简讯

鸡传染性支气管炎病毒中国地方分离株S1基因5′端的变异

对自海南省、广西省发生鸡传染性支气管炎 (IB)鸡群分离的 4株 IBV分离株 (Ha N- 1/95、Ha N- 2 /95、GX- 1/98、GX- 2 /98)的主要免疫原纤突蛋白 S1基因经 RT- PCR扩增其 5′端约 1.2 kb的目的片段 ,将其插入载体 p MD 18- T中 ,在大肠杆菌中实现目的基因的克隆。对克隆的目的基因经限制性酶切分析及 PCR鉴定后 ,以双脱氧链终止法测定其核苷酸序列 ,并与 Gen Bank中的参考毒株 (H12 0、SD- 1/97和 Holte)相应序列作比较 ,分析其同源性。结果表明 ,Ha N- 1/95、Ha N- 2 /95、GX- 1/98及 SD- 1/97与疫苗株 H12 0的核苷酸序列同源性分别为 99.5 %、99.2 %、97.9%和99.5 % ,其推导氨基酸序列同源性分别为 99.1%、98.9%、96 .9%和 99.2 %。 GX- 2 /98与 Holte株的核苷酸序列同源率为 99.0 % ,其推导的氨基酸序列同源性为 98.6 % ,而与其他中国分离株的核苷酸序列的同源性仅为 70 %左右 ,氨基酸序列的同源性仅为 6 8%左右。

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒 (IBDV)超强毒 L X株感染 SPF鸡免疫器官中 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒 L X株接种 2周龄 SPF雏鸡 ,在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出 IBDV抗原的存在和 CD4 + 与 CD8+ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中 ,CD4 + T淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质 ,而 CD8+ T淋巴细胞则存在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙 ,并且 CD8+ T淋巴细胞数量明显多于 CD4 + T淋巴细胞 ,在接种后 14 d仍未见 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞数量减少。脾脏中 CD4 + T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在 ,而 CD8+ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中 CD4 +和CD8+ T淋巴细胞在皮质中减少 ,但在髓质增多 ,尤其是 CD8+ T淋巴细胞数明显多于 CD4 + T淋巴细胞。盲肠扁桃体中 CD4 + 和 CD8+ T淋巴细胞主要存在于生发中心 ,尤其是 CD8+ T淋巴细胞数比 CD4 + T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见 CD4 +和 CD8+ T淋巴细胞 ,而且 CD8+ T淋细胞更多。在这些淋巴器官中 ,病毒损伤部位出现 CD4 +和 CD8+ T淋巴细胞的迁入聚集 ,表明 T淋巴细胞可能参与 IBDV超强毒的免疫致病过程。

鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用

利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。

金黄色葡萄球菌临床分离耐氟喹诺酮类药物株的gyrA和grlA基因突变

对 5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌 (MIC值范围 :4～≥ 12 8mg/ L) ,提取各细菌染色体DNA,对 gyr A和 grl A基因进行 PCR扩增 ,产物与 p MD18- T载体连接 ,转化至大肠杆菌 JM10 9感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,5株菌均发生了基因突变。突变位点 grl A:Ser80 (TCC)→ Phe(TGC) ,Ser80 (TCC)→ Tyr(TAC) ;gyr A:Ser84 (TCA)→ L eu(TTA )、Ser84 (TCA)→ Ala(GCA)、Glu88(GAA)→ L ys(AAA) ,其中 2株对氟喹诺酮类药物的 MIC值低 (4～ 6 4 m g/ L) ,均发生 grl A单一点突变 ,其余 3株在 gyr A和 grl A上产生多突变位点 ,且对氟喹诺酮类药物的 MIC值较高 (8～≥ 12 8mg/ L )。说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药 ,高水平的耐药需要多位点的突变。 5株耐药菌株均发生 grl A Ser80→ Tyr(Phe)点突变 ,提示环丙沙星、诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶 Iv

嗜水气单胞菌的随机扩增多态DNA分型

用 4 5条随机引物对不同来源的 9株嗜水气单胞菌进行了 DNA指纹分析 ,其中 10条引物呈现良好的多态性和稳定性。建立的随机扩增多态 DNA(RAPD)反应的最佳条件 :模板 DNA 2 0 ng,随机引物 0 .8μm ol/ L ,d NTP 15 0μmol/ L,Mg2 + 3.5 mm ol/ L,Taq酶 2 .0 U;95℃预变性 5 min,94℃变性 6 0 s,36℃退火 70 s,72℃延伸 12 0 s,4 0个循环。初步建立了嗜水气单胞菌的 RAPD指纹图谱 ,分析了 9株嗜水气单胞菌之间的遗传距离。据此将 9株菌归为 3个组 ,为该菌的分型提供了新的方法。

Closantel缓释剂驱除山羊实验感染肝片吸虫的效果

选用 5只实验感染肝片吸虫山羊进行 Closantel(氯氰碘柳胺 )缓释剂驱虫试验。试验用山羊每只一次性口服肝片吸虫囊蚴 15 0个 ,感染后第 15周随机将山羊分成对照组 (n=2 )和驱虫组 (n=3) ,驱虫组每只羊口服 2丸 Closantel缓释剂 (含 15 .5 % Closantel,每丸 7.6 g) ,每周定时采集颈静脉血和进行粪便检查 ,每月称重 ,试验结束时剖检测量肝重和计数肝内虫体数 ,以驱虫前后山羊的红细胞、白细胞、嗜酸性粒细胞、血清抗体和一氧化氮的变化、体重变化、剖检时肝重 /体重之比、虫卵的变化以及虫体减少率作为衡量驱虫效果的指标。结果表明 ,投药后嗜酸性粒细胞在第 1、2、3周与对照组相比有显著下降 ,其他各项指标与对照组相比虽有一定差异但不显著。虫体减少率为 4 1.2 2 %。提示Closantel缓释剂对驱除实验感染肝片吸虫有一定效果 ,在虫体感染前投药会起到预防作用。

塞曼特罗 (Cimaterol)对大鼠肝细胞氮代谢及 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的影响

利用原代肝细胞培养技术测定了塞曼特罗 (Cimaterol,CIM,1× 10 - 6 m ol)对大鼠肝细胞氮代谢和 6 -磷酸葡萄糖脱氢酶 ((G- 6 - PDH)活性的影响。结果表明 ,CIM可影响大鼠肝细胞中尿素氮的浓度 ,与对照组相比 ,CIM试验组培养液中尿素氮水平下降了 2 3.87% (P<0 .0 5 ) ,且 CIM的这种作用可被 β-受体阻断剂心得安 (PRO,1× 10 - 6 m ol)所阻断。CIM也可增加 3H-亮氨酸掺入肝细胞的量 ,与对照组相比 ,其幅度提高了 19.77% (P<0 .0 5 ) ;同样 ,PRO可抑制这种作用。CIM还具有增加大鼠肝细胞产生 IGF- 的趋势 ,但与对照组相比无明显影响 (P>0 .0 5 )。CIM对大鼠肝细胞G- 6 - PDH活性有显著影响 ,试验组肝细胞中 G- 6 - PDH活性与对照组相比下降了 4 3.36 % (P<0 .0 5 ) ;CIM引起的肝细胞 G- 6 - PDH活性下降的作用也可被 PRO所阻断。结果提示 ,CIM可通过增强大鼠肝细胞氮素的保留和蛋白质的合成 ,以及通过抑制肝细胞 G- 6 - PDH活性 ,影响脂肪代谢 ,从而调节机体的生长发育

生长激素释放因子在CHO细胞的表达

在对生长激素释放因子 (GRF)基因改造和化学合成 ,并构建了其真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )的基础上 ,用 L ipofectin将上述载体转染 CHO细胞进行瞬时表达。提取转染细胞总 RNA,用 RT- PCR和 Dot blotting检测 GRF基因的表达情况 ,用 Western blotting检测转染细胞上清液的表达产物 ,均得到了阳性结果。制备大鼠垂体单层细胞 ,测定表达产物的生物学活性 ,结果表达产物可刺激生长激素释放 ,并且比对照组提高 3.8倍。试验结果表明 ,已构建的真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )能表达出有生物学活性的 GRF。

我国无规定动物疫病区示范区项目建设

氟化物对鸡甲状腺激素代谢的影响

选用 1日龄蛋鸡 2 5 0只 ,随机分为 5组 ,每组 5 0只 ,饲喂相同的全价日粮。第 1组为正常对照组 ;第 2、3、4、5组在日粮中添加不同量的氟化钠 ,使日粮中氟的含量分别为 5 0 0、10 0 0、15 0 0、2 0 0 0 m g/ kg。试验期 15 0 d。每隔 30 d采集血样 ,测定血清中氟、甲状腺激素 (T3、T4 )的含量 ,观察试验鸡的临床表现。结果表明 ,本试验成功地复制出了不同程度的鸡慢性氟中毒模型 ;各氟中毒组鸡血清中 T4 含量在整个试验期内均低于对照组 ,且呈明显的剂量—效应关系 ;在早期 ,各中毒组血清 T3含量不同程度地高于对照组 ,而中、后期则低于对照组 ,且与血清中氟含量呈显著的负相关(r=- 0 .85 3,P<0 .0 1)。由此可见 ,氟中毒明显破坏机体内甲状腺激素的代谢 ,影响甲状腺机能的正常发挥。

中药预防仔猪早期断奶腹泻

仔猪早期断奶腹泻 (Piglet early weaning diarrhea,PEWD)是在养猪生产上普遍采用仔猪早期断奶技术所带来的问题之一。本试验根据中兽医学的基础理论和 PEWD的临床表现 ,认为 PEWD是积食化热、脾胃虚弱所致 ,提出补脾益气、消食导滞、清热解毒的预防方法 ,选择以补中益气汤为基础方进行适当的加减 ,增加消导药和清热药 ,减少提升类药物 ,经预备试验后选择下列药方 :黄芪、党参、白术、茯苓、甘草、马齿苋、神曲、山楂和当归 ,煎成 10 0 %的中药汤剂 ,分别以 1%、2 %、3%的比例添加到日粮中。试验结果表明 ,添加 2 %和 3%中药汤剂的日粮能有效地预防 PEWD,2 %和 3%添加量的效果差异不显著。最后选用 2 %的添加量进行临床试验 :选择 (2 8± 1)日龄杜长大断奶仔猪 6 0头 ,随机分成 2组 ,每组 30头 ,设 3个亚组 ,每个亚组 10头。 2组均饲喂基础日粮 ,试验组另添加 2 %的中药汤剂。试验期14 d。断奶后 10 d,每个亚组选择 5头 ,前腔静脉采血做血液学和免疫学指标检测。试验结果表明 ,2 %中药汤剂能有效预防仔猪早期断奶腹泻 ,腹泻率较对照组下降 32 .4 % (P<0 .0 1) ,并能提高 RBC、WBC、TP、Ig G的数量和水平。

妊娠犬及其胎儿股动脉血管插管技术

对 12例妊娠犬及其胎儿股动脉血管插管术的手术途径、血管和导管选择、插管方法、麻醉和术后护理进行了探讨。 12例术后胎儿在母体内的存活时间分别为 :36 h 2例、4～ 5 d 2例、6～ 7d 3例、8～ 10 d 3例、12～ 14 d 2例。胎儿在母体内存活 4 d以上的 10例犬正常娩出经手术插管的胎儿 ,其血管插管保持完好 ,所产 10只幼犬全部成活 ,分娩前后均可从导管采集到血液样本。其余 2例犬发生流产。

药物对球虫感染鸡血液及生化指标的影响

1日龄艾维因肉鸡分为 4个组 ,即中药组、马杜霉素组、感染不给药组和不感染不给药组 ,每组 2 0只。中药组从 1日龄开始即投喂含 0 .1%中草药复方制剂 (由绞股蓝皂甙、去油鸦胆子仁等组成 )的饲料 ;马杜霉素组从 12日龄起投喂含马杜霉素 5 mg/ kg的饲料。前 3组于 14日龄感染鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。卵囊攻击前及攻击后 4、7d分别采血 ,测定血液红细胞数、血钾、血钠、血磷、血清白蛋白和血清总蛋白含量。结果表明 ,卵囊攻击后 4、7d,感染不给药组的红细胞数显著低于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,卵囊攻击后 7d,血钾浓度显著高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,血清白蛋白和血清总蛋白显著低于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卵囊攻击后 7d,中药组血液红细胞数显著低于不感染不给药组 (P<0 .0 5 ) ,但显著高于感染不给药组 (P<0 .0 5 ) ;马杜霉素组的各项测定指标与不感染不给药组相比无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;卵囊攻击后 ,各组间的血磷和血糖值无显著差异 (P>0 .0 5 )。结果提示 ,药物能抵抗球虫感染 ,血液各项指标得以保持相对恒定。

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)为包被抗原 ,氯霉素 (CAP)为竞争半抗原 ,两者与一定量的抗CAP- Mc Ab反应。结果表明 ,理想的包被抗原质量浓度为 1.2 5 mg/ L ,抗 CAP- Mc Ab稀释倍数为 1∶ 12 0 0 0 ,酶标二抗稀释倍数为 1∶ 5 0 0 0 ,最适检测范围为 1～ 10 0 μg/ L,最小检测量为 0 .1μg/ L,批内和批间变异系数分别为 3.6 2 %和 5 .19%。得到回归方程 (y =1.2 730 - 0 .6 74 5 x,r2 =0 .9779)和标准曲线 ,从而建立了快速定量测定 CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)。

猪卵母细胞体外成熟过程中p90~(rsk)未被MAPK激活

从屠宰场获得的初情期母猪卵巢中的卵母细胞 ,在修改后的 TCM199中进行体外成熟培养。在卵母细胞发育的一定时期取样 ,利用 SDS- PAGE蛋白质电泳和免疫印迹技术 ,研究了 MAPK(丝裂原激活蛋白激酶 ,又称 ERK)和p90 rsk (ribosomal S6 kinase)对猪卵母细胞成熟的调节。结果表明 ,修改后的 TCM199可以满足猪卵母细胞成熟的需要 ,但猪卵母细胞在体外成熟过程中 ,p90 rsk未随 MAPK激活而激活 ,说明维持猪卵母细胞的 M 阻滞与 MAPK有关 ,而与 p90 rsk无关。

NO在小鼠早期胚胎吸收过程中的作用

给妊娠 7d小鼠尾静脉注射细菌脂多糖 (L PS)诱导早期胚胎吸收。注射 L PS后 12、2 4、36 h,以 EL ISA、比色法检测血清和子宫匀浆中 Th1型细胞因子 IFN- γ、IL- 12与 NO的含量变化 ;免疫组织化学法观察 3种一氧化氮合酶(n NOS,e NOS,i NOS)和 Th2型细胞在小鼠子宫表达的变化。此外 ,还观察了 NO供体硝普钠 (SNP)诱导孕鼠流产效果及氨基胍 (AG)对抗 L PS诱导孕鼠流产的效果。结果显示 ,相对于正常妊娠组 ,L PS处理组孕鼠子宫匀浆 NO含量及 IFN- γ、IL- 12水平极显著升高 (P<0 .0 1) ,血清 NO含量也极显著升高 (P<0 .0 1) ;n NOS、i NOS在 L PS处理组小鼠子宫可见阳性标记 ,而 e NOS未见阳性标记 ;大量 Th2型阳性细胞标记仅在正常妊娠组小鼠子宫内膜基质可见 ,L PS处理组未见阳性细胞。腹腔注射 SNP致使孕鼠早期胚胎吸收 ,然而妊娠 6～ 9d腹腔注射 AG却未能降低 L PS诱导的孕鼠早期胚胎吸收。上述结果提示 ,L PS处理后 ,Th1型免疫反应增强 ;源自升高表达的 i NOS的子宫局部高浓度 NO可能作为一种效应分子介导小鼠早期胚胎吸收。

谷氨酰胺对饲喂生大豆仔猪肠道通透性和消化吸收能力的影响

选择 18头 2 8日龄体重相近的断奶大长北公仔猪 ,随机分为 3组 ,每组 6头 ,于代谢笼中进行试验。按等氮等能的原则平衡各组日粮 ,基础日粮含 5 %生大豆。试验 组添加 1%的谷氨酰胺、试验 组添加 2 %的谷氨酰胺 ,以研究谷氨酰胺对饲喂生大豆仔猪肠道通透性和消化吸收能力的影响。试验结果表明 ,日粮添加谷氨酰胺可显著增加试验 、 组仔猪血浆中尿素氮水平和尿液中尿素氮的排出 ,并降低 35日龄时仔猪血浆内毒素含量 ,且试验 组仔猪血浆内毒素含量显著低于对照组 ;对 4 2日龄仔猪血浆内毒素含量和肠道的通透性无显著的影响。仔猪粪脂和 D-木糖吸收试验 ,各组间无明显的差异 ,但日粮添加谷氨酰胺可显著降低仔猪粪中水分含量 ,减少腹泻的发生。谷氨酰胺对饲喂生大豆造成损伤仔猪的氮代谢有明显的影响 ,并可促进水分的吸收 ,减少腹泻的发生。

非激素类免疫制剂促动物生长的研究进展