• 猪圆环病毒(PCV)序列分析与进化

    马相如,陈焕春,肖少波,刘正飞,曹胜波,张利达

    从 Gen Bank数据库下载了世界各地分离的猪圆环病毒基因组全序列 ,并对其进行多重比对 ,绘制系统进化树 ,发现来自同一国家或地区的 PCV毒株亲缘关系较近。提取 PCV ORF1编码的蛋白质序列 ,进行多序列比较 ,分析保守氨基酸序列 ,搜索结构域相似序列 ,结果发现玉米线条病毒属与 PCV的起源有密切的关系。此外 ,在数据处理过程中通过自编程序结合互联网及免费软件 ,能迅速进行大规模序列比较分析 (35个序列以上 ) ,提高了生物数据分析处理的速度。

    2004年02期 105-108页 [查看摘要][在线阅读][下载 119k]
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  • 用于转导猪β-干扰素基因的高滴度逆转录病毒的制备

    王继英,张大龙,杜立新

    通过 DNA重组技术 ,将卵清蛋白 5′调控序列和猪 β-干扰素基因重组到逆转录病毒载体 p L NHX中。通过瞬时转染法 ,将构建好的逆转录病毒重组载体和表达 VSV- G膜蛋白的表达载体 p VSV共转染 GP2 2 93包装细胞。病毒滴度测定表明 ,利用瞬时转染法可以产生高滴度的逆转录病毒 ,最高滴度可达 10 7CFU/ m L。

    2004年02期 109-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 100k]
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  • 3种非猪瘟病毒单独或混合感染对猪瘟弱毒疫苗免疫效力的影响

    宁宜宝,赵耘,王琴,宋立,张广川,丘惠深,沈青春,王在时

    将 2 0头 9月龄左右猪瘟、伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征抗原、抗体阴性猪分成 6组 ,分别利用猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒 (PRV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 (PRRSV)单独或混合感染。 7d后连同对照猪 4头 ,免疫接种猪瘟兔化弱毒疫苗 (HCL V) ,13d后连同 4头阴性对照猪一起攻击猪瘟石门强毒。整个试验期间分别每天测温 ,观察临床症状 ,每周采集扁桃体和血样做各种病毒抗原及抗体检测。结果表明 ,非猪瘟病毒感染 7d后 ,所有各组猪均从体内检测到了相应感染的病原 ,表明 3种非猪瘟病毒感染成功。在攻击猪瘟石门强毒后 2周 ,感染了非猪瘟病毒后接种 HCL V疫苗的 4个免疫组 12头猪除 1头外 ,11头全为猪瘟病毒 (HCV)抗原检测阳性 ,且多呈强阳性 ;而单一 HCL V疫苗免疫组在猪瘟强毒攻击后检测不到 HCV;所有 HCL V疫苗免疫猪均存活 ,而非免疫对照组 4头猪全部在攻毒 16 d内死亡。

    2004年02期 112-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k]
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  • CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

    王晓泉,姜平,丁铲,许家荣

    以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

    2004年02期 114-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 113k]
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  • 马立克氏病病毒pp38基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达

    姜世金,丁家波,张志,孙淑红,王玉,杨汉春,崔治中

    通过 PCR方法扩增马立克氏病病毒 (Marek′s disease virus,MDV) Md11株的 pp38基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pc DNA3.1/ zeo(+)中。阳性克隆鉴定后 ,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,通过间接免疫荧光试验 (IFA)检测到了 pp38在 CEF中的表达。

    2004年02期 117-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 96k]
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  • 鸡白细胞介素18成熟蛋白全长基因的克隆与序列测定

    胡敬东,崔治中,范伟兴,刘文强,赵宏坤

    根据已发表的鸡白细胞介素 18(IL- 18)成熟蛋白的 c DNA序列 ,设计 1对特异性引物 ,应用 RT- PCR从脂多糖(L PS)刺激 10 h活化的 MDCC- MSB1细胞中克隆到编码鸡 IL - 18成熟活性蛋白的完整基因片段 ,其大小为 5 10 bp。经序列测定证实 ,所获得的 c DNA基因序列与文献报道的结果完全一致 ,从而为进一步研究鸡 IL- 18的基因表达、生物学活性以及应用奠定了基础。

    2004年02期 119-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 104k]
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  • 鸡传染性支气管炎病毒国内分离株D971 mRNA_3和mRNA_4 cDNA的分子特征

    刘玉芬,刘胜旺,荣骏弓,孔宪刚,刘宝全

    参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV)基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,经 RT-PCR扩增得到了 IBV国内分离株 D971约 1.3kb的片段 ,其中包含 3a、3b、E及 M蛋白基因的完整 ORF,并将该片段进行了克隆和序列测定。与国内外部分 IBV毒株序列比较表明 :D9713a基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、GA/99和 UK/6 6的 3a基因核苷酸序列同源性在 83%~ 89%之间 ,氨基酸序列同源性为 77%~ 91% ,其中与 CU- T2毒株的同源性最低 (分别为 83%和 77% ) ;3b基因与上述毒株的对应核苷酸序列同源性在 85 %~ 95 %之间 ,氨基酸序列同源性为 72 %~ 96 % ,与 CU- T2的同源性最高 (分别为 95 %和 96 % ) ;E蛋白基因与 CU- T2、D14 6 6、DE0 72、M4 1、Ark99、H5 2、Gray、GA/99和 UK/6 6的核苷酸序列同源性在 81%~ 86 %之间 ,氨基酸序列同源性为 74 %~ 80 %。不同毒株推导的 E蛋白 C末端表现不同特征 ,其中 D971E蛋白 C末端比 CU- T2的对应区多 9个氨基酸残基 ,而比本试验选用的其他参考毒株的相应区域短 5~ 7个氨基酸残基。M基因与 CU - T2、DE0 72、Gray、M4 1、H12 0、H5 2、SD/97/0 2、L X4及D4 1的 M基因核苷酸序列同源性在 86 %~ 91%之间 ,氨基酸序列同源性为 85 %~ 95 % ,其?

    2004年02期 122-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 158k]
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  • 鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化

    贺云霞,王君伟,王立群,Ulrich Neumann

    将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。

    2004年02期 126-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 104k]
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  • 猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测方法的建立

    王贵平,何启盖,刘军发,蔡旭旺,陈焕春

    根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1~ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。

    2004年02期 129-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 99k]
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  • 中华鳖对温和气单胞菌口服微球缓释疫苗的免疫应答

    孙红祥,潘杭君,胡富强,郑聪霞

    以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As) Z- 1株灭活全菌液 ,采用生物降解性高分子材料制成缓释微球疫苗 ,口服免疫中华鳖 ,测定血清中凝集抗体、血液中白细胞杀菌率以及对活菌攻击的免疫保护率。结果表明 ,中华鳖口服微球疫苗 ,其血清中凝集抗体效价和血液中白细胞杀菌百分率均可达到灭活菌液注射组相当的水平 (P>0 .0 5 ) ,显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;微球疫苗口服组和灭活菌液注射组的免疫保护率分别为 94 .7%和 89.5 % ,两者差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,而对照组小鼠 95 %死亡。采用可生物降解微球作为中华鳖气单胞菌口服疫苗的载体系统是可行的。

    2004年02期 131-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k]
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  • 兔脑炎原虫引起肾上皮凋亡的研究

    潘耀谦,张柳平,段艳

    对 16只具有兔脑炎原虫病的示病症状 ,即出现不同程度的头颈歪邪、震颤、平衡失调和转圈运动等运动障碍症状的獭兔 ,运用原位末端标记技术和基因染色技术 ,着重对病兔肾组织损伤的发生进行了研究。结果表明 :肾远曲小管和集合管是脑炎原虫主要的寄生部位 ,在此常能检出虫体或假囊 ;凋亡的细胞多见于集合小管的上皮细胞。用TUNEL染色 ,不同阶段的凋亡细胞可出现不同的病理形态学变化。初期的凋亡细胞 ,其胞核浓缩 ,胞膜增厚 ,着色较均匀 ;后期的凋亡细胞 ,其胞核的体积明显变小 ,胞浆减少 ,胞膜呈皱襞状 ,紧紧地包绕着皱缩而浓染的细胞核 ,形成典型的凋亡小体。用 P53和 Bcl- 2染色 ,由于基因表达产物的扩散 ,不仅受损细胞的核染色较深 ,而且胞浆染色也较深。研究证明 ,TUNEL 染色是一种检测由脑炎原虫引起肾细胞凋亡的灵敏、可靠的方法 ;P53和 Bcl- 2基因参与了肾细胞的凋亡过程 ;临床上病兔多尿与脱水可能主要与肾远曲小管和集合管的上皮细胞凋亡有关。

    2004年02期 134-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 183k]
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  • 柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

    韩红玉,赵其平,陈兆国,黄兵

    采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。

    2004年02期 138-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 95k]
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  • 狂犬病病毒糖、核蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

    袁慧君,扈荣良,包世俊,张守峰,殷震

    分别以 p IRES1neo和 p VAX1为载体 ,构建了以狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白为目的基因的基因疫苗单或双基因表达载体。以司苯 -甘油作为包裹剂 ,按 1μg DNA用 0 .5μL司苯 -甘油比例混合 ,将各表达载体制成 DNA疫苗 ,进行小鼠免疫试验。免疫共分 p IRES1neo、p IG- neo、p IN- neo、p IGN、p IG- neo+p IN- neo、p VAX1、p VG、p VN和 p VGN9个试验组 ,每只小鼠于后肢胫前肌每侧接种基因疫苗 5 0μL (0 .5 g/ L ) ,共免疫 3次 ,间隔 14 d。通过间接 EL ISA和细胞中和指数测定分别检测免疫应答水平。结果显示 ,1免疫 3次后 ,所有试验组抗体阳转率 10 0 % ;2第 3次免疫后 14 d检测 ,抗体水平显著上升 ;3以 p IRES1neo为载体构建的基因疫苗免疫效果普遍优于以 p VAX1为载体构建的基因疫苗 ,其中含有糖蛋白 /核蛋白双基因共表达载体 p IGN免疫组的抗体水平均高于其他试验组 ;4以 7.5个 L D50 的 CVS强毒肌肉攻毒 ,保护率达 89%。通过以上试验证明 ,p IGN是用于本动物免疫试验的最佳 DNA疫苗。

    2004年02期 141-144页 [查看摘要][在线阅读][下载 128k]
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  • 乙型脑炎重组伪狂犬病病毒TK~-/gG~-/NS_1~+的安全性及免疫性

    徐高原,陈焕春,徐晓娟,李自力,何启盖,吴斌,孙圣福

    用含有日本乙型脑炎病毒 (SA14 - 14 - 2株 )非结构蛋白 NS1基因的重组伪狂犬病病毒 TK- / g G- / NS+ 1 免疫BAL B/ c小鼠和断奶仔猪。结果表明 ,该重组病毒对 BAL B/ c小鼠和断奶仔猪是安全的 ,免疫的 BAL B/ c小鼠能抵抗伪狂犬病病毒 (PRV )强毒 (Ea株 )的致死性攻击 ,免疫的断奶仔猪能产生乙型脑炎病毒 (JEV)特异性抗体和 JEV特异性 CTL 活性。

    2004年02期 145-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 97k]
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  • 大肠杆菌新型菌毛(F1987)基因文库的构建

    于凤鸣,房海,陈翠珍,张晓君,巩元芳,马建军

    用碱裂解法从表达新型菌毛 (F1987)的 E.coli DH5 α阳性转化子中提取相应质粒 DNA,用 Bam H 对相应质粒和载体质粒 (p U C19)分别进行酶切 ,酶切产物经过纯化并按一定比例混合后 ,加入 T4 DNA连接酶进行连接 ,连接产物用热激法转化受体菌 E.coli DH5 α,构建了相应的基因文库。

    2004年02期 147-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 101k]
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  • 免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响

    贾立军,张艳梅,彭大新,刘红旗,程坚,张如宽,李秀梵

    利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %~ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3~ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %~ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %~ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。

    2004年02期 150-152页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k]
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  • 生长抑素基因疫苗pcS/SS构建及其在HeLa细胞中的表达

    曹少先,杨利国,茆达干,张文伟,管峰

    将 PCR扩增得到的 pc MV- S中的乙肝表面抗原 (HBs Ag) S基因亚克隆到 p UC18中 ,构建成 p U S质粒 ,再将化学合成的生长抑素 (somatostatin,SS)基因单链复性 ,融合到 S基因编码区的第 2 2 5个氨基酸位点之后 ,构建成 p US/SS质粒 ,然后将 S/ SS融合基因亚克隆到 pc DNA3.1(- )中 ,构建成 S/ SS融合表达质粒 pc S/ SS。采用脂质体包裹法将 pc S/ SS质粒转染 He L a细胞 ,用 SDS- PAGE和 EL ISA分析表明 ,S/ SS融合基因在转染后 72 h和 G4 18选择 2周后的细胞中均获得表达 ,融合蛋白具有 SS的反应原性。

    2004年02期 153-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 145k]
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  • 人溶菌酶cDNA的克隆及其在小鼠体内的表达

    孙怀昌,张泉,施伟庆,李国才,于峰

    根据已发表的人溶菌酶 (human lysozyme,h L YZ) m RNA序列设计引物 ,以人乳腺第 1链 c DNA为模板 ,用 PCR扩增出 1.5 kb h L YZ双链 c DNA,其推导的氨基酸序列与国外发表的从胎盘、巨噬细胞和结肠中克隆的 h L YZ氨基酸序列同源性为 10 0 % ,与从人组织细胞中克隆的 h L YZ仅有 1个氨基酸差异 ,但与从中国人胎盘中克隆的 h L YZ具有6个氨基酸差异。将此 c DNA克隆入乳腺特异表达载体 ,用所获得的基因构件注射哺乳期小鼠 ,经 RT- PCR和微球菌溶解试验证明 ,上述基因构件能有效地驱动目的基因在小鼠乳腺中表达 ,表达量为 6 9.3mg/ L,表达具有较好的组织特异性。这些试验结果表明 ,本研究构建的表达 h L YZ c DNA的基因构件可以用于乳腺生物反应器的研制。

    2004年02期 157-159页 [查看摘要][在线阅读][下载 105k]
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  • 银染mRNA差异显示方法在致突变实验中的初步应用

    李乾学,张锦霞,吴永魁,张立树,栾新红

    为建立在药物致突变研究中应用银染 m RNA差异显示的方法 ,试验提取未经过 /经过环磷酰胺处理的 Balb/c小鼠肝组织的总 RNA ,并以此为模板 ,采用 d T1 2 CG、d T1 2 AG、d T1 2 GG为锚定引物 ,通过反转录、差异显示 PCR反应 ,以 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带 ,回收后将其再扩增。结果表明 ,RNA投入量为 3μg、镁离子浓度为 1.5~ 2 .0 mm ol/L、退火温度为 4 0℃时 ,扩增的片段条带清晰、背景低 ,差异条带明显 ,再扩增条带单一。银染 m RNA差异显示技术可成功应用于药物致突变的研究。

    2004年02期 160-162页 [查看摘要][在线阅读][下载 103k]
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  • 泰山螭霖鱼肠道的显微和超微结构

    张金花,王树迎

    采用光镜和扫描电镜技术 ,对泰山螭霖鱼 (Varicorhinusmacrolepis)的肠道进行了观察。结果表明 :泰山螭霖鱼无胃 ,食管之后是肠道 ,起始端膨大呈球状。肠道由前肠、中肠和后肠组成 ,肠管直径由前肠到后肠逐渐变小。各段肠壁均分为粘膜、肌层和浆膜 3层。粘膜上皮由柱状细胞和杯状细胞组成 ,肌层分内环行和外纵行 2层。粘膜向肠腔内突出形成许多粘膜褶 ,有的呈指状、杵状 ,有的有分支。由前肠到后肠 ,粘膜褶由高变低 ,数量逐渐减少 ;杯状细胞数目由多变少 ;肌层逐渐变薄。扫描电镜下 ,肠道的粘膜褶大体上呈纵向锯齿状 ,并且粘膜褶上还有次级皱褶。柱状上皮细胞表面多呈圆形 ,前肠、中肠柱状上皮细胞轮廓和界限清楚 ,常呈隆起状 ,而后肠上皮细胞表面较平坦。前肠柱状上皮细胞游离面的微绒毛长而密 ,后肠的短而稀疏。前肠的杯状细胞常常有较大的分泌孔 ,周围有分泌物 ,粘膜表面有粗大的分泌颗粒 ;后肠杯状细胞的分泌孔较小 ,粘膜表面有较多细小分泌颗粒。

    2004年02期 163-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 272k]
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  • 实验感染肝片吸虫山羊的病理生理学 Ⅱ.血清NO和花生四烯酸代谢物的变化

    顾有方

    选择 9只 6~ 10月龄健康雄性白山羊 ,经粪便检查和 Dot- EL ISA检测 ,确认无肝片吸虫感染 ,随机分成感染组(n=5 )和对照组 (n=4 ) ,试验组每只一次性口服接种 15 0个肝片吸虫囊蚴 ,感染前 (0周 )至感染后 2 3周每周从颈静脉采集血液 1次 ,分离血清 ,测定一氧化氮含量和花生四烯酸代谢物 6 -酮 -前列腺素 F1α(6 - keto- PGF1α)和血栓素 B2(TXB2 )的变化。结果表明 ,肝片吸虫感染后第 6~ 2 1周试验组血清中的 NO一直高于对照组 ,并在第 7、10周时显著地高于对照组 ;血浆中 TXB2 水平变化较为明显 ,在 1~ 3周与对照组相比无显著差异 ,从第 5周开始到试验结束 ,试验组血浆中 TXB2 水平均显著或极显著地高于对照组 ;在整个试验期间 ,血浆中 6 - keto- PGF1α水平变化不显著。这一结果提示 ,NO及花生四烯酸代谢物可能参与山羊肝片吸虫病的发生发展过程。

    2004年02期 168-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 103k]
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  • 肉鸡葡萄球菌性关节炎关节部位的组织病理学

    王德海,程国富,胡薛英,谷长勤,周诗其,赵雅心

    以关节腔直接注射金葡菌的方法复制肉鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型 ,运用组织学观察方法对所建立的病理模型进行了动态研究。研究结果发现 :随着试验期的延长 ,关节滑膜面病变逐渐加重 ,纤维素样物质及滑膜细胞逐渐增多 ,滑膜及关节囊逐渐增厚、水肿、变性 ,在试验后期则纤维化。通过对关节滑膜面进行扫描电镜观察 ,发现试验组注射侧关节滑膜面滑膜消失 ,表面粗糙不平 ,呈网格状 ,见有大量金葡菌和巨噬细胞 ;未注射的对侧关节滑膜面病理性改变与注射侧关节滑膜面基本相同 ,但病变轻微 ,可见残存的部分滑膜。对照组鸡只的关节滑膜面未见病理性改变。

    2004年02期 171-173页 [查看摘要][在线阅读][下载 142k]
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  • 牛奶中埃谱利诺菌素(eprinom ectin)荧光高效液相色谱检测方法的建立

    潘保良,汪明,王玉万,潘贞德,戴晓曦,高凌云,那顺

    建立了以多拉菌素 (doramectin,DOR)作为内标检测牛奶中埃谱利诺菌素 (eprinomectin,EPR)的荧光高效液相色谱 (HPL C)检测法。用乙腈作为牛奶中蛋白质的沉淀剂和 EPR的提取剂。用 ODS- C1 8固相萃取法对提取的 EPR进行纯化。用真空干燥箱对提取和纯化后的 EPR进行干燥。在无水条件下 ,用三氟乙酸酐和 N-甲基咪唑作荧光衍生化剂 ,加入冰醋酸 ,在加热条件下对干燥后的 EPR进行荧光衍生化。用荧光 HPL C进行检测 ,检测条件 :流动相为 A液(为乙腈与无水甲醇按 1∶ 2的比例配制而成 )与水之比为 98∶ 2 ,流速为 1.0 m L/ m in,激发波长为 36 6 nm,发射波长为 4 6 5 nm,进样量为 10 0 μL,柱温为室温。本方法的检测限为 0 .1μg/ L,在 1~ 4 0 μg/ L 血浆的浓度范围内 ,标准曲线方程为 Y=0 .1787x- 0 .117,R2 =0 .997;样品的回收率为 83.4 0 %~ 10 5 .6 5 % ;变异系数为 6 .32 %~ 9.0 5 %。结果显示 :本方法灵敏度高 ,干扰少 ,重复性好。

    2004年02期 174-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 97k]
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  • 麻保沙星(marbofloxacin)在猪体内的药物动力学

    李云峰,曾振灵,陈杖榴,杨太,黄进发

    选用 18头健康的杜洛克×大白×长白三元杂交断奶仔猪 (公母兼有 ,体质量在 2 0~ 2 3kg)杂交猪 ,随机分为 3组 ,每组 6头 ,按每千克体质量 2 .5 mg的剂量进行了静注、肌注及内服麻保沙星 (m arbofloxacin)的药动学研究。三氯甲烷萃取血浆中的药物 ,用反相高效液相色谱法测定血浆中药物的浓度 ,MCPKP药代动力学程序处理血药浓度 -时间数据。静注给药的药时数据符合三室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2π(0 .13± 0 .0 1) h;t1 /2α(5 .4 1± 0 .4 3) h;t1 /2β(16 .2 2± 1.6 0 ) h;AUC(2 4 .89± 1.5 1) mg· L- 1· h;V1 (0 .77± 0 .0 6 ) L· kg- 1 ;Vd( area) (2 .6 1± 0 .37) L· kg- 1 ;Vd( ss)(1.6 9± 0 .19) L· kg- 1 ;Cl B(0 .10± 0 .0 1) L· kg- 1·h。肌注给药的血浆药时数据符合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2 Ka(0 .2 7± 0 .16 ) h;t1 /2α(2 .87± 0 .90 ) h;t1 /2β(17.39± 1.6 2 ) h;tmax(0 .91± 0 .32 ) h;Cmax(1.96± 0 .2 4 ) mg· L- 1 ;AU C(2 6 .85± 3.5 1) mg· L- 1 · h;F(10 7.86± 14 .10 ) %。内服给药的血浆药时数据符合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2 Ka(1.16± 0 .19) h;t1 /2α(4.94± 0 .5 3) h;t1 /2β(2 2 .98± 2 .0

    2004年02期 177-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 160k]
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  • 碱性诺氟沙星在健康猪体内的药动学

    陈志宝,邓旭明,阎继业,李乾学,王学林,张洪友

    按 10 mg/kg单一剂量对健康猪分别肌注和静注碱性诺氟沙星注射液后 ,研究了其在猪体内的药代动力学。应用 HPL C法测定猪体内的血药浓度 ,所得数据应用 MCPKP药动学软件处理 ,结果为 :肌注碱性诺氟沙星 ,Cmax(2 .6 30 80± 0 .6 830 6 ) mg/L,T1 /2 (6 .0 75 17± 3.0 4 76 1) h,AUC(12 .4 99± 2 .4 2 3) mg/L· h,F4 8.4 % ;静注碱性诺氟沙星 ,Co(12 .736 4 8± 5 .1835 2 ) mg/L,T1 /2 (3.312 89± 0 .4 84 39) h,AUC(2 5 .74 7± 3.14 9) mg/L·h。

    2004年02期 180-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k]
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  • 产后奶牛子宫内膜的扫描电镜观察

    田文儒,何剑斌,丛霞,曹荣峰,姜忠玲,宋学雄

    应用扫描电镜观察了 5头奶牛产后不同时期子宫内膜的变化。结果发现 ,分娩后早期 ,奶牛子宫内膜部分破损 ,与破损部位相邻的细胞在产后 1周内相继脱落 ;未破损内膜上皮细胞表面的纤毛和微绒毛形状不整、数量减少。产后2周 ,基底细胞开始生长 ,至产后 4 5 d时生长完成 ;产后 4周 ,内膜破损区域缩小 ,上皮细胞表面纤毛和微绒毛形状规则、数量增加 ;产后 4 5 d,偶见上皮细胞缺失 ;至产后 6 0 d,子宫内膜上皮细胞完整、排列有序、被覆纤毛和微绒毛。上述结果表明 ,奶牛子宫内膜在分娩后 6 0 d内完成修复。

    2004年02期 183-186页 [查看摘要][在线阅读][下载 187k]
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  • 竞争性RT-PCR检测铜对Ctr1 mRNA表达的影响

    付世新,郑鑫,梁海涛,朱世成,王哲,张艳宇

    为了应用竞争 RT- PCR法检测铜对猪传代肾细胞 (PK15 )中特异性铜转运蛋白 Ctr1基因 m RNA表达水平的影响 ,经 2次克隆 ,将筛选出一段 4 0 0 bp的核苷酸序列 ,插入 RT- PCR扩增出的 5 30 bp Ctr1目的片段中 ,构建了插入突变型 Ctr1- c DNA竞争模板。再将竞争模板与各试验组 c DNA同时进行 PCR扩增。结果 ,猪肾 PK15细胞 Ctr1基因m RNA表达量在 7.8~ 31.2 μmol/ L Cu范围内随铜添加浓度的升高减少 ,当铜添加浓度达到 6 2 .5 μmol/ L 时 ,其表达量又有所回升 ,呈双相反应。

    2004年02期 186-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 149k]
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  • 水牛附睾尾精子的体外受精

    谢英,单天锡,李跃民,张家骅

    采用肝素诱导获能 ,比较了 TAL P液和 BO液处理水牛附睾尾精子进行体外受精和细管冷冻精液体外受精的效果。结果表明 ,用 BO液和 TAL P液分别处理水牛附睾尾精子 ,受精后的卵裂率分别为 4 6 .6 7%和 5 3.73% ,发育率分别为 2 1.6 7%和 2 6 .87% ,其受精效果差异不显著。综合 2种方法 ,水牛附睾尾精子的受精率为 5 7.14 % ,受精后的卵裂率为 5 0 .39% ;发育率相对于培养卵为 2 4 .4 1% ,相对于卵裂卵为 4 8.4 4 % ;与细管冷冻精液 (5 6 .0 0 % ,5 4 .31% ,2 6 .72 % ,4 9.2 1% )相比 ,差异不显著。形态学观察还表明 ,用保温干储的方法可获得活率好、存活时间长的附睾尾精子。试验结果说明水牛附睾尾精子用于体外受精可以得到与细管冷冻精液相当的效果。

    2004年02期 190-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 88k]
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  • 体外培养条件对延边黄牛受精卵体外发育的影响

    罗光彬,韩雪花,金花子,蔡春化,金庆国

    从延边黄牛卵巢中采集未成熟的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精及受精卵体外培养。结果表明 :1将卵子用 2种不同的培养液进行体外成熟培养和受精卵体外培养 ,TCM199组的卵裂率 (5 6 .3% )极显著高于 D- PBS组(33.6 % ) (P<0 .0 1) ;TCM199组的囊胚发育率和孵化率 (15 .1%、13.7% )虽高于 D- PBS组 (10 .5 %、8.7% ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。2以 TCM199作为基础培养液 ,分别用含激素培养液和不含激素培养液进行成熟培养和受精卵体外培养 ,添加激素组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (81.2 %、17.5 %、15 .3% )高于没有添加激素的对照组 (75 .8%、12 .1%、10 .5 % ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。 3体外受精卵与单层颗粒细胞共培养组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (78.0 %、11.5 %、9.9% )显著高于非共培养组 (6 8.1%、5 .4 %、3.6 % ) (P<0 .0 5 )。

    2004年02期 192-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 113k]
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  • 细胞松弛素B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响

    朱德生,谢松涛,杨贵忠

    目的 探讨细胞松弛素 B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响。方法 常规超排 KM小鼠获卵母细胞 ,将有明显第一极体的卵母细胞放入含有 5× 10 - 3、1× 10 - 2 、2× 10 - 2 g/ L CB的成熟培养液中孵育 15 min,采用盲吸法去核 ,去核后的卵母细胞放入含 5× 10 - 3g/ L Hoechst33342的成熟培养液中染色 15 min,在荧光显微镜下检查去核的效率。结果  CB组去核率可达 88.2 % ,而对照组去核成功率仅达 2 9.7% ,两者的去核效果统计学上有显著差异 ;同时 CB的浓度过高会影响去核的效果 ,使卵母细胞的破溃率升高。结论  CB有利于去核 ,同时卵胞膜可以借助磷脂双层的游动性而很快得到修复 ;高浓度的 CB对卵胞膜作用过于强烈 ,细胞骨架严重破坏 ,磷脂双层结构的弹性和粘性减弱 ,修复能力降低 ,影响胚胎的构建。

    2004年02期 195-196页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k]
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  • 牛、羊成纤维细胞的冷冻与冷藏保存

    刘亚,章孝荣,张运海,金仁桃,章美玲,汪存利,吴集义

    以体外培养的布尔山羊和黄牛耳组织成纤维细胞为研究对象 ,进行了哺乳动物体细胞的冻存与冷藏试验。结果表明 ,牛、羊的耳成纤维细胞在液氮中冻存 4 8h或冷藏 19d(4℃ )后再接种培养 ,仍能正常贴壁与生长。本试验筛选出一种简单易行的细胞冻存方案。

    2004年02期 197-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 55k]
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  • 牛卵母细胞和附植前胚胎的rRNA基因表达及其核仁生物学研究进展

    牛淑玲,丰培金,周虚

    2004年02期 199-201+208页 [查看摘要][在线阅读][下载 130k]
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  • 羊卵泡发育动态变化及超数排卵方法的改进

    陈兵,魏泓

    2004年02期 202-204页 [查看摘要][在线阅读][下载 100k]
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  • 创立中国畜牧兽医品牌科技期刊的思考与尝试

    张学东,冯立文,沈晓峰,李伟民,郭建顺,王哲,高宏伟

    2004年02期 205-208页 [查看摘要][在线阅读][下载 111k]
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