鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gC和gD基因的克隆及序列分析

根据已发表的传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) SA-2株的核酸序列 ,设计了 1对引物 ,以 ILTV中国王岗株 DNA为模板 ,PCR法扩增出 1条 1 .3 9kb的基因片段 ,将扩增产物插入到真核表达质粒 p CRTM 3 -Uni,得到重组质粒 p TA-g D。另将克隆到 p Bluescript SK质粒中的 g C基因酶切后 ,插入到 p CRTM 3 -Uni载体 ,得到重组质粒 p TA-g C。经电泳分析、酶切、PCR鉴定后 ,进行序列测定。序列分析表明 ,ILTV王岗株 g C基因的编码序列与 SA-2株的核苷酸同一性为 99%,而王岗株 g D基因的编码序列在其 C端多了 1 7个核苷酸 ,其余部分的同一性为 97%。鉴于 g C、g D基因在诱导机体产生对 ILTV的免疫应答中的作用 ,g C、g D基因的克隆及其真核表达质粒的构建 ,为 ILTV基因免疫的研究奠定了基础

新城疫病毒F48E9株及东北地区流行株F基因遗传变异分析

采用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿抽提一步法 ,提取新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株及 2个东北地区分离株 DB3、DB5基因组 RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因 c DNA第 1链 ,再利用 PCR技术分段扩增出 F基因的c DNA。F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的 c DNA经酶切修饰后 ,插入 p UC1 9的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5α。经相对分子质量比较、酶切分析及 PCR等鉴定方法筛选出 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的阳性克隆。然后采用 Sanger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,证实分别获得了 F4 8E9、DB3和 DB5株 F基因的全长 c DNA。利用 DNASIS及 MEGA分析软件 ,将上述 3个毒株的 F基因序列与基他 1 1株有代表性的 NDV的相应序列进行比较分析 ,并绘制了 1 4株 NDV F基因的系统发育进化树。结果表明 ,F4 8E9和 DB3株在核苷酸序列上相对独立于 Toyoda等所分的 A、B、C组 ,单独成为一组 ;DB5株与B1 Hitchner株同属 B组 ,说明它们具有较高的同源性。同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行。从进化的角度来看 ,NDV各毒株间确实存在遗传变异 ,但 F蛋白主要功能区遗传相对稳定

应用抗多肽抗体鉴别新城疫病毒强弱毒株

:在克隆我国流行的新城疫病毒 ( NDV)强毒株 F4 8E8株、四平株及弱毒株长春株、V4株的 HN和 F基因并进行测序的基础上 ,针对我国流行的 NDV强毒株 F蛋白前体 ( F0 )的 F2片段的特异结构 ,人工合成特异性多肽 ,将其与小牛血清白蛋白 ( BSA)化学偶联制备成全抗原 ,免疫小鼠制备出抗多肽血清。经 ELISA检测 ,该抗体与 NDV强毒株呈强阳性反应 ,而与鸡痘病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、NDV弱毒株长春株和 V4株呈阴性反应。试验结果表明 ,该抗体可以用于 NDV强弱毒株毒力的快速鉴定

鸡传染性腺胃炎病毒(暂定名)的致病性

用暂定为鸡传染性腺胃炎病毒 ( IPV)的 ZJ971株 ,经口服、腹腔、泄殖腔、口服 -腹腔 -泄殖腔联合不同途径接种于 8日龄来航非免疫雏鸡 ,均可引起雏鸡感染发病 ;其中 ,以口服 -腹腔 -泄殖腔联合途径感染效果最佳 ,腹腔途径次之。感染雏鸡生长阻滞、体重增长缓慢 ;剖检眼观病变主要以腺胃重量增加 ,腺胃指数增大 ,胸腺、法氏囊萎缩为特征 ;病理组织学变化主要以萎缩性胃炎、法氏囊炎、十二指肠卡他性炎为特征

524位两院院士投票评出1999年中国世界十大科技进展

鸭源流感病毒感染对鸡和家鸭红细胞免疫功能的影响

采用商品来航鸡、樱桃谷鸭分别接种鸭源流感病毒株 A/duck/Nanjing/2 1 /95( H9N?) ,研究了禽流感病毒 ( AIV)感染对红细胞免疫功能的影响。结果发现 ,流感发生与红细胞 CR1花环率之间存在着反向关系 ;正常鸭的红细胞 CR1花环率极显著高于正常鸡的红细胞 CR1花环率 ,即使接种 AIV后 ,鸭红细胞 CR1花环率有所下降 ,但也显著高于正常鸡的红细胞 CR1花环率。这些结果表明 ,鸭的红细胞免疫功能在一定意义上比鸡的红细胞免疫功能强 ,这从红细胞免疫功能这一侧面探讨了鸭对 AIV感染表现为无症状 ,而鸡感染AIV后发病率和死亡率都较高的机制

猪繁殖与呼吸道综合征RT-PCR诊断方法的建立

根据猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)核衣壳蛋白 ORF7的序列 ,设计了 1套引物 ,建立了检测 PRRSV核酸的 RT-PCR方法。通过对猪繁殖与呼吸道综合征 ( PRRS)标准毒株的检测 ,证明该方法不仅能够扩增出特异性的核酸片段 ,同时可从基因水平上区分 PRRSV美洲型和欧洲型。使用该方法对国内临床上疑似为 PRRS的送检样品进行检测 ,结果为阳性 ,并确定其基因型均为美洲型。该研究建立的从组织中直接提取细胞总 RNA进行 RT-PCR的方法 ,为 PRRS的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段

禽病原性大肠杆菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株 TK3 ( O1 )提取 型菌毛免疫 BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,获得 4株能稳定分泌针对 型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别命名为 a B6 、b G5 、c F3和 c G3。单抗阻断甘露糖敏感血凝试验、免疫胶体金和 Western blot试验证明 ,单抗是 型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的 ELISA效价为分别为 1 0 - 2～ 1 0 - 3和 1 0 - 5～ 1 0 - 6 ;腹水的平板凝集价为 1∶ 1 2 8～ 1∶ 2 56。上述4株单抗对 77株带 型菌毛的禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测 :O1 8分离株阳性率为72 %,O78分离株阳性率为 1 7%,O2分离株阳性率为 3 3 %,O88分离株阳性率 89%,O1 1分离株阳性率为60 %,O2 6分离株阳性率为 3 3 %。表明研制的 型菌毛单抗能检出大多数 O1 8、O88、O1 1分离株的 型菌毛 ,而对 O78、O2、O2 6分离株相应菌毛的检出率较低

用PCR和探针杂交法检测鸡败血霉形体

根据鸡败血霉形体 f MG-2核酸片断序列 ,设计合成了 1对 2 5bp寡核苷酸引物 ,对鸡败血霉形体基因组 DNA进行扩增 ,均获得预期的 73 2 bp扩增产物 ,检测灵敏度为 1 pg;参考菌株 DNA无扩增。回收纯化琼脂糖电泳凝胶中的扩增产物 ,DIG随机引物法合成核酸探针 ,Dot-blot杂交试验 ,鸡败血霉形体呈阳性 ,检测灵敏度为 1 0 0 pg;其他为阴性。对自然发病鸡群检测进一步表明 ,建立的 PCR和探针杂交法具有高度的灵敏性和特异性 ,可用于鸡败血霉形体早期感染和隐性感染的检测

抗菌肽Shiva-1基因的人工合成与克隆

参照抗菌肽 Shiva-1的氨基酸序列 ,兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子 ,设计了 Shiva-1基因序列 ,加上适宜基因工程操作的酶切位点 ,人工合成了 2条分别为 92 bp和 91 bp的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、Eco RI酶切 ,将完整的 Shiva-1基因反向克隆至 p UC1 8载体 ,经 PCR检测和序列分析证明 ,已正确克隆了抗菌肽 Shiva-1基因

嗜水气单胞菌与迟缓爱德华氏菌亚单位二联疫苗对小鼠的免疫效果

将嗜水气单胞菌 ( Ah) J-1株的 HEC毒素和胞外蛋白酶 ( ECP)分别与迟缓爱德华氏菌 ( Et) 3 8株的脂多糖 ( LPS)及脱毒多糖 ( PS)偶联 ,制成 3种亚单位二联疫苗 :HEC-PS、ECP-PS、HEC-LPS。将它们与 Ah J-1和 Et3 8全菌灭活疫苗一同分别免疫小鼠 ,并设注射 PBS对照组 ,检测各组小鼠体液免疫及细胞免疫水平。结果显示 ,用间接 ELISA、溶血抑制和全菌凝集试验检出这 3种亚单位疫苗的抗体水平无明显差异 ,并且都对 Et3 8有凝集活性。用 MTT法检测脾淋巴细胞转化率和腹腔巨噬细胞吞噬活性 ,显示亚单位疫苗的细胞免疫指标均明显高于对照组 ,但略低于全菌苗免疫组。在第 2次免疫后的第 6周 ,分别用 1 0 0 LD5 0 Ah J-1和2 .3 7× 1 0 7CFU Et3 8攻击 ,Ah J-1攻击各组的保护率依次为 ,HEC-PS组 83 .3 %、ECP-PS组 80 %、HEC-LPS组 92 .3 %、Ah J-1全菌组 1 0 0 %、Et 3 8全菌组 2 5%、对照组无保护力 ;Et 3 8攻击各组的保护率依次为HEC-PS组 90 %、ECP-PS组 90 .9%、HEC-LPS组 85.7%、Ah J-1全菌组 62 .5%、Et3 8全菌组 1 0 0 %、对照组为 1 2 .5%。表明 3种亚单位偶联疫苗均具有较好的二联疫苗的性能

我国犬埃立克体病病原分离与鉴定Ⅲ.病原的电镜观察

对埃立克体感染犬的单核细胞和血小板进行了透射电镜观察 ,结果表明 ,单核细胞的细胞质和血小板中均存在埃立克体包涵体 ,其中单核细胞的包涵体内病原多达 8个 ,血小板的包涵体内至少有 3个病原。这一结果从形态学角度进一步证实了引起广州市郊某养犬基地流行犬埃立克体病的病原为 2种 ,即感染单核细胞的犬埃立克体 ( Ehrlichia canis)和感染血小板的扁平埃立克体 ( E.platys)

流行性白血病病牛的免疫病理学观察

用 8种单克隆抗体 ( TH1 4B、BAQ4 4A、BIg4 5A、BIg71 5A、BIg50 1 E、CACT1 0 5A、MM1 A、AH-CC1 2 5) ,结合常规病理学方法 ,对 1 0头流行性白血病病牛的免疫病理学进行了观察。结果 :患病较轻时 ,淋巴结内的淋巴小结肿大 ,生发中心明显 ,副皮质区显著增宽。脾脏中的脾小体亦增大 ,动脉周围淋巴鞘增厚。用 Mc Ab证明 ,在淋巴结和脾脏中有较多的 B淋巴细胞和大量 T淋巴细胞。患病较重时 ,淋巴结中的淋巴小结萎缩、消失 ,皮质区有大量弥散的小淋巴细胞 ,脾小体萎缩 ,残存脾小体的生发中心内网状细胞增生 ,周边有大量小淋巴细胞。动脉周围淋巴鞘扩大 ,有多量小淋巴细胞聚集 ,有时可见到相邻的淋巴鞘融合的现象。用Mc Ab证明 ,在淋巴结和脾脏内有大量 T淋巴细胞 ,而 B淋巴细胞稀疏 ,甚至消失。据此认为 ,牛流行性白血病以细胞免疫反应为主 ,体液免疫反应则随着疾病的发展而逐渐减弱

猪不同直径卵泡中卵母细胞体外培养的成熟潜力

比较研究了猪卵巢表面直径 0 .5～ 1 mm、1～ 2 mm、2～ 6mm、>6mm卵泡中卵母细胞所处的生发泡阶段。结果表明 ,0 .5～ 1 mm卵泡中卵母细胞主要处于 GV- 期和 GV- 期 2个阶段 ,比例分别为 67.2 %和2 0 .6%;而 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中 ,卵母细胞大部分则处于 GV- 期 ,比例分别为 91 .9%和89.6%;>6mm直径卵泡中 ,卵母细胞逐渐发生老化 ,GV- 期比例仅为 53 .2 %,一部分处于 GV- 期和GVBD期。体外培养试验表明 ,1～ 2 mm卵泡中卵母细胞的体外成熟率比较低 ,其中一部分卵母细胞不能发生 GVBD( 2 5.1 %) ,另有一部分卵母细胞 ( 3 9.8%)达到第 1次减数分裂中期后 ,不能继续向前发育。培养 0～ 2 0 h时 ,添加 1 mmol/ L dbc AMP,能够显著抑制 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中卵母细胞发生 GVBD。培养 2 0 h后 ,去除 dbc AMP,显著增加了培养到 4 4h阶段的 M- 期比率。 dbc AMP主要是降低了培养 4 4h阶段 GV期阻滞的比率 ,而对 M- 期阻滞的比例没有影响。因此 ,dbc AMP的作用可能主要是促进卵母细胞GVBD的同步化

什么是科学精神

家兔随机扩增多态性DNA分析

从 2 5个随机引物中筛选出 5个具有较高多态性的引物 ,分别对 5个群体的 80只家兔基因组 DNA进行了 RAPD-PCR扩增。经统计分析得到了 5个家兔群体之间的远近不同的进化亲缘关系 ,聚类结果与预期目标一致

甜菜碱对断奶仔猪消化机能的影响

选用 4 8头始重为 1 0 kg左右的杜长加断奶仔猪 ,随机分成对照和试验 2组 ,饲以基础饲粮。试验组中添加 80 0 mg/kg甜菜碱 ,试验期 3 6d,每天记录腹泻头数。结束前 1周进行消化试验 ,结束时进行屠宰试验 ,取十二指肠内容物及其电镜切片样品。结果表明 ,添加甜菜碱组饲粮中干物质和粗蛋白的消化率较对照组分别提高 4 .2 4 %( P <0 .0 5)和 6.4 5%( P <0 .0 5) ;腹泻率较对照组降低 3 3 .80 %( P <0 .0 1 ) ;十二指肠内容物中总蛋白水解酶活力比对照组高 53 .3 2 %( P<0 .0 5) ;脂肪酶和淀粉酶活力与对照组差异不显著 ( P>0 .0 5) ;十二指肠电镜切片显示 ,甜菜碱组猪十二指肠微绒毛长度和密度均比对照组明显改善 ,其长度较对照组提高 1 6.1 9%( P <0 .0 5)。上述结果提示 ,饲粮中添加甜菜碱能明显改善断奶仔猪的消化机能 ,提高饲粮中养分的消化与利用 ,其主要原因在于甜菜碱改善了断奶仔猪消化系的生长发育状况 ,进而影响了消化道内源性消化酶的分泌与活性

鸡传染性法氏囊病病毒变异的分子生物学研究进展