我国应尽快建立兽医与人医一体化的公共卫生体系

高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验

将禽流感病毒血凝素 H9A基因克隆入插入载体 p FG11S中 ,通过酶切鉴定获得了正向转移载体 p FG11SHA;将其与禽痘病毒疫苗株 (w FPV)共转染鸡成纤维细胞 (CEF) ,通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒 r FPV- Ps- HA;以间接免疫荧光法证实 HA基因得到了表达。将该病毒经颈部皮下免疫 1日龄 SPF鸡 ,免疫后 15 d以 H9亚型禽流感病毒 F株翅静脉攻毒 ,攻毒后第 5天采集泄殖腔棉拭子样品进行病毒分离。将此重组病毒与以痘苗病毒 P7.5启动子表达相同基因的重组病毒 r FPV- P7.5 - HA作比较 ,结果表明 ,r FPV- Ps- HA相对于 r FPV- P7.5 - HA明显抑制了病毒的排出 ;攻毒后第 2、5、7、9、11天分别对 r FPV- Ps- HA、油乳剂灭活苗免疫鸡进行泄殖腔、气管排毒规律的检测 ,发现疫苗组均能很好地抑制排毒 ,攻毒对照组泄殖腔的排毒率明显高于气管排毒率

新城疫病毒cDNA探针在重组鸡痘病毒鉴定中的应用

将含新城疫病毒 (NDV)四平株 F基因的重组质粒 (p KSF)经 Eco R 及 Xba 双酶切 ,回收 340 bp的 c DNA片段 ,制备了地高辛标记的 c DNA探针。特异性检测表明 ,该探针对含 NDV F基因的 p KSF呈现特异性 ,而对照载体质粒及鸡痘病毒 (FPV 2 82 E4 )的核酸均呈阴性 ;敏感性检测表明 ,该探针对同源 DNA的检出限量为 4 0 pg。应用该探针对含 NDV F基因的重组鸡痘病毒 v FV2 82进行杂交检测 ,结果呈阳性。以上结果表明 ,该探针可成功用于含 NDV F基因的重组鸡痘病毒的鉴定

鸭瘟病毒强毒株在急性人工感染成年鸭病例体内分布规律

5 6只 3月龄四川麻鸭经皮下接种鸭瘟病毒 (DPV)强毒 SC1株 ,成功建立了 DPV感染的急性病理模型 ,并应用PCR方法检测了不同时间 DPV在感染鸭体各组织器官的分布情况。结果表明 ,接种 2 h后 ,即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出 DPV DNA;12 h,可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食管、腺胃、血液、舌、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等检测到 DPV的 DNA。检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏和脑组织。本试验为阐明 DPV的致病机理和应用 PCR方法检测感染鸭体组织中的 DPV提供了重要的实验数据。

基因重组抗原酶联免疫法检测兔出血症病毒抗体及其标准化

以重组兔出血症病毒 (RHDV) VP6 0蛋白为抗原 ,建立了 RHDV抗体间接 EL ISA检测方法。优化的试验反应条件为 :重组 VP6 0的包被质量浓度为 1.0 mg/ L ,用 10 %牛血清封闭 ,以大肠杆菌提取物稀释被检血清以消除非特异性反应。将所建立的 EL ISA与现行血凝抑制 (HI)试验比较发现 ,不同免疫状态的兔血清的 RHDV EL ISA抗体与 HI抗体均呈正相关。对 11个 RHD免疫兔场 1130份血清样品的抗体检测表明 ,各免疫兔群血清 RHDV抗体水平不完全一致 ,D值在 1.0 9～ 1.76之间 ,显著高于非免疫兔 (0 .0 5 )及 SPF兔 (0 .0 2 ) ,低于高免兔 (2 .34)。在此基础上 ,研制了RHDV抗体酶联免疫检测试剂盒 ,测定了其主要指标 ,制定了各成分的质量控制标准 ,为兔群进行免疫学监测及评价疫苗的免疫效果提供了便利

华东地区PMWS患病猪群PCV-2的检测及其基因特征

用 PCR方法 ,对江苏、上海、山东、江西、安徽和浙江等省市 6 5家猪场 99例断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)肺脏和淋巴结病料 ,进行了猪圆环病毒 - 2 (PCV- 2 )基因检测 ,发现其中 18家猪场 2 1例病料为 PCV- 2阳性。源自安徽和上海的 PCV- 2分离株经基因序列分析显示 ,2个分离株部分 ORF2 与国外分离毒株同源性为 92 %～99%。安徽分离株 AHHF6与韩国分离株 KSY- 1同源性为 99% ,而上海分离株 SHHT1与加拿大分离株 Imp.114 7同源性为 98%。上述结果表明 ,我国 PMWS患病猪群广泛存在 PCV- 2 ,不同地区 PCV- 2存在一定基因差异 ,它们可能来源于不同国家或地区

禽源巴氏杆菌链霉素耐药基因StrA的克隆及原核表达

根据巴氏杆菌链霉素耐药基因 Str A序列 ,设计合成 1对引物 ,以临床分离的禽源巴氏杆菌链霉素耐药菌株质粒DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出禽源巴氏杆菌的 Str A基因片段。将长约 80 4 bp的 Str A目的基因克隆到 p GEM-T载体上 ,通过核苷酸序列测定 ,结果表明 ,克隆的 Str A基因长约 80 4 bp,与文献报道 (NC- 0 0 1774 )的同源性为99.8% ,只有 1个碱基不同 (6 9位 T→ C) ,但所编码的氨基酸没有改变。将 Str A基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体 p ET- 2 8c(+)中 ,重组质粒酶切鉴定正确后 ,将构建好的原核表达质粒 p ET- 2 8c(+) - Str A转化到受体菌BL- 2 1(DE3)中 ,经 IPTG诱导后 ,进行 SDS- PAGE电泳 ,经检测 ,Str A外源基因的表达产物占菌体总蛋白的 12 %。蛋白表达形式为包涵体表达

质粒DNA拓扑学结构对基因疫苗生物学特性的影响

利用不同拓扑学结构的质粒 ,分别转化 E.coli感受态细胞、转染 SK6 - 6细胞和免疫小鼠 ,比较了不同拓扑学结构质粒对转化效率、转染率和对免疫应答水平的影响。结果显示 ,超螺旋占 5 0 %比例的猪瘟病毒 E2基因表达质粒p CDSW转化 E.coli感受态细胞的效率比开环的 p CDSW高 8倍 ,超螺旋比例占 80 %的 p VAXE2 IL- 2质粒比酶切线性化质粒转化率高 2 2倍 ;以荧光蛋白基因为报告基因 ,超螺旋比例占 80 %的荧光蛋白真核表达质粒转染真核细胞的效率是线性化质粒的 12倍 ;以猪瘟病毒主要保护性抗原 E2基因表达质粒 ,分别制备成超螺旋和开环形式占优势的质粒 ,免疫昆明鼠 ,抗体检测结果显示 ,超螺旋比例高的基因疫苗免疫效果明显好于开环质粒的基因疫苗

人流感病毒和禽流感病毒感染不同的靶细胞

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右

猪乳中乳成分变化的曲线拟合

以 10 0头二花脸母猪作为试验动物 ,对猪乳中蛋白质、乳糖、IGF- 、EGF和胰岛素含量在泌乳 1～ 2 1d阶段的变化进行了曲线拟合 ,并分析了这些乳成分的变化规律。结果表明 ,倒数曲线为乳蛋白、IGF- 、EGF和胰岛素随泌乳时间变化的最优拟合曲线。乳蛋白、IGF- 、EGF和胰岛素含量随时间的延续而下降 ,其拟合方程分别为 :y=33.74 4+85 .80 3÷ x(g· L- 1 ) ,y=4 2 .5 94 +2 90 .0 2 3÷ x(μg· L- 1 ) ,y=132 .84 1+6 38.5 98÷ x(ng· L- 1 ) ,y=18.0 73+316 .92 3÷ x(U·m L- 1 ) ,其中 x为泌乳天数。乳糖的最优拟合曲线为对数曲线 ,乳糖含量随时间的延续而上升 ,其拟合方程为 :y=32 .2 2 3+9.6 2 6 lnx(g· L- 1 ) ,x为泌乳天数。猪乳成分变化最为剧烈的是在初乳期 ,7d后过渡到相对比较平稳的常乳期

抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较

应用由 Hancock实验室改进的微量肉汤稀释法测定了 cecropin P1、cecropin A、magainin 2、defensin 1、bactenecin、lactoferricin和 indolicidin等 7种抗菌肽和盐酸金霉素、去甲万古霉素、土霉素、强力霉素等 4种抗生素的体外抗菌活性 ,并且使用薄层琼脂糖孔穴扩散法比较了抗菌肽中 cecropin P1和 cecropin A与土霉素和呋喃唑酮对大肠杆菌 K88的抑菌效果。结果发现 ,抗菌肽与抗生素一样对几种革兰氏阳性菌和阴性菌都有不同程度的抗菌效果。其中 cecropin A、cecropin P1和 defensin1对大肠杆菌的 2个菌株 ATCC2 5 92 2和 K88的抗菌活性高于抗生素 ,defensin1是各种抗菌肽中对金黄色葡萄球菌抗菌效果最好的。抗生素对试验用金黄色葡萄球菌的抑制活性总体上要好于抗菌肽。与抗生素相比 ,cecropin A、cecropin P1和 indolicidin对猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌具有更好的抗菌效果。另外 ,抗菌肽的抑菌圈边缘十分清晰 ,而抗生素的整个抑菌圈都比较模糊且界线不明。因此 ,从抗菌效果方面考虑 ,抗菌肽可以代替抗生素用于疾病的预防和治疗

多氯联苯对鸡胚性腺发育的毒性和雌性激素作用

研究了内分泌干扰物多氯联苯 (PCB)对鸡胚性分化开始后性腺发育和配子分化的影响。在孵化的第 10天向气室内注入 Aroclor12 5 4或雌激素 ,第 19天取出睾丸和卵巢 ,进行形态学观察。结果显示 ,PCB明显促进卵巢皮质的发育 (P<0 .0 5 ) ,效果类似 17β-雌二醇 (E2 ) ;对睾丸发育也呈现微弱的雌激素样作用 ,生精细胞分化受到抑制 ,细精管管壁显著变薄 (P<0 .0 1) ,而 E2 作用于睾丸会导致睾丸萎缩 ,甚至雌性化 ,睾丸横截面积比对照组显著减少 ,细精管管壁也变薄 (P<0 .0 5 )。PCB的上述雌激素样作用能被克罗米酚 (clom iphen)阻断。此外 ,与 E2 相比 ,PCB对雌性和雄性生殖细胞表现出强烈的毒性作用 ,使大多数生殖细胞发生核固缩和胞质空泡化 ,细胞间隙增大 ,雄性的细精管结构也受到破坏。以上结果表明 ,PCB对鸡胚性腺呈现出毒性和雌性激素的双重作用

雏鸡实验性鸡败血霉形体亚临床感染呼吸器官的组织病理学动态观察

对 18日龄 SPF鸡人工接种鸡败血霉形体 (MG) KPF2 1 株 ,分别在接种后 5、12、19、2 6、33d进行血清平板凝集试验、尸体剖检、病理组织学观察和呼吸器官的电镜观察。结果如下 :接种 MG后 ,雏鸡呈 MG血清学反应阳性 ,但无明显的临床症状 ;病理组织学观察 ,呼吸器官主要反应是淋巴细胞浸润 ,有颗粒白细胞增多。电镜观察证实了病理组织学观察的结果 ,同时还发现 ,接种后 19d MG贴附于呼吸道的粘膜上皮 ,引起细胞膜的不平整 ,继而破坏生物膜结构 ,使气管及支气管的纤毛脱落 ;气管粘膜上皮、肺毛细管壁细胞及气囊壁细胞的微绒毛脱落 ;细胞内质网和线粒体肿胀呈球状 ,线粒体嵴逐步消失 ,最终导致细胞死亡、崩解。呼吸器官的功能部分减退甚至消失。

大鼠基因组序列发表

微卫星DNA与延边黄牛肉用生长性状关系

选择与肉牛主要生产性状紧密连锁的 5个微卫星位点 ,以肉牛线性体型评分方法作为衡量肉牛生长发育的指标 ,运用最小二乘法拟合线性模型 ,分析了延边黄牛肉用生产性状与微卫星标记的关系 ,并分析了微卫星 ETH10和IDVGA4 6位点的不同基因型与肉用生产性状的关系。结果表明 ,微卫星 EHT10位点的等位基因 2 0 9对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的肩部性状有正面影响 ,等位基因 2 13对外貌线性评定中的系部、肌肉度线性评定中的尻形状和细致度线性评定中的骨骼及皮肤性状有正面影响 ,而等位基因 2 15对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的尻形状有负面影响 ;微卫星 IDVGA4 6位点的等位基因 2 4 9对背线、前肢和后肢等外貌线性评定性状 ,肌肉度线性评定的腰宽以及细致度线性评定的骨骼和皮肤性状有正面影响 ,等位基因 2 0 3对外貌评定性状的头部、背线 ,肌肉度评定性状腰宽以及细致度评定性状骨骼和皮肤有负面影响 ,等位基因 2 4 5对腰宽性状也起到负面影响

在猴体内证明干扰素抗SARS有效

波尔山羊体质量生长随机扩增多态DNA标记及遗传连锁图谱构建

利用随机扩增多态 DNA(random am plified polym orphic DNA,RAPD)技术研究了 RAPD标记与波尔山羊体质量的相关性 ,并利用 Jointmap和 Genemap程序构建了 RAPD分子标记遗传连锁图谱。结果表明 ,RAPD标记OPP0 6 2、OPQ0 6 1、OPO113、OPO0 2 1、OPO0 71、OPQ0 6 2、OPQ0 6 5、OPP0 4 3和 OPP0 6 3与各年龄阶段体质量有显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1)相关。构建了 11个 RAPD分子标记遗传连锁图谱和 1个表型标记连锁图谱 ,标记OPO0 71、OPO0 2 1、OPP0 6 2和 OPQ0 6 5分别座落于第 3、4、5、10连锁群中

猪流感病毒的种间传播及分子进化

畜禽生长激素释放因子(GRF)的研究进展