传染性法氏囊病病毒X毒株不同代次的致病性及VP_2可变区序列分析

分别以传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) X毒株细胞适应的第 5代、第 1 1代和第 1 7代毒感染 38日龄非免疫雏鸡进行致病性试验 ,确定 X毒株的毒力 ,并比较 3个代次毒的致病性差异 ,进而利用 RT-PCR扩增其VP2 基因可变区 ,测定其核苷酸序列 ,从分子生态学角度研究了非鸡胚源细胞传代培养对 IBDV X毒株毒力和抗原性的影响。结果表明 ,IBDV X毒株表现为中等毒力 ,在 Vero细胞上传代后 ,其毒力有所减弱。VP2 可变区氨基酸序列有 3个位置发生了替换 ,即第 5代毒氨基酸残基 2 62位为半胱氨酸 ,而第 1 1代毒和第 1 7代毒则变为酪氨酸 ( Cys→ Tyr) ;第 5代毒的 2 90位为缬氨酸 ,而第 1 1代和第 1 7代毒则变为蛋氨酸 ( Val→Met) ;第 5代毒和第 1 1代毒的 31 6位为赖氨酸 ,而第 1 7代毒则变为精氨酸 ( Lys→Arg)。 2 90位氨基酸替换导致该区域二级结构的改变 ,并对 IBDV的抗原性有显著影响。上述结果提示 ,这些氨基酸残基可能对维持IBDV的毒力和抗原性是必要的。通过毒株间 VP2 可变区序列的比较和系统发生树的分析 ,证明 IBDV X毒株与 Bursin-2疫苗毒关系很近。

应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅱ.JEV、PPV、PRRSV、PRV单项PCR检测方法的建立

在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各 PCR扩增产物进行了点杂交和部分测序鉴定。用单项 PCR对感染猪相关病毒的检测证实 ,本试验已经建立了有效、特异、敏感的检测 JEV、PPV、PRRSV、PRV的单项 PCR技术 ,为进一步建立多联 PCR技术及其应用打下了基础

转基因小鼠后代乳汁中外源基因的表达

运用传统育种方法 ,用整合有人凝血因子 ( h F )的转基因小鼠进行近交和远交。通过选育 ,在其后代中出现 4只双重杂合子 ( 3♀ ,1 )及 2只纯合子小鼠 ( 2♀ )。收集雌鼠乳汁 ,用 ELISA测定其中 h F 蛋白含量。结果表明 ,相对于单纯杂合子小鼠 ,纯合子小鼠的表达量无增高 ( P>0 .0 5) ,而双重杂合子小鼠的表达量有显著提高 ( P<0 .0 1 )。结果提示 ,选育双重杂合子转基因后代小鼠 ,是一条提高转基因动物外源基因表达水平的有效途径。

鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达

将氯霉素乙酰转移酶 ( CAT)基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合 ,构建了 p CAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因 5′调控序列 )表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液 ,转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明 ,在鸡原代输卵管上皮细胞 ,转染后 4 8h表达量最高 ,为 0 .67μg/L;而在鸡成纤维细胞 ,不论有无类固醇激素存在 ,均不表达。结果提示 ,在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。

新城疫(ND)-减蛋综合征(EDS76)蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ.制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒 ( NDV) Colon-30株和减蛋综合征病毒 ( EDS76AV) -1 2 7株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚 ,制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后 ,与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化 ,制成鸡新城疫 ( ND) -减蛋综合征( EDS76)蜂胶二联灭活疫苗 ,对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对 3～ 6周龄易感雏鸡以 2倍使用剂量肌肉注射 ,安全性良好 ;对 1日龄雏鸡接种 1个使用剂量进行急性毒性试验 ,1 5d生长曲线表明 ,对雏鸡无影响 ;对 6周龄雏鸡注射 1个使用剂量 ,每批疫苗免疫 1 0只鸡 ,免疫后 5～ 32 d,鸡血清中 EDS76血凝抑制( HI)抗体的几何平均滴度 ( GMT)为 6.5～ 1 1 .8log2 ,ND血凝抑制 ( HI)抗体的几何平均滴度 ( GMT)为 4 .8～ 9.8log2 ;对 ND免疫攻毒试验表明 ,3批疫苗 ,每羽份含有的半数保护量 ( PD5 0 )分别为≥ 1 2 7、≥ 1 31和≥1 2 7。

猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA的克隆

从猪的肌生成抑制素 ( MSTN)编码序列中设计引物 ,以军牧一号猪肌细胞总 RNA为模板 ,利用 RT-PCR和嵌套 PCR技术 ,扩增出 MSTN c DNA片段。该片段全长 1 2 77bp,包含猪 MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与 p MD1 8-T载体连接 ,转化到 JM1 0 9大肠杆菌中 ,成功地筛选到阳性克隆 ,其质粒测序结果与文献报道的一致。经 Eco R 和 Pst 酶解分析 ,c DNA片段与 p MD1 8-T载体之间既有正向插入的克隆 ,也有反向插入的克隆 ,所得到的 MSTN c DNA可用于原核和真核表达载体的构建

胭脂鱼弹状病毒包涵体在培养细胞中的形成

从患致死性出血综合征的胭脂鱼 ( Myxocyprinusasiaticus Bleeker)分离到一种能产生包涵体的弹状病毒 ,称为胭脂鱼弹状病毒 ( Chinese sucker rhabdovirus,CSRV)。选择草鱼卵巢细胞系 ( Grass carp ovaries,CO)为宿主细胞 ,在接种 CSRV 3、6、9、1 2、1 8h后 ,分别取样、固定、制片、染色 ,用光学显微镜和电子显微镜观察。光镜观察结果显示 ,CSRV包涵体为直径 1～ 1 0μm的球形胞质包涵体 ;在宿主细胞中有多个包涵体 ,宿主细胞的形态和直径都发生了变化 ,然后裂解和死亡。透射电镜观察结果显示 ,在包涵体内存在大量病毒颗粒。

上海地区猪源链球菌分离株的病原特性鉴定

1997～ 1 999年从上海地区分离出 1 5株猪源链球菌 ,结合培养特性、生化特性及血清定型等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养特性基本符合链球菌的特点 ,大多具有 α或 β溶血 ,生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌 A-G乳胶分型诊断液和猪链球菌 1、2型标准阳性血清检测 1 5株分离菌 ,4株为 C群链球菌 ,1株为 2型猪链球菌 ,1株为 B群链球菌 ,1株为 D群链球菌 ,1株与 A群和 C群有交叉反应 ,7株不在其检测范围。小鼠对 1 5株分离菌的敏感性有所不同。本试验表明 ,上海地区猪链球菌病的病原已不再是单一的C群链球菌。对新出现的 2型猪链球菌 ,应引起足够重视

制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法

采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)值明显高于 MM培养基 ;连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。

隐孢子虫(Cryptosporidium)病毒的鉴定及其特性

根据已发表的隐孢子虫病毒的序列 ,设计合成 2对引物 ,对小球隐孢子虫 ( Cryptosporidium parvum)、鼠隐孢子虫 ( C.muris)、贝氏隐孢子虫 ( C.baileyi)、火鸡隐孢子虫 ( C.meleagridis)进行 RT-PCR扩增 ,结果发现仅小球隐孢子虫 ( C.parvum)含有大小约为 1 .7× 1 0 3nt和 1 .3× 1 0 3nt2个片段的 ds RNA病毒。将其PCR产物连接到 p MD1 8-T载体上进行克隆测序 ,经与 Gen Bank比较 ,含这 2个片段的 ds RNA病毒与已发表的该虫病毒的同源性分别为 96%和 98%。电泳鉴定发现 ,该病毒对低浓度 RNA酶不敏感 ,且不能被 DNA酶降解。依赖 RNA的 RNA聚合酶活性测定结果表明 ,该病毒具有该聚合酶的活性。电镜观察未发现存在病毒样粒子。

12株中国伊氏锥虫对苏拉明的药敏试验

用体外培养生长抑制试验检测了中国伊氏锥虫安徽水牛株 ( AHB)、广东阳江水牛株 ( GDB1 )、广东水牛株 ( GDB2 )、广东马株 ( GDH)、广西骡株 ( GXM)、湖北骡株 ( HBM)、湖南水牛株 ( HNB)、江苏高邮水牛株( JSB1 )、江苏盱眙水牛株 ( JSB2 )、新疆骆驼株 ( XJCA)、云南水牛株 ( YNB)、浙江水牛株 ( ZJB)对苏拉明的敏感性。它们的 50 %生长抑制浓度 ( IC5 0 )依次为 0 .1 1 4、0 .0 4 1、0 .1 2 0、0 .1 4 9、0 .752、0 .2 52、0 .1 71、0 .1 2 7、0 .339、0 .0 94、0 .1 0 6、0 .1 1 8mg/L。结果显示 ,不同虫株的伊氏锥虫对苏拉明的敏感性明显不同 ,提示中国伊氏锥虫不同虫株存在抗药性差异。在 1 2株伊氏锥虫中 ,GXM株对苏拉明的抗药性水平明显高于其他株。小鼠体内治疗试验显示 ,GXM株以 1 0 mg/kg剂量苏拉明治疗无效 ,在临床上表现出一定的抗药性 ,而 GDB1株以 1 0 mg/kg剂量苏拉明治疗则全部治愈。由此可见 ,体外药敏试验结果与体内治疗结果一致。这一结果提示 ,多数中国伊氏锥虫株对苏拉明的敏感性偏低 ,少数虫株已表现出一定的抗药性。

世界各国/地区历年来报道的牛海绵状脑病(BSE)病例统计

法国加大对疯牛病的研究力度

山羊冰川棘豆中毒的病理学观察

8只杂种奶山羊 ,按每日每千克体重 1 0 g的剂量饲喂冰川棘豆 ( Oxytropis glacialis)草粉 ,第 2 5天起 ,出现以中枢神经系统机能紊乱为特征的中毒症状。病理组织学检查 ,心、肝、脾、肺、肾、脑、卵巢等组织发生空泡变性 ,空泡变性普遍而且严重 ,并且观察到淋巴结和脾脏中巨噬细胞胞核空泡变性 ,淋巴细胞胞核淡染 ,呈空泡样。肝、肾、脑组织电镜观察 ,病理变化以空泡变性为主 ,细胞中线粒体肿胀、空泡化 ,粗面内织网断裂 ,溶酶体增加

山羊子宫内肽能神经分布及妊娠时的变化

采用免疫组化方法 ,研究了山羊子宫内含 P物质 ( SP)和含血管活性肠肽 ( VIP)神经的分布。结果 ,妊娠及未妊娠山羊子宫颈内有粗细不等的神经束行经于外膜和肌层中 ,神经分支形成丛状分布于血管壁 ,子宫颈部未见 SP神经元胞体及 VIP神经元胞体 ;未妊娠山羊子宫角内 SP神经和 VIP神经均呈丛状围绕血管并分布于血管壁 ;妊娠中期的孕角和非孕角均有胎盘形成 ,除胎盘内无神经分布外 ,SP神经及 VIP神经同样分支形成丛状分布于血管壁。结果提示 ,山羊子宫内 SP神经和 VIP神经主要支配子宫内血管 ,妊娠时除胎盘内无神经分布外 ,SP神经及 VIP神经的分布无明显变化

温度对体外培养小鼠精原干细胞的影响

将分离纯化的小鼠精原干细胞分别置于 37、34、30℃及 5% CO2 、饱和湿度条件下进行体外培养。结果表明 ,3种温度下的精原干细胞均可以存活并增殖 ,但随着体外培养时间的延长 ,细胞的生长状态、增殖数量和存活时间有明显差异。34℃下细胞平均存活时间最长 ,增殖数量最多。统计分析显示 ,34℃与 30、37℃下细胞平均存活时间有显著差异 ( P<0 .0 5) ,表明 34℃是小鼠精原干细胞较为适宜的生长环境

氟甲砜霉素(Florfenicol)在猪体内的药物动力学

健康猪 6头 ,体重 ( 2 4 .7± 1 .0 ) kg,单剂量静注、肌注、内服氟甲砜霉素 ( Florfenicol) 2 0 mg/ kg,用高效液相色谱法测定其血药浓度 ,实验所得的血药浓度 -时间数据采用非房室模型统计矩原理分析处理。静注给药的主要药物动力学参数为 :AUC 90 .1 3mg/ ( L· h) ,MRT 6.84 h,Cl B0 .2 3L/ ( kg· h) ,Vd(SS) 1 .53L/ kg,t1 / 2β 6.72 h。肌注给药的主要药物动力学参数为 :AUC 84 .31 mg/ ( L· h) ,MRT 2 6.88h,t1 / 2β 1 7.1 8h,F96.86% ,校正 F* 4 2 .50 %。内服给药的主要药物动力学参数为 :AUC1 32 .0 8mg/ ( L· h) ,MRT1 4 .2 3h,t1 / 2β 9.98h,F 1 4 8.53% ,校正 F* 1 0 8.51 %。试验结果表明 ,氟甲砜霉素在猪体内的主要药动学特征为 :静注给药表观分布容积大 ,消除半衰期长 ,血药浓度高 ;肌注给药吸收不规则 ,吸收和消除缓慢 ;内服给药吸收迅速完全 ,生物利用度高

盐酸克林霉素对实验性猪链球菌病的药效试验

牛胚胎移植技术在中国内蒙古的研究和应用

1 991～ 1 996年 ,对 6个品种 1 38头供体母牛超排处理 1 99次 ,共获得 A、B级胚胎 1 1 4 8枚 ,平均每次每头获可用胚 5.77枚 ;共移植受体 1 2 99头 (包括鲜胚和冻胚 ) ,妊娠产犊 593头 ,总移植妊娠率为 4 5.7%。对牛的超数排卵技术进行了深入研究 ,对不同超排方法的超排效果、不同品种肉牛的超排反应及重复超排的效果进行了分析 ,获得了适于重复应用、效果稳定的超排方案 ,即用 FSH-PG法 ,FSH总剂量在 4～ 6mg,5d 1 0次递减注射。同时 ,对受体牛饲养管理条件与受体诱导同期发情效果和移植妊娠率之间的关系进行了探讨 ,对经产牛和育成牛受体移植妊娠效果进行了比较 ,并对移植人员技术熟练程度对妊娠率的影响进行了分析 ,从而为大规模实施牛 ET计划提供了受体牛选择依据

甜菜碱对肉雏鸡新城疫免疫反应的影响

将 8 1 0只艾维茵肉雏鸡分成 6组 ,分别饲以添加 0 (不添加蛋氨酸对照组 )、2 0 0 0 mg/ kg蛋氨酸 (添加蛋氨酸对照组 )和 60 0、1 30 0、2 0 0 0、2 70 0 mg/ kg甜菜碱的基础日粮共 2 4 d( 1～ 2 4日龄 )。期间 ,选择体重、体温和新城疫母源抗体相近的 1 3日龄母鸡 72只 (每组每重复 4只 )接种新城疫弱毒苗。结果表明 :添加不同剂量甜菜碱均明显地促进免疫应答和减轻接种疫苗的体温反应 ,并随添加剂量的增加呈增强趋势 ,其中2 0 0 0 mg/ kg剂量组效果最为显著 ,免疫后 3、6d的新城疫的总抗体和 6d的 Ig M抗体滴度较不添加蛋氨酸对照组分别升高 54.1 7% ( P<0 .0 1 )、2 8.76% ( P<0 .0 1 )和 4 4.94 % ( P<0 .0 1 ) ,与添加蛋氨酸对照组基本一致 ;免疫后 5、9、1 3h的体温 ,比不添加蛋氨酸对照组分别低 0 .55℃ ( P<0 .0 1 )、0 .36℃ ( P<0 .0 1 )和 0 .2 1℃( P<0 .0 5) ,比添加蛋氨酸对照组分别低 0 .4 1℃ ( P<0 .0 1 )、0 .34℃ ( P<0 .0 1 )和 0 .1 7℃ ( P<0 .0 5)。

我国禽流感防制研究进展