兽医针灸学面临的挑战与思考

鸡传染性支气管炎病毒中国分离株核蛋白基因的分子克隆

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经过同样处理的载体 p UC1 1 9上。经 PCR、酶切、斑点杂交及 Southernblotting杂交鉴定 ,证实获得了含有 IBV的核蛋白基因的重组质粒

人白细胞抗原-B27(HLA-B27)转基因小鼠的建立

人白细胞抗原 -B2 7( HLA-B2 7)与强直性脊柱炎 ( AS)有强相关性 ,为构建 AS动物模型以用于其发病机理和治疗的研究 ,将 HLA-B2 7基因与 β2 -微球蛋白基因等量混合后 ,利用显微注射技术注入昆明小鼠的1 3 70枚受精卵中 ,再将注射后存活的 1 0 50枚卵移植到 58只假孕母鼠体内 ,产仔 97只。PCR检测上述 97只转基因仔鼠 ,结果 2 7只为阳性。Southern blotting检测上述 2 7份 PCR阳性小鼠的基因组 ,结果 8只为阳性 ,表明已成功地建立了 HLA-B2 7转基因小鼠

1个新的DNA分子量标准物

犬瘟热病毒南京分离株的生物学特性鉴定

从南京地区临床诊断疑似为犬瘟热的病犬脑组织分离到 1株病毒 ,经鉴定为犬瘟热病毒 ( CDV) ,命名为 CDV-NJ1 5,对其培养特性、细胞毒力、血凝活性、抗原性、结构多肽和对犬的致病性进行了研究。结果表明 ,除 Vero外 ,CDV-NJ1 5还能在 MDCK、BHK-2 1、FE、DJRK、HEp-2等细胞系有限增殖 ,产生的 CPE特征与 Vero细胞类似 ,但不能在 PK1 5细胞系增殖。在 Vero细胞的 TCID5 0 和空斑形成单位分别为 1 0 - 5 .0 /m L和2 .4× 1 0 5 PFU/m L。参考株 CDV-Onderspoort的培养特性和细胞毒力基本与之相似 ;交叉中和试验表明 ,二者之间具有交叉反应和相同的抗原性 ;二者的结构多肽 NP蛋白和 F蛋白用特异性单克隆抗体免疫转印技术分析 ,未显示差异。动物回归试验表明 ,CDV-NJ1 5对犬表现出弱致病力。以上结果提示 ,该分离株是一持续性感染的弱毒株 ,其抗原性与疫苗株未显示差异

生长激素释放因子(GRF)在动物肌肉组织的表达

向大鼠后肢小腿前部注射生长激素释放因子 ( GRF)的表达质粒 pc DNA3 -GRF4 0 μg,于注射后 2 d开始 ,每隔 5d杀 2只取样 ,提取 RNA和 DNA,用 PCR和 RT-PCR检测质粒及其表达。结果表明 ,在 3 0 d时仍为阳性结果。注射部位肌肉组织免疫组化检测结果表明 ,在部分大鼠 ( 1 4/ 2 4 )的肌肉组织中检测到了 GRF分子。给家兔注射 pc DNA3 -GRF质粒 1 0 0μg(第 组注射质粒 ,第 组注射含 1 0 %甘油的质粒 ) ,于注射后 1 d开始采血分离血清 ,用 RIA法测定血清生长激素 ( GH)的水平。结果表明 ,第 组在 5d时 ,GH水平上升2 7.1 %( P <0 .0 5)。本研究结果表明 ,外源 GRF在肌肉组织可获得表达 ,并能提高动物体内的 GH水平

通用真核表达载体的构建及其活性检测

以质粒 pc DNA3和 p SV2 -dhfr为基础 ,构建了 2个通用表达载体 p MCD-A和 p MCD-B,然后将 EPOminigene克隆于它们的多克隆位点之中 ,得到表达载体 p AE和 p BE,经脂质体导入 CHO-dhfr- 细胞瞬时表达 ,结果表明 ,p MCD-A和 p MCD-B表达效果较好 ,表达产物经网织红细胞法测定 ,具有体内生物活性

狐化脓性子宫内膜炎菌苗株的选育及免疫试验

通过血清分型证实 ,狐化脓性子宫内膜炎主要由 、 型绿脓杆菌所引起。对分离菌株进行毒力和免疫原性测定 ,筛选出了免疫原性良好的型代表株 P960 1和 P970 3。用选育菌株研制的双价灭活疫苗进行免疫试验 ,结果小鼠能抵抗该 2株强毒菌混合物 1 0个 MLD的攻击 ,保护率达 1 0 0 %;田间试验证实 ,该双价菌苗能有效控制狐化脓性子宫内膜炎的发生。此外 ,对选育菌株生化特性及对抗生素的敏感性进行了测定

鸡源大肠杆菌胞外蛋白酶的检测

用脱脂奶琼脂平板法检测了 1 0 0株大肠杆菌的胞外蛋白酶。结果 ,在 88株鸡源株中 ,阳性者为 2 2株( 2 5%) ,1 2株参考株中有 3株为阳性 ( 2 5%) ,显示较高比例的大肠杆菌产生胞外蛋白酶这一致病因子。另外 ,用嗜水气单胞菌 J-1株的胞外蛋白酶 ( ECPase54)抗血清作 Dot-ELISA,检测上述 1 0 0株大肠杆菌 ,3株鸡源株表现阳性 ,其脱脂奶琼脂平板法检测结果亦为阳性。

口服甘露寡糖(MOS)对哺乳仔猪免疫功能和血液GSH-Px、SOD的影响

在 6窝仔猪中每窝选择 4只 ,共 2 4只仔猪随机分成对照组 ( 1 2只 )和试验组 ( 1 2只 )。仔猪出生次日开始灌服甘露寡糖 (试验组 )和生理盐水 (对照组 ) ,以后每 2 d灌服 1次 ,直至断奶 ( 2 8日龄 ) ,3 0日龄采血检测。研究结果表明 :( 1 )甘露寡糖能极显著提高哺乳仔猪血清 Ig A( 2 .1 0 1 g/ L)水平 ( P <0 .0 1 ) ,显著提高Ig G( 6.77g/ L)水平 ( P <0 .0 5) ,但对 Ig M( 1 .3 96g/ L)、C3( 0 .2 1 4g/ L)、C4( 0 .1 49g/ L)没有明显影响 ( P >0 .0 5) ;( 2 )甘露寡糖能极显著提高哺乳仔猪 PHA淋巴细胞转化率 ( 47.75%,P <0 .0 1 )、白细胞吞噬能力( 3 4 .3 8%,P <0 .0 1 )和 T-淋巴细胞总数 ( 61 .75%,P <0 .0 1 ) ;( 3 )甘露寡糖能极显著地提高血液 GSH-Px( 41 .3 3 U/ L)和 SOD( 1 49.83 U/ L)水平 ( P <0 .0 1 )。结论 :甘露寡糖通过显著增加哺乳仔猪血液 T-淋巴细胞总数达到同步提高体液免疫和细胞免疫功能 ;能显著提高哺乳仔猪血液 GSH-Px和 SOD活性 ,可能与甘露寡糖改善肠道微生态环境 ,促进某些营养物质 ,如 Se、Cu、Zn等吸收有关

早期断奶应激对仔猪血清生化指标的影响

5窝 3 5日龄仔猪 4 0头 ,随机分成 2组 ,每组 2 0头 ,每窝 4头。 组仔猪 3 5日龄断奶后留原栏 , 组仔猪 3 5日龄随母猪转栏。在断奶时和断奶后 1、3 d,仰卧前腔静脉采血 ,进行生化指标检验。结果表明 , 组仔猪断奶后 3 d,血清尿素氮 ( BUN)水平升高 ( P <0 .0 5) ,血清球蛋白 ( GLOB)水平降低 ( P <0 .0 5)。断奶后腹泻仔猪的血清钠 ( Na)、葡萄糖 ( GLU)、总蛋白 ( TP)、氯 ( Cl)、清蛋白 ( ALB)水平与腹泻前相比显著下降或极显著下降 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,血清尿素氮 ( BUN )、乳酸脱氢酶 ( LDH )、肌酸激酶 ( CK )、球蛋白( GLOB)升高 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1 )

测定多种动物血清中LH生物活性RRA法的应用

利用已建立的可测定多种动物血清中促黄体激素 ( LH)生物学活性的 LH-RRA法 ,检测了不同生理状态下的 LH分泌量 ,进一步分析了该 RRA法在实践应用中的可靠性。通过用特异性刺激 LH分泌的 LRH-A3注射动物和诱导体外培养的垂体细胞分泌 LH的试验表明 ,该方法具有很高的特异性和可靠性。结果显示 ,雄兔对于 LRH-A3刺激有特异性反应。 2只兔前后、不同兔同时的对照试验表明 ,该 RRA法可以特异性地检测出 LRH-A3引起的 LH特异性变化。对母猪发情至早期妊娠阶段血清中 LH检测结果表明 ,此 RRA法可有效地测定出猪血清中 LH的动态变化。利用绵羊垂体细胞体外培养模型 ,分别用不同剂量的 LRH-A3( 0、1、1 0、1 0 0、1 0 0 0 ng/孔 )诱导垂体细胞合成和分泌 LH,RRA测定结果表明 ,试验组 LH含量分别比对照组增加 1 .77、1 .78、2 .0 3和 1 .4 6倍 ( P <0 .0 1 ) ,呈现剂量依赖关系。以上结果表明 ,建立的 LH-h CG的 RRA可以替代 RIA和体外生物测定法

氟砜霉素的急性毒性和亚慢性毒性试验

氟砜霉素对大鼠的急性毒性试验结果表明 ,氟砜霉素对大鼠的经口 LD5 0 大于每千克体重 50 0 0 mg。亚慢性毒性试验的结果表明 ,按每千克体重 1 0 0 mg的剂量应用氟砜霉素 3 0 d以上 ,会减少大鼠的增重 ,降低骨髓的造血机能 ,损伤肝脏 ,严重损伤肾脏及睾丸 ,但对脾脏、肺脏、雌性生殖器官、大脑无损伤。氟砜霉素 50mg/ kg的剂量对肾脏有轻度的损伤 ,在 3 0 d时可减少大鼠的增重 ,但对其他组织器官以及骨髓造血机能均无影响。氟砜霉素 3 0 mg/ kg的剂量应用 60 d,对大鼠的增重、骨髓造血机能及各组织器官均无影响

双峰驼肾上腺的组织学与细胞超微结构

:用组织学、组织化学和电镜技术对 3 5例双峰驼肾上腺的组织学和细胞超微结构作了研究。结果表明 ,双峰驼肾上腺的主要组织结构特点为 :( 1 )被膜厚而致密 ,其纤维束常伸入球状区并将此区实质分隔成大小不等的细胞团 ;( 2 )束状区中可见由纤维组织和球状区细胞构成的圆团状结构 ,有时也见髓质细胞团分布 ;( 3 )网状区细胞着色均匀 ,因此不像其他动物的那样分为明细胞和暗细胞 ,此区与髓质界限不清 ,其中有较多孤立存在的髓质细胞团 ;( 4)髓质细胞分亮细胞和暗细胞 2类 ,但其分布与人和其他动物的完全不同 ,髓质因此也不能被分为内区和外区 ;更特别的是在髓质中有较多大小不一的皮质小体 ,其中心为一束纤维和血管 ,向外依次由皮质各层细胞环绕。

中国人民解放军基因工程重点实验室简介

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

用光镜、电镜观察了生后 1～ 1 8d昆明白小鼠的生精上皮。结果显示 ,生后 1～ 3 d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞 2类形态结构截然不同的细胞 ,前者位于管中部 ;生后 4～ 5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上 ;生后 6～ 7d,原始 A型精原细胞大量出现并附着在基膜上 ;生后 8d,A型精原干细胞大量出现 ,B型精原细胞开始出现 ;生后 1 0 d,B型精原细胞大量出现 ;生后 1 2～ 1 3 d,前初级精母细胞出现 ,少数曲细精管的管腔开始出现 ;生后 1 4～ 1 5d,多数曲细精管管腔基本形成 ,前初级精母细胞大量出现。本试验的结果表明 ,7～ 8d小鼠的睾丸最适于分离精原干细胞

枫泾猪发情周期子宫性腺激素受体含量的变化

以长白猪为对照 ,测定了枫泾猪发情周期血浆中雌二醇和孕酮及其子宫受体含量。发情期血浆雌二醇的峰值 ,枫泾猪为 ( 57.0 4± 3 .60 ) ng/ L,长白猪为 ( 55.85± 3 .0 4 ) ng/ L,两者无显著差异 ( P >0 .0 5)。孕酮最高水平和间情期平均水平 ,均为枫泾猪高 ( P <0 .0 1 )。孕酮最高水平 ,枫泾猪为 ( 2 4 .1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 6.67± 0 .2 1 ) μg/ L;孕酮间情期平均水平 ,枫泾猪为 ( 1 8.1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 1 .0 7± 0 .61 )μg/ L。枫泾猪发情期和间情期的细胞质雌二醇受体 ( CER)分别为每毫克 DNA( 3 87± 2 1 .2 )、( 3 52± 1 8.2 )fmol,其离解常数 ( kd)值分别为 ( 4.8± 0 .4 )、( 3 .8± 1 .0 ) nmol;细胞核雌二醇受体 ( NER)分别为每毫克DNA( 1 2 69.58± 1 56.4 2 )、( 578± 2 1 .4 ) fmol,其 kd值分别为 ( 5.8± 1 .4 )、( 3 .4 8± 1 .0 ) nmol;细胞质孕酮受体 ( CPR)分别为每毫克 DNA( 3 4 3 .0± 51 .4 )、( 1 48± 4 1 .0 ) fmol;细胞核孕酮受体 ( NPR)分别为 ( 3 2 4± 6.9)、( 1 1 5± 2 .4 ) fmol。发情期和间情期子宫 NER含量较长白猪高 ( P <0 .0 5) ,说明此时枫泾猪子宫对雌二醇具有较高的敏感性

绵羊体内外受精胚胎玻璃化冷冻保存

用 EFS4 0溶液对绵羊体内外受精的早期囊胚进行了玻璃化冷冻保存的研究。经卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养获得的早期囊胚 ,分别作如下处理 :( A) 1 0 %EG中预处理 5min后 ,在 EFS4 0平衡 3 0 s(两步法 ) ;( B) EFS4 0中平衡 1 min(一步法 ) ;( C) EFS4 0中平衡 2 min(一步法 )。然后投入液氮中冷冻保存 ,解冻胚胎的继续发育率分别为 80 %、78%和 50 %,A、B2组的结果与对照组 ( 88%)无显著性差异 ( P >0 .0 5)。经超数排卵获得的体内受精早期囊胚用两步法冷冻保存 ,解冻后胚胎发育继续率为 89%,与对照组( 93 %)也无显著性差异 ( P >0 .0 5)

转基因植物可饲(食)疫苗