用马立克氏病病毒强毒的BamH-L片段核酸鉴定血清1型毒株

马立克氏病病毒 (MDV) GA强毒株的 Bam H - L 片段 DNA全长为 2 892 bp,G+C比率为 5 5 .91%。用内切酶将其亚克隆为 6个片段 :Bam H - Pst 、Pst - Pst 、Pst - Cla 、Cla - Sm a 、Sm a - Sma 和 Sm a - Bam H 。用地高辛标记 L 片段 DNA或者分别标记其 6个亚片段核酸 ,通过斑点杂交试验都可将 MDV血清 1型毒株与 2型和 3型的毒株区分开来 ,应用 PCR方法可获得相同结果。但 PCR方法更敏感、更快捷。结果表明 ,MDV GA强毒株的Bam H - L片段 DNA对 MDV血清 1型毒株是特异的

利用BrdU在CEF(TK~+)细胞中筛选TK~-重组鸡痘病毒

将新城疫病毒 (NDV)四平株 HN基因 ,插入不含报告基因、以 TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2中的复合启动子下游 ,获得重组表达质粒 p UTA- 2 HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,培养、收获病毒后 ,用含 40 m g/ L 5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶 (Brd U )的培养液 ,在 CEF(TK+)细胞中筛选培养 2代 ,然后用不含 Brd U的培养液进行病毒蚀斑纯化 ,成功筛选出表达 NDV HN蛋白的 TK-重组鸡痘病毒

鹅副粘病毒的组织嗜性

用单克隆抗体介导的免疫过氧化物酶 (MC- IP)技术 ,对 2 1只鹅副粘病毒病鹅体内的病毒抗原进行定位 ,结合组织病理学观察结果 ,探讨了鹅副粘病毒的组织嗜性。结果显示 ,除脑和心脏未检测到病毒外 ,在气管、肺、食道、肝脏、腺胃、胰腺、肠、哈氏腺、胸腺、脾脏、法氏囊、肾脏等器官都能检测到病毒 ,病毒抗原定位于上述器官的各种上皮细胞、淋巴细胞、网状细胞和巨噬细胞的胞浆内 ,其中以胃肠粘膜上皮细胞和法氏囊、胸腺、脾脏的淋巴细胞和网状细胞内检出率高 ,阳性反应强。这些结果提示 ,鹅副粘病毒是一种泛嗜性病毒 ,胃肠粘膜上皮和淋巴组织是其主要侵嗜部位

美英公司合作研制出通过尿液检测疯牛病的方法

鸭传染性浆膜炎蜂胶疫苗研制

从重庆病鸭中分离到 2株细菌 ,经细菌形态学、生理生化指标鉴定 ,证明为鸭疫里氏杆菌 (Riemerella anatipes-tifer,RA)。用改良的血清酵母肉汤进行增菌培养 ,将 2菌株菌液混合 (1∶ 1,体积比 ) ,经甲醛灭活后 ,加入蜂胶佐剂 ,制成蜂胶灭活疫苗。用其免疫 5～ 7日龄雏鸭 ,一免后 7、10、15 d皮下注射 RA混合菌液攻毒 (0 .2 m L /只 ) ,平均保护率达 6 6 .6 7% ;10 d后二免 ,二免后 7、10 d攻毒 (0 .2 m L/只 ) ,平均保护率达 94.47%

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素 -人血清白蛋白 (CAP- HSA)作抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 1株分泌抗CAP单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1F9。经检测 ,其分泌的抗体亚类为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目 84～ 96条 ,间接EL ISA检测细胞培养上清效价为 1∶ 2 5 6 ,诱生小鼠腹水的抗体效价可达 1∶ 6× 10 5。该细胞连续培养生物学性状稳定 ,竞争间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)显示 ,其与供试抗生素交叉反应小 ,表明该单抗具有较大的应用价值

西尼罗病毒传播到加拿大

3位科学家获2001年度诺贝尔生理/医学奖

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体LTR72基因的克隆及序列分析

利用 PCR和点突变 PCR技术 ,制备了大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)突变体 L TR72和 L T的基因片段 ,经酶切连接后构建了突变体重组质粒 p L TR72 ,经酶切和序列测定证明重组子构建正确 ,目的突变点第 72位的丙氨酸密码子已被突变成为精氨酸密码子。同时 ,试验构建了可以表达天然 L T的表达质粒 p L T作对照。二级结构分析表明 ,L TR72及 L T之间没有显著差异

伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定

根据已经发表的伪狂犬病病毒 (PRV) Rice株的 g E基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,通过 PCR方法扩增到了PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,并克隆到 p MD18- T载体中 ,转化大肠杆菌 XL1- blue菌株。重组质粒 p MD18- T- FL经酶切和 PCR鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,重组质粒 p MD18- T- FL含有PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,长 16 74bp。序列比较分析表明 ,此区段与 PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为 97.5 % ,氨基酸序列同源性为 94.8%

重组逆转录病毒介导的neo~R基因在公鼠生殖系细胞的转移

将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo R基因在公鼠生殖系细胞的转移

牛BLG/tPA和牛as1酪蛋白/tPA基因在家兔乳腺中的暂时表达

为鉴定和筛选用于制备 t PA转基因动物乳腺生物反应器的高效表达载体 ,试验分别以 1.1kb牛 b-乳球蛋白(BL G)基因、1.0 kb牛 as1酪蛋白基因 5′端侧翼调控序列与 1.7kb经过改造的人组织纤溶酶原激活剂 (t PA) c DNA融合 ,构建了 p BL G- PA 2和 pas1- PA2 2个乳腺定位表达载体。载体经酶切鉴定正确后 ,用脂质体包裹 ,并用毛细玻璃管经乳头管导入妊娠中后期的家兔乳腺 ,进行暂时表达。分别于家兔分娩后 1～ 15 d采奶 ,采用琼脂糖平板溶圈法测定乳汁中 t PA的含量和活性。结果 2个载体均获得表达 ,且 p BL G- PA2表达水平高于 pas1- PA 2。 p BL G- PA2和 pas1-PA2在家兔乳汁中的含量分别为 2 0 0～ 85 0μg/L和 5 0～ 2 5 0μg/L。

ChAT在1日龄雏鸡丘脑视、听觉中继核团内的分布

胆碱乙酰转移酶 (Ch AT)是 ACh的合成酶 ,为了观察它在禽脑内的分布 ,试验选取 1日龄雏鸡 5只 ,采用免疫组化 SP法研究了 Ch AT在鸡丘脑视、听觉中继核团内的分布。结果表明 ,在 1日龄雏鸡丘脑中 ,Ch AT阳性神经元广泛分布于圆核、卵圆核及亚圆核中 ,且密度较高、染色较深 ;外侧膝状体核中既有阳性神经元 ,又有阳性纤维分布。这表明1日龄雏鸡丘脑中继核团胆碱能神经系统的发育已趋于完善

禽轮状病毒致哺乳动物疾病

德国牧羊犬生理生化指标及血清FT_3、FT_4水平

对 2月龄至 9岁德国牧羊犬生理生化指标及血清 FT3 、FT4的测定结果表明 :WBC,幼年组 (2～ 4月龄 )较低 ,成年组 (1～ 2岁 )最高 ,老年组 (7～ 9岁 )明显下降 ;RBC,老年组较其他年龄段组稍低 ;RDW表明 ,幼年组红细胞体积较其他年龄段组稍大 ;RL T,老年组较其他年龄段组稍低 ;TP、Alb,幼年组及老年组较低 ;AST,幼年组最低 ,为 (2 7.6 5±8.2 4) U/ L,而老年组最高 ,为 (36 .17± 8.47) U/ L;AL T,幼年组最低 ,为 (19.6 3± 7.2 1) U/ L,而老年组升高至(37.6 1± 11.6 5 ) U/ L;FT3 、FT4,幼年组最高 ,分别为 (116 .15± 19.6 3) μg/ L、(2 990 .17± 34 0 .6 0 ) μg/ L,进入老年期FT4下降至 (1180 .15± 46 0 .2 3)μg/ L

朊病毒病治疗新进展

实验感染肝片吸虫山羊血液T、B淋巴细胞比例及激素水平变化

为了深入了解动物感染肝片吸虫后免疫细胞和内分泌活动的变化 ,将 6只健康山羊均分为感染 、 组及对照组。 、 组分别一次性口服感染肝片吸虫囊蚴 2 0 0、5 0 0个 /只 ,试验期 17周 ,每周定时采血 ,测定血浆 T、B淋巴细胞比例、皮质醇、胰岛素、甲状腺激素 (T3 、T4)等。结果表明 , 、 组山羊 T淋巴细胞 (% )分别从感染后 4、6周开始低于或显著低于对照组 ,直至 17周 ;而 B淋巴细胞 (% )变化与之相反。 、 组山羊血浆皮质醇变化较大 ,总体水平高于对照组 ;T3 、T4水平从第 4周开始逐渐低于对照组 ,且在极低的水平上变动 ; 、 组胰岛素水平与对照组相近。提示山羊急性感染肝片吸虫后 ,内分泌活动紊乱 ,体内细胞免疫反应抑制 ,而体液免疫反应增加 ,表现出山羊对肝片吸虫感染的耐受力和抵抗力较弱的特点

PRRSV感染SPF仔猪血液中细胞因子和一氧化氮的动态

利用生物学和免疫学方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) BJ- 4株感染仔猪血清中 TNF-α的变化 ,结果显示 ,感染后 TNF- α水平明显上升 ,外周血单核细胞产生 Th1型细胞因子 IL- 2的能力增强。比色法检测仔猪感染后血浆中 NO的变化 ,发现 NO在病毒感染后略有增高。TNF- α升高可能使内皮细胞受到损伤 ,导致机体对其他病原体的易感性增强。 NO可反馈性地抑制巨噬细胞的功能和 T细胞增殖 ,使 PRRSV感染仔猪的免疫功能受到抑制

美国出台控制全球3大传染病“杀手”的研究计划

雏鸡在冷暴露下体内相关激素的动态变化

12 0只 5日龄公雏鸡用以研究不同强度的冷暴露对雏鸡内分泌的影响。相关激素测定的结果表明 :血清中三碘甲腺原氨酸 (T3 )、甲状腺素 (T4)、胰岛素和糖皮质激素的含量随冷暴露的时间不同而发生变化。在 (10± 1)℃环境下 ,T3 和 T4在血清中的含量波动范围较大 ,胰岛素和皮质醇波动范围较小 ;而在 (15± 1)℃环境下 ,T3 波动范围小 ,T4仅在冷暴露后 8h下降明显 ,胰岛素和皮质醇波动范围较大并出现 2次峰值

一种快速关闭基因的新方法—RNAi

BV147感染Vero细胞的超微结构

应用电镜对 1997年本实验室从野外捕获的恒河猴分离的 BV147在 Vero细胞上的形态发生和增殖规律进行了观察。结果表明 ,新分离为 BV147是疱疹病毒属成员 ,在细胞核内复制、增殖 ,在核内膜以“出芽方式”获得囊膜而达到成熟 ,通过细胞的胞吐或膜系统排到细胞外。接毒后 18h病毒主要在核内 ,2 4h则可在核膜间隙、胞浆和细胞外见到大量成熟病毒颗粒

猪血浆中六茜素的HPLC测定及药代动力学

采用 YWG- C1 8色谱分析柱 (4 .6 m m× 2 5 0 m m,5 μm) ,Waters TM486可变波长紫外检测器 ,甲醇 -水 (4 0∶ 6 0 )为流动相 ,香草醛为内标 ;血液样品用乙醚提取纯化后进样 ,2 2 0 nm波长处检测 ,建立了反相 HPL C法检测猪血浆中六茜素 (pyroline,PL )含量的方法 ,同时对 PL静脉单次给药 (30 mg/ kg)后在猪体内的药代动力学进行了分析。结果表明 ,PL 在血液中的线性范围为 1.0～ 10 0 .0 mg/ L(r=0 .995 3) ,最低检测量 0 .1μg,最低检出质量浓度 2 .0 m g/ L,平均方法回收率为 98.36 % ,精密度考察 PL日内、日间相对标准偏差小于 4%。所得的 PL血药时程符合二室开放模型 ,药物动力学参数为 :T1 /2α=1.5 2 m in,T1 /2β=6 6 .0 5 min,AUC=880 .0 7m g/ (m in· L )。表明 PL单次给药后 ,在体内分布广泛而迅速 ,消除快。试验所建立的 HPL C检测法专属性高 ,快速、准确、重复性好

绵羊自然铅镉中毒骨骼损伤的X线特征

对自然铅镉中毒绵羊骨骼损伤的 X线特征及骨组织重金属元素的沉积进行了系统研究。结果表明 ,由于重金属元素在骨骼中的高度蓄积 ,致使骨中 Ca、P代谢紊乱 ,重金属中毒呈现以骨质疏松为特征的骨营养不良。头颅、胸部及四肢 X线摄影检查显示 ,病羊骨骼主要病理变化是普遍性骨质疏松 ,牙齿磨灭不齐 ,四肢长骨密度减低 ,骨皮质变薄 ,骨髓腔增宽 ,骨小梁稀少 ,骨指数显著低于健康羊 (P<0 .0 5 )

又有11种猪的白细胞分化抗原被确认

猪冷冻附睾精子与体外成熟卵母细胞的体外受精

研究了不同解冻温度 (39～ 41℃、5 8～ 6 0℃、6 9～ 71℃ )和解冻方式 (干解冻、湿解冻 )对猪冷冻附睾精子解冻后的活力、存活指数以及受精能力的影响。结果表明 ,采用同一种解冻方式 ,经高温解冻的精液 ,虽然解冻后的活力较好 ,但活力却下降很快 ,精子的存活时间和存活指数均不如低温解冻的精液。采用同一种解冻温度 ,湿解冻所需的解冻时间相对短 ,解冻后精子活力相对低 ,但存活时间和存活指数相应优于对应的干解冻试验组。经低温解冻的精子 ,受精能力最强 ,精子的受精能力与解冻时间呈显著正相关 (r=0 .916 13,P=0 .0 10 3)。使用改良 TCM199培养液 ,猪受精卵和颗粒细胞单层共培养能发育至早期桑椹胚

DNA指纹图与生化标记分析对近交系小鼠遗传检测的比较

采用 JL- 0 2多位点探针对来自北京和西安地区的 5个 BAL B/ c群、2个 BAL B/ c- nu/ nu群、4个 C57群、1个CBA/ N群和 1个 DBA/ 2群近交系小鼠进行了 DNA指纹图分析 ,并与常规生化标记分析法进行了比较。结果显示 ,DNA指纹图的图带数均为 17～ 2 2条 ,具有良好的多态性。生化标记分析中 Hbb位点显示异常的 BAL B/ c及 BAL B/c- nu/ nu小鼠与其同群体正常小鼠的 DNA指纹图有较大差异 ,2个体之间的相似系数 (F)及共有带率 (X)均在 0 .8以下 ,完全相同 DNA指纹图的概率 (P)均在 1.3× 10 - 2以下 ;生化标记分析未见异常的群体内 ,DNA指纹图基本一致 ,P>2 .2× 10 - 1 。 DNA指纹图显示 ,不同单位的同一品系间存在一定差异 ,其 F及 X均在 0 .8以下 ,P<1.1× 10 - 3 。不同品系间 DNA指纹图的 F及 X相差较大 ,均在 0 .4以下 ,P=2 .7× 10 - 1 0。BAL B/ c群与 BAL B/ c- nu/ nu群间 DNA指纹图的 F和 X在 0 .6 5以下 ,P=3.8× 10 - 6。同一动物的基因组 DNA,经不同次实验所得出的 DNA指纹图基本一致。2种方法比较表明 ,DNA指纹图在动物遗传检测中比生化标记分析有较大的优势 ,它不但能确切地反映生化标记分析显示的异常动物的遗传变化 ,而且还检出了生化标记分析未能检出的动物遗传变异 ,因此更加灵敏。DNA指

昌潍白猪内分泌腺的生长发育规律

系统研究了 1～ 8月龄昌潍白猪 (192头 )内分泌腺的性状指标 ,并由此得出了其内分泌腺的生长发育规律及其与体重变化的回归方程。结果表明 ,肾上腺在 1～ 3、5～ 6月龄生长速度最快 (P<0 .0 1) ;甲状腺在 1～ 8月龄有 2个生长高峰期 ,即 4月龄和 6月龄 ;胸腺的生长高峰期集中于 3～ 4月龄 (P<0 .0 1) ,颈部胸腺在 1～ 3月龄生长速度显著快于胸部胸腺 ,胸部胸腺左侧生长发育明显快于右侧 ;脑垂体在 2～ 6月龄生长速度较快。肾上腺、甲状腺、胸腺、脑垂体随体重变化的回归方程分别是 :y=0 .0 199x+0 .80 16 (r=0 .975 9,P<0 .0 1) ;y=0 .16 34 x+1.2 86 8(r=0 .976 1,P<0 .0 1) ;y=1.76 0 8x+2 6 .995 0 (r=0 .946 2 ,P<0 .0 1) ;y=0 .0 0 2 4x+0 .0 6 2 0 (r=0 .90 83,P<0 .0 1)。

噬菌体肽库及其在抗原表位识别中的应用