自发性急性犬瘟热的原发性脱髓性脑病(英文)

为了进一步观察犬瘟热病毒引起的原发性脑损伤和包涵体形成的特点,调查脑组织的损伤与神经症状的关系,对10只急性犬瘟热病犬的脑组织进行了详细的病理学研究。为了仔细地观察病变,本试验按照解剖学关系将脑组织分成3个大部分和11个切面,即大脑(4个切面),脑干(5个切面)和小脑(2个切面)。组织切片经HE、LFB和免疫组织化学染色后进行检查,结果表明在大脑,脱髓呈弥漫性发生,程度较轻;脑干的周围或靠近第三脑室的白质脱髓较重;小脑在轻度或中度脱髓的基础上常出现严重的多发性脱髓灶。脱髓部呈空泡或海绵状,有少量胶质细胞存在,但无炎性反应。脱髓性病损是非对称性发生,对神经束没有特殊的亲和力。在脑室的室管膜细胞内发现有较多的嗜酸性胞浆或核内包涵体。用抗犬瘟热病毒抗体染色,带有包涵体的室管膜细胞呈现强阳性反应。部分锥体细胞,神经核细胞和浦氏细胞变性、溶解或胞浆深染,胞核浓缩。这种变化以小锥体神经细胞表现得最为明显。根据此研究结果,作者认为由犬瘟热病毒引起的原发性脑组织损伤是一种脱髓性脑病,而不是脑炎变化;位于室管膜细胞内的包涵体对于脑组织犬瘟热的确诊具有重要的作用;由于犬瘟热病毒引起神经细胞的损伤是非特异性的,对脑组织的侵害是非对称性的,对神经束的作用无特殊的亲和力,所?

禽副粘病毒型鹅源分离株YG₉₇和鸡源分离株Y₉₈在体外培养细胞中的形态发生

用禽副粘病毒型鹅源分离株YG97和鸡源分离株Y98的鸡胚尿囊液毒感染原代CEF,制作超薄切片,运用透射电镜观察,结果显示,2株病毒引起CEF细胞器肿胀等轻微的超微结构改变,但不引起细胞的皱缩和裂解。结果表明鹅源YG97分离株和鸡源Y98分离株与NDV强毒株F48E8在致细胞病变特性上的差异。透射电镜观察结果还表明鹅源分离株YG97、鸡源分离株Y98在培养细胞上的形态发生与鸡新城疫病毒F48E8强毒株相似,是由细胞核复制的“纤丝样”结构出核孔在细胞浆内发育而成的。

传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的真核表达及免疫原性检测

为了探讨S1基因在DNA免疫防制传染性支气管炎(IB)中的免疫原性,将IBVZ株S1基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,构建了真核表达质粒pcDNAIBVZS。在脂质体作用下将pcDNAIBVZS转染CEF细胞,用间接免疫荧光试验检测,在CEF细胞中可见有大量S1蛋白表达。将重组质粒以100μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,经间接ELISA试验检测二免前后的血清,结果显示,pcDNAIBVZS基因可在SPF鸡体内诱导相应抗体的产生,具有特定的免疫原性。

牛源致病性大肠杆菌耐氟苯尼考floR基因的克隆与序列分析

对临床分离的12株牛腹泻大肠杆菌进行了血清型鉴定,毒力因子分析和MICs值测定。利用PCR方法对上述致病性大肠杆菌进行了floR基因的检测,其中5株floR阳性。对其中的3株大肠杆菌的耐氟苯尼考floR基因进行了克隆和序列分析。结果表明,克隆的floR基因所推倒的氨基酸序列与其他12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与已报道的floR序列间仅存在1个或2个氨基酸替代。

肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制

从分离鉴定的49株大肠杆菌中筛选出5株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型的大肠杆菌作为制苗菌株,经培养灭活后,以蜂胶为佐剂,研制出的肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶疫苗,使用安全,免疫效果好。用该苗免疫后150d的保护率为100%,无不良反应。该苗4℃下保存1年不失效。田间试验结果表明,该苗性能好,免疫后对肉仔鸡、肉种鸡的生产性能无不良影响,鸡群大肠杆菌病的死亡率明显下降。

魏氏梭菌毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律

从山东省莱芜、泰安、潍坊等3个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体内分离到3株魏氏梭菌,鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1～23周血清中抗毒素(Ab)消长规律研究。结果表明,魏氏梭菌外毒素用0.3%甲醛32h能够彻底灭活,并最大可能地保持其抗原性;制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用,安全可靠;用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL/只,免疫保护效果可靠;采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗免疫接种家兔后第2周血清抗毒素效价迅速升高,到第4周达最高峰,分别为6.6log2和7.125log2,较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降,至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4.0log2和3.4log2以上,所以,该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。

与HEp-2细胞粘附现象相关的大肠杆菌O157基因的发现

将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同质量浓度的萘啶酮酸(nalidixicacid,NA)的麦康凯(MacConkey)琼脂平板上,获得对NA有抗性的菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir(携带转座子TnphoA)和抗萘啶酮酸的97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,经过约200个接合试验,有503个菌株在含有Km、NA、XP的LB琼脂平板上形成蓝色菌落,说明在这些菌株中形成了phoA融合基因,并能表达phoA基因。在这503个Kmr,NAr变异体中,有6株完全失去了对HEp-2细胞的局灶型粘附(localadherence,LA)现象。对构建的6株大肠杆菌O157TnphoA变异体,克隆TnphoA及其两侧的大肠杆菌O157DNA序列,用根据TnphoA融合接点处的phoA的DNA序列设计合成的寡核苷酸引物,对各克隆中TnphoA上游的大肠杆菌O157的DNA片段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异体的TnphoA插入到已知的大肠杆菌O157紧密素基因eae中,有2个变异体的TnphoA分别插入到eae之外的核苷酸序列中,分别插入到一个功能未知的菌毛分子伴侣基因和一个功能未知的Z4182基因的上游。这项研究表明,除紧密素外,大肠杆菌O157尚有其他因子参与对真核细胞的粘附。

HBV/HAV复合抗原基因在CHO细胞中的表达

为探讨HBV/HAV复合疫苗的可行性,利用DNA重组技术将HBsAg与HAW复合多表位抗原基因VPX进行融合,插入到真核表达质粒pVAX1多克隆位点,构建成核酸表达疫苗pVAX1/SVPX,将其转染CHO细胞。转染细胞培养48h后,进行RT-PCR、Western-blot、ELISA分析,结果表明HBV/HAV复合抗原基因SVPX能够在CHO细胞内转录、表达,融合蛋白具有HBV和HAV抗原的特性。

生物牛黄中间体的抗病毒作用及对家兔血液流变学指标的影响

运用比较药理学方法研究了生物牛黄中间体与天然牛黄、人工牛黄在抗病毒及对家兔血液流变学指标影响方面的不同。结果显示,生物牛黄中间体以25、50、100mg/kg体质量及人工牛黄50mg/kg体质量灌胃给药的大鼠含药血清,灭活后,在10倍稀释的情况下,在鸡胚成纤维细胞上使新城疫系疫苗毒的TCID50升高1个滴度;生理盐水组、天然牛黄50mg/kg体质量组10倍稀释大鼠含药血清,灭活后,在鸡胚成纤维细胞上使新城疫系疫苗毒的TCID50降低1.5个滴度。生物牛黄中间体以25、50、100mg/kg体质量灌胃给药,可明显降低高分子右旋糖酐所致“血瘀”家兔的血沉值、血沉方程K值和红细胞聚集指数;天然牛黄50mg/kg体质量组对血沉值和血沉方程K值具有显著降低作用;人工牛黄50mg/kg体质量组对血沉值具有显著降低作用。

蛋白发酵产物外啡肽的构成与活性研究

利用人工瘤胃装置,选用经定向培育的瘤胃细菌体外发酵面筋蛋白,并适时提取发酵液进行了植物外啡肽构成与活性的研究。结果显示体外发酵11h,外啡肽的生物学活性最强,肽浓度也相对较高。以超滤结合纸层析法检测外啡肽的构成,所显示的色带表明为10～27肽。人工瘤胃装置的发酵参数pH6.412±0.207、总脱氢酶活性(TDHA)(1.037±0.045)U/mL,D600(细胞菌生长量)1.410±0.065,氨氮(NH3-N)(1318.36±140.68)mg/L,微生物总蛋白(MCP)(6.213±1.014)g/L。采用所制备的植物外啡肽对AA肉鸡肌肉注射不同剂量,同时注射新城疫疫苗,结果显示,试验组新城疫血凝抑制抗体滴度显著性高于对照组,7～35日龄的体增重也显著高于对照组,血清中生长激素(GH)、胰岛素(Ins)、三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲腺原氨酸(T4)的浓度也显著高于对照组。每周每公斤体质量2mL的外啡肽剂量肌肉注射效果最好。

猪生长激素单克隆抗体的制备及其特性

选取7只BALB/c小鼠,以猪生长激素为抗原,采用常用的免疫方法进行免疫,通过细胞融合技术,经筛选克隆,获得了3株分泌猪生长激素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A3、1A5、1B5。亚类鉴定,1A3为IgG1,1A5和1B5为IgG2a。腹水效价依次为1∶3.2×105、1∶3.2×104、1∶6.4×104。亲和力常数依次为1.0×109M-1、0.5×107-1和2.0×108-1。

Enterocin A结构基因和免疫基因的克隆及序列特征分析

采用PCR技术从屎肠球菌的染色体DNA上扩增到1条529bp的DNA片段entAIc,以pGEM-T为载体,将该基因片段克隆到大肠杆菌中,对阳性重组质粒pGAI测序。序列分析结果表明片段entAIc含有2个ORF,EnterocinA结构基因entA和免疫基因entI,2个基因紧密相连。核苷酸序列分析显示,不同菌株来源的entA和entI具有较高的同源性,分别达到99.87%和99.76%。氨基酸序列分析显示不同菌株来源的EnterocinA前体完全相同,免疫蛋白仅有1个氨基酸差异。

《中国兽医学报》入选2004年度《化学文摘》(CA)千名表

犬QFM麻醉的综合监测

QFM是一种自行研制的新型犬用复合麻醉制剂。为了验证QFM的麻醉效果及对生理功能的影响,以0.15～0.2mL/kg剂量对7只犬进行麻醉,进行了单纯麻醉监测和QFM麻醉监测期间手术验证试验。结果证明QFM无论单纯进行犬的麻醉,还是在麻醉过程中进行手术处置,都具有较为确实的麻醉效果,且镇静、镇痛、肌松效果均衡,诱导及复苏迅速平稳,无流涎和呕吐等负反应发生,对机体的正常生理功能及各项生理指标影响轻微,血氧饱合始终维持在90%以上,可为犬的临床常规手术提供良好的手术条件。但手术刺激对其药理作用有轻微的拮抗作用。

硼对鸡组织器官硼含量及其健康状况的影响

选择1日龄固始鸡300只,随机分成4组,分别在饮水中添加硼(以硼酸作为硼源)0、100、200、400mg/L,研究了硼对鸡组织器官硼含量及其健康状况的影响。观察鸡的临床表现,并于7、14、21、28、35、42日龄时,每组随机抽取10只鸡屠宰,采集其肌肉、骨、脑、心、肝、脾和肾组织,用姜黄素比色法测定其硼含量。结果显示,各组鸡的组织器官硼含量随饮水中硼含量的增加而增加。饮水硼含量越高,组织器官硼的沉积速度越快。饮水硼100mg/L,对雏鸡的生长和健康无害;饮水硼200mg/L,使雏鸡食欲受到抑制,采食量减少;饮水硼400mg/L,雏鸡出现精神不振、食欲降低、营养不良、气囊臌气和健康状况恶化等。由此说明,高硼对鸡的健康不利。

大熊猫细管冻精制备程序的建立与应用

筛选了不同的冷冻稀释液(TEST,蔗糖-卵黄-甘油液)、不同的冷冻剂型(颗粒法,细管法)、不同甘油终浓度、不同的解冻液(M199,Ham′sF10)等条件,在此基础上,建立了大熊猫细管冻精制备程序。与传统颗粒冻精制备技术相比,本试验极显著地提高了大熊猫冷冻精液质量,冷冻精液活力从35.45%提高到57.88%(P<0.01);顶体完整率从42.25%提高到78.24%(P<0.01)。从1999年至2002年共有14只雌性大熊猫在共计36只次发情配种中采用了细管冻精,较1992～1998年采用传统颗粒冻精的总受胎率提高了11.2个百分点(达到55.6%),其中经产健康适龄雌性大熊猫的受胎率提高了27.3个百分点(达到83.3%),处女大熊猫的受胎率提高了8.8个百分点(达到58.8%)。

体外培养牛腔前卵泡卵母细胞的超微结构

直径约100μm牛腔前卵泡在无血清下体外培养15d。超微结构研究显示,培养前腔前卵泡卵母细胞微绒毛短小,分布均匀。胞质内细胞器致密而均匀,线粒体多为长或圆形,嵴较少,高尔基体、脂滴稀少,未见有皮质颗粒出现。培养6d时,微绒毛略变粗长,但数量减少。胞质内细胞器,由近核分布向胞质中央区转移,线粒体形态丰富,基质电子密度极高。培养15d腔前卵泡卵母细胞微绒毛增多,变长,斜向或垂直插入已经形成的透明带中。线粒体增多,大小不等,形态各异,胞质中区有溶酶体样物质及零星的皮质颗粒出现。电镜研究表明,体外培养与体内正常发育腔前卵泡卵母细胞超微结构变化规律基本相似。

动物RNA病毒载体对外源基因的表达