绵羊白细胞介素2基因的克隆与序列分析

为与腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因构建融合基因表达载体 ,利用健康绵羊血扩增和克隆了设计有特殊酶切位点的绵羊白细胞介素 2 ( Ovi IL-2 )。从绵羊血中分离白细胞 ,用 TRIZOL试剂盒提取绵羊白细胞RNA,以 RNA为模板 ,用设计的 Ovi IL-2 3′引物进行 RT-PCR,扩增 Ovi IL-2 c DNA;以 Ovi IL-2 c DNA为模板 ,用 Ovi IL-2的 5′引物和 3′引物进行 PCR,扩增设计有 Bam H 和 Eco R 限制性酶切位点的 Ovi IL-2。经1 .5%琼脂糖凝胶电泳分析和 Xba 酶切鉴定 PCR产物后 ,将 Ovi IL-2 PCR产物与质粒 p Bluescript SK( + )连接 ,进行 Ovi IL-2基因克隆 ,在含 X-gal和 IPTG的 LB平板上 ,挑选白色单一菌落进行重组质粒筛选 ,用Bam H + Eco R 或 Eco R 酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳出现 1条 50 0 bp大小的带 ;用 Eco R 或Eco R + Xba ,Bam H + Xba 酶切重组质粒分别出现 2 70 bp和 2 30 bp大小的带 ,从而筛选出重组质粒p Blue-Ovi IL-2。将筛选出的 p Blue-Ovi IL-2进行序列分析 ,证明克隆的 Ovi IL-2基因与国外报告的基因一致

我国RV野毒株G基因主要功能区核酸序列的分子差异

对来源于鹿、牛和鼠的狂犬病病毒 ( RV)野毒株 82 0 2、BRV、MRV的 G基因 4 0 5～ 1 1 4 6位核苷酸序列进行了 RT-PCR扩增、克隆和序列测定 ,并应用计算机软件对这 3个毒株的测定序列和人源株 CGX89的相应序列进行了分析比较。结果表明 ,这 4个不同来源 RV的 G基因主要功能区的分子差异较大 ,4个野毒株的糖基化位点和主要诱导中和抗体产生的抗原决定簇内某些氨基酸亦不同 ,这些差异将影响它们的抗原性和毒性。研究结果证明 ,在我国流行的 RV野毒株中存在亲缘关系较远的毒株 ,其野毒株 G基因较大的分子差异可能影响疫苗的免疫保护效果

NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较

以新城疫病毒 ( NDV)长春株接种 9日龄 SPF鸡胚增殖后 ,进行了蚀斑纯化 (三代 )鉴定 ,差数、蔗糖密度梯度离心提纯和生物学特性鉴定。结果表明 ,该病毒的鸡胚平均致死时间 ( MDT)大于 1 6 8h,雏鸡脑内致死性 ( ICPI)为 0 .2 5,雏鸡静脉致死性 ( IVPI)为 0 ,血凝解脱时间超过 1 2 0 h,血凝素热稳定性 56℃ 5min仍具有血凝活性。系统发育进化树分析表明 ,NDV长春株与 La Sota株亲缘关系最近 ,为弱毒株。参考多株 NDVHN基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR一次性扩增出 NDV长春株的全长 HN基因。将该 HN基因插入 p KS( -)后 ,进行了序列测定。序列分析表明 ,该 HN基因核苷酸长度为 1 731 bp,编码 577个氨基酸 ,序列中有 5个糖基化位点 ,1 2个半胱氨酸残基 ,与国外发表的 NDV毒株序列相符 ,核苷酸同源性为88.1 %～ 98.8% ,推导的氨基酸同源性为 91 .1 %～ 98.8%。

原位PCR检测鸡传染性法氏囊病病毒

采取临床病例鸡的法氏囊制成石蜡切片 ,经蛋白酶 K处理、原位 RT-PCR后 ,用地高辛精标记探针进行原位杂交检测传染性氏囊病病毒 ( IBDV)。结果 1 0个病例有 8个呈阳性 ,2个阴性。本试验尝试利用具有极高灵敏度的原位 PCR方法 ,从组织中检测低拷贝甚至单拷贝的目标序列 ,以鉴别隐性感染或混合感染 ,为IBDV的诊断和分子流行病学的分析提供了一种新的手段。

鹅细小病毒主要结构蛋白基因的扩增、克隆与原核表达载体的构建

根据已发表的鹅细小病毒 ( GPV)核苷酸序列设计并合成了 1对引物 ,对 GPV主要结构蛋白 VP2和VP3基因进行扩增。所获得的 PCR产物与预期片段大小相符 ,约 1 .8kb。将该片段直接与真核表达 p CR3.1T载体连接 ,转化入感受态大肠杆菌 TOP1 0 F′中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及 Bam H 酶切线性化初步鉴定的基础上 ,经限制性内切酶 Sca 和 Eco R 分别酶切进行正反向鉴定 ,获得了 3个正向插入的克隆 ( PVPA)和 2个反向插入的克隆 ( PVPB)。将正向插入的克隆 PVPA1与原核表达载体 p ET-2 8b( + )分别用 Bam H 和 Xho 双酶切后 ,回收目的片段进行定向连接 ,并转化入感受态大肠杆菌 DH5α中。对所获得的重组质粒分别经 Sca 、Eco R 、Bam H / Xho 酶切 ,证实含有目的基因 ,且基因插入方向正确 ,成功地构建了含有 GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体 ,为高效原核表达以及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础

大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除

对采集的 9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上 ,进行了耐药基因定位。结果表明 ,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上 ,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验 ,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达 6 9.4 %。

牛肌肉组织中苯并咪唑类药物的基质固相分散-高效液相色谱多残留分析法

将基质固相分散 ( MSPD)与酸碱萃取相结合 ,对组织中的残留物进行净化。反相高效液相色谱( HPLC)测定 ,流动相为乙腈 -0 .0 1 7mol/L磷酸 ( 7+ 3) ,检测波长 2 90 nm。建立了牛肌肉组织中 4种苯并咪唑类药物的基质固相分散 -高效液相色谱 ( MSPD-HPLC)多残留分析法。在 0 .0 5～ 0 .4 0 mg/kg添加范围内 ,4种苯并咪唑类药物的平均回收率为 ( 6 9.2± 1 2 .4 ) %。本方法检测限为 0 .0 1～ 0 .0 5mg /kg。

放射性肺纤维化大鼠动物模型的建立及其病变规律

用 60 Coγ射线对二级雌性 Wistar大鼠 (体重 ( 2 2 0± 2 0 ) g) 2 2 3只进行 30 Gy全胸单次照射 ,其中照射野为 4 .5cm× 4 .0 cm,照距为 3m,剂量率为 2 .7Gy/ min。分别于照后 3、7、1 4、2 1、2 8、4 2、56、70、90、1 80、2 70、36 5d共 1 2个时间点进行了取材观察。结果表明 ,肺脏病变初期呈急性变化 ,以后转为亚急性或慢性进行性发展过程 ,可大致分为 2个阶段 4个期。早期即急性炎症期或渗出期 ,中期为增生期 ,这 2期合为疾病的第 1阶段 ,称为放射性肺炎。后期即纤维化期 ,晚期即胶原化期 ,这 2期共同构成本病的第 2个阶段 ,称为进行性间质纤维化阶段

镉对原代培养大鼠肝细胞的损伤作用

用活体肝脏灌注、胶原酶消化法分离大鼠肝细胞并作原代培养 ,以 Cd Cl2 ( 0～ 2 50或 50 0 μmol/ L)处理 ,测定培养上清液中 LDH、ALT、ARG和细胞内 GSH-Px、GSH、MDA等的含量 ,探讨镉对肝细胞的损伤作用和脂质过氧化状况。结果 ,当 Cd≥ 1 0和 5μmol/ L时 ,细胞内 LDH、ARG泄漏分别明显增加 ,GSH-Px活力显著受到抑制 ,GSH含量和 MDA产生随着镉的剂量增大而增加 ( Cd≥ 50μmol/ L)。认为镉对肝细胞的损伤和对细胞膜完整性的破坏 ,与脂质过氧化有关 ;镉处理后细胞中 GSH增加可能与镉抑制了还原型谷胱甘肽向氧化型谷胱甘肽的转化有关。镉可直接抑制 ALT本身的活性 ,因而认为以细胞内 ALT泄漏作为镉诱导细胞损伤的评价指标时要予以注意

FTA基因保藏系统

高温对肉鸡血浆纤维连接蛋白及血清生化指标的影响

将 39日龄肉鸡置于 4 2℃高温环境中 3h,分别在热应激后 4、2 8、52 h采血检测血浆纤维连接蛋白( FN)和某些血清生化指标 (血糖、尿酸、总蛋白、白蛋白、胆固醇、谷草转氨酶、T3 、T4)的变化 ,以研究高温对肉鸡生理、代谢等方面的影响及寻找判断应激的指标。结果表明 ,血浆 FN浓度在高温刺激后 2 8h明显高于对照组 ;血清谷草转氨酶活性在 2 8、52 h后明显比对照组高 ;总蛋白、白蛋白在 4 h后明显比对照组低 ;其他血清生化指标在高温刺激下均无显著变化。提示高温可引起肉鸡急性期蛋白—纤维连接蛋白的变化

抑制素(IB)主动免疫对牛超排效果的影响及机制

用猪精液抑制素 ( inhibin,IB)抗原主动免疫供体母牛 ,结合外源纯化 FSH超排处理 ,观察了抑制素主动免疫对牛超排效果的影响 ,并通过检测不同生理时期血液中相关生殖激素的水平 ,探讨了抑制素免疫影响牛超排效果的机制。选产后 50 d以上的 3～ 5岁荷斯坦母牛 1 2头和西杂青年母牛 1 2头 ,按其发情顺序随机分为试验组和对照组 ,每组 1 2头。试验组用完全福氏佐剂乳化的 IB抗原进行首免 ,间隔 2 0 d再用不完全福氏佐剂乳化的 IB抗原加免 1次 ,加免后 6 d开始采用纯化 FSH做超排处理 ,观察发情 ,适时进行配种 ,于配种后 7d进行非手术法采卵。对照组只是用纯化 FSH做超排处理。参试牛于不同生理时期颈静脉采血 ,分离血清 ,用放免法测定各生理时期血清中 FSH、LH、E2 、P4水平。结果表明 :( 1 )抑制素主动免疫可以提高牛超排效果 ,试验组头均胚胎数和头均可用胚胎数分别比对照组增加 2 .4枚和 1 .4枚 ( P<0 .0 5) ;( 2 )抑制素主动免疫可提高母牛血浆中 FSH水平 ,从而促使卵泡发育 ,增加胚胎数和可用胚胎数 ;( 3)在首免后到加免前 ,抑制素主动免疫对 LH、E2 、P4基础分泌基本无影响

氯前列烯醇诱导母猪同步分娩的效果

选择 2～ 4胎龄施格母猪 1 32头 ,分为 2组。对照组 ( 6 5头 )不做任何处理 ,试验组 ( 6 7头 )又分妊娠 1 1 2d组 ( 34头 )、1 1 3d组 ( 33头 )。用氯前列烯醇 ( 0 .1 g/L)分 0 .5m L/头、1 m L/头 2个剂量组分别处理上述各试验组母猪 ,观察母猪的分娩情况。结果 ,处理至分娩开始的间隔 ,1 1 2 d组为 2 8.72 h,1 1 3d组为 2 3.34 h,2组差异极显著 ( P<0 .0 1 ) ;分娩产程 ,1 1 2 d组为 3.0 8h比对照组长 4 .2 min,1 1 3d组为 2 .31 h比对照组短4 2 min,无显著性差异 ( P>0 .0 5) ;而白天分娩率经χ2 检验有显著性差异 ,1 1 2 d、1 1 3d组分别有 6 1 .76 %和78.78%的母猪在白天分娩 ,而对照组仅为 4 6 .1 5% ( P<0 .0 5)。1 1 2 d组、1 1 3d组母猪的生产成绩 ,死胎率分别为 2 .2 7%和 2 .0 8%比对照组低 1 .82 %、2 .0 1 % ( P<0 .0 5) ;初生窝重分别为 1 1 .56、1 0 .55kg,分别比对照组高 0 .0 8kg和低 0 .0 7kg( P>0 .0 5) ;2 0日龄窝重 ,1 1 2 d组平均为 33.56 kg比对照组低 1 .9kg,1 1 3d组为2 9.30 kg比对照组高 1 .77kg( P>0 .0 5) ;断奶个体重 ,1 1 2 d组平均为 8.1 4 kg比对照组低 0 .2 7kg,1 1 3d组平均为 9.2 7kg比对照组高 0 .85kg( P>0 .0 5)。结果表明 ,氯前列烯醇能有效控制母猪分娩时间集

rob(13/17)纯合子猪的联会复合体分析

:采用表面铺展法和硝酸银染色技术对 rob( 1 3/1 7)纯合子猪减数分裂的配对行为进行了联会复合体( synaptonemal complex,SC)的电镜观察和分析。结果表明 ,rob( 1 3/1 7)纯合子猪的 SC配对行为正常 ,未见三价体和侧生组分形成。SC的形成开始于偶线期 ,成熟于粗线期 ,解体于双线期。在减数分裂前期 ,性染色体轴呈强嗜银性 ,配对明显落后于常染色体。根据减数分裂前期性染色体的形态和行为 ,把性染色体的 SC分为 4个类型

N-甲基-D,L-天门冬氨酸(NMA)对肥育猪脂肪沉积的影响及其机理

研究了不同剂量 N-甲基 -D,L-天门冬氨酸 ( NMA)对肥育猪脂肪代谢的影响。结果表明 ,饲粮中添加NMA 50 mg/ kg,肥育猪日增重提高 9.6 5% ( P<0 .0 1 ) ,胴体瘦肉率提高了 4 .0 8% ( P<0 .0 5) ,脂肪率降低3.50 % ( P<0 .0 1 ) ,皮下脂肪苹果酸脱氢酶总活力下降 1 8.6 4 % ( P<0 .0 5) ,葡萄糖 -6 -磷酸脱氢酶总活力下降 1 5.93% ( P<0 .0 5) ,异柠檬酸脱氢酶总活力下降 4 7.70 % ( P<0 .0 1 ) ,激素敏感脂肪酶活性提高 37.4 0 %( P<0 .0 3) ,脂肪组织中 c AMP含量提高 36 .6 8% ( P<0 .0 4 ) ,血清脂肪酶活性提高 1 1 5.1 5% ( P<0 .0 1 ) ,游离脂肪酸浓度上升 2 2 .6 4 % ( P<0 .0 1 )。据此认为 ,NMA可以通过调控脂肪代谢相关酶的活性 ,从而影响猪体脂肪代谢

敌敌畏急性中毒对小鼠血清胆碱酯酶活性的影响