表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒在水禽的免疫效力

利用表达 H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒 ( r FPV- HA)和油乳剂全病毒灭活疫苗分别接种商品鹅 ,评价疫苗在水禽的免疫保护作用。结果发现 ,免疫后 2 1 d,r FPV- HA免疫组 HI抗体检测为阴性 ,灭活疫苗免疫组HI抗体阳性率为 70 % ;用 H5亚型禽流感病毒攻击后 ,与阴性对照组相比 ,r FPV - HA免疫组鹅的口腔和泄殖腔排毒率降低 ,病理变化减轻 ,感染鹅易康复 ,保护率为 80 % ,总体保护效力达到灭活疫苗水平。结果表明 r FPV - HA免疫家鹅可诱导良好保护 ,显示出了良好的应用前景

犬细小病毒基因型的调查

采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 ,进化方式与文献报道的进化方式一致

鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景

鹅源副粘病毒NA-1株F蛋白基因的克隆及其载体的构建

鹅源副粘病毒分离株 NA- 1经 1 1日龄鸡胚增殖后收集尿囊液 ,浓缩 ,提取病毒基因组总 RNA,采用 RT- PCR方法 ,一次性扩增出与预期大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯回收后克隆入 p MD1 8- T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,对阳性克隆进行了序列测定和序列分析。测序后拼接的 F基因长 1 6 72 bp,包含完整的开放阅读框 ( 1 6 6 2bp) ,编码 5 5 3个氨基酸 ,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R- R- Q- K- R- F1 1 7,与 NDV的强毒株特征相符 ,同时也与鹅副粘病毒分离株致病性试验结果相符。根据 NDV基因分型标准 ,鹅源副粘病毒 NA- 1株归属基因 型 NDV。将 F基因克隆入转座载体 p Fast Bac ,得到重组转座载体 PFF,将 PFF转化大肠杆菌 DH1 0 Bac,提取质粒 ,得到阳性重组穿梭载体 re- Bacm id,为下一步的转染表达奠定了基础

柔嫩艾美尔球虫T细胞刺激性抗原的免疫原性

以抗原对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞的刺激能力和动物保护性试验为指标观察了柔嫩艾美尔球虫 ( Eimeriatenella)孢子化卵囊可溶性抗原及其组分的免疫保护作用。纯化的孢子化卵囊经超声波粉碎 ,获得全可溶性抗原 ,用Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析后 ,获得 4个组分 ,分别命名为 1 .0蛋白、2 .0蛋白、3 .0蛋白和 4 .0蛋白。可溶性抗原及其各个组分 ,均能刺激球虫耐过鸡脾脏和盲肠扁桃体 T细胞增殖 ,其中以 3 .0蛋白作用最强。 3 .0蛋白再用Sephadex G- 75凝胶过滤层析 ,获得 3 .1蛋白、3 .2蛋白和 3 .3蛋白组分。其中 3 .2蛋白对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞刺激作用最强。SDS- PAGE电泳显示 ,3 .2蛋白含有 2条多肽 ,相对分子质量分别约为 3 70 0 0和 4 0 0 0 0。动物免疫保护性试验表明 ,3 .2蛋白可以有效保护感染鸡抵抗柔嫩艾美尔球虫的攻击 ,盲肠病变计分为 1 .5 ,增重与不免疫不攻虫对照组相当 ,表明 3 .2蛋白是优良的疫苗候选抗原

中华硬蜱初次和再次感染宿主后叮咬局部组织病理学变化的动态观察

中华硬蜱初次叮咬和再次叮咬宿主后 ,叮咬部位可发生一系列程度不同的病理学变化 ,在初次叮咬过程中 ,叮咬局部组织反应较轻 ,其皮肤组织中炎性细胞浸润较少 ,主要为中性粒细胞以及少量巨噬细胞 ,于叮咬后 5 d达高峰 ,无组织坏死现象。而中华硬蜱叮咬再次感染组宿主 6 h,叮咬局部组织反应剧烈 ,呈现急性炎性损伤 ,可出现大量炎性细胞浸润 ,其中含大量嗜碱性粒细胞和部分嗜酸性粒细胞及淋巴细胞 ,嗜碱性粒细胞可出现明显脱颗粒现象。体视学结果显示 ,再次感染组炎症细胞浸润于 1～ 3d达高峰。同时叮咬局部组织出现明显充血、水肿和坏死现象 ,电镜下其皮肤组织结构排列紊乱 ,胶原纤维结构模糊 ,组织中出现大量炎性细胞碎片。研究为进一步阐明抗蜱免疫机理提供了理论依据

利用RNAi抑制口蹄疫病毒的复制(英文)

根据口蹄疫病毒 IRES和 L 串联序列两侧的保守区域设计了 2个引物 ,利用 RT- PCR和 PCR方法扩增出该串联序列 ,并进行了测序。测序结果表明 ,扩增产物与 Gen Bank上相应的序列具有很高的序列同源性 (大于 99% )。在测序的基础上 ,选择了 L 基因上的 1个靶位点 (位于启始密码子下游第 2 2 9nt后 2 1 nt长的序列 ) ,合成了 si RNA表达盒SEC- L2 2 9。细胞单层长成 5 0 %～ 70 %时 ,将纯化的 SEC- L2 2 9转染到 BHK细胞中 ,转染 4 h后用高感染复数 FMDV接种 ,2 4 h后用间接免疫荧光方法对口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制进行检测。研究结果表明 ,SEC- L 2 2 9极大地抑制了口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制 ,且该抑制作用具有序列特异性 ,并降低了 BHK细胞的死亡率。另外 ,2 5 ng和5 0 ng SEC- L2 2 9处理组间对病毒复制的抑制作用差异不明显 ,可能是病毒基因组发生了突变。本试验表明 ,利用 PCR方法合成的 SEC在 BHK细胞中能特异性地抑制 FMDV的复制 ,RNAi技术可能为防治口蹄疫提供一个新的途径

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成及pIRES1-PACAP表达载体的构建

根据文献报道的垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)基因序列和信号肽基因序列 ,设计 10条单链寡核苷酸片段 ,通过 5次 PCR扩增获得 PACAP基因片段 ,同时两端设有 Sm a 和 Xba 酶切位点 ,酶切后将其克隆至 p IRES1- neo质粒中 ,经 PCR、酶切和测序鉴定 ,证明已获得 PACAP基因并构建了 p IRES1- PACAP表达载体

鼠层粘蛋白α5链E_3、LG_4、LG_5片段的克隆及表达

从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性

环境低温和T_3致肉鸡腹水、肺动脉高压和肺微细动脉肌型化

21 0羽 AA商品肉鸡随机分为 A、B、C 3个组 ,常规饲养。 1 4日龄后 A组鸡正常对照 ,而 B、C组鸡舍温按每日1～ 2℃由 2 5℃逐步降至 1 2℃ ,同时 C组在日粮中按 1 .5 mg/ kg的剂量添加甲状腺素 T3以诱发肉鸡腹水综合征 ( as-cites syndrom e,AS)。结果表明 :低温和 T3能显著增加 AS发病率、红细胞压积 ( PCV)值、右心室与全心室重量比( RV/ TV)、平均肺动脉压 ( m PAP)和厚壁末梢血管百分率 ( TWPV % ) ( P<0 .0 1 )。从而揭示了环境低温和 T3诱发的AS患鸡已发生了肺动脉高压和肺微细血管肌型化

补气活血对奶牛产后气虚血瘀证血液流变性的影响

从血液流变性变化角度研究补气活血方——归芪益母散防治产后气虚血瘀证的作用。试验分为 3组 :产后健康组 18例 ,气虚血瘀证组 9例 ,气虚血瘀证用药组 8例。用药组按 0 .8g/ kg体质量投喂归芪益母散 ,给药方法为产后 1、2、3、5、7d每日 1剂 ,共计 5剂。于产后 1、2、4、7、10 d按设计指标采血、化验分析。结果显示 :喂服归芪益母散可显著降低产后气虚血瘀证奶牛 1、2 d全血低切比粘度 (P<0 .0 5 ) ;显著降低 4、7、10 d血浆比粘度 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 ) ,归芪益母散有改善血液流变性的作用。补气活血可显著改善产后气虚血瘀证奶牛的血液流变性

鸡蛋中氯霉素残留的检测方法及其消除规律

选用处于产蛋高峰期的健康海兰蛋鸡 2 0只 ,单笼饲养 ,多剂量内服氯霉素 (每千克体质量 10 0 mg,连喂 12 d) ,停药后逐只逐日收集鸡蛋 ,将蛋白、蛋黄分别匀浆 ,用乙腈、乙酸乙酯、正己烷萃取及净化后 ,HPL C检测氯霉素浓度。色谱柱为 Waters Nova- Pak C1 8(3.9mm× 15 0 mm)柱 ,检测波长为 2 80 nm,流动相为乙腈 /水 (2 0 / 80 ) ,流速为 1m L/min,进样量为 5 0 μL。在上述条件下 ,氯霉素的色谱峰保留时间约为 8.0 min,最低检测限为 0 .0 0 2 μg/ g,标准曲线的线性范围为 0 .0 0 2～ 2 0 μg/ g。氯霉素含量为 0 .5 μg/ g时 ,在蛋白中的批内、批间变异系数分别为 3.5 2 %、3.4 3% ;在蛋黄中的批内、批间变异系数分别为 3.83%、3.37%。将氯霉素以 0 .5 μg/ g分别添加到空白蛋白和蛋黄中 ,测得蛋白、蛋黄中氯霉素的回收率分别为 94 .89%、83.15 %。结果表明 ,本法是一种简便、灵敏、可靠的检测鸡蛋中氯霉素残留的分析方法。停药当天 ,蛋白、蛋黄中的氯霉素分别为 3.6 1、14 .5 1μg/ g;停药第 5天 ,分别为 0 .0 5、7.17μg/ g;停药第 8天 ,蛋白中已检测不到氯霉素 ,蛋黄中氯霉素为 0 .80μg/ g;停药第 11天 ,蛋黄中尚有 0 .0 4μg/ g的氯霉素 ,而停药第 12天 ,蛋黄中已检测不到氯霉素。采用 MCPKP药?

甜菜碱对生长猪的生长性能和胴体组成的影响(英文)

选用 96头杜长大生长猪 ,随机分成 4组 ,以研究日粮中添加不同水平甜菜碱 (10 0 0、15 0 0、2 0 0 0 mg/kg)对猪生长性能、胴体组成及肉质的作用效果。试验结果表明 ,与对照组相比 ,日粮中添加 10 0 0 mg/kg和 15 0 0 mg/kg甜菜碱组猪日增重分别提高 13.2 0 % (P<0 .0 1)、9.2 8% (P<0 .0 5 ) ,日均采食量分别增加 7.30 % (P<0 .0 5 )、7.33% (P<0 .0 1) ,料重比分别下降 7.93% (P<0 .0 1)、6 .5 5 % (P<0 .0 5 )。此外 ,10 0 0 mg/kg甜菜碱组猪的胴体瘦肉率和眼肌面积比对照组分别提高 7.15 % (P<0 .0 5 )、19.12 % (P<0 .0 5 ) ,胴体脂肪率与背膘厚分别减少 2 7.2 1% (P<0 .0 5 )、14 .86 % (P<0 .0 5 ) ;背最长肌中的肌红蛋白和肌内脂肪分别提高 34.2 1% (P<0 .0 1)、2 9.5 6 % (P<0 .0 1)

卡拉胶寡糖对肉仔鸡肠道菌群、小肠微绒毛及免疫功能和生产性能的影响

选择艾维因 (Avian)肉仔鸡 12 0只 ,随机分为卡拉胶寡糖组和对照组 ,每组 6 0只 ,雄、雌各半。试验日粮添加0 .1%卡拉胶寡糖 ,试验期 5 6 d。研究了卡拉胶寡糖 (Oligo- carrageenan)对肉仔鸡肠道主要菌群、微绒毛密度、免疫功能及生产性能的影响。结果表明 ,卡拉胶寡糖组鸡盲肠内容物中大肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌的数量均下降 (P<0 .0 5 ) ;回肠微绒毛密度增加 (P<0 .0 5 ) ;法氏囊相对重量增加 (P<0 .0 5 ) ,血清新城疫抗体效价提高 (P<0 .0 5 ) ;增重提高 9% ;料重比降低 2 .9%。结论 :卡拉胶寡糖可抑制肉仔鸡肠道菌的增殖 ,促进小肠微绒毛生长发育 ,提高免疫反应和生产性能

高锌对肉鸡血液生化指标的影响

1日龄艾维茵肉鸡健雏 2 0 0只随机分为 4组。 组 :基础日粮 (Zn10 0 mg/ kg) ; 组 :基础日粮 +Zn14 0 0 m g/kg; 组 :基础日粮 +Zn 190 0 mg/ kg; 组 :基础日粮 +Zn 2 4 0 0 mg/ kg,试验期 7周。结果表明 : 组血清碱性磷酸酶 (AKP)活性显著升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,AKP的同工酶亦受到不同程度的影响。谷丙转氨酶 (GPT)、淀粉酶(AMY)活性各试验组均显著升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;肌酸激酶 (CK)活性在试验初期升高 ,中期不同程度的降低(P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,试验结束时与对照组无显著差异 (P>0 .0 5 )。血清总蛋白 (TP)、球蛋白 (GL B)含量随锌水平的升高而升高 ,白蛋白 (AL B)含量下降 ,但均与对照组比较差异不显著 (P>0 .0 5 )。血清锌含量随饲料锌水平增高而显著升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,血清中钙磷含量则与饲料锌水平成负相关

抑制性差减杂交技术(SSH)及其研究应用进展

创新兽药的研究开发及所面临的挑战