新城疫病毒HeB02分离株F基因的序列分析

根据国外已发表的新城疫病毒 F基因序列 ,设计了 1对引物 ,并以 RT- PCR特异性扩增出新城疫病毒 He B0 2分离株的 F基因 ,基因产物大小为 1.6 3kb,与设计相符。对其进行序列测定后 ,与其他标准毒株 F4 8E9、L a Sota和Clone30的 F基因进行了同源性比较 ,结果表明 ,He B0 2株与国内标准强毒株 F4 8E9及目前广泛应用的弱毒疫苗株L a Sota和 Clone30的 F基因核苷酸序列的同源性分别为 88.1%、84 .9%和 83.8%。由此可以看出 ,He B0 2分离株与标准毒株和疫苗株相比 ,在 F基因上发生了变异

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒

为了检测、区分猪传染性胃肠炎 (TGE)和猪流行性腹泻 (PED) ,建立了同时检测这 2种疾病病原体的多重 PCR方法。参考 Gen Bank登录的 TGEV和 PEDV纤突蛋白 S基因序列 ,经 DNAsis 2 .0比较分析 ,分别筛选出 TGEV、PEDV S基因相对保守区。以 TGEV TH- 98株 (Gen Bank登陆号为 AF4 94 337)和 PEDV CV777株 (Gen Bank登陆号为 NC0 0 3436 )为参考模板 ,利用软件 Primer 3设计合成了 2对寡核苷酸引物 ,以 ST细胞培养的 TGEV和 PEDV毒株核酸为模板 ,利用所设计的 2对引物进行多重 RT- PCR扩增 ,结果同时得到与试验设计相符的 4 99bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带 ,而对其他 3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明 ,建立的多重 RT- PCR方法可检测出 10 pg TGEV RNA和 10 0 pg PEDV RNA。

基因疗法:一个美丽的传说?

疯牛病病牛末梢神经和肾上腺中发现变异锯蛋白

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达

根据克隆的毒害艾美耳球虫 (Eimeria necatrix)广东株微线蛋白 - 2基因 (En MIC- 2 (Gd) )的 c DNA序列设计特异性引物 ,用 PCR方法扩增其阅读框架 (ORF)后 ,克隆至质粒表达载体 p ET- 32 a(+) ,成功构建了重组表达质粒 p ET-32 a(+) - En MIC- 2。用 Ca Cl2 法将其转化至宿主细菌 E.coli BL2 1(DE3) ,并用 IPTG成功诱导了 En MIC- 2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 10 .8% ,其相对分子质量约为 5 5 0 0 0。重组蛋白经 SDS- PAGE分析后 ,用 E.necatrix(广东株 )感染鸡的高免血清进行 Western Blotting分析 ,结果为阳性

大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达

利用 PCR方法 ,从肠出血性大肠杆菌 O15 7∶ H7的基因组 DNA中 ,分别扩增出 Stx1B和 Stx2 B亚基的结构基因片段 ,然后再通过 PCR将这 2个片段连接起来 ,并定向克隆到表达质粒 p ET2 8a的 Nco 和 Eco R 位点之间 ,构建了重组表达质粒 p MB1。将重组质粒转化到宿主菌 BL2 1(DE3)中 ,对重组菌株 BL2 1(p MB1)用 IPTG进行诱导表达 ,并对最佳诱导时间进行了探索。 SDS- PAGE电泳检测结果表明 ,重组菌株表达出了 16 30 0的目的蛋白 Stx2 B- L-Stx1B;经薄层扫描分析表明 ,表达量约占菌体总蛋白的 6 8.4 % ,且目的蛋白为包涵体表达 ,表达量约占细菌沉淀的84 .6 %。研究还表明 ,未用 IPTG诱导的 BL2 1(p MB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明 ,在 3～ 7h的诱导时间内 ,目的蛋白的表达量没有明显变化

英实验证明“人类疯牛病”可能有多种

旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析

应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因 ,表明此基因在旋毛虫各个时期均有表达

孕酮对小鼠妊娠早期子宫内膜转化生长因子β₁Ⅰ型受体表达的影响

采用免疫组织化学 SABC法 ,研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子 β1 型受体(TGFβR )表达的影响。结果显示 :(1)孕 4 d,注射 2 mg孕酮组 ,子宫表面上皮、腺上皮及基质中 TGFβR 表达增加 ,与对照组和注射孕酮 4 mg组差异显著 (P <0 .0 1)。注射孕酮 4 mg组 ,表面上皮 TGFβR 表达无显著增加 ;腺上皮细胞 TGFβR 表达稍有下降 ,但与对照组差异不显著 ;基质细胞 TGFβR 表达明显增加 ,与对照组差异显著 (P <0 .0 1)。 (2 )孕 5 d,试验组表面上皮和腺上皮 TGFβR 随着孕酮剂量的加大 ,其表达下降 ;基质细胞 TGFβR 表达则随孕酮剂量的增加而增多 ,且 3组间差异显著 (P <0 .0 1)。 (3)孕 6 d,注射 2 mg组 ,表面上皮及基质细胞 TGFβR 表达增加 ,与对照组差异显著 (P <0 .0 1) ,而腺上皮 TGFβR 表达呈下降趋势。注射 4 m g组 ,表面上皮、腺上皮及基质表达变化趋势同孕 5 d。结论 :外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β 型受体表达有一定影响 ,即孕酮可显著提高基质 TGFβR 表达 ,但对腺上皮 TGFβR 的表达有下调作用 ;对表面上皮 TGFβR 的表达作用不定 ,2 mg使表面上皮 TGFβR 表达增多 ,4 mg使 TGFβR 表达降低

半胱胺对鸡十二指肠和脾脏中白细胞介素-2含量的影响

在口服 2种剂量生长抑素耗竭剂半胱胺 (CS- 组、CS- 组口服剂量分别为 2 0、80 mg/ kg)的基础上 ,应用新城疫弱毒疫苗对鸡进行消化道粘膜免疫 ,采用放射性免疫分析法测定了鸡十二指肠和脾脏中白细胞介素 - 2 (IL- 2 )的含量。结果表明 ,应用半胱胺首免后 3周 ,CS- 组十二指肠和脾脏中 IL - 2的含量比仅用新城疫弱毒疫苗免疫组显著增加 (P<0 .0 5 ) ;CS- 组十二指肠中 IL- 2含量比仅用新城疫弱毒疫苗免疫组极显著增加 (P<0 .0 1) ;首免后 4周 ,CS- 组脾脏中 IL- 2含量比仅用新城疫弱毒疫苗免疫组显著增加 (P<0 .0 5 ) ;在十二指肠 CS- 组和 CS- 组 IL- 2含量比仅用新城疫弱毒疫苗免疫组均显著增加 (P<0 .0 5 )。由此可推测 ,生长抑素可抑制十二指肠和脾中 IL- 2的释放。应用生长抑素耗竭剂半胱胺可以促进十二指肠粘膜和脾脏中 IL- 2的释放 ,增强机体的粘膜免疫功能

大鼠乳腺局部免疫的调节机制——泌乳期与静止期乳腺肥大细胞分布的比较

应用改良甲苯胺蓝染色法 (MTB)观察了大鼠泌乳期和静止期乳腺肥大细胞的分布、形态、数量变化规律 ,并用阿尔新蓝 -番红鉴别染色法 (AB- S)进行了细胞化学分型研究。结果 :AB- S染色显示 ,大鼠乳腺只存在黏膜型肥大细胞 ;无论是泌乳期还是静止期 ,乳腺肥大细胞大多分布于腺泡间和小叶间结缔组织中 ,细胞的形态各异 ,但细胞数量在静止期和泌乳期有显著差异 ,泌乳期的乳腺肥大细胞数量明显减少 (P<0 .0 1)。乳腺肥大细胞的动态变化 ,可能与乳腺泌乳期腺泡上皮的生长和静止期腺泡间结缔组织细胞增生等结构变化有关

利维爱(Livial)对去势雌兔动脉粥样硬化影响的病理学观察

以去势雌兔作为雌激素缺乏模型 ,研究了利维爱 (L ivial)对食饵性兔动脉粥样硬化的斑块及血管病理形态学变化的影响。将 30只 7～ 9月龄、体质量约 4 kg的新西兰大白兔随机分为 3组 :A组为去势后饲喂高胆固醇组 ,B组为假手术后饲喂高胆固醇组 ,C为去势后饲喂高胆固醇并补充利维爱组。饲养 12周后处死 ,测定胸主动脉 AS斑块的面积 ,在光镜和电镜下观察血管壁的病理组织学变化。结果 :假手术组和利维爱组硬化斑块面积均小于 A组 ,利维爱组斑块面积与 A、B组比较差异显著 ;假手术组和利维爱组血管的病理变化比 A组轻 ,利维爱组血管的形态学结构接近正常血管 ,病理变化最轻。由此认为 ,利维爱对防治动脉粥样硬化的形成和发展有较好的效果

中草药对蛋雏鸡生长性能和免疫功能的影响

研究了中草药女贞子、五味子、四君子汤和六味地黄丸 ,以及甘露寡糖和黄霉素对蛋雏鸡生长性能、甲状腺素分泌和免疫机能的影响。试验选用 2 94只 1日龄海兰褐健康蛋公雏 ,随机分为 7组 ,每组设 3个重复 ,每重复 14只。对照组饲喂基础日粮 ,试验组日粮分别为 :基础日粮 +1%中草药、基础日粮 +5 0 mg/kg甘露寡糖、基础日粮 +5 m g/kg黄霉素。结果表明 ,上述饲料添加剂对蛋雏鸡的生长性能和血浆 T3和 T4 的含量以及 T3/T4 均无不同影响 ;与对照组相比 ,试验所用 4种中草药均可显著提高血清抗新城疫抗体水平 ,而甘露寡糖与黄霉素作用不明显 ;与对照组相比 ,各试验组雏鸡脾淋巴细胞转化率均有所提高 ,其中女贞子组的转化率显著提高 ,表明本试验所用几种添加剂均有增强细胞免疫的作用

专家对禽流感疫苗不能快速应用感到担心

硒和维生素E在热应激猪自由基代谢中的作用

在平均温度为 (34.89± 5 .6 2 )℃的猪舍内 ,选择 10 0日龄长大二元杂交商品生长猪 (去势公猪 ) 4 0头 ,随机分为 4组 ,通过日粮添加不同水平的硒 (Se)和维生素 E(VE)作为对照组、低水平组、中水平组和高水平组 ,测定与自由基代谢有关的血清丙二醛 (malondialdehyde,MDA )含量、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione- peroxidase,GSH- Px)活性。结果表明 ,补充 Se和 VE 可降低 (P<0 .0 5 )或显著降低 (P<0 .0 1)血清MDA含量 ;升高 (P<0 .0 5 )或显著升高 (P<0 .0 1)血清 SOD和 GSH- Px活性 ,从而证明 Se和 VE可减少热应激猪体内自由基的数量 ,缓解猪热应激时的自由基损伤 ,提高猪抗热应激的能力

山羊孤雌胚胎的体外培养

系统地研究了培养液微滴的大小、培养液体系及血清浓度对山羊孤雌胚胎早期体外发育的影响。结果表明 ,培养液微滴以较大体积 (2 0 0～ 5 0 0 μL)的培养效果较好 ;在 3种培养液中 ,添加 10 %的 NGS对山羊孤雌胚胎的体外发育效果较好 ,囊胚率分别可达 6 2 .79% (81/ 12 9)、5 3.5 2 % (38/ 71)、13.6 4 % (12 / 88) ;m CR1aa组囊胚发育率和囊胚细胞数显著低于 SOFaa组和 CR1aa组 ,SOFaa组优于 CR1aa组 ,尽管 SOFaa组和 CR1aa组间无显著差异。在本试验条件下 ,以 SOFaa培养液 ,山羊孤雌胚胎体外培养 72 h时加入 10 %的 NGS,5 0 0 μL 微滴培养 ,其发育效果较好 ,囊胚率可达 6 2 .79%。

马尾藻类多糖对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响

就马尾藻类多糖对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响进行了探索。试验 1证明 ,体外培养时 ,成熟液添加马尾藻类多糖能促进卵丘细胞扩展 ,成熟培养 4 7～ 4 8h,添加 2 0 g/ L 马尾藻类多糖能提高核成熟率 (41.8% ) ,与对照组2 9.3%的核成熟率相比 ,二者差异显著 ;试验 2证明 ,进行化学联合激活时 ,添加 2 0 g/ L马尾藻类多糖 (未添加 L H)可获得 6 0 .4 %孤雌激活分裂率 ,显著高于对照组 4 2 .6 %的孤雌激活分裂率

乙醇激活对猪体外成熟卵母细胞发育的影响

探索了单独应用乙醇或者联合 6 -氨基嘌呤 (DMAP)、细胞松弛素 B(CB)、放线菌酮 (CHX)等化学物质对体外成熟 4 4 h猪卵母细胞激活的影响。结果如下 :分别用 0、5 %、8%、11%乙醇处理 5 min,或者在 8%乙醇条件下激活处理2、5、10 min的各组试验中 ,8%乙醇处理 5 min的卵裂率为 (6 .4 2± 4 .88) % ,高于其他各组 ,但均无囊胚发育 ;乙醇(8%、5 min)激活后 ,分别用 CB、CHX、DMAP、CB+CHX、CB+DMAP培养 6 h,结果 CB+DMAP的激活率、卵裂率和囊胚率最高 ,分别为 (70 .86± 3.75 ) %、(5 3.87± 5 .36 ) %、(15 .0 7± 5 .5 3) % ,与其他组相比 ,囊胚率差异显著 (P<0 .0 5 )

大剂量维生素A、K及其互作对AA肉鸡生产性能和凝血机能的影响

1周龄 AA肉鸡 16 0只 ,随机分为对照组、+Vit A组、+Vit K组、+Vit A+Vit K组 ,自由采食以玉米、豆饼为主组成的基础日粮 ,各组处理如下 :对照组喂基础日粮 ;+Vit A组喂基础日粮 +6 0 0 0 0 0 IU维生素 A/ kg日粮 ;+Vit K组喂基础日粮 +40 0 mg维生素 K/ kg日粮 ;+Vit A+Vit K组喂基础日粮 +6 0 0 0 0 0 IU维生素 A/ kg+40 0 mg维生素K/ kg日粮。通过对不同周龄肉鸡体质量、料重比和凝血机能等指标的测定 ,得到结果如下 :(1)大剂量维生素 A显著抑制肉鸡生长 ,增大料重比 ;大剂量维生素 K对料重比影响不显著 ,但有促进生长之趋势 ;二者互作抑制肉鸡生长 ,增大料重比的作用更加明显。(2 )大剂量维生素 A、K对凝血酶原时间无显著性影响 ,但二者互作却显著延长肉鸡凝血酶原时间 ;大剂量维生素 A显著降低凝血因子 的活性 ,大剂量维生素 K却明显升高凝血因子 的活性 ,二者互作时 ,凝血因子 的活性接近 +Vit A组 ,说明主要显示了维生素 A的作用

Nogo与中枢神经再生