更快、更准确的疯牛病检测方法出台

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能

通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光 ,证实了该启动子的单向启动活性

从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒

将表现为典型 J亚群禽白血病肿瘤的病料分别接种于鸡胚成纤维细胞和 DF1细胞 ,采用间接荧光抗体试验(IFA)和 PCR方法 ,从这些肿瘤病料中分离和鉴定出 8株 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)。对证明感染了 AL V- J的细胞继续培养 ,并用禽网状内皮组织增生症病毒 (REV)的特异性单抗及引物做 IFA和 PCR,在 8株 AL V- J中 ,有 3株AL V- J的感染细胞中同时有 REV感染。由此表明 ,发生肿瘤的肉鸡中 ,AL V- J和 REV的共感染已相当普遍。将这 3株 REV- SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和 SD0 10 2的 3′- L TR用 PCR扩增、克隆和序列比较 ,发现分离的 SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和SD0 10 2与国内的另外 2株 REV- SD990 1和 HA990 1的同源性为 96 .7%和 96 .1% ;而与另 1株 REV参考株鸭脾坏死性病毒 (SNV)的同源性高达 99%。

规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查

为了调查猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型 ,从湖北、河南、江西、安徽、浙江等省的 33个猪场采集 32 1份仔猪黄、白痢病料进行细菌的分离和生化鉴定 ,结果分离到大肠杆菌 30 2株 ,其中致病性大肠杆菌 2 76株。对 112株致病性大肠杆菌进行了 15种抗生素敏感性试验 ,发现分离菌株对 15种药物均有不同程度的耐药性 :青霉素 G对其完全没有抑制作用 ;先锋霉素 抑制作用最强 (97.3% ) ,其次为呋喃妥因 (78.6 % )、痢特灵 (71.4 % )、环丙沙星(6 8.8% )、诺氟沙星 (6 5 .1% )。 112株菌中 ,有 4 7种耐药谱型 ,多数为 6耐以上的菌株 (80株 ) ,占供试菌株的 71.4 %。应用微量平板凝集试验 ,对分离的 2 76株致病菌进行了血清型鉴定 ,鉴定共有 72种血清型 ,其中优势血清型 10种 ,占能定型分离致病菌株的 5 3.7%。

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与高效表达

根据 Gen Bank中致病性嗜水气单胞菌气溶素 (Aer)基因的序列设计引物 ,以国内嗜水气单胞菌分离株为模板 ,扩增出 Aer基因的全长序列。经 T载体克隆和序列测定 ,证实克隆了国内分离株的不含信号肽的 Aer全长基因。将该基因以正确的读码框架与表达载体 p ET2 8b连接 ,经 IPTG诱导、SDS- PAGE检测 ,外源基因获得高效表达。诱导 4 h的培养物中 ,融合蛋白的表达占菌体总蛋白含量的 4 8.5 7%。 Western-印迹结果显示 ,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地识别嗜水气单胞菌产生的天然毒素 ,而且天然毒素制备的抗体也能识别纯化的重组毒素

堆型艾美耳球虫(E.acervulina)单克隆抗体细胞株的建立

利用细胞融合技术 ,将堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina)的子孢子可溶性抗原免疫的小鼠脾细胞和 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,通过间接 EL ISA方法筛选 ,得到能稳定分泌针对堆型艾美耳球虫子孢子的特异性抗体细胞株 5 B4和5 G7。用间接 EL ISA方法对这 2株细胞的腹水效价进行测定 ,结果 5 G7细胞株的腹水效价为 1∶ 2 6 2 14 4 ,5 B4细胞株的腹水效价为 1∶ 1310 72。腹水经正辛酸 -硫酸铵二步法纯化 ,SDS- PAGE结果表明 ,此方法对 5 G7细胞株纯化效果较好 ,但对 5 B4细胞株纯化效果不理想

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达

从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9～ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组 FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫的鉴别诊断方法提供了依据

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

将 RVG基因插入到鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2 Sm a 位点获得重组转移载体 p U TA- RVG,利用脂质体转染已感染中国鸡痘病毒疫苗株 2 82 E4株 2～ 3h的鸡胚成纤维 (CEF)细胞 ,收获病毒后 ,用 Brd U法进行加压筛选重组病毒 ,PCR检测到重组病毒 RVG基因 ,Western blot检测出 RVG,从而证实已成功构建了表达 RVG的重组鸡痘病毒

日本血吸虫中国大陆株Sj23抗原基因在家蚕细胞中的表达及鉴定

将日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白 (Sj2 3抗原 )基因从原核表达载体 p ET2 8(c)中亚克隆入转移载体 p Bac PAK- His1,构建了 p Bac PAK- his1- Sj2 3转移载体 ,并与线性化家蚕杆状病毒共转染家蚕细胞 ;经 PCR鉴定得到重组病毒 ,经过蓝、白斑筛选得到纯化的重组病毒 ;SDS- PAGE显示日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白基因在家蚕细胞中实现表达 ,蛋白的相对分子质量为 2 6 0 0 0 ;重组 Sj2 3经 Western- Blot鉴定能够识别血吸虫感染多克隆兔血清

鳖消化道组织结构观察

应用 HE染色、碱性磷酸酶反应 (AKP)、PAS反应和甲基绿 -派若宁染色 ,对鳖消化道各段的组织结构进行了系统的研究。结果表明 ,鳖食管粘膜上皮内有毛细血管分布 ,粘膜下层和固有层内无腺体分布 ,但高柱状粘膜上皮细胞为粘液性细胞。胃粘膜表面无明显的贲门区、胃底区和幽门区之分 ,胃腺细胞呈嗜伊红着色 ,还未分化为主细胞和壁细胞。小肠占肠道总长的 6 / 7,但从前向后结构基本相似 ,很难区分出十二指肠、空肠和回肠 3段 ;小肠绒毛发达 ,但缺乏中央乳糜管 ,也没有小肠腺 ,肠腔内侧有一贯穿全长的皱襞。大肠皱襞和绒毛稀疏短小 ,未见大肠腺。鳖消化道的基本形态构造、各种细胞的分布与哺乳动物和鸟类有较大的不同 ,与其他水生动物也存在一定差异

重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响

选用体质量 5 0 kg左右的去势长白×大约克公猪 16头 ,随机分为试验组和对照组 ,试验组猪每日肌肉注射重组猪生长激素 (rp GH) 4 m g/头 ,2 8d后屠宰采集背部皮下脂肪 ,用 RT- PCR方法 ,以 18S r RNA作内标 ,定量分析脂肪组织中生长激素受体 (GH- R)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)、胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)和瘦蛋白(L eptin)的 m RNA丰度。结果显示 ,试验猪脂肪细胞 GH- R m RNA丰度比对照猪增加了 5 0 .9% (P<0 .0 5 ) ,IGF- 1m RNA丰度增加 2 7.8% (P<0 .0 5 ) ,IGF- R m RNA丰度增加 4 8.1% (P<0 .0 1) ,而 L eptin m RNA丰度则比对照猪减少 2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结果提示 ,生长激素不仅可以直接调节脂肪组织 ,还可能通过脂肪 GH- R介导产生 IGF- 以旁 (自 )分泌形式调节脂肪组织的代谢

黑猩猩基因组序列草图完成

锌对雏鸭外周血T-淋巴细胞的影响(英文)

15 0只 1日龄天府肉鸭健雏随机分为 3组 ,分别喂给缺锌 (每千克日粮含 Zn 2 2 .9mg)、对照 (每千克日粮含 Zn10 0 mg)和锌中毒 (每 kg日粮含 Zn130 0 mg)日粮 7周或 4周 ,以酸性 - α-醋酸萘酯酶 (ANAE)染色法观测外周血 T-淋巴细胞的动态变化。结果锌缺乏组和锌中毒组雏鸭外周血 T-淋巴细胞的 ANAE阳性率显著低于对照组 (P<0 .0 1) ,表明锌缺乏或锌中毒可抑制 T-淋巴细胞的生成 ,降低其在外周血中的数量。本试验还对锌缺乏和锌中毒引起的外周血 T-淋巴细胞减少的机理进行了探讨

铬对热应激下蛋鸡脾组织结构的影响

将处于热应激条件下的 192只 35周龄新罗曼褐壳蛋鸡随机分成 6组 ,分别饲喂不添加铬的玉米 -豆粕型基础日粮和添加 10、2 0、30、4 0、5 0 mg/ kg葡萄糖耐量因子 (glucose tolerance factor,GTF)的试验日粮 5 2 d。取出器官组织固定后 ,制作石蜡切片 ,HE染色 ,光镜观察。观察可见 ,添加 2 0 mg/ kg GTF组蛋鸡脾白髓中脾小结体积增大 ,生发中心明显 ;空肠管壁出现集合淋巴小结。添加 30、4 0 mg/ kg GTF组蛋鸡脾白髓动脉周围淋巴鞘增厚 ;椭球数量增多 ,体积增大。结果显示 :给热应激下蛋鸡补充有机铬 (GTF) ,免疫器官 (脾 )的组织结构发生明显变化 ,可缓解热应激反应 ,增强机体免疫功能

盐酸克伦特罗单抗快速检测试剂盒的研制

以竞争性酶免疫分析原理为基础 ,应用特异性克伦特罗 (Clenbuterol,CL )单克隆抗体研制成功了β-肾上腺素受体激动剂克伦特罗的快速检测 EL ISA试剂盒 (CL- Kit)。 CL- Kit线性检测范围为 0 .5～ 12 8μg/ L,各标准品的吸光值变异系数为 2 .3%～ 3.6 %。标准曲线呈典型的 S型 ,相关系数 R2 =0 .996 ,符合 4参数 L ogit曲线拟合。检测结果表明 :CL 单抗对 CL 的半数抑制量 IC50 为 7.94 μg/ L,对沙丁胺醇 (Sb)的 IC50 为 10 0 0 μg/ L,肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的 IC50 均≥ 6 4 0 0 μg/ L;CL- Kit与 Sb的交叉反应性为 0 .79% ,与异丙肾上腺素的交叉反应性为 0 .12 % ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。试剂盒测定回收率在 91%～ 10 5 % ,批内变异系数小于 2 0 % ,批间变异系数小于 10 %。试剂盒在保存期内稳定

重组PEA受体结合区蛋白的免疫活性

为了观察重组绿脓杆菌外毒素 A(PEA)受体结合区蛋白在不同动物体内的免疫效果 ,将该蛋白纯化后免疫了小鼠、家兔、山羊等动物。对小鼠进行了攻毒实验 ,通过 EL ISA方法检测了家兔、山羊血清中抗体的消长规律。结果对小鼠的保护情况为 :最后 1次免疫后 14 d小鼠对 3倍 L D50 的 PEA攻毒保护率为 10 0 % ,2 1d保护率为 5 0 % ,2 8d后无保护效果。家兔和山羊免疫后 7～ 14 d达到峰值 ,2 1d后逐渐降低 ,2 8～ 35 d后降至免疫前水平

不同时期添加甜菜碱对肉鸡生产性能和脂肪代谢的影响

36 0只 1日龄健康艾维茵 (Avian)肉鸡随机分为 6组 (每组 6 0只 ) ,分别为对照组和第 、 、 、 、 组 ,试验期7周。第 ～ 组分别于不同时期添加同一剂量的甜菜碱 (10 0 0 mg/ kg,0 .1% ) ,添加时间依次为 1～ 7周 ,2～ 4周 ,3～ 5周 ,4～ 6周 ,5～ 7周。结果表明 :不同时期添加甜菜碱均能促进肉鸡体增重 ,降低腹脂率 ,与对照组相比 ,第 、 、 、 、 组 7周末体质量分别高出 8.0 1% (P<0 .0 1)、5 .0 1% (P<0 .0 5 )、4 .4 7% (P<0 .0 5 )、2 .2 4 % (P>0 .0 5 )、2 .0 9% (P>0 .0 5 ) ;腹脂率分别降低 19.5 6 % (P<0 .0 1)、6 .0 9% (P<0 .0 5 )、13.4 8% (P<0 .0 1)、15 .6 5 % (P<0 .0 1)、12 .17% (P<0 .0 5 ) ;第 组体质量在第 3、4周末超过第 组 ,从 6周龄开始 ,各组间体质量差异逐渐缩小 ;试验组皮脂厚度 ,胸、腿肌中甘油三酯含量较对照组有不同程度增加 (厚 ) ,但肝脏中甘油三酯含量各试验组均低于对照组 ;血清生化指标动态变化呈现一定的规律性 ,其中血清总蛋白含量较稳定 ,总氨基酸含量随周龄逐渐升高 ,甘油三酯 5～ 6周高于 1～ 3周 ,游离脂肪酸含量随周龄呈下降趋势 ,血清尿酸呈现缓 U型变化曲线。结论 :(1)不同时期添加 0 .1%甜菜碱可促进肉鸡体增重 ,降低腹脂率 ,引起体内脂肪重新分

镧离子对肉牛胰腺核糖核酸酶活性的影响及作用机制

在肉牛胰腺核糖核酸酶 (RNase)介质中加入 L a3+ ,研究了其对 RNase活性的影响及作用机制。结果表明 ,适当浓度的 L a3+ 对酶活性有激活作用 ,高浓度则严重抑制酶活性。竞争实验表明 ,高浓度下 ,L a3+ 可置换出 RNase中的Ca2 + 。荧光滴定表明 ,在 1个 RNase分子上结合有 2 .5个 L a3+ ,其低亲和性结合位点上的结合常数 ksv=1.33× 10 8L· mol- 1。由于高浓度下 L a3+对核糖核酸酶中 Ca2 +的竞争取代 ,因而可能导致酶的构象改变 ,使酶失去活性

《科学》杂志公布2004年科技热点

《中国兽医学报》投稿须知