肠道出血性大肠杆菌O157∶H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素1基因的检测

应用聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction,PCR)对 1 99株肠道出血性大肠杆菌 ( enterohemor-rhagic Escherichia coli,EHEC) O1 57∶ H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素 1 ( enteroaggregative Es-cherichia coli heat-stable enterotoxin1 ,EAST1 )基因进行了检验。结果 ,从 1 % ( 2 / 1 99)菌株中检出了 EAST1基因。对其中 1株菌 ( EHEC O1 5796-84 )的 EAST1基因进行了序列测定。与以往发表的其他致腹泻性大肠杆菌的 EAST1基因的序列相比较 ,EHEC O1 5796-84与 EAgg EC ( O4 2 ,TL1 0 0和 1 60株 )、产肠毒素性大肠杆菌 ( enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠道致病性大肠杆菌 ( enteropathogenic E.coli,EPEC)、扩散粘附性大肠杆菌 ( diffusely adherening E.coli,DAEC)的 EAST1基因序列相同 ,但与 EAgg EC菌株 1 7-2的EAST1基因有 1个碱基对不同 ,从而导致 1个氨基酸残基的变化。本研究结果进一步表明 ,EAST1或它的变异型基因广泛分布于致腹泻性大肠杆菌中

农业部、国家出入境检验检疫局发布公告 防止疯牛病传入中国

传染性法氏囊病病毒超强毒株F9811VP_2基因的克隆及序列分析

根据 NCBIG Gene Bank记载的传染性法氏囊病病毒超强毒 ( vv IBDV) OKYM株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对特异性扩增 IBDV主要宿主保护性抗原 VP2 基因的引物。从 IBDV F981 1感染发病鸡法氏囊组织中提取病毒 RNA,经 RT-PCR扩增出约 1 .5kb的基因片段 ,采用平端连接法将此基因片段克隆至p UC1 1 9质粒的 Sma 位点上。经核苷酸序列测定 ,并与国内外其他 vv IBDV VP2 基因序列进行比较分析 ,发现 F981 1与 OKYM在 VP2 基因上有 1 8个核苷酸不同 ,但在氨基酸序列上仅 2 1 2位存在差异 ,从而从分子生物学角度证明 F981 1为 vv IBDV。对 1 4 3～ 3 82氨基酸区域所作系统进化树分析表明 ,F981 1、G92 0 1与OKYM、UK661、HK4 6相近 ,而 F950 2、G93 0 3与 OKYM、U K661、HK4 6较远 ,说明我国存在许多不同的vv IBDV毒株

标准鸭肝炎Ⅰ型血清对鸭肝炎野毒株的免疫保护试验

为探讨珠江三角洲及其附近地区鸭肝炎免疫失败的原因 ,对从该地区分离到的鸭肝炎野毒 SN株等 6个毒株在 7日龄雏鸭、1 0日龄鸭胚及 9日龄鸡胚上作免疫保护试验、交叉中和试验。试验结果表明 ,标准鸭肝炎 型 ( DH- )血清对部分野毒株 ( SN株、Z株、SF株 )的免疫保护指数较低 ,明显低于相应野毒株血清的保护指数 ,表明该疫区部分鸭肝炎野毒的抗原性已发生改变。这一免疫保护试验结论得到了交叉中和试验结果的支持。根据试验结果 ,采取若干有代表性鸭肝炎野毒与标准 DH- 型毒株 ,制备鸭肝炎高免血清或高免卵黄抗体用于临床免疫防治 ,并注意排除一些其他因素的干优 ,使临床免疫保护率达到 96%。

伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫

构建了 2个利用人类巨细胞病毒 ( HCMV)的启动子启动表达伪狂犬病病毒 Ea株糖蛋白 g D基因的真核表达质粒 p CIDI和 pc DDI,体外转染 BHK-2 1细胞 ,用间接免疫荧光法检测 ,证实糖蛋白 g D在细胞中得到表达。用表达质粒 p CIDI和 pc DDI作为核酸疫苗免疫 BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体 ,结果其滴度为 1∶ 1 2 8～ 1∶ 51 2。初步证实 ,用 g D基因作为核酸疫苗免疫动物 ,可以激活机体的免疫应答反应

Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株B亚型Gag和Env蛋白在大肠杆菌中的表达

将中国流行株 型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAGE电泳分析有重组蛋白表达。该蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加 ,4 h达到最大值。凝胶扫描结果显示 ,该蛋白表达量占菌体总蛋白的 1 0 .3 %。Western blotting检测 ,该重组蛋白可与中国流行株 HIV-1 B亚型阳性血清发生特异反应。重组表达质粒 p ETM1、p ETM2和 p ETM3仅在蛋白印迹中与 gp1 2 0单抗发生特异性反应而出现特异显色带 ,SDS-PAGE电泳分析未见表达蛋白带。

DNA疫苗免疫新途径

肉食兽细小病毒通用PCR诊断技术的建立

根据肉食兽细小病毒核苷酸序列高度同源的特点 ,设计合成了 1对引物 ,以犬细小病毒、貂肠炎病毒和猫泛白细胞减少症病毒细胞培养物为 DNA模板 ,进行 PCR特异性片段扩增 ,扩增片段大小为 0 .6kb。结果表明 ,扩增产物与设计的 2个引物之间的序列大小一致。通过通用性、特异性与敏感性试验及对临床送检样品检测 ,证明本法对肉食兽细小病毒通用 ,且具有快速、特异和高度敏感的特点。

世界首例转基因克隆猪在英国诞生

影响小鼠转基因原核胚体外发育的若干因素

探讨了显微注射不同浓度的外源 DNA以及温度、培养基等对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射 1 .5、1 5、3 0 mg/L的衰变加速因子 ( CD55)、膜反应溶解因子 ( CD59)基因后 ,小鼠原核胚发育到囊胚的比率随 DNA质量浓度的升高而依次降低为 57.7%、3 6.6%、1 0 .4 % ,差异极显著 ( P <0 .0 1 )。注射 1 .5mg/L外源 DNA,原核胚的囊胚率 ( 57.7% )比对照组 ( 54.5% )稍有提高 ,但差异不显著 ( P >0 .0 5)。 1 .5mg/L为本试验最佳外源 DNA注射质量浓度。 3 7℃、CZB培养液或改进的 Whitten氏培养液 ,可取得较好的体外培养效果。

第1只转基因灵长类动物产生

由牛体外受精胚胎分离胚胎干细胞

以 DMEM+1 5% NBS+0 .1 mmol/ Lβ-巯基乙醇 +0 .1μmol/ L亚硒酸钠 +1 0μg/ L LIF+1 0μg/ LIGF-1作为培养液 ,以原代小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层 ,利用 8日龄牛体外受精胚胎获得了传 3代的牛类胚胎干细胞 (类 ES细胞 )。通过体外分化试验 ,对所得类 ES细胞的多能性进行了鉴定。结果在培养 2 d后 ,牛类 ES细胞分化形成了类似于扩张囊胚的结构 ,悬浮于培养液中。

一种简便快速的体外点突变方法

胆酸负荷对妊娠后期绵羊母体和胎儿血浆IGF-2及其代谢物水平的影响

以绵羊及其胎儿为试验对象 ,研究了胆酸负荷对妊娠后期母体和胎儿血浆胰岛素样生长因子 -2 ( in-sulin-like growth factor-2 ,IGF-2 )及其代谢物水平的影响。将 7只确知妊娠时间的绵羊分为试验组 5只和对照组 2只 ,试验前装置颈静脉瘘 ,在妊娠 90 d和 1 0 4 d 2次给试验组静脉灌注胆酸盐 1 .1 mg/ kg,给对照组静脉灌注等量生理盐水 ,妊娠 1 2 0 d时手术安装胎儿后肢胫前动脉血管瘘。每天采胎儿和母体的血样 ,分离血浆 ,测定血浆 IGF-2和主要代谢物水平。同时测定胎儿出生时生长发育指标。结果表明 :( 1 )试验组母羊 IGF-2水平低于对照组 ,相反其胎儿 IGF-2水平却高于对照组 ( P<0 .0 5) ;( 2 )试验组母羊的总蛋白和乳酸水平分别比对照组低 2 3 .61 %和 3 9.73 % ,其他指标没有明显差异 ;试验组胎儿果糖较对照组低 2 2 .56% ,但α氨基氮高于对照组 3 5.64 % ;( 3 )试验组胎儿出生重比对照组小 2 9.0 0 % ,胎龄短 7.50 d。因此认为 ,胆酸重复灌注可引起妊娠绵羊早产和胎儿出生重降低 ,而这可能与 IGF-2和主要代谢物水平变化有关。

环核苷酸(cAMP/cGMP)与肉鸡内分泌及免疫功能的关系

以艾维茵肉鸡为实验对象 ,研究了血清环核苷酸与肉鸡内分泌及免疫功能的关系。结果表明 ,以传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)强毒株攻击后 ,肉鸡垂体 -肾上腺轴活动加强 ,并发生针对 IBDV的特异性免疫反应 ,血清 c AMP与 c GMP含量均上升 ,但 c AMP/ c GMP比值保持稳定 ,提示垂体 -肾上腺轴活动加强使c AMP上升与抗 IBDV特异性免疫细胞内效应大分子的合成有关 ,而 c AMP/ c GMP比值的稳定则是保持一种高阈平衡 ,以维持内环境的稳态。由于 IBDV强毒株破坏了机体免疫系统 ,未经 IBDV疫苗免疫的肉鸡c AMP、抗 IBDV抗体和 IL-2的上升幅度均比经 IBDV疫苗免疫的肉鸡小。

美国对用牛源材料制作疫苗提出新要求

褪黑激素RIA方法的建立及其在探索湖羊四季发情机理上的应用

运用 Mannich反应 ,将褪黑激素 ( MLT)与牛血清白蛋白 ( BSA)连结 ,制备 MLT完全抗原。 MLT与BSA连结比为 1 2∶ 1。将此完全抗原免疫 5只雄兔 ,制备特异性抗体 ;将 MLT用 12 5I标记 ,薄层层析筛选标记物 ,制备高纯度的放射性标记物 ,建立竞争性 MLT-RIA法。本法可测范围为 1 5.3 1～ 1 50 0 pg,灵敏度为每管 1 5.3 1 pg,批内变异系数 6.7% ,批间变异系数 1 4 .8%。用此法测定夏至时考力代羊昼夜血样 ,测定结果与国外基本一致 ;测定夏至时湖羊昼夜血样 ,发现湖羊 MLT分泌有其特殊性 ,即血液 MLT水平呈明显的昼夜变化 :白天为 1 0 0 ng/L左右 ,而黑暗开始时 ,MLT水平迅速上升 ,在 2 0 :0 0～次日 8:0 0处于高水平 ,最大值为 1 1 0 0 ng/L左右。

二甲硝咪唑及其代谢物在猪体内的消除规律

建立了应用 HPLC法测定二甲硝咪唑 ( DMZ)在猪组织中残留的方法。在猪肌肉、肝脏、肾脏、脂肪等组织中添加高、中、低不同量的二甲硝咪唑 ,HPLC测定的回收率均在 80 %以上 ,变异系数在 1 0 %以内。肌肉、肝脏、肾脏的最低检测限为 1 0μg/kg,脂肪为 50μg/kg。同时研究了二甲硝咪唑在猪组织中残留的消除规律。试验结果认为 ,二甲硝咪唑在猪体内很快地转变为 2 -羟甲基硝基咪唑 ( DMZOH) ,DMZOH是其主要代谢物。以 3 0 0、60 0 mg/kg的剂量连续内服 5d,停药 4 8h后各组织中均检测不到 DMZ及 DMZOH。

PPL公司简介

甜菜碱促蛋鸡产蛋的内分泌作用机制

将 51 2只 3 0 0日龄罗曼蛋鸡随机分为 2组 ,分别饲喂添加甜菜碱 0、80 0 mg/ kg的 2种饲粮 ,于试验3 0、80 d采血和屠宰 ,探讨了甜菜碱促产蛋的内分泌作用机制。结果显示 ,日粮中添加甜菜碱 3 0、80 d,均可显著提高产蛋鸡腺垂体和血清中 FSH、LH含量 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ;显著提高血清中 T3 、雌二醇 ( E2 )、孕酮( P4 )的含量 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ;显著提高下丘脑和腺垂体中 c AMP含量 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。日粮中添加甜菜碱 80 d,可显著提高产蛋鸡血清中甲状旁腺激素 ( PTH)含量 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。日粮中添加甜菜碱对血清中 T4 含量无明显影响。

泗水裘皮羊鞣后羔皮的物理性能

系统研究了山东泗水裘皮羊 4个年龄组 ,即 2～ 5日龄 (小毛 )、1 0～ 2 5日龄 (中毛 )、3 0～ 60日龄 (大毛 )、6月龄共 2 4只个体鞣后羔皮的主要物理性能指标。结果表明 ,皮板的抗张强度为 8.68～ 1 4 .86N/ mm2 ,撕裂强度为 2 2 .62～ 55.4 5N/ mm ,规定负荷 (试样受到 5N/ mm2 拉力 )伸长率为 4 4.67%～ 72 .3 3 % ,崩裂强度为 2 60 .65～ 3 4 4.77N/ mm,收缩温度为 65.90～ 90 .77℃ ;皮重为 1 4 0 .0 0～ 4 1 6.3 3 g,皮厚为 0 .94～ 1 .2 3mm,总面积为 1 690 .67～ 3 4 1 8.67cm2 ,有花面积占总面积的 84 .4 4%～ 99.86%。以上各物理性能指标 ,除皮板的规定负荷伸长率随年龄增长而下降外 ,其余各指标均随年龄增长而增加。小毛、大毛、6月龄羔皮的皮厚部位差均较小 ( P>0 .0 5)。

喹诺酮类药物耐药性的分子机制