用PCR技术从同一兔出血症病料扩增和检出2种病毒核酸

应用 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术，对兔出血症病毒核酸作了鉴定。分别设计合成 ２ 对 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增特异性引物，即按兔出血症病毒中国分离的 Ｎ Ｊ株核酸序列合成 １ 对引物（ Ｎ Ｊ引物），按德国分离的 Ｆ Ｒ Ｇ 株核酸序列合成另 １ 对引物（ Ｆ Ｒ Ｇ 引物），进行 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ。从纯化的病毒核酸样品和感染 Ｄ Ｊ Ｒ Ｋ 细胞的病毒核酸样品中，均扩增出 ２ 对引物范围内的特异性核酸片段， Ｎ Ｊ引物扩增产物为 ３６４ ｂｐ， Ｆ Ｒ Ｇ 引物扩增产物为 ５１３ｂｐ。模板用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化后，仍出现 ３６４ ｂｐ 带，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，则此带消失；反之，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，出现５１３ ｂｐ 带，用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化，则此带消失，证实前者模板为 Ｄ Ｎ Ａ，后者为 Ｒ Ｎ Ａ。 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验证实， Ｐ Ｃ Ｒ扩增出的核酸片段与各自的地高辛标记特异性探针发生强阳性杂交反应。由此认为，在兔出血症病毒感染中，同时存在着 ２ 种不同核酸型的病毒。

鸡传染性支气管炎病毒华南分离株核蛋白基因的序列测定及同源性分析

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ）核蛋白基因序列，设计并合成 １ 对引物。应用这对引物，以 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 特异性扩增出华南分离株（ Ｈ Ｎ 株）的核蛋白基因，基因产物大小为 １５ ｋｂ ， 与设计相符。对 Ｈ Ｎ 株部分核蛋白基因进行序列测定，并与标准毒株 Ｈ５２、 Ｍ ４１、 Ｂｅａｕ 和 Ｇｒａｙ 的核蛋白基因进行同源性比较，结果表明， Ｈ Ｎ 株与 Ｈ５２、 Ｍ ４１、 Ｂｅａｕ 和 Ｇｒａｙ 株的核酸同源性分别为 ８５％ 、８４％ ８４％ 和 ８６％ 。由此可以看出， Ｈ Ｎ 株与标准毒株在核蛋白基因上存在一定的差异。

鸡包涵体肝炎病毒(IBHV)对雏鸡淋巴细胞和红细胞免疫功能的影响

为探讨鸡包涵体肝炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｈ Ｖ）引起免疫抑制的机理，给 １ 周龄雏鸡经口感染鸡Ⅷ型腺病毒，观察了感染后不同时间血液淋巴细胞转化率、 Ｒ Ｂ Ｃ Ｃ３ｂ 受体花环率和 Ｒ Ｂ Ｃ Ｉ Ｃ 花环率的动态变化。结果表明，淋巴细胞转化率和 Ｒ Ｂ Ｃ Ｃ３ ｂ 受体花环率于感染后 ３ ｄ 开始下降，至 ９ ｄ 降至最低，显著低于对照组（ Ｐ ＜ ００１）； Ｒ Ｂ Ｃ Ｉ Ｃ 花环率于感染后 ５ ｄ 开始升高，至 １１ ｄ 达最高，显著高于对照组（ Ｐ ＜ ００１）。证实 Ｉ Ｂ Ｈ Ｖ 能够引起淋巴细胞和红细胞免疫功能降低。

间接ELISA测定禽源大肠杆菌外膜蛋白抗体方法的建立

建立的检测禽源大肠杆菌外膜蛋白抗体的间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ，抗原最适包被质量浓度为 ５０ ｍ ｇ／ Ｌ；包被方式以 ４℃过夜为佳；待检血清作用时间为 １～１５ ｈ，酶标抗体作用时间为 １５ ｈ 时效果最好，酶标抗体最适稀释倍数为 １∶４ ０００。

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。

动物细胞系的染色体组型分析和致癌/致瘤性

应用间接ELISA检测动物隐孢子虫病抗体

分别应用蔗糖和氯化铯密度梯度离心法纯化小型隐孢子虫（ Ｃｒｙｐ ｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｐ ａｒｖｕｍ ）卵囊，获得高纯度的抗原，建立了用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测动物隐孢子虫病抗体的方法。抗原最适包被质量浓度是 ５．０ ｍ ｇ／ Ｌ，待检血清最佳稀释度是 １∶１００，明胶封闭体积分数和作用时间分别为 １％ 和 ６０ｍ ｉｎ。试验证明，该法具有快速、简便、特异和重复性好等优点。

美国兴起环境─基因研究热──从人类基因组计划到环境基因组计划

猪囊虫病实验动物模型的建立

猪带绦虫孕节经酸性胃蛋白酶 ３７℃消化后，离心收集虫卵，加入含胰蛋白酶、 Ｎａ Ｈ Ｃ Ｏ３ 及猪胆汁的孵化液，置 ３７℃孵化，孵化率在 ７５％ 以上。孵化后的六钩蚴经尾静脉感染昆明小鼠，９ 周后剖检，在小鼠的心脏及肺脏见有猪囊虫，感染率为 １００％ 。压片镜检，确认检出的猪囊虫发育成熟，形态结构完整；胆汁孵化试验，见其头节自动外翻。用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法在小鼠血清中检测到囊虫 Ｃ Ａ 抗原和抗体。试验表明，经尾静脉感染昆明小鼠的六钩蚴，可发育成成熟的猪囊虫，从而为猪囊虫病的研究提供了一种制作简便、经济的实验动物模型。

猪卵丘卵母细胞复合体和壁层颗粒细胞上LHR/hCGR的检测及性腺激素的分泌

用取自 ３～５ ｍ ｍ 卵泡的处于减数分裂阻抑状态的猪卵丘卵母细胞复合体（ｐ Ｃ Ｅ Ｏ），培养 ４８ ｈ，用 Ｆ Ｓ Ｈ（１００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）或 ｈ Ｃ Ｇ（０、５０、１００、２００、５００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）刺激 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌甾体激素；用放射受体测定法（ Ｒ Ｒ Ａ）比较 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 的卵丘细胞及壁层颗粒细胞（ Ｍ Ｇ Ｃ）上促黄体激素受体／人绒毛膜促性腺激素受体（ Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ）的数量； Ａ Ｍ ｅ Ｘ 石蜡切片、免疫组织化学染色，检测 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 以及 Ｍ Ｇ Ｃ 的分布情况。在 Ｆ Ｓ Ｈ 作用下，ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌的孕酮明显高于 ｈ Ｃ Ｇ 作用组和对照组 （ Ｐ ＜ ００５）； 平均每个壁层颗粒细胞上的 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ是每个卵丘细胞的 １０５ 倍； Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在基膜两侧分布较多，且卵母细胞上没有 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ，临近卵母细胞的卵丘细胞膜上较少被染色。以上结果表明，在体外试验中，可能由于 Ｃ Ｅ Ｏ 上 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 的数量不足或生理活性降低， Ｌ Ｈ／ｈ Ｃ Ｇ 不能促进卵母细胞恢复减数分裂。

家兔胚胎细胞核移植与连续移植

将发育不同时期的兔胚和移核胚的卵裂球细胞核与去核的成熟卵母细胞共同组成移核胚，通过中间受体培养和移植实验检验胚胎的发育能力。结果表明，（１）兔囊胚之前各个时期的胚胎细胞核均可使移核胚发育到囊胚；（２）胚胎极化前后的卵裂球参与组成的移核胚发育到囊胚的比例无显著差异。但极化后 ６４细胞胚的卵裂球与去核卵母细胞的融合率低于极化前的 ８细胞胚胎卵裂球；（３）兔 １６细胞胚与去核的卵母细胞组成的移核胚可以发育到期，产仔率为 ３．１６％ ；（４）兔移核胚卵裂球用于连续核移植，其后 ２ 代均可发育成囊胚，其中第 １ 代移核胚与第 ２ 代移核胚发育率相似，但显著高于第 ３ 代移核胚；（５）兔移核胚和各代连续移核胚卵裂球与去核卵的融合率无显著差异。

血小板活化因子对长白猪精子顶体反应率的影响及海风藤酮对其的拮抗作用

以终质量浓度为 ５、１０、２５、５０ μｇ／ Ｌ的血小板活化因子（ Ｐ Ａ Ｆ）与长白猪精子共同温育 ６０ ｍ ｉｎ，在此期间精子的顶体反应率（ Ａ Ｒ）都极显著高于对照组 （ Ｐ ＜ ０．０１）； 终质量浓度为 １００ μｇ／ Ｌ 的 Ｐ Ａ Ｆ组与对照组相比， Ａ Ｒ 差异不显著 （ Ｐ ＞ ０．０５）。由此表明，一定量的 Ｐ Ａ Ｆ 可提高猪精子的 Ａ Ｒ。上述 ５ 个质量浓度 Ｐ Ａ Ｆ试验组中加入海风藤酮（ Ｋ Ａ Ｄ）作用后，各试验组精子 Ａ Ｒ 都低于 Ｐ Ａ Ｆ对照组，且随着 Ｋ Ａ Ｄ 浓度的减小，其降低 Ａ Ｒ 的作用逐渐减弱；在温育 ５、１５、２５、３５、４５、６０ ｍ ｉｎ 内， Ｋ Ａ Ｄ 终浓度为 １．５×１０－ ３ 、１．０×１０－ ３ ｍ ｏｌ／ Ｌ组的精子 Ａ Ｒ 均极显著低于 Ｐ Ａ Ｆ对照组 （ Ｐ ＜ ０．０１）； Ｋ Ａ Ｄ 终浓度为 ２．０×１０－ ５ 、２．０×１０－ ６ ｍ ｏｌ／ Ｌ 组的精子 Ａ Ｒ 与 Ｐ Ａ Ｆ对照组相比，均无显著性差异 （ Ｐ ＞ ０．０５）。此外，在温育 ２５、３５、４５ ｍ ｉｎ 时， Ｋ Ａ Ｄ 终浓度在１．５×１０－ ３ ～２．０×１０－ ４ ｍ ｏｌ／ Ｌ 范围内，精子 Ａ Ｒ 均极显著低于 Ｐ Ａ Ｆ对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。表明?

生长相关蛋白免疫反应神经纤维在20胚龄鸡端脑中的分布

为了给家禽发育神经解剖学积累资料，应用免疫组化 Ａ Ｂ Ｃ 法，对 ２０ 胚龄鸡端脑进行了生长相关蛋白（ Ｇ Ａ Ｐ４３）免疫反应神经纤维分布的研究。结果表明，在端脑新纹状体中含有大量较细的阳性纤维，阳性纤维多集中在新纹状体靠近背髓板区域，纤维有分支且交织成网。部分阳性纤维穿过背髓板向腹下方移行，伸向旧纹状体扩大部。在旧纹状体扩大部，有呈背腹方向排列的短阳性纤维束，数量较多，向尾侧伸向初级旧纹状体。在初级旧纹状体中，阳性纤维束以腹内侧方向排列为主，并有少量细的纤维分支互相交织，向腹内侧移行，逐渐聚集成纹体丘脑束。纹体丘脑束参与形成额丘脑束，伸向丘脑。

双峰驼微量元素补充方法

双峰驼 ４０ 峰，随机均分为 ４ 组：Ⅰ组投服 Ｓｅ Ｃｕ Ｃｏ 复合微量元素缓释丸，Ⅱ组口服硫酸铜并肌肉注射亚硒酸钠，Ⅲ组口服硫酸铜，Ⅳ组对照。全血及被毛检测结果表明，与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ组血、毛 Ｓｅ 含量及谷胱甘肽过氧化物酶（ Ｇ Ｓ Ｈ Ｐｘ）活性极显著升高 （ Ｐ ＜ ００１）； Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血、毛 Ｃｕ 含量和血清铜蓝蛋白（ Ｃ Ｐ）及三碘甲腺原氨酸（ Ｔ３ ）含量均显著升高 （ Ｐ ＜ ００１， Ｐ ＜ ００５）。据此认为，给双峰驼投服 Ｓｅ Ｃｕ  Ｃｏ 微量元素缓释丸与口服硫酸铜并肌注亚硒酸钠具有同样的效果。

甜菜碱促进猪生长的机理

９６ 头“杜长大”生长猪按饲养试验要求分成 ４ 组（每组 ３ 个重复），分别饲 以添加 ０、１ ０００、１ ５００、２ ０００ ｍ ｇ／ｋｇ甜菜碱的基础日粮，试验期 ６２ ｄ。结果表明，１ ０００ ｍ ｇ／ｋｇ 剂量组试验猪生长性能最佳，日增重较对照组提高了 １３２０％ （ Ｐ ＜ ００１）， 料重比降低了 ７９３％ （ Ｐ ＜ ００１）。该组猪血清 Ｇ Ｈ、 Ｉ Ｇ Ｆ Ｉ、 Ｔ３ 、 Ｔ４ 水平分别升高了 １０１７６％ （ Ｐ＜ ００１）， ４４７５％ （ Ｐ ＜ ００１）， ２６５３％ （ Ｐ＜ ００１） 和 １６８３％ （ Ｐ＜ ００５）； 血清游离丝氨酸含量提高了 １４２８％ （ Ｐ ＜ ００５）； 血清总蛋白上升了 ２１６９％ （ Ｐ ＜ ００１）， 血清尿素氮含量降低 了 ４７６７％ （ Ｐ ＜ ００１）； 背最 长肌 和 肝脏 中 Ｒ Ｎ Ａ 含量 及 背最 长肌 Ｒ Ｎ Ａ／ Ｄ Ｎ Ａ 比 率分 别升 高了１２６０％ （ Ｐ ＜ ００５）， １７８０％ （ Ｐ ＜ ００２） 和 １９７９％ （ Ｐ ＜ ００２）； 肝脏 和腺 垂体 ｃ Ａ Ｍ Ｐ 含 量提 高了４７５３％ （ Ｐ ＜ ００１） 和 ６５２１％ （ Ｐ ＜ ００１）。研究结果提示，甜菜碱似作用

犬瘟热病毒野毒株H蛋白基因的序列分析

对引起长春某犬场犬死亡的犬瘟热病毒（ Ｃ Ｄ Ｖ）野毒株（ Ｌ Ｉ Ｕ）附着或血凝蛋白（ Ｈ）基因进行了全基因序列测定，并与疫苗弱毒 Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ 株作了比较。用 ４ 对引物对 Ｌ Ｉ Ｕ 株进行了 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增，将扩增得到的 ４ 个阳性 Ｐ Ｃ Ｒ 片段纯化后直接测序。将所测序列拼接后，去掉侧翼的 Ｆ 基因和 Ｌ 基因序列，得到了 Ｈ蛋白的全基因序列。该基因全长为 １ ９４６ ｂｐ，开放阅读框架（ Ｏ Ｒ Ｆ）始于 ２１～２３ 位的 Ａ Ｔ Ｇ，终止于 １ ８４２～１ ８４４位的 Ｔ Ｇ Ａ，编码 ６０７ 个氨基酸。将 Ｌ Ｉ Ｕ 毒株与疫苗弱毒 Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ 株进行比较，二者 Ｈ 基因核苷酸序列的同源性为 ９１．７％ ，推导的 Ｈ 蛋白氨基酸序列的同源性为 ９０．２％ 。 Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ 株的 Ｈ 蛋白潜在的 Ｎ 联糖基化位点为 ４ 个，而 Ｌ Ｉ Ｕ 株 Ｈ 蛋白为 ８ 个。糖基化位点的不同可能对 Ｌ Ｉ Ｕ 株 Ｈ 蛋白的抗原性产生影响。２ 个毒株 Ｈ 蛋白的半胱氨酸残基数目均为 １２ 个，且位置是保守的；疏水性有一定的不同，但推测的穿膜区位置是相同的，位于 ３５～５５ 位氨基酸之间。

禽细小病毒的分子生物学