传染性支气管炎病毒中国和东南亚分离株的分子流行病学

对 2 4个鸡传染性支气管炎病毒中国和东南亚分离株的 S1基因 5′端 (含 HVR 和 HVR )和 N基因 3′端进行了扩增和序列分析 ,通过与公开的其他毒株序列间的比较和分析 ,对分离毒株的分子流行病学进行了研究。结果表明 ,2 4个分离毒株分属于美洲、亚洲和欧洲 3个基因群。其中一些毒株形成一相对独立的亚洲基因群 ,提示 IBV在亚洲已存在相当长时间 ;另一些毒株则可能来源于欧洲和美洲或来源于不同毒株 (包括疫苗株 )基因间的重组

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体 p ET- 2 8a构建重组质粒 p ETIL 18m,转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,并用 IPTG诱导。重组菌菌体裂解物 SDS- PAGE可检测到相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白 ,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与人 IL- 18单抗发生特异性免疫反应

猪细小病毒NS_1基因的克隆及表达

根据 Bergeron等报道的猪细小病毒基因组序列设计引物 ,在下游引物中引入 Bgl 酶切位点以便于构建表达载体。利用 PCR技术扩增得到 NS1 全基因 ,将其克隆到 p MD18- T载体中进行序列测定并分析 ,进而构建重组转移载体p Fast- NS1 ,在 DH1 0 Bac大肠杆菌中与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病毒 (Ac NPV )基因组 (Bacmid)发生同源重组 ,获得重组穿梭载体 Bacmid- NS1 ,经脂质体介导转染 Sf9细胞后 ,得到重组杆状病毒 (Ac NPV- NS1 )。SDS- PAGE、Western-blotting分析可见大小约为 84 0 0 0的特异性带 ,表明 NS1 蛋白在杆状病毒 Bac- To- Bac表达系统中成功地实现了表达 ,从而为研究其结构与功能创造了条件。

上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染

上海地区 6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征 ,剖检的 18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) N蛋白和 2型猪圆环病毒 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )部分基因的特异性 PCR引物 ,通过 RT- PCR和 PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出 PRRSV和 PCV- 2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查 ,证实上海地区出现PRRSV和 PCV- 2的混合感染

中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定

应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1株 ,在 1.0 m mol/ L IPTG和 37℃的条件下诱导 ,VP6 0 - GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western- blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的 870 0 0相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠 ,所得抗血清应用间接 EL ISA检测 ,与 RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明 ,大肠杆菌中表达的 RHDV VP6 0融合蛋白在抗原性上与天然衣壳蛋白具有一定的相似性

T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达

从 BL 2 1(DE3) E.coli菌株中以 PCR的方法扩增得到了与 T7RNA多聚酶 (T7RNA polymerase,T7pol)基因大小一致的 DNA片断。将 PCR产物纯化后直接克隆到 p GEM- T载体中 ,经酶切鉴定和 DNA序列分析表明克隆得到了正确的 T7pol基因。将 T7pol基因亚克隆入 p ET- 2 8b(+)中 ,构建得到原核表达质粒 p ET2 8T7。该质粒的 BL 2 1(DE3) p L ys S转化菌在 IPTG的诱导下可表达约 9880 0的蛋白 ,这与 T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5 α、JM10 9、HB10 1、BL2 1(DE3)和 BL2 1(DE3) p L ys S等 5种不同的宿主菌 ,仅有转化 T7pol酶活性受到抑制的宿主菌 BL2 1(DE3) p L ys S才能得到转化子 ,而其余 4种 T7T7pol酶活性不受抑制的 E.coli宿主菌不能得到转化子。p ET2 8T7原核表达质粒这种仅能在 T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的 T7pol基因能正确表达出具有 RNA转录酶活性的蛋白

实验性鸡葡萄球菌性关节炎的发病机制——血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和类风湿因子的动态变化

8周龄健康肉鸡 6 0只随机分成 2组 ;其中试验组 4 5只 ,对照组 15只。试验组每只鸡经关节腔注射鸡源致病性金黄色葡萄球菌 2 .5× 10 9CFU,复制鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型 ,研究血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 6 (IL- 6 )、类风湿因子 (RF)的动态变化。结果表明 :接种后鸡血清中 RF水平自第 1天开始明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,第 2 8天达到峰值 5 .5。血清中 TNF-α的含量与对照组相比 ,在接种后第 3、5天差异显著 (P<0 .0 5 ) ,第 14天差异极显著 (P<0 .0 1) ;血清中 IL- 6的含量在第 2周上升的幅度最大 ,随后持续至少 3周 ,第 14天开始该因子水平显著高于对照组 (P<0 .0 1)。 3种细胞因子的含量均与关节炎的发展程度成正相关。

聚合酶链反应(PCR)法检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因

根据已报道的鱼源嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列设计和合成了 1对可扩增目的片段长度为 893bp的引物 ,建立了检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因 PCR方法。脱脂奶平板产溶蛋白圈的 10株鱼源嗜水气单胞菌株以及 ATCC796 6检测均为阳性 ,检测的灵敏度可达 2 .0× 10 - 3g/ L的模板 DNA。表明 PCR法在分子水平快速、特异检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶并可作为流行病学调查的手段

炭疽杆菌基因组解码

柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡LPO含量和抗自由基酶活性的动力学

通过测定柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)感染鸡的盲肠、肝脏、脾脏和法氏囊组织中脂质过氧化物 (L PO)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GXH- Px)及过氧化氢酶 (CAT)活性 ,研究雏鸡感染球虫后机体内自由基生成和抗自由基反应。结果表明 ,雏鸡感染 E.tenella后 ,盲肠、肝脏和脾脏组织中的 L PO含量在感染后显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1)升高 ,T- SOD、Mn- SOD、Cu、Zn- SOD、GSH- Px和 CAT活性水平不同程度下降。试验结果说明在 E.tenella感染后 ,鸡体内的氧自由基生成反应加剧 ,氧自由基参与了球虫的致病过程。

禽类中脑脊髓束的细胞构筑——HRP和SABC法研究

采用 HRP和免疫组织化学 SABC结合法 ,在脊髓的颈中部、颈膨大部和腰膨大部单侧引入 HRP,逆行追踪了北京鸭、麻鸭、鸽子和鹌鹑 ,对中脑至脊髓传导通路的起始部位和细胞构筑进行了研究。脑干冰冻切片 ,DAB显色。结果发现大量标记细胞分布在中脑对侧的红核、双侧的 Cajal中介核、中央灰质和 EW核内。此外 ,还发现一些标记细胞分布在中脑中缝核和双侧的中脑网状结构。而在顶盖内 ,没有任何部位出现标记细胞。结果表明 :禽类除具有红核脊髓束外 ,还存在着 Cajal中介核至脊髓的直接传导通路 ,EW核至脊髓的直接传导通路以及中缝核和网状结构至脊髓的直接传导通路 ,而不存在与哺乳类相似的顶盖脊髓通路。 SABC法研究结果表明 :中脑的红核脊髓束和中缝核脊髓束的起始神经元是 5 -羟色胺 (5 - HT)能神经元。部分网状脊髓束的起始神经元也是 5 - HT能神经元。

人参皂甙Rb1的免疫佐剂作用

分别将人参皂甙 Rb1(人参主要成分之一 )以及氢氧化铝胶作为佐剂和金黄色葡萄球菌菌体抗原混合免疫豚鼠 ,观察免疫前后血清抗体滴度变化 ;并用 Rb1和奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗混合免疫奶牛 ,观察免疫前后血清抗体滴度变化 ,以及血液淋巴细胞在刀豆蛋白 A(Con A)、美洲商陆 (PWM)和金黄色葡萄球菌抗原刺激下的体外细胞增殖反应。结果表明 ,Rb1和抗原混合物免疫动物后 ,未见任何不良反应 ;Rb1组豚鼠血清抗体滴度比对照组和氢氧化铝胶佐剂组滴度增加快 ,幅度显著增高 ;Rb1组奶牛血清抗体滴度比对照组奶牛显著增加 ,Con A、PWM和金黄色葡萄球菌抗原诱导的血液淋巴细胞体外细胞增殖反应比对照组显著提高。因此 ,Rb1是一种有效的免疫佐剂

意大利出现首例人变异型克雅氏症死亡病例

世界首匹体细胞克隆马诞生

铁和维生素A互作效应对肉仔鸡体内相关血液理化指标的影响

选用 1日龄艾维因肉仔鸡 5 0 4只 ,随机分为 9组 ,每组 4个重复 ,每个重复 14只鸡 (公母比为 1∶ 1) ,采用 3× 3(Fe× VA)完全随机试验设计 ,研究了日粮中不同添加水平的 Fe(0、30、6 0 mg/ kg)和 VA(75 0、15 0 0、2 70 0 IU/ kg)对不同生长阶段 (0～ 4周和 5～ 7周 )肉仔鸡体内相关血液理化指标 :血红蛋白 (Hb)含量、红细胞计数 (RCC)、红细胞压积 (PCV)、血沉 (ESR)的影响。结果表明 :1日粮铁添加水平对 0～ 4周肉仔鸡血液的 Hb含量 ,RCC,PCV和 ESR值影响均显著 (P<0 .0 5 ) ,5～ 7周时仅对 RCC值影响显著 (P<0 .0 5 )。 2日粮 VA添加水平对前后期 Hb含量影响均不显著 (P>0 .0 5 ) ,对前后期 RCC值影响均显著 (P<0 .0 1) ,对后期 PCV值影响显著 (P<0 .0 5 ) ,对前期 ESR值影响显著(P<0 .0 5 ) ,VA显著影响肉仔鸡体内铁状况血液指标。3交互作用对前后期 Hb含量、前期 RCC、后期 PCV、前期 ESR值影响均显著 (P<0 .0 5 )。 Fe(0 m g/ kg)× VA(70 5 IU/ kg)组前后期产生的 Hb含量和前期 RCC均低于正常范围 ,机体处于贫血状态。 4 Fe和 VA互作有助于改善血液 Hb含量和 RCC值

环氧合酶-1和环氧合酶-2在兔早期妊娠子宫内膜及早期胚胎中的表达

环氧合酶 (cyclooxygenase,Cox)是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶 ,而前列腺素在哺乳动物的生殖过程中起着很重要的作用。本试验采用 RT- PCR方法对环氧合酶 - 1(Cox- 1)及环氧合酶 - 2 (Cox- 2 )在早期妊娠兔子宫内膜中的表达进行了半定量研究和在早期胚胎中的表达定性研究。结果表明 ,Cox- 1在早期妊娠兔子宫内膜中表达较平稳 ,呈组成型表达 ;在早期胚胎中各个时期均可以检测到 Cox- 1m RNA,表明它在早期胚胎发育过程中起作用。 Cox- 2在早期妊娠子宫内膜中的表达水平有很大差异 ,妊娠第 1天表达水平较高 ,从第 2天开始表达下降 ,到第 6天表达又明显增加 ,第 8天达到最高。 Cox- 2在囊胚之前的各个时期胚胎均未检测到 ,而在扩展胚泡和孵出胚泡中表达 ,Cox- 2的时期特异性表达可能与兔胚泡孵出及胚胎着床等过程相关。

转基因动物已占英国所用实验动物的1/4

有机磷类神经毒剂及其抗毒剂