融合现象。纤维束中散在着几个关节小区,有的小区有关节囊、关节面、关节腔等关节基本结构,有的小区则不完全具备上述结构。这是一种既具有纤维关节特征同时又具有滑膜关节特征的混合关节,在骨连接分类方面属直接连接和间接连接的过渡类型。

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  • 粪链球菌对奶牛子宫内膜炎致病菌的体外抑菌试验

    徐耀基,苏乔,黄引贤

    为了给应用微生态制剂防治奶牛子宫内膜炎提供依据,将从健康母猪生殖道中分离的一株粪链球菌,与从奶牛子宫内膜炎分离的6种致病菌(溶血性链球菌、埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、克雷伯氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌)分别混合培养,观察了粪链球菌对这些致病菌的抑制作用。结果表明,粪链球菌与这些病原菌等量混合培养,或加大致病菌用量后混合培养,或粪链球菌先培养一定时间后再与致病菌混合培养,在混合培养一定时间后,各致病菌的生长都受到抑制。

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  • 人结核分枝杆菌热休克蛋白70基因启动子的序列分析

    姚建忠,许崇波,靳风烁,冯书章,朱平

    卡介苗(baciluscalmete-guerin,BCG)是一种应用广泛的活的减毒性结核菌苗,具有低毒性、免疫力持久、对热稳定等特性[1]。目前国内外学者正致力于运用基因重组技术,将BCG发展成一种新型重组活载体疫苗[2,3]。本研究克隆了人结核分...

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  • 猪溶血性链球菌对复合酚消毒剂的耐药性

    彭新宇,吴惠贤,宋长绪,谢宏料,魏文康,温列娜,谢明权

    以亚致死浓度(1∶500)复合酚多次处理猪溶血性链球菌C5516,得其第19代菌(F19)。F19可抵抗推荐浓度复合酚(1∶300,可完全杀死原代菌);在普通肉汤多次传代,未见其对复合酚抵抗力下降;用碱裂解法提取F19质粒DNA,经琼脂糖凝胶电泳,发现1条明亮的电泳带。此电泳带与F19对复合酚的抵抗力的关系尚需进一步研究。

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  • 实验感染肝片吸虫水牛和山羊的细胞免疫反应

    王丙云,陈龙,毛鑫智

    为评价肝片吸虫病的细胞免疫反应,选用8头雄性去势水牛和6只雄性山羊,经粪便检查和Dot-ELISA检测确认无肝片吸虫感染。经2周适应性饲养后,随机将水牛分成试验组(n=5)和对照组(n=3)。试验组水牛每天每头经口感染60个囊蚴,连续20d,共接种1200个囊蚴。山羊分成试验1组、实验2组和对照组,每组2只。试验1组和2组每只山羊分别一次性口服接种500个和200个囊蚴。水牛在感染前5周和感染后26周内,山羊在感染前1周和感染后16周内,每周颈静脉采血1次,测定外周血T淋巴细胞增殖反应和/或白细胞介素-2水平。结果表明,水牛在感染后1~6周,T淋巴细胞增殖反应有上升趋势,而在感染后13~17周低于对照组;血清白细胞介素-2水平有类似于淋巴细胞增殖反应的变化。实验1组山羊血清白细胞介素-2水平低于对照组,而实验2组在感染后2~11周有上升的趋势,以后下降。

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  • 重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠排卵、胚胎发育能力及妊娠母体激素动态

    周虚,孙敬方,田小云,关宏,刘健,梁冠生,张嘉保,赵志辉,李慕,陈善军

    为探讨先天性T-B淋巴细胞联合缺陷对生殖功能的影响,用正常BALB/c小鼠作对照,对重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠的排卵、胚胎(胎儿)发育能力及妊娠母体外周血浆促黄体素(LH)和孕酮(P)水平的变化进行了研究。首先,观察了妊娠期、窝产仔数,发现SCID小鼠大多在妊娠第20天(检栓当天为第1天)凌晨分娩,平均窝产仔数为(3.86±1.67)只(n=42),BALB/c小鼠多在妊娠第20天较晚或第21天凌晨分娩,平均窝产仔数为(4.44±1.54)只(n=20),比SCID小鼠约多0.6只。取10周龄SCID雌鼠40只,BALB/c雌鼠50只,分别于第2、6、10、15、19(SCID)或20(BALB/c)天早晨各取5~10只用于试验。结果表明:(1)SCID小鼠平均排卵数比BALB/c小鼠少约0.7个(分别为8.00±1.90和8.66±2.26),而产前1d活胎数占排卵数的百分比在SCID小鼠和BALB/c小鼠间无差异(分别为66.47%和66.38%),说明SCID小鼠产仔数比BALB/c小鼠产仔数低是由于排卵数少造成的;(2)SCID小鼠在妊娠最后5d,外周血浆水平下降迅速,这期间胎儿死亡率高;BA?

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  • 犬吉氏巴贝斯虫的人工感染及治疗试验

    董君艳,王力光,李忠生,宋珍华,李德昌,陈启军

    为进一步证实犬吉氏巴贝斯虫(Babesiagibsoni)的致病作用,筛选较为理想的治疗药物,将12只杂种狼犬均分为摘脾组与不摘脾组,进行了吉氏巴贝斯虫人工感染试验。人工感染犬临床症状与自然感染犬无明显差异,表现为体温升高、红细胞减少、Hb降低及虫血症等,摘脾组较不摘脾组虫血症和症状的出现早1~2d。将此12只人工感染犬及67只自然感染犬随机分成4组,分别以贝尼尔(Berenil)、阿卡普林(A-caprinum)、蒿甲醚(Artemtherin)和磷酸伯氨喹(Primaquinephosphate)4种药物进行治疗比较试验,结果以蒿甲醚疗效最好,用药后第2天虫体转阴率达70%,第3天Hb由28g/L上升到64g/L,奏效迅速。

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  • 大麦日粮中添加粗酶制剂对鸡外周血液中代谢激素的影响

    刘燕强,韩正康

    为探讨粗酶制剂促进鸡生长的作用机制,通过三系列试验研究了粗酶制剂添加于大麦日粮中对不同基因型或生理状况的鸡血液代谢激素的影响。结果表明,粗酶制剂处理,使蛋用雏鸡T3(三碘甲腺原氨酸)、TSH(促甲状腺激素)和T3/T4(甲状腺素)显著提高(P<0.01或P<0.05);21日龄肉鸡T3、Ins(胰岛素)、T3/T4和Ins/Gluc(胰高血糖素)提高(P<0.05);42日龄肉鸡T3、GH(生长激素)、Ins、T3/T4和Ins/Gluc显著提高(P<0.05),而Gluc显著降低(P<0.05);生长后期鸡T3、GH和T3/T4显著升高(P<0.05)。结果提示,粗酶制剂可通过调节代谢激素的分泌而提高鸡的生产性能。

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  • 阻断淋巴细胞糖皮质激素受体对鸡免疫功能的影响

    王水琴,潘兴华,崔淑芳,王选年

    为进一步证明糖皮质激素受体(GR)在介导淋巴细胞免疫功能中的作用,观察GR阻断鸡对马立克氏病病毒(MDV)的感受性,用RU486阻断鸡淋巴细胞GR,当GR被阻断60%以上时(RU486剂量为50mg/kg),鸡脾细胞诱生IL-2和IFN活性及T、B细胞丝裂原刺激增殖活性均明显降低;外周血淋巴细胞、单核细胞、ANAE+细胞减少;脾脏、法氏囊、胸腺重量与体重之比的相对重量减轻,淋巴细胞系统免疫功能呈低下状态。此时雏鸡对MDV的易感性增高。当GR被阻断不足35%时(RU486剂量为25mg/kg),对淋巴细胞系统免疫功能无影响。

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  • 腰交感神经干阻断对羊实验性胃肠弛缓的效应

    赵旭昌,王哲,李毓义,张乃生,龚伟,臧家仁,赵建军

    为探索胃肠弛缓与交感神经机能状态的关系,观察了腰交感神经干阻断对健康羊和实验性胃肠弛缓羊胃肠运动机能的影响,并比较了碳酸盐缓冲合剂或醋酸盐缓冲合剂配合腰交感神经干阻断对酸过多性或碱过多性胃肠弛缓羊胃肠内环境参数、电活动性及植物神经调控指标的影响。结果表明,腰交感神经干阻断对健康羊胃肠电活动性影响不大;单纯腰交感神经干阻断对实验性胃肠弛缓无明显治疗效应;碳酸盐缓冲合剂或醋酸盐缓冲合剂配合腰交感神经干阻断对实验性胃肠弛缓的恢复亦无促进或辅助作用。由此认为,在起因于胃肠内环境特别是酸碱度改变的胃肠弛缓,交感神经兴奋性过高可能不是主要的致病因素。

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  • 日粮中添加抗氧化微营养素对热应激产蛋鸡生产性能的影响

    范石军,韩友文,李荣文

    选用24周龄Hy-Line蛋鸡分别饲养于20℃、30℃和35℃环境中,在日粮中添加不同水平的抗氧化微营养素,观察了产蛋鸡生产性能的变化。结果表明:(1)热应激可导致蛋鸡产蛋率、体重和蛋壳品质下降,严重影响其生产性能的发挥。通过日粮添加抗氧化微营养素可有效缓解热应激效应,显著提高蛋鸡产蛋率和蛋壳质量;(2)热应激期间,日粮中添加抗氧化微营养素可使蛋鸡体重损失加快而产蛋率提高,未添加抗氧化微营养素蛋鸡则体重损失较小,但产蛋率显著下降。

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  • 饮水高钠诱发的肉鸡腹水综合征的血液流变学特征

    张克春,王桂军,王小龙,李家奎

    为查明高钠饮水与肉鸡腹水综合征的病因学关系,将240只健康AA肉鸡随机均分为试验Ⅰ、Ⅱ和对照3个组,从8日龄起分别饮用含Na+为0.06%、0.12%和0.00%的饮水,动态对比观察各组肉鸡临床表现、血液红细胞压积(PCV)、红细胞变形性(ED)、右心室(RV)和全心室(TV)的重量比(RV/TV)。结果表明,高钠饮水可以诱发腹水综合征;肉鸡在摄入过量Na+时,出现肺动脉高压(PH)、PCV增加和ED下降等血液流变学特性的改变,促进了腹水综合征的形成。

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  • 6种中草药抗病毒试验

    侯世宽,张茂林,刘杰,苟兴宽,田慧英,冯书章,金宁一

    选用人参叶、山楂、艾叶、紫苏叶、青蒿和刺五加等6种中草药的13份提取液,在RK和DK细胞上分别进行了抗伪狂犬病病毒和抗狐狸脑炎病毒试验。结果,仅人参叶的水提取液和醇提取液对狐狸脑炎病毒和伪狂犬病病毒均有抗病毒作用;水提取液和醇提取液对狐狸脑炎病毒在DK细胞上的50%抑制浓度(IC50)分别为1∶565.5和1∶1037.4。

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  • 日本七鳃鳗血细胞显微及亚显微结构

    文兴豪,张凯,李德雪,郭文场,王铁恒,岳占碰,张仁成,李子义,邹啸环,杜惜明

    用光镜和透射电镜技术对10尾日本七鳃鳗的血细胞进行了观察。结果表明:红细胞为圆形或椭圆形,胞质不很均匀,电子密度较低,含有板状嵴线粒体,核呈圆形或椭圆形。中性粒细胞表面有伪足,形态各异,胞质内含有A、B2种颗粒(A型颗粒为圆形,电子密度较低;B型颗粒为长椭圆形,电子密度较高)。嗜酸粒细胞数量较少,胞质内含有A、B、C3种形态各异的有膜颗粒(A型颗粒为圆形,电子密度较高,均质;B型为长椭圆形,颗粒中央有电子密度较高的长椭圆形致密芯;C型内含有电子密度较高的杆状致密芯,位于颗粒一侧)。单核细胞表面有伪足,胞质内含有粗面内质网、板状嵴线粒体、溶酶体和液泡。淋巴细胞为圆形,核较大,胞质内含有板状嵴线粒体、粗面内质网和嗜天青颗粒。血栓细胞体积较小,形态各异,胞质内含有线粒体、粗面内质网和细小颗粒。

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  • 用心肌酶活性评价含血停搏液对心肌的保护效应

    祁克宗,王林安,疏元善

    为评价含血停搏液对心肌的保护效应,按其不同灌注方式将28只低温体外循环犬随机均分为冷晶(A)、冷血(B)、温血(C)和冷温血(D)4组。于心肌缺血再灌注期不同时点抽取冠状静脉血样,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)活性变化。结果,在主动脉开放15~60min各时点,D组3种血清酶活性升高程度最小,与A,B,C组对应时点相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。提示冷温血联合灌注进一步增加了能量储备,极大地减少了心肌缺血缺氧程度,对心肌具有明显的保护作用

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  • 柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋和感染肠炎沙门氏菌敏感性的影响

    秦泽荣,孔繁瑶,荒川皓,马场荣一郎

    为揭示球虫感染对蛋鸡的肠炎沙门氏菌敏感性及鸡蛋的肠炎沙门氏菌污染率的影响而进行了本研究。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染对蛋鸡生产肠炎沙门氏菌污染蛋及感染肠炎沙门氏菌的敏感性均具有增强作用。具体表现为:柔嫩艾美耳球虫感染可使肠炎沙门氏菌污染蛋壳显著增多(P<0.05);球虫感染鸡所产蛋,无论是新鲜的还是贮存1周后的,其蛋内容物的肠炎沙门氏菌阳性率比仅感染肠炎沙门氏菌鸡所产蛋要高;球虫感染鸡盲肠中的沙门氏菌阳性率和沙门氏菌数显著增加(P<0.01);球虫感染鸡输卵管中的肠炎沙门氏菌也有增多;球虫感染使泄殖腔拭子的肠炎沙门氏菌阳性率增加。研究结果表明,柔嫩艾美耳球虫感染可以增加鸡群中肠炎沙门氏菌的水平及其垂直传播的危险。

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  • 奶牛围产期血液流变学主要指标的变化规律

    王清兰,郭克峻,焦淑贤,陈德民,宛绍月

    为了解健康奶牛围产期血液流变学的变化规律,对15头围产期(产前90d至产后30d)奶牛血液流变学的全血高、低切变率粘度,全血高、低切变率还原粘度,红细胞聚积指数,红细胞压积(PCV),血浆粘度等5项指标进行了系统检测。结果表明,在产前90~5d,上述5项指标均呈下降趋势,且分别于分娩前10、8、5、3、1d降至最低水平;产后1~3d内,除PCV外,上述4项指标迅速升高达最高值,产后1周以后,随着泌乳量的逐日增加而逐渐恢复到常态。

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  • 超强传染性法氏囊病病毒株宿主保护抗原的分子特征

    曹永长,毕英佐,梁志清,林文量

    为了探索超强传染性法氏囊病病毒(IBDV)株毒力增强的原因,采用反转录-聚合酶链反应技术,从中国广东、福建分离到的3株超强IBDV毒株中扩增到编码VP2蛋白的cDNA基因片段,并对VP2基因的高可变区进行了序列测定。序列分析和聚类分析表明,3株超强毒株与欧洲超强毒株非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。将超强毒株VP2高可变区的氨基酸序列与其他血清Ⅰ型毒株进行比较,发现除了具有一般IBDV强毒株的分子特征之外,所有超强毒株在222、256、294和299位上的氨基酸均相同,分别为A、Ⅰ、Ⅰ和S,与其他毒株均不相同。而222、294和299位上的特征性氨基酸使超强毒株VP2中诱导中和抗体的抗原决定簇的构象发生细微变化,从而导致毒力增强。

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  • 鸡白痢沙门氏菌脂多糖的保护性作用

    李肇增,李风华,阎红霞,窦洪举,刘德明,李巧贤

    用被动保护试验的方法,通过比较抗脂多糖(LPS)血清组与LPS中和抗鸡白痢血清组的LD50,证明了LPS的保护性作用。与攻菌对照组的LD50相比,抗LPS血清组有非常显著的差异(0.002>P>0.005),LPS中和抗鸡白痢血清组有显著差异(0.02>P>0.05)。试验证明,LPS是鸡白痢沙门氏菌(Salmonelapulorum)菌体主要的保护性抗原之一。

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  • 苯酚在兽医免疫学检测中的应用

    常维山,牛钟相,朱瑞良,柴家前,唐珂心,徐海花

    本研究利用低浓度苯酚的表面活性作用,在不影响被处理样品的生物活性的前题下,使油乳剂疫苗和高免疫卵黄液破乳,分离出水相进行免疫学检测,为此类生物制品的质量监控,创造了有利条件。1材料与方法1.1液体苯酚将市售苯酚加热融化,加入1/10体积的蒸馏水,使其...

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  • 判断消毒剂对鸡球虫孢子化卵囊抑杀效果的新方法脱囊抑制试验

    吴惠贤,魏文康,谢宏料,彭新宇,温列娜,谢明权

    判断消毒剂抑杀鸡球虫孢子化卵囊的效果,一般要通过鸡体试验,即观察经消毒剂作用过的卵囊对健康鸡的致病力,以病变值、卵囊值、抗球虫指数等判定效果[1]。鸡体试验操作繁琐,试验时间长,且不能确定药物抑杀的百分率。我们参考文献[2,3]介绍的脱囊技术,总结出...

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  • 性信息素对鲤鱼血浆促性腺激素水平的影响

    郑全,陈守义,张玉生,胡仲明

    信息素(pheromone)是同种生物有机体之间的化学通讯信息物质或信号,由一个有机体释放,能引起同种接受者产生行为变化或生理反应。与生殖及性行为有关的信息素称为性信息素。研究表明,鱼类性信息素来源于性腺[1]。关于性信息素的化学本质,已有一些报道[...

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  • 慢病毒疫苗研究的成就、问题及对策

    于力,沈荣显,徐宜为

    按最新的病毒分类和命名,慢病毒被划为反转录病毒科的慢病毒属,并分为5个亚属8个种:灵长类慢病毒,包括人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)、人免疫缺陷病毒Ⅱ型(HIV-2)和猴免疫缺陷病毒(SIV);绵羊和山羊慢病毒,包括梅迪-维斯纳病毒(MVV)和山羊关...

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  • 伊氏锥虫单一或混合抗原免疫小鼠保护性试验

    王云飞,周勇志,钟淑梅,周金林,沈杰

    采用广东克隆(广东水牛伊氏锥虫单虫克隆)、安徽克隆1(安徽水牛伊氏锥虫单虫克隆)、安徽克隆2、新疆克隆(新疆骆驼伊氏锥虫单虫克隆)作单一抗原或混合抗原免疫小鼠试验。用安徽克隆1和新疆克隆单一抗原免疫小鼠,再用相应同株克隆攻击,其保护率在80%以上,而用异株克隆攻击(安徽克隆1、新疆克隆或广东克隆),保护率低于17%,表明安徽、新疆和广东伊氏锥虫各株间免疫原性存在差异。用新疆克隆抗原和安徽克隆2抗原混合免疫,再用新疆克隆和安徽克隆2攻击,保护率在80%以上,用新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫,再用新疆克隆和广东克隆攻击,保护率亦在80%以上,且在免疫后1~2个月仍有效。对新疆克隆抗原和广东克隆抗原混合免疫小鼠脾细胞作体外增殖试验,用不同抗原按500mg/L和125mg/L高低2种剂量刺激,均产生明显增殖,表明各锥虫抗原存在免疫交叉,但在高剂量组,用同株克隆的刺激增殖效果(SI)高于异株克隆。

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  • 地高辛标记C15A核酸探针检测牛巴贝斯虫

    吴鉴三,谢明权,张肖正,吴惠贤,王志亮,谢宏料,杜元钊,彭新宇

    为了提高牛巴贝斯虫核酸探针的检测性能,制备了地高辛标记的牛巴贝斯虫C15A核酸探针。该探针检测牛巴贝斯虫DNA的灵敏度为32pg,检测探针DNA的灵敏度为0.1pg;检测其他对照血液原虫(双芽巴贝斯虫、边缘无浆体、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫、卵圆巴贝斯虫)和牛血细胞的DNA,均未出现非特异性反应。与光敏生物素标记的牛巴贝斯虫C15A核酸探针比较,光敏生物素标记探针能检出10%带虫血12.5μL,而地高辛标记探针能检出10%带虫血0.015μL,且杂交背景浅,显色深。

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  • 《中国兽医学报》1994~1997年载文分析

    秦红丽

    《中国兽医学报》(原名兽医大学学报)是我国唯一的由军队院校主办的以兽医学科为主的学术性期刊。为适应科技发展的需求,拓宽视野,增加信息量,加强与国内外同行的学术交流与合作,该刊于1994年更名为《中国兽医学报》。本文对《中国兽医学报》1994~1997...

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  • 传染性支气管炎病毒S_1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

    步志高,江国托,王秀荣,康丽娟,祁贤,陈万芳,卢景良

    为探讨DNA免疫防制传染性支气管炎(IB)的可能性,以克隆的Masschusete型类M41地方分离QD株S1基因为免疫原基因,引入终止密码后插入SV40启动子、增强子下游和SV40polyA信号上游,构建了S1基因DNA免疫表达质粒pSVQDS1。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的pSVQDS1溶于PBS,以300μg/只的剂量肌肉注射免疫小鼠,于4周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明,pSVQDS1能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒(IBV)M41株的中和抗体,具有良好的免疫原性。

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  • 微量PCR检测鸡马立克氏病病毒早期感染

    李运敏,陈溥言,蔡宝祥,楚文彬

    为了建立一种监测鸡群马立克氏病病毒(MDV)早期感染的微量PCR方法,根据血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV1)基因组BamHI-L片段的核酸序列设计了1对寡核苷酸引物,用含0.3UTaq酶的10μL反应体系分别扩增了MDV1型(京-1株、MD11/75c株)、MDV2型(SB-1株)和HVT(FC-126株)的核酸,并用京-1株感染细胞DNA作了敏感性试验。结果显示,该引物对MDV1型病毒特异,京-1株和MD11/75c株都扩增到425bp的核酸条带,而SB-1株、FC-126株和正常CEF细胞的DNA都没有得到任何条带;敏感性试验结果表明,微量PCR能够检测到0.1pg的京-1株感染细胞DNA;对京-1株感染鸡,在接种后第5天就能在血液细胞中检测到MDVDNA。微量PCR可望成为监测鸡群MDV早期感染的一种快速、有效的方法。

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  • 无包埋体对虾病毒(NOSV)的纯化和随机文库构建

    朱山,郭福生,陆承平,吴时友

    通过超薄切片和负染电镜观察,从患暴发性传染病死亡的中国对虾体组织中,发现一种无包埋体对虾病毒(NOSV)或称中国对虾类杆状病毒(PcBLV)。对其用不连续蔗糖梯度离心纯化,观察了其核衣壳的负染结构:核衣壳平均大小为62nm×314nm,由蛋白壳粒环堆砌而成,每3层环形成1个重复单位,重复单位之间有较大空隙;核衣壳一端较平,另一端近于帽状。提取纯化病毒的核酸,电泳后用低熔点琼脂糖回收,用EcoRI酶切,克隆于pUC18质粒中,共获得16个阳性克隆质粒,克隆片段总长度约53.45kb。

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  • 生长激素释放因子(GRF)的基因改造及化学合成

    冯立文,张永亮,张玉静,欧阳红生,刘松财,岳军明,申建新,刘万臣

    为了提高生长激素释放因子(GRF)的体内活性,根据猪GRF的天然序列,设计了改造后GRF(1~32)的基因序列(含信号肽),两端加设EcoRI、HindⅢ的粘性末端,分4段由DNA合成仪合成,每段长度分别为95、97、86、106NT,2条链间有15个碱基的粘端。用尿素变性PAGE纯化合成片段,用T4多核苷酸激酶对合成DNA磷酸化,混合4个片段复性,然后用T4连接酶连接。提取pBluscript质粒,用EcoRI和HindⅢ在Multicorebufer中酶切完全后,琼脂糖电泳,由GeneEluteAgroseSpinColums回收酶切大片段。将该酶切片段与上述合成的GRF基因由T4连接酶连接,并转化至氯化钙致敏的DH5α。选取重组菌落,提取质粒,用PCR及双酶切鉴定阳性克隆。用Miniprep提取重组质粒,ABI373自动测序仪测序。测序结果表明已克隆到合成的GRF基因。

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  • 产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

    王玉炯,许崇波,冯书章,朱平,殷震

    为了给产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶链式反应(PCR)技术,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了930bp的β-毒素基因。用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对PCR产物进行双酶切处理,然后通过T4DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒pET-28C(+)的多克隆位点,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamHI和EcoRI双酶切分析和PCR扩增检测,证明重组质粒pECB2中含有产气荚膜梭菌的β-毒素基因。经核苷酸序列分析,明确了克隆的β-毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。

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  • 应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌

    李景鹏,李成梅,虞塞明,何成强,丁乃峥,吴丹

    利用聚合酶链反应(PCR)检测沙门氏菌,使用了2对引物HI和phoP。HI引物对各长20NT,根据鞭毛I相抗原基因自行设计,扩增序列长269bp;phoP引物对各长21NT,根据phoP/phoQ基因设计,扩增片段长299bp。PCR采用50μL反应体系。dNTPS各100μmol/L,引物各1μmol/L,Mg2+2.5mmol/L,酶2U。三温段PCR循环条件为:97℃预变性7min;94℃变性60s、55℃复性40s、72℃延伸60s,35个循环;72℃延伸7min。检测8株标准阳性菌,结果都出现了HI引物和phoP引物特异带,标准阴性菌3株只出现phoP特异带,说明HI引物特异性很强。

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