马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因的克隆和表达

用马立克氏病病毒 ( MDV)感染鸡胚成纤维细胞 ( CEF) ,提取总 RNA,经 RT- PCR扩增出由 MDV编码的病毒类白细胞介素 - 8( v IL- 8)基因 ,,并将其克隆进 p GEM- T easy载体中 ,测序进行分析。将 v IL- 8基因片段插入表达性载体 p GEX- 5 x- 3中 ,转化大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导 ,结果获得了重组 v IL - 8- GST融合蛋白的表达。表达产物活性分析表明 ,v IL- 8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性。提示 ,MDV在致瘤过程中 ,v IL- 8能吸引易感细胞促进病毒感染 ,并可能参与肿瘤的扩散和发展。

日本、意大利发现新型疯牛病病例

猪红细胞CD58分子协同NDⅣ疫苗免疫的佐剂效应

用从木瓜酶修饰的猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 8日龄雏鸡 (分为试验 A组、对照 B组 ) ;用从正常猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 18日龄雏鸡 (分为试验 C组、对照 D组 ) ,以β-微量法测定ND抗体效价 ,以 α-醋酸萘酯酶染色法检测鸡外周血 T细胞的变化 ,并分别用 NDV F4 8E9强毒株在免疫后 2 4 d攻击 A组和 B组鸡、39d攻击 C组和 D组鸡。结果表明 ,免疫前 ,8日龄雏鸡的 ND抗体效价为 2 5.8,18日龄雏鸡的 ND抗体均为阴性 ;免疫后 ,与对照 D组比较 ,试验 C组的 ND抗体提前 4 d达到 2 4 .8,并且试验 C组 ND抗体效价显著高于对照 D组 ( P<0 .0 1) ,保护期延长 ;试验 A组雏鸡体内 ND抗体变化和对照 B组相似 ,但试验 A组雏鸡外周血 T细胞数量显著高于对照 B组 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 ,试验 A组鸡死亡率为 33% ,对照 B组鸡死亡率为6 3% ;试验 C组鸡死亡率为 17% ,对照 D组鸡死亡率为 5 3%。本研究结果表明 ,猪红细胞 CD5 8分子具有较好的疫苗佐剂效应

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 CSFV反转录后的 c DNA模板进行多重 PCR扩增和多重 PCR反应条件的优化 ,结果同时得到 3条与试验设计相符的 2 88bp( CSFV)、5 75 bp( PPV)和 70 0 bp( PRV)特异性条带 ;敏感性检测结果表明 ,该多重 PCR可以检测到 14 .5 ng/ L 的 CSFV、2 7.1pg/ L 的 PPV、31.4 ng/ L 的 PRV的核酸模板

~(60)Coγ射线对高免卵黄液中AE病毒的灭活

用不同剂量、剂量率的 6 0 Coγ射线 ,对人工污染一定量的禽传染性脑脊髓炎病毒 ( AEV)的高免卵黄液进行辐照 ,研究了其对病毒的灭活效果和对卵黄抗体的影响。结果表明 ,6 0 Coγ射线辐照 ,可以灭活高免卵黄液中的 AEV,且随辐照剂量、剂量率的增大 ,灭活率也增高 ;AEV在卵黄液中的 D1 0 值为 6 .6 1～ 7.0 6 k Gy;9.2 k Gy以上的辐照剂量 ,可以将高免卵黄液中的 AEV完全灭活 ,且不影响抗体效价

鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析

通过 RT- PCR和 DNA测序技术 ,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素 2 ( IL- 2 )基因的核苷酸序列 ,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示 ,绍兴麻鸭的类似于鸡 IL - 2基因的核苷酸长度由 74 8个碱基组成 ,编码产物为由 14 0个氨基酸残基组成的多肽 ,编码产物中含有 2 1个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因的核苷酸及编码产物 ,与鸡和火鸡 IL- 2的一致性分别为 71.4 %～ 72 .1%和 5 5 .0 %～ 5 7.9% ,与哺乳类等动物 IL- 2的一致性分别为 2 2 .1%～ 2 8.8%和 14 .3%～ 17.1%。对绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明 ,其编码产物与鸡和火鸡 IL- 2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因编码产物的三维结构 ,预测由 4个α-螺旋结构和 2个β折叠组成。这些研究结果预示 ,鸭的类似于鸡 IL - 2基因编码产物 ,在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。

胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ C突变株转移载体pSKPG的构建

通过 PCR方法克隆了胸膜肺炎放线杆菌 ( Actinobacillus pleuropneum oniae)武汉株完整的 apx C基因和部分apx A基因约 3.4 kb。将该 DNA片段克隆到载体 p Bluescript SK( + )中得到质粒 p SKPP,并进一步将 gfp基因插入到 apx C基因的 Xba1 位点处 ,构建了 apx C基因插入失活的转移载体 p SKPG,从而为构建胸膜肺炎放线杆菌apx C菌株打下了坚实的基础

表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌感染动力学

用表达绿色荧光蛋白 ( green fluorescentprotein,GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 X4 5 5 0 ( p YAGFP)给 BAL B/c小鼠尾静脉注射和口服 ,对小鼠脏器进行细菌计数 ,并用间接 EL ISA法测定血清中抗细菌的抗体。结果表明 ,静脉注射重组菌的小鼠在肝脏、脾脏中重组菌数量有 2个峰值 ,总的趋势是越来越少 ,而血清中抗体效价越来越高 ,可以初步推断 ,肝脏、脾脏中的细菌数量与血清中的抗体水平呈一定的相关性 ;口服重组菌的小鼠 ,在各脏器中重组菌的数量呈现正态分布的变化趋势 ,其中派伊尔结 ( Peyer′s patches,PPs)中细菌数量与血清中的抗体水平呈一定的相关性 ,而脾脏、肝脏及肠系膜淋巴结中细菌数量与血清中的抗体滴度无关。

我国科学家参考黑猩猩基因发现人类某些特有疾病源自基因变异

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建与筛选

在体外将猪带绦虫虫卵孵化为有活力的六钩蚴。采用商品化试剂盒抽提六钩蚴总 RNA、m RNA,反转录为双链c DNA,再加 Eco R Adapter。在去除小片段后 ,dsc DNA与 λgt11噬菌体 DNA连接 ,经蛋白包装 ,构建了猪带绦虫六钩蚴λgt11c DNA文库。该文库效价为 3.5× 10 9pfu/ m L ,重组 DNA片段大小为 0 .5～ 3.2 kb,平均为 1.6 kb,蓝白斑比 1∶ 9。用抗体探针对文库进行免疫学筛选 ,在消除非特异性反应的基础上筛选约 10 6 重组子 ,共得到 118株强阳性克隆 ;应用 PCR鉴定上述部分阳性克隆 ,均扩增到 0 .5 kb以上的片段。结果显示 ,构建的文库合格 ,含六钩蚴所有抗原基因 ,可用于六钩蚴 c DNA克隆的筛选 ;用免疫学与 PCR联合筛选 c DNA文库 ,可消除假阳性

欧盟口蹄疫政策发生重大改变

山羊β-酪蛋白启动子指导的通用表达载体及乳腺暂时表达系统

为了实现外源蛋白在动物乳腺中的特异性高效表达 ,利用山羊 β-酪蛋白 5′端 1.132 kb的侧翼调控序列、牛生长激素基因 poly A ( BGHPA)序列、基质结合区 ( matrix attachment region,MAR)和多克隆位点 ( MCS) ,构建了乳腺组织定位通用表达载体 p MRPA,鉴定正确后 ,将 2 .1kb的人组织型纤溶酶原激活剂 ( tissue- type plasm inogen activator,t PA) c DNA克隆到 p MRPA多克隆位点 ,获得重组表达载体 p MRPA- t PA。在不同的泌乳时间 ,使用不同的包裹剂 ,采用不同的剂量 ,将 p MRPA- t PA注入泌乳期山羊乳腺组织进行暂时表达。结果显示 ,所构建的乳腺组织特异性通用表达载体能够有效地指导目的基因的高效表达。通过乳腺暂时表达试验进一步发现 ,泌乳稳定期表达效果最好 ,t PA表达水平在 2 .0 2 0～ 6 .95 9mg/ L ;表达量随 DNA用量的增加而提高 ;使用普通包裹剂和裸质粒相比 ,普通包裹剂对表达效果无明显影响。本试验对乳腺暂时表达系统进行了系统性研究 ,为通过乳腺暂时表达系统改良乳汁蛋白组成提供了重要依据

捻转血矛线虫中肠超微结构

捻转血矛线虫中肠由单层上皮细胞所组成 ,未见明确的细胞界限 ,并向肠腔内伸出相互平行、排列整齐的微绒毛 ,长约 6 .5μm,微绒毛中心由纵贯微绒毛并相互平行的微丝构成 ;细胞核位于细胞中部 ,核膜清楚 ,体形大 ,形状不规则 ,有一较大的核仁 ,异染色质凝集成块状 ,电子致密度甚高 ,分散于核质中 ;上皮细胞中部细胞器丰富 ,有粗面内质网、线粒体、高尔基体及溶酶体 ;基部为胶原纤维样 ,并含有丰富的内质网。

封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的测定及部分器官的组织学观察

利用雅培 ( AEROSET)全自动血液生化测定仪对封闭群草原兔尾鼠 2 3项血液正常生化指标进行了测定 ,并与昆明小鼠、人的正常值进行了比较 ,同时探讨了年龄、性别因素对封闭群草原兔尾鼠血液正常生化指标的影响。另外 ,对封闭群草原兔尾鼠的心脏、肝脏、肾脏、肺、脾脏进行了组织学观察。结果如下 :( 1)该种新开发的实验动物血液正常生化指标与昆明小鼠、人的正常值相比较具有以下特点 :1总蛋白 ( TPROT)、白蛋白 ( AL B)、球蛋白 ( GL OB)、总胆红素 ( TBIL I)、直接胆红素 ( DBIL I)、间接胆红素 ( IBIL I)、尿素氮 ( UREA)、二氧化碳 ( CO2 )、甘油三脂 ( TG)、胆固醇( CHOL )、钠 ( Na)、氯 ( Cl)、镁 ( Mg)、总钙 ( TCA)的测定值 ,三者间无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。 2封闭群草原兔尾鼠与昆明小鼠相比 ,谷草转氨酶 ( AST)、谷丙转氨酶 ( AL T)、糖 ( GL U)、钾 ( K)、磷 ( P3+)存在显著性差异 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 3封闭群草原兔尾鼠与人相比 ,谷草转氨酶 ( AST)、谷丙转氨酶 ( AL T)、碱性磷酸酶 ( AL P)、乳酸脱氢酶( L DH)、肌酐 ( CREAT)、尿酸 ( UA)、钾 ( K)存在显著性差异 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 ( 2 ) 2个年龄组各指标间以及 2个性别组各指标间均无统计学差异。 ( 3)封闭群草原兔?

绵羊大肠阻塞病理模型血浆及组织中内皮素-1含量的变化

选择绵羊建立反刍动物大肠阻塞病理模型 ,对手术前、后静脉血浆及死亡后心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏和肠组织中内皮素 - 1( Endothelin- 1,ET- 1)含量进行测定 ,探讨了该模型血浆及组织中 ET- 1含量的变化和临床意义。结果表明 :模型组和对照组手术前血浆 ET- 1含量分别为 ( 5 7.81± 2 .95 ) ng/L 和 ( 6 2 .72± 3.17) ng/L,手术后含量分别为 ( 4 1.87± 8.0 6 ) ng/L 和 ( 6 0 .74± 4 .6 8) ng/L,模型组术后 ET- 1含量明显下降 ( P<0 .0 5 ) ;每 30 min间隔采血 ,模型组术前、术后第 2天和第 4天 ET- 1含量依次降低 ,差异极显著 ( P<0 .0 1) ;模型组心、肺、肾组织中的 ET- 1含量分别为 ( 2 73.2 8± 5 3.7)、( 2 70 .6 5± 98.6 )、( 2 4 9.32± 2 0 .8) ng/L,分别比对照组心脏 ( 10 5 .73± 32 .2 ) ng/L、肺脏 ( 34.34± 6 .73) ng/L、肾脏 ( 5 0 .4 3± 12 .89) ng/L明显升高 ( P<0 .0 1)。这些变化可能与肠阻塞的发生、发展有密切关系。

10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响

将鸡胚成纤维细胞 ( CEF)分别与当归多糖 ( CAPS)、黄芪多糖 ( APS)、板蓝根多糖 ( IRPS)、淫羊藿多糖 ( EPS)、蜂胶多糖 ( PPS)、淫羊藿黄酮 ( EF)、蜂胶黄酮 ( PF)、黄芪黄酮 ( AF)、黄芪皂甙 ( AS)和人参皂甙 ( GS)等 10种中药成分一起加入到 96孔细胞培养板中培养 ,分别在培养 2 4、36、4 8、6 0、72 h时用 MTT法测定中药成分对 CEF增殖的影响。结果表明 ,所有中药成分均能显著促进 CEF增殖 ,并有一定的量效和时效关系

冷休克蛋白表达的分子机制

依普拉芬(Ipriflavone)对产蛋后期笼养蛋鸡生产性能和骨代谢的影响

5 8周龄 ISA蛋鸡 5 0 0只 ,随机分为 5组 :A组为对照组 ,B、C、D、E组分别在基础日粮中添加依普拉芬 ( Ipri-flavone,7-异丙氧基异黄酮 ) 15、2 5、5 0、10 0 m g/ kg。试验期 70 d。每月采血样测定血钙、血磷、骨钙素、碱性磷酸酶、雌激素 ,记录体重 ,测骨矿含量 ;每天记录产蛋量、蛋重、破壳蛋数。结果表明 :C组产蛋率显著高于对照组 ( P<0 .0 5 )和 B组 ,极显著高于 D、E组 ( P<0 .0 1) ;C组蛋重、破壳率优于其他各组 ;各组体重无显著差异 ;C组血磷显著低于其他各组 ,B组血钙显著低于其他各组 ,C组碱性磷酸酶、骨钙素均显著高于其他各组 ( P<0 .0 5 ) ;试验各组雌激素水平上升 ,但各组间无差异。结论 :日粮中添加适量依普拉芬 ( 2 5 mg/ kg)能改善蛋鸡的骨代谢 ,提高其生产性能和产蛋率

饲粮锌、硒和维生素E水平对经产母猪繁殖性能及相关参数的影响

选择年龄、体重、胎次、繁殖性能较一致的二元杂经产母猪 (长白×约克 ) 2 7头 ,采用 L9( 34 )正交表安排试验 ,共 9个试验组 ,每组 3个重复。饲粮锌、硒和维生素 E均设置 3个水平 :锌 4 5、85、12 5 m g/ kg;硒 0 .10、0 .2 5、0 .4 0 mg/ kg;维生素 E15、30、4 5 IU/ kg。研究了饲粮微量养分锌、硒和维生素 E对经产母猪相关参数的影响规律。结果表明 :( 1)饲粮中含锌量 85 mg/ kg、含硒量 0 .4 0 m g/ kg、含维生素 E量 4 5 IU / kg时 ,可以获得最多的窝产仔数 ( P<0 .10 ) ,分别为( 10 .3± 1.0 )头、( 10 .2± 1.2 )头、( 10 .3± 1.0 )头 ;母猪断奶返情时间间隔也最短 ( P<0 .0 5 )。 ( 2 )经产妊娠母猪血清雌激素浓度在妊娠期保持相对高水平 ;孕激素妊娠前期保持相对高水平 ,后期则保持相对低水平 ,是发挥母猪繁殖潜力的保证。 ( 3)经产母猪喂给含锌量 85 mg/ kg、含硒量 0 .4 0 mg/ kg、含维生素 E量 4 5 IU/ kg的饲粮时 ,血清总蛋白含量最高 ( P<0 .10 ) ,血清尿素浓度最低 ( P<0 .10 ) ,提示有更多的蛋白质在母体和胎儿累积。 ( 4 )血清 GSH- Px活力妊娠后期比妊娠前期低 ,提示妊娠后期比妊娠前期母体和胎儿代谢过程产生的过氧化物更多。综合所考察的参数显示 ,经产母猪饲粮中含锌 85 mg/ kg、

肾上腺素能α_2受体对二花脸猪生长激素分泌的作用

给 6头去势二花脸公猪一次注射肾上腺素能α2 受体激动剂可乐宁 ( Clonidine,6μg/ kg)后 ,GH总体水平、基础水平、峰强度明显升高 ,分别增加 10 4 .10 % ( P<0 .0 1)、113.4 0 % ( P<0 .0 1)和 5 4 .5 0 % ( P<0 .0 1) ,并保持脉冲式分泌 ,但峰值出现在注射后 6 0 min左右 ,明显提前。饲喂半胱胺 ( CS)后第 4天静脉注射 Clonidine,则 GH分泌比对照组显著提高 ,但与单独注射 Clonidine和单独口服 CS相比较未见有显著差异 ( P>0 .0 5 )。结果表明 ,α2 受体激动剂 Cloni-dine可促进 GH分泌 ,且峰值出现时间明显提前

《中国兽医学报》2003年第23卷总目次