• 小鼠卵母细胞氯化锶激活条件

    孟庆刚,朱士恩,常影,曾申明,张忠诚

    以昆明小鼠为试验对象 ,研究了氯化锶 (Sr Cl2 )浓度、激活处理时间以及卵龄对卵母细胞 Sr Cl2 孤雌活化的影响。h CG注射后 18h的小鼠卵母细胞在 1.6、5 .0、10、2 0 m mol/L Sr Cl2 的激活液中处理 10 min,各组间的激活率 (原核期卵母细胞的比例 )无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 10、2 0 mmol/L Sr Cl2 组发育至 2 -、4 -细胞期比率 (5 9.2 6 %、2 0 .37% ,6 3.79%、2 0 .6 9% )显著高于 1.6、5 .0 mm ol/L 组 (2 9.6 3%、9.2 6 % ,4 7.0 6 %、7.84 % ) (P<0 .0 5 )。只有 2 0 mmol/L 组的少数激活卵母细胞 (3.4 5 % )发育至桑椹胚阶段。 10、2 0 mmol/L Sr Cl2 组处理 2 0、4 0、6 0 min,2组间的活化率无显著性差异 ;处理 4 0 min,2 0 m mol/L 组的桑椹胚和囊胚发育率 (6 4 .4 4 % ,2 2 .2 2 % )均显著高于 10 mmol/L 组 (30 .36 % ,11.6 1% ) ;处理 6 0 min,10 mmol/L 组的桑椹胚和囊胚发育率 (84 .6 8% ,4 6 .77% )均显著高于 2 0 mmol/L 组(6 7.4 6 % ,2 8.5 7% )。 10 mmol/L Sr Cl2 处理 2 0、4 0、6 0、180、36 0 m in,其活化率和 2 -细胞的发育率无显著性差异。 6 0、180 min处理组的囊胚发育率 (49.5 8%、4 7.5 9% )差异不显著 ,但 2者均显著高于 2 0、4 0、36 0 m in组 (4.5 0 %、12 .2 4 %和

    2002年04期 321-324页 [查看摘要][在线阅读][下载 156k]
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  • 激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响

    杨素芳,石德顺,韦精卫

    系统探讨了几种激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响。体外成熟 (IVM) 2 6 h的水牛卵母细胞经 7%乙醇(EH)、钙离子载体 (A2 3187)或离子霉素 (Ion)激活处理 5 min后 ,在 2 m mol/ L 6 -甲二氨基嘌呤 (6 - DMAP)中培养 3~4 h,然后再继续培养 6~ 11d,观察其胚胎发育情况。结果发现 ,5μmol/ L Ion激活处理的水牛卵母细胞分裂率显著高于 EH处理的卵母细胞 (6 3.0 % vs5 4 .2 % ,P<0 .0 5 ) ,其原核形成率也显著高于 EH处理的卵母细胞。激活处理前 ,无Ca2 + 培养液孵育时间的长短 ,对水牛卵母细胞孤雌发育无显著影响 (P>0 .0 5 )。如用 A2 3187激活处理水牛卵母细胞 ,其激活分裂率则随着浓度的升高而提高。从而表明 ,5 μmol/ L Ion可有效激活水牛卵母细胞

    2002年04期 325-327页 [查看摘要][在线阅读][下载 103k]
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  • 注射hCG后不同时间猪所排卵泡内COC的形态和卵母细胞减数分裂进程

    孙兴参,伊亚玲,岳奎忠,马所峰,冯兴军,谭景和

    研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、2 2、2 4 h(71.2 %、76 .5 %、70 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 )注射 h CG后 18、2 2、2 4 h收集的 COC分别有98.9%、98.0 %、91.4 %的卵丘已经发生扩展 ,而注射 h CG后 4 h收集的 COC则无一发生卵丘扩展 ;(3)注射 h CG后 4h,有少量卵母细胞开始恢复减数分裂 ,至 18h左右开始发生生发泡破裂 (GVBD) ,到 2 2~ 2 4 h有 5 8.4 %~ 6 0 .0 %的卵母细胞发生 GVBD;(4)外层卵丘扩展、放射冠轻微扩展的卵母细胞处于 GV- 1期的比例 (6 9.6 % )明显高于卵丘完全扩展的卵母细胞 (47.8% )和放射冠部分扩展、卵丘已经脱落的卵母细胞 (2 9.3% ) ,而后 2者发生 GVBD的比例(40 %、4 4 % )则略高于前者 (2 7% )。

    2002年04期 327-329页 [查看摘要][在线阅读][下载 117k]
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  • 牛不同直径卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率和染色体异常分析

    朱淑文,华修国,艾晓杰,李培昌,吉泽绿

    将不同直径牛卵泡内卵母细胞体外成熟培养 2 2 h后 ,对其体外受精后的卵裂率、胚胎发育速度和胚胎染色体异常发生率进行了研究。结果表明 ,体外受精后 4 8h,直径 3~ 6 mm卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率明显高于直径1~ 2 mm和 7~ 10 mm卵泡内卵母细胞体外受精后的卵裂率 (P<0 .0 5 )。体外受精后 4 8h,直径 3~ 6 mm卵泡内卵母细胞体外受精后的胚胎的发育速度明显快于直径 1~ 2 mm和 7~ 10 mm卵泡组胚胎 (P<0 .0 5 )。通过对不同卵裂期胚胎的染色体标本分析表明 ,直径 1~ 2 m m卵泡内卵母细胞体外受精后的胚胎染色体异常发生率明显高于直径 3~ 6mm卵泡组 (P<0 .0 5 ) ,但与直径 7~ 10 mm卵泡组之间无显著性差异。

    2002年04期 330-331页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k]
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  • 小鼠去透明带裸卵的体外受精及其胚胎发育

    安铁洙,谭建华,张学明,周虚,朴善花

    为了建立提高小鼠弱精子体外受精率的新方法 ,将小鼠宰杀在 2 0℃下搁置 14 h,然后取出附睾尾精子进行冷冻保存。用解冻后活力明显下降的精子 ,与去透明带裸卵进行体外受精。结果显示 ,与带有颗粒细胞卵的体外受精率(0 % )和透明带切开卵的体外受精率 (4%~ 31% )相比 ,去透明带卵的体外受精率增至 39%~ 6 8% (P<0 .0 1) ;体外受精所获的 2细胞胚 ,经培养有 74 %~ 10 0 %的胚胎发育至扩张囊胚 ;来自 BDF1雄性小鼠精子的 2细胞期体外受精胚 ,经体外培养至囊胚期后再移植 ,获得了正常新生小鼠。以上结果表明 ,去透明带裸卵与小鼠弱精子体外受精 ,可提高小鼠弱精子的利用率

    2002年04期 332-334页 [查看摘要][在线阅读][下载 95k]
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  • 血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

    马所峰,苗义良,兰国成,王子玉,常仲乐,谭景和

    试验研究了血清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的影响 ,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明 :(1)培养 2 4 h,添加 PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组 (P<0 .0 5 ) ,而培养到 2 7h,2者成熟率之间差异变得不显著 ,说明添加 PMSG对卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响 ,但加速了卵母细胞核的成熟进程 ;(2 ) M199+BSA培养 2 7h,卵母细胞核成熟率显著高于培养 2 4 h,而 M199+FCS培养 2 7h与培养 2 4 h的成熟率差异不显著 ,说明添加 BSA时 ,卵母细胞核体外成熟速度比添加 FCS的慢 ;(3)卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第 1极体形态无统计学差异 ,说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展 ;(4)山羊的卵丘扩展并不依赖于卵母细胞 ;(5 )将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的 COC分开培养发现 ,2者卵母细胞核成熟率无明显差异 ,带有壁颗粒细胞的 COC卵丘扩展情况明显优于一般 COC

    2002年04期 334-336页 [查看摘要][在线阅读][下载 108k]
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  • 几种冷冻条件对牛体外受精卵发育率的影响

    黄凤玲,石德顺,卢克焕

    试验比较了乙二醇 (EG)、丙二醇 (PG)、二甲基亚砜 (DMSO)、甘油 (G)和不同的投液氮温度 (- 33℃或 - 4 0℃ )对牛体外受精卵冷冻后发育率的影响。结果 :投液氮温度无论是 - 33℃或 - 4 0℃ ,均以 1.5 mol/ L EG的冷冻效果为最好 ,与 1.5 mol/ L PG相比 ,受精卵的发育率差异显著 (39.7% vs19.2 % ;4 7.8% vs2 4 .7% ,P <0 .0 5 ) ;同 1.5mol/ L DMSO和 1.5 mol/ L G相比 ,受精卵的发育率差异极显著 (39.7% vs 16 .1% or 13.3% ;4 7.8% vs 19.2 % or17.3% ,P <0 .0 1)。 - 4 0℃投液氮 ,受精卵冷冻后的发育率略高于 - 33℃ ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。以 2 5 % EG+2 5 % PG作为细胞外玻璃化溶液对牛体外受精卵进行冷冻 ,冷冻后受精卵的发育率达 5 8.9% ,高于用 1.5 mol/ L EG冷冻在 - 4 0℃投液氮这一处理 (47.8% ) ,但无统计学上差异 (P >0 .0 5 )。然而 ,试验组冷冻后受精卵的发育率均极显著低于对照组 (80 .6 8% ,P <0 .0 1)。结果表明 ,投液氮温度以 - 4 0℃为较好 ,防冻剂以 EG的冷冻效果为最佳。玻璃化冷冻法完全可以应用于冷冻牛体外受精卵

    2002年04期 337-338页 [查看摘要][在线阅读][下载 70k]
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  • 成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存

    李莲军,阮承迈,张锐,李德雪,文兴豪,张学明,岳占碰,于卫东

    在含 10 %小牛血清 (NBS)的 DMEM培养基中 ,分别各添加 5 %、10 %、15 %、2 0 %和 2 5 %的二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇 (PG)、乙二醇 (EG)和甘油 (G) ,对成年小鼠睾丸生殖细胞进行冷冻保存 ,复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示 ,5 %~ 2 5 % DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为 88.5 %、88.0 %、88.0 %、6 5 .6 %及 5 1.3% ;5 %~ 2 5 % PG冻存液组的细胞复苏率分别为 87.2 %、86 .4 %、79.0 %、73.4 %及 4 0 .1% ;5 %~ 2 5 % EG冻存液组的细胞复苏率分别为 86 .6 %、80 .9%、6 0 .8%、5 1.3%及 30 .0 % ;5 %~ 2 5 % G冻存液组的细胞复苏率分别为 86 .5 %、86 .3%、6 5 .3%、36 .0 %及 31.4 %。其中各抗冻剂 5 %和 10 %组的细胞复苏率最高 ,与 15 %组相比均存在显著或极显著差异。 4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO、PG、EG和 G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞时的最小损失率分别为 4 .8%、6 .1%、6 .7%、6 .8%。结果表明 ,采用慢速冷冻时 ,DMSO、PG、EG及 G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂 ,最佳使用含量均为 5 %~ 10 %。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含 5 %~ 10 %的 DMSO、PG、EG和 G的 DMEM(含 10 % NBS)冻存液中 ,2步慢速降温 ,液氮储存 ,37℃水浴复苏 ,是一种具有较

    2002年04期 339-340页 [查看摘要][在线阅读][下载 72k]
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  • 牛腔前卵泡的体外培养

    高建明,吴学清,王占贺,万善霞,高雅芝,孙颖

    通过在α- MEM和 D- MEM/ F1 2 基础液中添加不同比例的 ITS、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤和血清 ,观察了不同基础液对牛腔前卵泡体外生长发育的影响 ,从而筛选出较好的组别。在筛选出的基础液组别中添加 3个水平的FSH、L H、E2 ,观察了其对牛腔前卵泡体外生长发育的影响。结果表明 ,α- MEM和 D- MEM/ F1 2 2种基础液中以α-MEM为好 ,不同的基础培养液组合对牛腔前卵泡的体外培养有一定的影响。添加不同水平的激素对牛腔前卵泡体外培养也有显著影响。试验初步筛选出最佳的培养液成分为α- MEM+ITS(I- 5 m g/ L ,T- 5 mg/ L ,S- 5μg/ L ) +丙酮酸钠(0 .2 3mmol/ L) +谷氨酰胺 (1.5 m mol/ L) +次黄嘌呤 (2 m mol/ L) +血清 (7.5 % ) +FSH(0 .2 5 mg/ L) +L H(5 IU/m L ) +E2 (0 .5 mg/ L )。

    2002年04期 341-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k]
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  • 山羊PGCs用于分离与克隆类ES细胞

    韩建永,桑润滋,孙国杰,王志刚,李俊杰

    选择健康成年本地白山羊 ,自然发情、配种后 4 4 d取胎儿 ,以传统的原始生殖细胞 (PGCs)分离与克隆的方法和PGCs与其胎儿生殖嵴周围组织细胞共同培养的方法获得类胚胎干细胞 (类 ES细胞 ) ,并对山羊类 ES细胞在不同饲养层上进行培养。结果表明 ,采用传统方法和共培养的方法并添加细胞因子均能分离获得类 ES细胞。分离获得的类ES细胞在同源 (山羊 )胎儿细胞饲养层上生长效果较好 ,可传 4代或 5代 ,而在小鼠原代成纤维细胞饲养层上类 ES细胞仅传 3代。另外 ,共培养不添加细胞因子组仅获 1个类 ES细胞集落 ,传代后丢失

    2002年04期 344-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 146k]
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  • 牛体细胞核移植技术

    董雅娟,柏学进,李建栋,M.D.Varisanga,N.R.Mtango,李云龙,铃木达行

    对牛体细胞核移植技术中核供体细胞周期同期化处理、电融合条件及去核方法等进行了研究。结果表明 ,血清 -饥饿组 (细胞周期同期化处理组 )的移核重构胚细胞融合率 (83.3% )、卵裂率 (70 % )和囊胚发育率 (33.8% )与血清 -选择组对应指标间无显著性差异 (82 .3%、6 9.2 %、32 .4 % ,P >0 .0 5 ) ;但上述 2组分别极显著高于血清 -随机组(6 4 .8%、33.8%、4 .35 % ,P <0 .0 1)。试验确立了场强 1.0 2 5 k V/cm、脉冲宽度 5 0μs、连续 2次电脉冲为最佳电融合条件。摸索出的点击去核法 ,对卵母细胞进行去核 ,去核成功率达 90 % ,极显著高于吸引法的 6 8.3% (P <0 .0 1) ;其囊胚发育率为 34.1% ,显著高于吸引法的 18.0 % (P <0 .0 5 ) ,与挤压法 (2 0 .9% )相比差异不显著 (P >0 .0 5 )。移核重构胚胎移植后 ,产 2头成活的体细胞克隆牛

    2002年04期 347-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 156k]
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  • 胚胎移植技术在优质细毛羊育种中的研究与应用

    石国庆,刘守仁,杨永林,倪建宏,皮文辉,周平,万鹏程

    采用 FSH、L H、PMSG、氟孕酮阴道海绵栓等激素进行超数排卵 ,通过人工授精、手术采卵、同期发情、胚胎移植、B超妊娠检查等技术 ,共处理优秀美利奴母羊 4 5 6只 ,获得可用胚胎 (A、B、C级胚胎 ) 30 33枚 ,平均 6 .6 5枚 /只(30 33/ 4 5 6 ) ,移植受体母羊 2 333只 ,冻胚受孕率 4 7.0 2 % (10 97/ 2 333) ,产羔数 14 2 6只 ,产羔率 12 9.99% (14 2 6 /10 97)。其中 ,公羔 6 85只 ,母羔 74 1只。优质细毛羊初生重公羔平均 4 .4 5 kg,母羔平均 4 .6 1kg。断奶重公羔平均38.2 4 kg,母羔平均 33.6 8kg。 12月龄平均体重公羊 76 .15 kg,母羊平均 6 2 .15 kg。周岁毛长公羊平均 11.6 7cm,剪毛量平均 12 .0 4 kg;母羊毛长平均 11.12 cm ,剪毛量平均 7.6 5 kg;平均净毛率达到 6 8.5 %。 2岁公羊体重平均 10 6kg,毛长平均 11.5 cm,剪毛量平均 11.85 kg,净毛率 6 9.5 %。2岁母羊体重平均 72 kg,毛长平均 11.0 cm,剪毛量平均8.5 kg,净毛率 6 9.0 6 %。羊毛纤维平均细度 18.71μm。 3岁公羊最大体重 14 8kg,母羊最大体重 10 2 kg。优质细毛羊新类群同期上述各项指标均显著或极显著高于中国美利奴羊

    2002年04期 351-353页 [查看摘要][在线阅读][下载 92k]
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  • 波尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

    洪琼花,邵庆勇,廖德芳,谭鸿明,朱士恩,曾申明,马兴跃,姚兴荣

    对 75只波尔山羊超排处理 ,共获 A、B级胚胎 776枚 ,平均 (10 .35± 6 .4 5 )枚 /只 ,鲜胚移植受体 36 7只 ,移植产羔率达 5 5 .6 %。应用 CIDR和 PMSG同期发情处理受体山羊 5 6 0只 ,5 4 9只达到同期发情 ,32 h内同期率为 98.0 4 %。囊胚和扩张囊胚在发情后 7d的移植产羔率分别为 6 2 .2 2 % (84 /135 )和 5 8.2 6 % (6 7/115 ) ,显著高于桑椹胚 (43.18% )和孵化囊胚 (5 1.72 % ) (P<0 .0 1) ,而囊胚和扩张囊胚间、桑椹胚和孵化囊胚间差异不显著 (P>0 .0 5 )。受体山羊的黄体数量直接影响到移植产羔结果 ,黄体数≥ 2的受体山羊移植产羔率显著高于黄体数为 1的受体山羊移植产羔率 (P<0 .0 1) ,分别为 6 4 .83% (94 /14 5 )和 4 9.5 5 % (110 /2 2 2 )。PMSG注射时间 (在取 CIDR前 2 d或当天注射 )和剂量对受体羊的黄体数和移植产羔率均无显著影响 (P>0 .0 5 )

    2002年04期 354-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 84k]
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  • 牛胚胎玻璃化超快速冷冻一步法移植试验

    柏学进,董雅娟,吴胜权,李建栋,张新慧,薛建华,罗明玖

    应用 30 %乙二醇 +0 .3mol/ L 蔗糖 - m- PBS液 (VS1)、30 %乙二醇 +0 .3m ol/ L 蔗糖 +5 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m-PBS液 (VS2 )、30 %乙二醇 +0 .3mol/ L蔗糖 +10 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m- PBS液 (VS3)玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎 ,一步法移植。结果显示 ,VS1、VS2、VS3组玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率分别为 10 0 % (2 0 / 2 0 )、95 %(19/ 2 0 )和 5 5 .6 % (5 / 9) ;培养存活率分别为 70 % (14 / 2 0 )、75 % (15 / 2 0 )和 2 2 .2 % (2 / 9) ;囊胚孵化率分别为 0、2 0 % (4/2 0 )和 0。VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率极显著地高于 VS3组 (P<0 .0 1) ;VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的培养存活率分别显著 (P<0 .0 5 )和极显著 (P<0 .0 1)地高于 VS3组。 VS1组冷冻的胚胎经一步法移植了 5头 (1枚 /头 ) ,未获得妊娠 (0 / 5 ) ;VS2组冷冻的胚胎用一步法移植了 10头 (1枚 /头 ) ,结果获得 2头妊娠(2 / 10 ) ,并产下 2头正常犊牛。

    2002年04期 356-358页 [查看摘要][在线阅读][下载 108k]
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  • 昆明小鼠早期胚胎G6PDH在CZB和KSOM中的转录与表达

    张守全,王翀,江青艳,杨关福

    根据小鼠肌肉 6 -磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6 PDH)的 c DNA序列 ,设计并合成内外 2对引物 ,以巢式 RT- PCR检测了昆明小鼠体外培养的 2 -、4 -细胞期早期胚胎 G6 PDH m RNA的表达情况。结果显示 ,以不含葡萄糖的培养液 CZB体外培养发育至 2 -、4 -细胞阶段昆明小鼠早期胚胎 G6 PDH m RNA经反转录后 ,均能以外引物扩增产物为模板通过内引物扩增出 1条 378bp特异性条带 ;而以含葡萄糖的培养液 KSOM体外培养发育至 2 -、4 -细胞阶段昆明小鼠早期胚胎G6 PDH m RNA经反转录后 ,通过内外 2对引物均不能扩增出特异性条带。表明 CZB液培养的昆明小鼠 2 -、4 -细胞期胚胎 G6 PDH基因已转录与表达 ,磷酸戊糖途径已是其代谢葡萄糖的主要方式之一 ;而以 KSOM液培养的昆明小鼠2 -、4 -细胞期胚胎 G6 PDH基因没有转录与表达。说明培养液中含有葡萄糖的昆明小鼠 2 -、4 -细胞期胚胎不存在磷酸戊糖代谢途径 ,不含葡萄糖的则存在磷酸戊糖途径。

    2002年04期 359-362页 [查看摘要][在线阅读][下载 152k]
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  • 小鼠原核胚OPS法冷冻保存技术

    朱士恩,权国波,吴通义,曾申明,张忠诚

    在 2 0、2 5℃室温条件下 ,采用 OPS(open pulled straw)法对小鼠原核胚进行玻璃化冷冻保存。结果表明 ,EFS和EDFS各冷冻组的原核形态正常率 (95 %~ 10 0 % )、体外发育率 (76 %~ 82 % )和对照组 (10 0 %、88% )无显著性差异 (P>0 .0 5 )。采用 EPFS4 0冷冻后的原核胚形态正常率 (70 %~ 76 % )与对照组相比差异极显著 (P<0 .0 1)。而 EPFS30和EPFS4 0冷冻后的胚胎发育率 (34%~ 5 7% )均极显著低于对照组 (P<0 .0 1)。另外 ,在 2 5℃室温条件下冷冻保存的原核胚 ,解冻后其囊胚发育率 (76 %~ 80 % )与对照组 (86 % )无显著性差异 (P>0 .0 5 )。冷冻保存的原核胚移植后的妊娠率和产仔率达 4 5 %和 4 4 % ,与新鲜原核胚移植的对照组 (5 6 %和 4 6 % )相比均无显著性差异 (P>0 .0 5 )

    2002年04期 362-364页 [查看摘要][在线阅读][下载 111k]
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  • 鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达

    刘颖,施振旦,黄运茂,于迎春,张细权,张贵学

    将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p PRL- RSET。鸡 INB- α片段经扩增后分别被克隆到质粒 p RSET A和 p PRL- RSET的 Nhe 和 Xho 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p INB- RSET和 p INB- PRL。以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的 PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒 p PRL- RSET和 p INB- PRL 转化 E.coli BL2 1(DE3)株 ,IPTG诱导后所表达的产物经 SDS- PAGE显示 ,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符。质粒 p PRL - RSET和 p INB- PRL的表达产物和用 Ni- NTA凝胶纯化的 2重组蛋白产物都可与抗鸡 PRL 抗体产生特异的免疫印迹 ,并且表达菌裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。结果说明 ,试验已成功完成了鸡 PRL、INB-α及 2者融合蛋白的构建、表达和纯化

    2002年04期 365-367页 [查看摘要][在线阅读][下载 115k]
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  • 抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响

    姜勋平,杨利国,刘桂琼,茆达干,叶荣

    用编码抑制素 α(1~ 32 )的基因与 pc DNA3.1真核表达质粒进行重组 ,构建抑制素基因疫苗 p INH。将 30只 2周龄 ICR小鼠随机分为 3组 (每组 10只 ) ,试验 、 组分别经脂质体介导肌肉注射 p INH 15μg(10 0μL )、2 5μg(10 0μL) ,对照组注射免疫空载体 pc DNA3.115 μg(10 0 μL)。首次免疫后间隔 3周加强免疫 1次。小鼠经 p INH基因免疫后 ,用 EL ISA可从血浆中检测到抑制素抗体 ,表明 p INH可在活体肌细胞内表达 ,表达产物具有抑制素抗原性 ,能激活免疫系统产生抑制素抗体。抑制素抗体 P/ N>2视为阳性 ,阳性率为 30 % (6 / 2 0 )。抑制素抗体阳性小鼠与阴性小鼠的产仔数、初生重和窝重等没有显著差异 (P>0 .0 5 )。抗体阳性组首次免疫后 ,雌鼠血浆 FSH浓度略有升高 ,经过加强免疫后显著升高 (P<0 .0 5 )。由此可以看出 ,抑制素基因免疫可以诱导产生抗抑制素抗体 ,并促进促卵泡素的分泌

    2002年04期 368-370页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k]
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  • 抑制素被动免疫对黄体中期山羊生殖激素分泌的影响

    周虚,田谷一善

    为了探讨抑制素在山羊生殖激素分泌调节中的作用 ,本试验用抗抑制素血清对黄体中期雌山羊进行了被动免疫试验。将酪 30 -抑制素 α(1,30 ) NH2 与兔血清白蛋白螯合 ,用去势雄山羊制备抗抑制素血清 (INH- AS) ,最终滴度为 1∶96 0 0 0。对照血清来自牛血清白蛋白免疫的去势雄山羊。 12只黄体期日本 SHIBA山羊 ,肌注 PGF2α(2 mg/只 )进行同期发情处理 ,处理后 3~ 5 d母羊出现发情。在发情后 10 d(发情当天为 0 d) ,将母羊分为 2组 ,每组 6只。试验组颈静脉注射 INH- AS(2 0 m L /只 ) ,并在注射前 (0 h)和注射后 6、12、2 4、4 8、72、96、12 0 h采取外周血样 (肝素抗凝 ) ;对照组注射对照血清 (2 0 m L/只 )。抗凝血样离心 (4℃、170× g、15 min)分离血清 ,- 2 0℃保存待测。血清 FSH和 L H含量用NIDDK放免试剂盒测定 ,其中 FSH标记纯品为 NIDDK- o FSH- I- 1,标准品为 NIDDK- o FSH- RO- 1,一抗为 NIDDK-抗- o FSH- 1;L H标记纯品为 NIDDK- o L H- I- 3,标准品为 NIDDK- o L H- RP- 2 4 ,一抗为抗 - o L H- YM。二抗为山羊抗家兔Ig G。血清 E2 和 P含量用1 2 5I放免盒测定。测 E2 时 ,为除去游离脂肪 ,样品用 0 .5 m L乙腈 +2 m L乙烷处理。试验结果表明 ,注射 INH- AS后 12 h,血清 FSH含量显著提高

    2002年04期 370-372页 [查看摘要][在线阅读][下载 109k]
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  • GnRH并列体二聚体主动免疫对公兔性腺的影响

    方富贵,章孝荣,张运海,袁运生,刘亚,陶勇

    用 Gn RH并列体二聚体主动免疫公兔 ,观察了免疫对公兔性腺及体重的影响。结果表明 ,免疫不影响公兔体重的增长 ,而使公兔睾丸重量降低 ,睾丸纵长缩短 ,表明性腺有萎缩的趋势

    2002年04期 373-374页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k]
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  • 生物信息数据库

    刘全

    2002年04期 374页 [查看摘要][在线阅读][下载 35k]
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  • 雄性恒河猴生殖功能的季节性变化

    王训立,周建华,范春梅

    采用随机抽样法和放射免疫测定法 ,分析了雄性恒河猴在不同季节的体重、睾丸容积、射精量、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素 (L H)和睾酮的变化情况。试验结果显示 ,雄性恒河猴的体重、睾丸容积和射精量的变化受季节因素的影响。在非生殖季节 ,雄性恒河猴的 FSH、L H和睾酮分泌水平明显偏低。在生殖季节 ,雄性恒河猴的 FSH、L H和睾酮分泌水平显著升高。揭示雄性恒河猴的生殖功能存在季节性变化

    2002年04期 375-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 82k]
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  • 日粮中锌水平对妊娠母猪繁殖性能的影响

    邹晓庭,钱利纯

    试验研究了不同日粮锌水平对母猪繁殖性能、母猪和新生仔猪血清参数等指标的影响。结果表明 ,日粮中添加5 0 mg/ kg锌足以防止母猪出现锌缺乏症。添加 75、10 0、12 5 mg/ kg锌组产活仔数可提高 0 .5、1.0 (P<0 .0 5 )、0 .87(P<0 .0 5 )头 /胎 ,平均初生重可提高 4 .73%、7.4 3% (P<0 .0 5 )和 9.4 6 % (P<0 .0 5 ) ;平均初生窝重可提高 6 .38%、18.5 8% (P<0 .0 5 )、19.2 8% (P<0 .0 5 )。适量增加妊娠母猪日粮中锌含量可提高母猪血清孕酮含量 ,提高新生仔猪血清白蛋白水平 ,降低血清中尿素氮含量 ,提高新生仔猪血清 T3、GH和 IGF- 1水平 ,增加新生仔猪血液和肝脏中锌含量

    2002年04期 378-380页 [查看摘要][在线阅读][下载 101k]
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  • 治疗性克隆在牛体上证明可行

    郭志儒

    2002年04期 380页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k]
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  • 双峰驼卵巢的组织结构

    陈秋生,刘宗平,陈北亨,赵兴绪

    应用组织学方法对双峰驼卵巢的形态结构进行了显微与亚显微观察。结果显示 ,双峰驼卵巢表面被覆单层立方至单层扁平的生殖上皮 ,无排卵窝 ,上皮下为致密结缔组织白膜 ,卵巢实质由外周的皮质和中央的髓质构成。皮质中原始卵泡和初级卵胞数量稀少 ,其分布位置更靠近皮质中层 ,偶见同一卵泡内含 2个卵母细胞。体积大小和发育阶段不同的次级卵泡与三级卵泡闭锁时 ,所发生的形态变化不一致 ,可出现实心和囊状 2种闭锁卵泡。黄体中以粒性黄体细胞占优势 ,其细胞质中含大量脂质泡而呈海绵样。卵巢髓质中除含大量血管外 ,还见卵巢网分布

    2002年04期 381-383页 [查看摘要][在线阅读][下载 151k]
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  • 性未成熟小母猪注射PMSG对卵泡闭锁及颗粒细胞凋亡的影响

    刘忠华,刘海兰,岳奎忠,马所峰,陈清轩,谭景和

    为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对 2~ 3月龄性未成熟的小母猪卵巢中卵泡发育、卵泡闭锁以及卵泡颗粒细胞凋亡的影响 ,就其注射 PMSG后 2 4、4 8、72、96 h卵巢中各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例及外周血浆中类固醇激素水平等进行了研究。结果如下 :(1)未注射 PMSG前 ,性未成熟小母猪卵巢表面卵泡总数 (10 .5个 /卵巢 )及各类卵泡数 (小卵泡 9个 /卵巢 ,中等卵泡数 1.5个 /卵巢 )均较少 ;注射 PMSG后 2 4 h,小卵泡数 (2 4个 /卵巢 )、中等卵泡数 (6 .5个 /卵巢 )和大卵泡数 (1.5个 /卵巢 )与对照组相比均明显增多 ;至注射 PMSG后 96 h,小卵泡数 (4.5个 /卵巢 )和中等卵泡数 (1.5个 /卵巢 )均明显减少 ,但大卵泡数量仍较多 (4.5个 /卵巢 )。 (2 )未注射 PMSG前 ,性未成熟小母猪各类卵泡中的颗粒细胞凋亡比例均较高 ,小卵泡和中等卵泡分别为 2 4 .8%和 34.4 % ;注射 PMSG后 2 4 h,颗粒细胞凋亡比例显著降低 (P<0 .0 5 ) ,小卵泡和中等卵泡分别为 10 .7%和 13.7% ;至注射 PMSG后 72 h,小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞凋亡比例开始显著升高 (P<0 .0 5 ) ,而大卵泡在出现后颗粒细胞凋亡比例较低且无较大波动。 (3)在未注射PMSG前 ,血清中的雌二醇含量仅为 15 .3ng/L,孕酮则由于含量太低而未能检测到 ;在注射 PM

    2002年04期 384-387页 [查看摘要][在线阅读][下载 134k]
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  • 转sMTPGH基因小鼠胚胎的体外培养

    孙燕,孙新明,侯蓉,张家骅

    采用纯化的羊金属硫蛋白 (s MT)启动子指导的猪生长激素 (PGH )基因 (s MTPGH)为显微注射片段 ,将其导入小鼠受精卵原核 ,比较了几种不同培养液对导入外源基因的小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明 ,改进的 M16培养液(用 m M16表示 )能有效克服 2 -细胞阻断现象 ,并使转基因胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段。在 m M16培养液的基础上 ,再加入表皮生长因子 (EGF) ,可使 1-细胞胚胎发育到囊胚的比率进一步提高。在 3种培养液 (M16、m M16、m M16 +EGF)中 ,转基因胚胎突破 2 -细胞阻断期的比率分别为 12 %、6 8%、90 % ,发育到囊胚期的比率分别是 0 %、2 0 %、4 3%。采用 PCR方法检测 5 7枚经体外培养发育至囊胚的显微注射胚胎 ,4枚扩增出阳性条带 ,外源基因在囊胚期胚胎的滞留率为 7%。

    2002年04期 387-389页 [查看摘要][在线阅读][下载 120k]
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  • 原核注射法转基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律

    魏庆信,樊俊华,郑新民,华文君,陈清轩,李奎,陈付学

    应用非同位素标记染色体原位杂交技术 ,对 9头不同世代的转 OMT- PGH基因猪和 6头原代转 h DAF基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律进行了研究。结果表明 ,4头原代转 OMT- PGH基因猪外源基因分别整合在第7、13、2和 8号染色体上 ,6头原代转 h DAF基因猪外源基因分别整合在第 13、6、11、2、7和 7号染色体上 ,证实了用原核注射法转基因猪外源基因的整合是“随机”的。来自同一亲本、不同世代的 5头转 OMT- PGH基因猪 ,其外源基因均存在于第 13号染色体上 ,与共同祖先原代转基因猪的整合位点相一致 ,表明转基因猪外源基因可以传递给后代 ,且整合位点的遗传是相对稳定的

    2002年04期 390-391页 [查看摘要][在线阅读][下载 60k]
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  • RYR1基因对母猪繁殖性能的影响

    刘桂琼,丁家桐,姜勋平,张牧

    用 PCR- RFL P法检测 2 2 5头大约克母猪的 RYR1(ryanodine receptor,RYR1)基因 ,它具有 NN、Nn和 nn3种基因型 ,其频率分别为 0 .76、0 .14和 0 .10 ;等位基因 N和 n的基因频率分别为 0 .83和 0 .17。该基因处于遗传不平衡状态 (P<0 .0 1)。具有 NN、Nn和 nn基因型母猪第 1胎产仔数分别为 10 .2 1、9.6 2和 8.2 2头 ;断奶仔猪数分别为9.2 1、8.13和 7.11头。等位基因 n使仔猪断奶应激效应具上升趋势 ,对增重有不利影响 ;降低母猪的产仔数和仔猪成活率 ,对繁殖性能有不良的遗传效应 ,有必要从母猪群中清除该等位基因。

    2002年04期 392-394页 [查看摘要][在线阅读][下载 95k]
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  • PGF_(2α)、eCG及hCG3种生殖激素联用对母犬发情、卵泡发育及胚胎着床的影响

    谭建华,安铁洙,刘珠果,万忠海,周虚

    给休情期性成熟母犬肌注 PGF2α(0 .5 m g/ kg) ,2 4 h后肌注 e CG(5 0 IU/ kg) ,再经 12 0 h后肌注 h CG(2 0 U/ kg) ,诱导其发情。将诱导发情的母犬与公犬交配 ,于交配后 16 d,摘取卵巢、子宫 ,观察其卵泡发育和胚胎着床情况。结果表明 ,药物处理可明显促使母犬提前结束休情期而进入发情期 (9/ 10 ) ,促进卵巢内卵泡发育 (P<0 .0 1) ,并使更多的胚胎着床 ,每只母犬子宫胚胎着床点为 (17.4± 2 .2 )个 ,提示 3种生殖激素联合应用可提高母犬繁殖率

    2002年04期 394-396页 [查看摘要][在线阅读][下载 117k]
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  • 供体PGCs在鸡-鸭嵌合体胚胎性腺外的发育

    马玉忠,李赞东,沙金,刘春海,王宁

    通过微注射法将鸡原始生殖细胞 (PGCs)注入到鸭的胚盘下腔中 ,用鸡 W染色体 DNA探针通过原位杂交的方法对供体 PGCs在嵌合体胚胎性腺外的发育作了研究。结果表明 ,所取的 4 8枚胚胎中 ,有 18.8%的脑内和 2 3.9%的神经管周围出现了阳性信号

    2002年04期 397-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 72k]
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  • GnRH类似物和孕酮对猪排卵及受胎率的影响

    黄利权,方坚勇

    取正常发情青年母猪 16头 ,其中 8头在发情开始后 2 0 h肌注 L RH - A30 .2μg/ kg,结果明显提高了母猪的排卵数和排卵率 ,分别比不作任何处理的 8头对照组母猪增加 6 .12个排卵数和 2 8.5 6个百分点的排卵率。另取 38头母猪 ,随机分成 4组 ,分别在发情配种前 6~ 8h肌注 L RH- A30 .2μg/ kg( 组 )、在发情配种后 2 d肌注孕酮 6 0 mg( 组 )或 L RH- A3与孕酮重复处理 ( 组 ) ,结果表明 ,L RH- A3可提高母猪的受胎率 ,明显提高产仔数 ,而孕酮处理组 ( 组 )与对照组 (不作任何处理 )比较无明显差异。经血清孕酮检测发现 ,L RH- A3可显著提高怀孕早期母猪的血清孕酮水平 ,怀孕后 10、2 0 d,分别比未用 L RH- A3处理的母猪平均高出 7.10 7、8.80 3μg/ L

    2002年04期 399-400页 [查看摘要][在线阅读][下载 58k]
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  • 提高水牛受胎率的综合技术措施

    许典新,韩建德,陆荣志,黄卫红

    2002年04期 401-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 利用GnRH、PGF_(2α)和PRID进行黄牛程序化人工授精

    李军锋,徐恢仲,左福元,曾子建,查辅祥,张家骅

    在一个处于自然散养状态下的本地黄牛群体中 ,比较了发情 /排卵同期化并定时人工授精组和仅同期发情处理后适时人工授精组黄牛的繁殖效果。 5 3头健康无病的本地黄牛随机分为 4组 ,试验 组 (Ov Synch法 ) ,注射 Gn RH-PGF2α- Gn RH;试验 组 ,注射 Gn RH- PGF2α- EB;试验 组 ,放置 PRID- PGF2α- EB;对照组 ,注射 PGF2α- PGF2α。其中 ,试验 、 、 组分别在处理结束后 16~ 2 0、2 4、2 4 h进行定时人工授精 ,对照组在鉴定发情后作适时输精。结果显示 :(1)各试验组同期发情率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,;(2 )试验 、 、 组所有授精牛均分别集中在处理结束后16~ 2 3、2 4~ 2 8、2 4~ 2 8h内完成人工授精 ,而对照组处理牛接受人工授精时间非常分散 ;(3)试验 、 、 组的第一情期受胎率分别为 6 0 .0 %、5 8.3%和 5 7.1% ,与对照组 (42 .9% )之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 ,试验组 3种程序处理黄牛均可以达到定时人工授精且不降低受胎率的目的。尤其是 Gn RH- PGF2α- EB程序 ,成本低、处理效果好 ,适宜在生产中推广应用

    2002年04期 402-404页 [查看摘要][在线阅读][下载 93k]
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  • 依葡柠解冻液对种公牛精子寿命及完整顶体率的影响

    李巧丽,易建明,熊家军,祁明德,程先菊

    采用复方依葡柠解冻液 (EDTA+葡萄糖 +柠檬酸钠 ,试验组 )与常用的单方柠檬酸钠解冻液 (2 .9%柠檬酸钠 ,对照组 )对肉用种公牛颗粒冻精进行解冻对照试验。结果显示 ,解冻后精子的复苏率 ,试验组与对照组相差不大 (P >0 .0 5 ) ;常温 (18~ 2 0℃ )和低温 (5~ 7℃ )下再贮存 ,精子的存活时间和生存指数 ,试验组高于对照组 ,且差异显著 (P<0 .0 5 ) ;解冻后在 (38± 2 )℃水浴中孵育 3h检查精子的完整顶体率 ,试验组极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。适用于水牛的良好解冻液依葡柠 ,用做牛 (肉用牛 )的冻精解冻得到了理想效果

    2002年04期 405-406页 [查看摘要][在线阅读][下载 55k]
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  • 科学家发现由DNA编码的第22种氨基酸

    郭志儒

    2002年04期 406页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k]
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  • 热应激对荷斯坦种公牛精液品质的影响及机理

    桑润滋,田树军,李俊杰,倪俊卿,韩建永,赵春霞,吴培,马亚宾,张军辉,胡月超,吴云海

    用 5头荷斯坦种公牛研究了热应激对其生理常值、精液品质、血清生化指标、精清生化指标的影响。结果表明 :(1)热应激可造成种公牛精液品质显著下降 ,使原精活力、冻精活力、精子密度、活精子百分数和顶体完整率分别比春季下降 3.13% (P<0 .0 1)、1.11% (P<0 .0 1)、34.8% (P<0 .0 1)、15 .0 % (P<0 .0 1)和 17.8% (P<0 .0 1) ,精子畸形率比春季上升 2 5 .5 % (P<0 .0 1)。(2 )夏季慢性热应激使荷斯坦种公牛的直肠温度和呼吸频率极显著高于春、秋、冬 3个非热应激季节 (P<0 .0 1)。 (3)夏季荷斯坦种公牛血清睾酮、T3、皮质醇和促黄体素的含量分别为 3.4 1ng/ L、1.2 9ng/L、5 .0 5 ng/ L和 4 5 .11ng/ L,与非热应激季节相比 ,均处于较低的水平。 (4)热应激可显著降低血糖和血清钠、钾、钙、镁水平 (P<0 .0 1) ,使血清 GPT、GOT处于最高水平 (P<0 .0 1)。 (5 )夏季荷斯坦种公牛精清睾酮含量仅为 4 .31ng/L,极显著低于非热应激季节 (P<0 .0 1)。 (6 )热应激造成荷斯坦种公牛精清钾、钙、镁处于最低水平 (P<0 .0 1) ,精清AL P、ACP处于最高水平 (P<0 .0 1) ,使精清钠由春季至夏季呈显著下降趋势。上述结果显示 :热应激使体内微环境发生了显著变化 ,抑制了下丘脑 -垂体 -睾丸轴的功能 ,从而影响了精子的生成?

    2002年04期 407-410页 [查看摘要][在线阅读][下载 131k]
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  • 哺乳动物性别控制研究进展

    卢克焕

    2002年04期 411-414页 [查看摘要][在线阅读][下载 131k]
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  • 猪繁殖性状QTL基因定位研究进展

    王爱华,赵志辉,李宁

    2002年04期 415-417页 [查看摘要][在线阅读][下载 106k]
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  • 哺乳动物血-睾屏障的研究进展

    康友敏,张健,李健,段相林

    2002年04期 418-420页 [查看摘要][在线阅读][下载 93k]
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  • StAR蛋白与生殖

    王鲜忠,张家骅

    2002年04期 421-424页 [查看摘要][在线阅读][下载 126k]
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