警惕西尼罗病毒

禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因的克隆及其重组禽痘病毒转移载体的构建

采用 RT- PCR技术扩增了禽流感病毒 A/ Guangdong/ 3/ 96 (H5 N1) [GD3/ 96 ]神经氨酸酶 (NA)基因 ,并将其克隆到 p UC18质粒中进行测序。核苷酸序列测定结果为 :NA基因全长为 14 10 bp,共编码 4 6 9个氨基酸。从 p UCNA中切下 NA基因片段 ,将其亚克隆到质粒 p SY5 38的 Eco R 位点 ,将带有痘苗病毒启动子 P11的 L ac Z基因平端克隆到该质粒的 Sm a 位点 ,然后切下同时含有 NA及 L ac Z基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体 p SY6 81的 Not 位点 ,经限制性内切酶分析、PCR鉴定等 ,证明含有禽流感病毒 NA基因的重组禽痘病毒转移载体已构建成功 ,从而为进一步筛选表达 NA蛋白的重组禽痘病毒及探讨该蛋白的免疫原性奠定了实验基础。

国产IBV疫苗株核衣壳蛋白基因的亲缘关系

利用自行设计的引物 Cx和 Cs,通过 RT- PCR方法分别扩增出鸡传染性支气管炎病毒 (IBV) D4 1株、H12 0 GD株、H12 0 SH株、H5 2 GD株等 4个国产疫苗株和标准强毒 M4 1- E4株完整的 N基因 c DNA,然后将其分别克隆到p GEM T- Easy或 p MD18- T载体中并测序。测序结果表明 ,这 5个 IBV毒株的 N基因均为 12 30 bp,分别编码由 4 0 9个氨基酸残基组成的多肽。同源性分析发现 ,被检的 5株 IBV毒株可分 2组 ,其中 D4 1株、H12 0 GD株和 H12 0 SH株为一组 ,它们的核苷酸和推导氨基酸序列同源性为 99.7%～ 99.8%和 99.0 %～ 99.5 % ,而 H5 2 GD株与 M4 1- E4株构成另一组 ,其核苷酸和推导氨基酸序列同源性为 99.7%和 99.5 % ;而 2组之间的最大同源性仅为 91.0 %和 93.2 %。在系统发生进化树上 ,这 2组分别位于不同的分支簇上。值得注意的是 ,国内的 H5 2 GD株与国外报道的 H5 2株不在同一分支簇上 ,相反却与国内强毒 M4 1- E4株以及国外报道的 M4 1株在同一分支簇上。这一结果表明 ,国内的 H5 2 GD疫苗株与国外报道的 H5 2疫苗株不同 ,它们在亲缘关系上更靠近 M4 1- E4株和 M4 1株。

35株不同来源的新城疫病毒(NDV)分离株F-糖蛋白基因序列测定和基因型

采用病毒分离试验、鸡胚平均死亡时间毒力试验、RT- PCR和 F-糖蛋白基因序列测定及基因分析 ,对 1996～2 0 0 0年从国内不同地区多种禽类中分离到的新城疫病毒 (NDV)分离毒株进行了研究 ,绘制了基因树。毒力试验结果表明 ,其中有 32株为强毒株 ,有 3株为中等毒力株。DNA序列分析和基因树结果表明 ,这 35株 NDV分为 4个类群 ,其中 2 7株为基因 型 (主要流行毒株 ) ,3株为基因 型 ,4株为基因 型 ,1株为基因 型。结果提示 ,我国新城疫感染来源是一个值得关注的问题。

鸡贫血病毒vp3基因克隆、序列分析和比较

克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒 (CAV)的 vp3基因 ,并对之进行了测序。该基因的开放读码框由36 6 bp组成 ,编码 12 1个氨基酸 ,氨基酸组成具有已报道 VP3的典型特点。本次克隆的基因与 Gen Bank收录的 CAV的 vp3基因进行序列比较 ,同源性至少为 98%。与国内报道的山东株 SJ1的 vp3基因有 3个核苷酸的差异 ,表明国内的 CAV毒株已经产生了一些分化。在 EMBL 中比较本次克隆的 VP3蛋白一级结构 ,与之差异最大的是马来西亚分离株的 VP3,有 5个氨基酸残基不同 ,同源性为 96 %。同时收集 EMBL 中的 CAV的 VP3蛋白绘制进化树 ,我国哈尔滨分离的 CAV毒株与 CIA进化关系最近 ,而与 Cux- 1的 2个衍生株 QDWX1、QDWX3进化关系最远。这些结果进一步证明了 CAV在遗传方面是较保守的病毒 ,来自哈尔滨的 CAV不是 CAV的一个独立分支。

鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究

以鸭肝炎病毒 (DHV)强毒株背部皮下接种 7日龄健康雏鸭 ,研究其不同时期诱导淋巴细胞及其他细胞凋亡的能力。结果表明 ,DHV能引起试验鸭淋巴细胞明显凋亡 ,维持时间较短 ,在 36 h达到高峰。揭示该病毒致病机理与淋巴细胞凋亡从而引起的免疫抑制相关。除淋巴细胞外 ,肝、肾、脑等器官的细胞凋亡不明显 ,与对照组无显著差异。

巴基斯坦消灭牛瘟——全亚洲呈无牛瘟状态

原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化

对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- PAGE分析结果表明 ,其纯度达 97%。酶联免疫试验测定的结果显示 ,与复性前变性蛋白相比 ,纯化蛋白与 CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了 2～ 16倍。

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究

鸡毒霉形体 (Mycoplasma gallisepticum ,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白 (protein of My-coplasma gallisepticum adhesin,p MGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的 p MGA基因片段 ,并估算出鸡毒霉形体 HS株基因组中 p MGA多基因族的基因数 ,本试验以 p UC1 8为载体 ,用 Eco R 限制性内切酶构建了鸡毒霉形体 HS株的基因组文库。根据 p MGA基因引导序列的保守区和 p MGA基因间隔区的序列 ,人工合成了 2个寡核苷酸探针 (探针 、探针 ) ,经标记后 ,双筛选所建的基因文库 ,从 6 0 0个转化子中共得到的 38个含有 p MGA基因的阳性克隆子 ,选其中 1个 7.5 kb的片段 (17号阳性克隆子 ,W17) ,用 4种限制性内切酶 (Eco R ,Hind ,Pst ,Bgl )酶切消化 ,绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针 和探针 杂交 ,发现 2个探针杂交图谱基本相同 ,根据杂交带及放射信号的强度值 ,估测出该片段含有 4个 p MGA基因 ,以这个片段所含的 p MGA基因数为标准 ,估算出鸡毒霉形体 HS株含有 39个 p MGA基因。

甲醛固定的绵羊痒病脑干组织悬浮液感染绵羊

用 10 %甲醛已固定 17个月的痒病绵羊脑干组织悬浮液 ,人工接种于 2只新西兰边区莱斯特育成羊 (2 #、11# )及 2只新西兰边区莱斯特和美利奴杂交 2代的育成羊 (32 86 #、315 0 # )的脑内 ,观察 2 93d。结果显示 ,11#新西兰边区莱斯特羊发病后剖杀 ,组织学检查发现其延脑内出现大的特异性空泡变性的神经元 ,证明痒病因子对甲醛有较强的抵抗力。

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗生产菌株灭活方法的优化

以灭活后中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)残存数、胞外产物溶血性及菌体抗原性为指标 ,考察不同的甲醛浓度、不同温度、不同灭活时间对中华鳖 As Z- 1株灭活的影响。结果表明 :As Z- 1株菌体和胞外产物的灭活时间与所采用的温度和甲醛浓度成反比 ;在相同的甲醛浓度和灭活温度下 ,菌体和胞外产物所需的灭活时间有很大差异 ;在使菌体灭活的各种灭活方法中 ,以 2 8℃、0 .2 %甲醛作用 2 d的菌体抗原性为最佳。

猪链球菌2型胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达

根据猪链球菌 2型 (Streptococcus suis type 2 )胞外蛋白因子 (extracellular factor protein,EF)基因序列 ,设计和合成 1对引物 ,以猪链球菌 2型江苏 98分离株 HA980 1的基因组 DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增 epf基因 12 0 7～16 75 bp序列 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体 p GEX- 6 p- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,经 IPTG诱导可表达相对分子质量约为 4 10 0 0的融合蛋白。用 EF抗血清进行的免疫印迹分析表明 ,含有 epf基因 12 0 7～ 16 75 bp序列编码的肽段的融合蛋白不能被 EF抗血清识别。

旋毛虫新生幼虫期特异性T_(314)全长cDNA的克隆及表达

利用 PCR将旋毛虫新生幼虫期特异性全长 T31 4c DNA的信号肽祛除后重组到原核表达载体 p ET- 2 8a。将重组质粒 p ET2 8- T31 4转入克隆菌 DH5α和表达菌 DE3,分别提取质粒进行酶切、测序鉴定。用 IPTG诱导培养重组表达菌DE3,做菌体裂解物外源基因表达产物的 SDS- PAGE分析。将重组质粒表达的融合蛋白免疫家兔制备抗血清 ,采用Western blot检测 T31 4c DNA在旋毛虫不同发育时期的表达情况及其天然表达产物的相对分子质量。测序结果显示 :外源 T31 4c DNA的 PCR产物在重组质粒 p ET2 8- T31 4中阅读框架正确 ;SDS- PAGE分析结果显示 :经 IPTG诱导后转化菌 DE3的裂解产物与对照菌相比出现了 1条相对分子质量约为 390 0 0的新条带 ,大小与外源 c DNA融合蛋白的理论推导值 3880 0相符 ;Western blot检测结果显示 :T31 4c DNA的天然表达产物仅存在旋毛虫新生幼虫 ,不存在于成虫与肌幼虫 ,且相对分子质量大小与其在原核重组质粒中表达产物相同。

恒河猴肾上腺皮质的显微与超微结构

应用光镜和透射电镜观察 ,恒河猴肾上腺皮质可分为球状带、束状带和网状带。其特点是 :(1)被膜较发达 ,有时可伸入球状带将其细胞分隔为团块。(2 )球状带有时呈指状伸入束状带和网状带 ,其内可见嗜铬细胞 ;球状带细胞可分为明、暗 2种类型 ,他们排列成团球状、滤泡状、索状和不规则形。 (3)网状带较发达 ,有的可分为内、外 2个区 ;有时网状带呈刺状伸入束状带 ;有时网状带细胞可见于被膜下或髓质内。(4)有时部分被膜连同皮质一起呈指状伸入髓质内。(5 )皮质细胞均含丰富的溶酶体、线粒体和内质网 ,但不同部位的细胞所含的脂滴在数量、大小、形态和电子密度等方面存在差异。

薄层扫描测定5种疯草中苦马豆素含量

称取甘肃棘豆粉 2 0 0 g,变异黄芪粉 2 0 0 g,茎直黄芪粉 171g,毛瓣棘豆粉 174 g,冰川棘豆粉 2 0 0 g,甲醇渗漉 ,回收甲醇 ,浸膏用 1m ol/ L HCl溶解 ,过阳离子交换柱 ,洗脱液 75℃水浴挥干 ,残留物先用甲醇溶解 ,回收甲醇后再用氨性氯仿溶解 ,回收氯仿 ,分别得到总生物碱 2 14、117.5、75 .4、33.1、10 .5 mg。甲醇溶解总生物碱与苦马豆素标准品 ,定量点样于硅胶板 ,显色后薄层扫描得出甘肃棘豆、变异黄芪、茎直黄芪、毛瓣棘豆和冰川棘豆中苦马豆素的含量分别为0 .10 6、0 .0 30、0 .0 5 3、0 .0 32、0 .0 2 0 mg/ g。

单次肌注亚硒酸钠在仔猪体内的药代动力学

按 0 .2 m g/ kg单剂量对健康仔猪肌注亚硒酸钠溶液后 ,研究了其在血液中的药物代谢动力学。结果表明 :血液动力学特征符合一级吸收二室开放模型 ,其理论方程为 :C=0 .1773e- 0 .0 548t+0 .0 72 7e- 0 .0 0 2 6 t- 0 .2 5 0 0 e- 1 3.882 3t。主要动力学参数为 :吸收半衰期 (t1 /2 Ka)为 0 .0 4 99h;达峰时间 (tmax)为 0 .4 2 37h;消除半衰期 (t1 /2β)为 2 71.9311h;曲线下面积 (AU C)为 31.72 6 0 m g/ L·h;表观分布容积 (Vd)为 2 .4 72 1L/ kg。根据单剂量药动学参数 ,计算多剂量给药参数 ,为临床治疗制定给药方案。先导剂量 (D* )为 0 .5 0 89m g/ kg,维持剂量 (D0 )为 0 .2 mg/ kg,给药间隔 (τ)为 192 h,平均稳态血药浓度 (c)为 0 .16 5 2 mg/ L。

奶牛临床型乳腺炎治疗药物筛选及疗效

从 2个不同地点奶牛场临床分离鉴定出奶牛临床型乳腺炎的病原菌 ,其中链球菌、葡萄球菌为主要病原菌。以试管二倍稀释法测定 14种抗菌药物对临床分离病原菌的最小抑菌浓度 (MIC) ,以恩诺沙星 (≤ 0 .0 6～ 1m g/ L )、环丙沙星 (≤ 0 .0 6～ 2 mg/ L)及阿莫西林的 MIC较低。以青霉素 +链霉素为对照 ,选择恩诺沙星、阿莫西林、克拉维酸合剂 (4∶ 1)、阿莫西林作临床疗效试验。结果证明 :0 .5 %阿莫西林 (2 0 0 mg) +克拉维酸 (5 0 mg)合剂 (4∶ 1)溶液 5 0 m L乳房灌注 ,每天 2次 ,平均疗程 3.6 d,对临床型乳腺炎有较好疗效。

高铜对生长猪生长性能、血清激素水平及酶活性的影响

军牧 1号生长猪 6 0头 ,体重 (19.2 6± 1.2 0 ) kg,随机分成 6组 ,公母各半。使用硫酸铜作为铜源 ,试验各组日粮铜添加质量浓度分别为 10 0、15 0、2 0 0、2 5 0、30 0 mg/kg,对照组不添加。试验期 10 0 d。测定生长性能及有关血液生化指标。结果 :(1)在日粮中添加不同水平的铜 (≥ 15 0 mg/kg和≤ 30 0 m g/kg) ,可明显提高平均日增重 (ADG) ,降低料重比 (F/G) ,但增重效应有明显的阶段性差异。前期 (0～ 6 0 d)效果优于后期 (6 0～ 10 0 d)。在整个试验期 ,试验组与对照组相比 ,ADG平均提高 9.9% ,增幅在 5 %～ 14 % ,其中以添加 2 0 0、2 5 0 mg/kg组最佳 ,分别达 72 0 .7g/d(P<0 .0 1)和72 5 .8g/d(P<0 .0 1) ;试验组 F/G平均降低 5 .4 % ,降幅为 3%～ 8.1% ,其中以添加 2 0 0、2 5 0 mg/kg组最低 ,分别为3.0 8(P<0 .0 1)和 3.0 6 (P<0 .0 1)。 (2 )试验组血清铜蓝蛋白 (CP)和铜锌超氧化物歧化酶 (Cu Zn- SOD)活性均有明显的增加。 (3)试验组血清生长激素、胰岛素和甲状腺素水平均有明显提高。结果表明 ,15 0～ 30 0 m g/kg铜添加量对 2 0～ 6 0 kg生长猪具有明显促生长作用 ,其中以 2 0 0、2 5 0 mg/kg铜添加量效果最佳 ;日粮铜水平对血清相关激素水平和酶活性的影响 ,随铜添加量的不同而呈现明显

多浪羊血液蛋白多态性与双羔性能的相关性初探

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对多浪羊产双羔母羊试验组及产单羔母羊对照组群体进行红细胞中血红蛋白(Hb)及乳酸脱氢酶 (L DH )多态位点的检测。结果表明 :多浪羊双羔母羊试验组与对照组控制 2种蛋白不同基因的基因频率有显著差异 ,其中含有较高频率 Hb B和 L DHA基因的多浪羊 ,有较高的产双羔性能。

胸膜肺炎放线杆菌研究进展