• O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达

    郑敏,金宁一,鲁会军,韩松,金扩世,李昌

    首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,转化大肠杆菌BL 21(DE 3)进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,VP 1O基因在大肠杆菌中获得表达。W estern b lotting检测证实表达的VP 1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化,获得了较高纯度的VP 1O蛋白。

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  • 绿色荧光蛋白基因与猪瘟兔化弱毒疫苗株E2基因在杆状病毒中的融合表达

    范学政,王琴,陈振海,王在时,赵耘,宁宜宝

    为了研究猪瘟病毒E 2糖蛋白的立体结构及生物学特性,将增强型荧光蛋白基因(EGFP)和猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E 2基因经PCR扩增后克隆至pB lueB acH is2A质粒,与杆状病毒DNA共转染后经PCR鉴定获得了含有EGFP和HCLV E 2融合基因(GFPTE 2)的重组杆状病毒rBACTE 2-339,并将其感染sf9细胞后在荧光显微镜下观察到了亮绿色荧光,说明融合基因已初步表达。

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  • 抗猪圆环病毒Ⅲ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

    陈美玲,陈焕春,黄红亮,琚春梅,宋云峰

    利用本室构建的质粒PGEX-ORF 2转化BL 21(DE3),经IPTG诱导表达,得到PCV 2-ORF 2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原,采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合,经间接酶联免疫吸附试验(EL ISA)筛选,获得了2株抗PCV 2-ORF 2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3B 2F 4和9C 3D 2,其细胞培养上清效价分别为1∶1 024、1∶512,小鼠腹水效价分别为1∶204 800、1∶102 400。EL ISA结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2仅与融合表达的PCV 2-ORF 2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应,说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2能与PCV 2发生反应,而不与PCV 1发生交叉反应,表明所获得的2株单抗是PCV 2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV 2-ORF 2基因的功能,及建立准确快速的鉴别PCV 1和PCV 2的诊断方法提供了强有力的手段。

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  • 禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

    肖运才,毕丁仁,李自力,胡思顺,许青荣,石德时,李永安,吴仁蔚

    将成熟的禽流感病毒(A IV)夹心EL ISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1~11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明,在-10℃下能保存6个月,而且特异性强、敏感性高、重复性好,操作简单、方便,能快速、准确地检测出样品中是否带有A IV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒,于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用,取得了良好的效果。

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  • 番鸭源新城疫病毒F蛋白基因的克隆及序列分析

    程龙飞,黄瑜,傅光华,李文杨,施少华,彭春香

    利用RT-PCR技术对番鸭源新城疫病毒FP 1/02株的F蛋白基因进行分段扩增、定向克隆到pM D 18-T S im p leV ector质粒载体,然后测定其核苷酸序列,拼接出F基因全序列,并推导出其相应的氨基酸序列。FP 1/02株的F蛋白基因全长1 690 bp,编码553个氨基酸,其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株特有的氨基酸序列结构特征。核苷酸序列分析结果表明,FP 1/02株与其他不同源新城疫病毒毒株之间的核苷酸序列同源性为87.2%~93.3%。

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  • 鸡感染J亚群禽白血病病毒的免疫抑制机理

    商营利,刘思当,丁宝君,肖一红,成子强,孙先明,褚艳丽

    通过人工接种建立了雏鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后发生免疫抑制的病理模型,对免疫抑制的机理进行了初步研究。结果表明:ALV-J感染早期可诱导胸腺、法氏囊的淋巴细胞凋亡,这种早期的淋巴细胞凋亡是胸腺和法氏囊萎缩的重要原因之一。病理组织学动态观察表明,ALV-J主要引起骨髓的髓系细胞灶状或弥漫性增生,病变导致骨髓机能受损,使机体免疫机能下降,是引起免疫抑制的根本原因。病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,这种病变的发生除与骨髓的病变及淋巴细胞凋亡有关外,还与中后期淋巴细胞的坏死有关,从而导致严重的免疫抑制。ALV-J感染可引起免疫器官及部分内脏器官中嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生,这可以作为病毒感染早期的病理诊断指标。

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  • IBDV-VP2基因高变区同义密码子在蛋鸡和乌鸡中的偏嗜性

    李银聚,张春杰,程相朝,吴庭才,王臣,陈溥言

    以RT-PCR方法对河南省洛阳地区2000~2002年分别从IBD发病蛋鸡和乌鸡鸡群中分离到的5株和4株IB-DV进行了VP 2高变区基因的扩增、克隆和测序。核苷酸和氨基酸序列分析发现,9株IBDV中有4处氨基酸发生了变化,即320位的G ln/H is,349位的V a l/Ile,375位的P ro/Ser和381位的Lys/A rg。这些氨基酸的变化,不符合变异株的特征。核苷酸序列变化主要表现在同义密码子的置换。分别将分离于蛋鸡和乌鸡的各3个毒株交叉感染乌鸡和蛋鸡鸡胚,盲传7代后取尿囊腔绒毛膜分离病毒进行VP 2基因的序列分析。结果表明,IBDV VP 2基因高变区某些氨基酸同义密码子在蛋鸡和乌鸡细胞中的选择上有偏嗜性。主要表现在第1亲水区220位的T yr(TAC/TAT);224、360、393位的G ly(GGA/GGG);260及420位的T hr(ACC/ACT,ACA/ACT);271位的V a l(GTA/GTG);279位的A sp(GAC/GAT);305位的Ile(ATC/ATA)及328位的Ser(TCA/TCG)。病毒在不同品种宿主中对同义密码子使用的偏嗜性,可能是导致蛋鸡和乌鸡对IBDV易感性不同的一个重要原因,也可能是病毒变异及新毒株产生的一条重要途径。

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  • OE-PCR法扩增获得犬瘟热病毒缺失疏水区的融合蛋白基因片段

    乌仁高娃,杨敬,陈振文

    根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的F蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失。

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  • 猪传染性胸膜肺炎快速PCR诊断

    彭小华,何孔旺,陆承平

    根据G enB ank中猪胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus p leurop eum on iae,A pp)外膜蛋白(om l)基因序列,设计合成1对特异性引物,进行PCR检测。对A pp 1、2、3、4、5a、5b、6、7、9型参考株均扩增出大小为1 010 bp左右的片段,而对马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、产肠毒素大肠杆菌等均未扩增出任何条带。用相应的限制性内切酶分别酶切PCR扩增产物,均得到与预期一致的结果;PCR检测的敏感度达10 CFU。将建立的PCR方法初步应用于6头人工发病猪的鼻拭子和病死猪的肺组织,均得到较好的检测结果。

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  • 克氏原螯虾口服疫苗免疫对白斑综合征病毒人工感染的保护作用

    许梓荣,魏克强

    利用家蚕-杆状病毒表达系统在蚕蛹体内表达的重组病毒囊膜蛋白rV p28制成的疫苗,口服免疫克氏原螯虾,观察了其对白斑综合征病毒人工感染的保护作用。对试验虾分别进行了2%rV p28、2%普通蚕蛹液(阳性对照)和普通饲料(阴性对照)等3个处理,持续口服免疫75 d。免疫35 d后口服攻毒,20 d内rV p28组的累积死亡率为36.67%,与阴性对照相比差异显著(P<0.05),免疫保护率(PRP)达59.26%;注射攻毒后20 d内,rV p28组的PRP为49.99%。免疫后55 d对存活虾再口服攻毒,20 d内rV p28组的累积死亡率为36.84%,与阴性对照相比差异显著(P<0.05),PRP为63.16%;2次注射攻毒后,rV p28组的PRP为31.25%。结果表明,重组囊膜蛋白rV p28免疫后,对口服感染具有显著的保护作用,对注射感染有一定的保护作用。

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  • 鸡志贺氏菌感染的血清流行病学调查

    许兰菊,王川庆,马水锋,薛双,赵原亮

    利用研制的鸡志贺氏菌平板凝集抗原及微量平板凝集试验,对我国河南、山东等不同地区35家鸡场具有拉稀病史的670只鸡血清灭活样品进行了检测。通过检测对鸡志贺氏菌病的发病率、流行地区、品种、日龄及其混合感染等进行血清流行病学调查。结果表明:我国部分地区存在有鸡志贺氏菌感染,其血清抗体阳性率较高,达28.3%(155/547)~33.7%(226/670),已远远超过鸡白痢鸡伤寒(1.4%)。目前该病在我国部分地区已广泛流行,不同品种和日龄的鸡均可发生,但血清阳性率存在显著差异,其中固始鸡和罗曼鸡血清阳性率高于其他品种,幼雏血清阳性率高于成鸡。鲍氏血清型阳性率高于痢疾型,并以二者混合感染为主,而该病与鸡白痢鸡伤寒的混合感染很少发生。

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  • 枯草杆菌多重耐药基因bmr的克隆及原核表达

    宋战昀,韩文瑜,雷连成,冯新

    根据B enB ank上已公布的多重耐药基因bm r的编码序列设计1对引物,以枯草杆菌基因组为模板,扩增出1 170bp的DNA片段,将所得片段与pM D-18T载体连接,转化到DH5α大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其扩增片段测序结果与文献报道序列同源性达98.81%。将该片段定向克隆到pET-28a(+)表达质粒中,提取质粒转化到BL 21(DE 3)中,经1 mm o l/L IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出bm r基因的表达产物。

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  • 几种拟地新线虫种间及种内线粒体lsrRNA及cox1基因的多态性

    曹湛,翁亚彪,林瑞庆,李明伟,邹丰才,何芳,朱兴全

    对来自世界各地的拟地新线虫共6个种的线粒体基因lsrRN A及cox 1序列进行了PCR-SSCP和序列分析。结果显示,lsrRN A基因序列在拟地新线虫种内、种间的变异都比较小,不能提供准确的遗传标记。但cox 1基因序列种间变异为0.5%~12.2%,比种内变异(1%~1.7%)大,能提供准确的遗传标记,可用于拟地新线虫姊妹种的鉴定。这些发现有助于拟地新线虫的生活史、传播途径、流行病学、种群遗传学的研究和其相关疾病的诊断。

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  • 成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备

    喻华英,高丰,王景林

    根据G enB ank中Ⅰ型痢疾志贺菌ShT-A基因的核苷酸序列,设计合成了2对引物,分别进行PCR扩增,将PCR产物分别与pGEM-T连接构建了克隆质粒pGEM-TA1和pGEM-TA2。用B amHⅠ和K pnⅠ以及B amHⅠ和X hoⅠ双酶切pGEM-TA1和pGEM-TA2,均得到大小为895 bp的ShT-A基因片段,分别与pQE 30和pET 21a(+)原核重组表达载体连接,构建pQE 30-A2和pET-21A1原核重组表达质粒。工程菌M 15/pQE 30-A 2和BL-21/pET-21A 1经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,均没有目的蛋白表达。这表明全长ShT-A可能对E.coli细胞产生毒性作用。DNA s is软件分析ShT-A基因序列,发现在513 bp处有H indⅢ位点,以ShT-A上游引物的B amHⅠ和H indⅢ从pGEM-TA1切出1个513 bp的截短片段,重新插入表达载体pQE 30,经PCR和双酶切鉴定正确后,得到pQE 30-A513重组表达质粒,转化E.coliM 15经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 000处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513相对分子质量相符。经薄层扫描分析,该截短片段的表达量约占菌体总蛋白的37.4%,主要为包涵体形式。免疫印迹结果表明,表达的重组ShT-A513蛋白同抗ShT-A513鼠多抗有特异性结合。

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  • 冀东地区猪链球菌病病原的特性

    马增军,芮萍,陈翠珍,吴建华,崔学文,史秋梅,宋芝

    对2003-2004年从河北省秦皇岛、唐山分离获得的48株猪源链球菌,进行了生物学特性鉴定及血清分群。其形态、染色及培养特性基本符合链球菌特征,大多具有α或β溶血。用国际通用的链球菌A-G乳胶分型诊断液检测48株分离菌,结果表明,猪源链球菌血清群以兰氏D群为主,占47.9%(23/48),其次为C群,占37.5%(18/48),A群、B群各1株,其他5株未检测出。致病性试验表明,供试菌株均能使小鼠、家兔和猪感染发病甚至死亡。试验提示,冀东地区猪链球菌病的病原以兰氏D群为主,在防治方面应引起重视。

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  • 猪Ghrelin基因的克隆及原核表达

    杨连玉,杨文艳,赵颖彩,钱剑,王哲

    从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪的G hre lin mRNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了282 bp的片段。将该片段克隆于pM D-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为G hre lin cD-NA。从阳性克隆中提取质粒,经N heⅠ和X hoⅠ双酶切,回收282 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒并再次转化到BL 21(DE 3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出猪G hre lin基因的表达。

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  • 绍兴、高邮2品种鸭下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA与血清中NPY及E_2浓度变化的比较

    倪迎冬,周玉传,王亚菊,卢立志,赵茹茜

    分别于30、60、90、120和150日龄随机选取绍兴母鸭和高邮母鸭各15羽,宰杀后采样,采用相对定量RT-PCR及R IA法检测了下丘脑G nRH-ⅠmRNA和血清中NPY、E2水平的发育性变化,并进行了品种间比较。结果表明:30~120日龄期间,绍兴母鸭下丘脑G nRH-ⅠmRNA含量呈逐渐上升趋势,120日龄达峰值,且显著高于30和60日龄(P<0.05);150日龄稍有下降,但仍维持较高水平。整个试验期间,尽管高邮母鸭下丘脑G nRH-ⅠmRNA的基础表达水平较高,但未见明显的日龄间差异(P>0.05)。R IA结果显示:30日龄绍兴母鸭血清中NPY浓度较高,60日龄显著降低(P<0.01),并维持在此低水平至120日龄,但在150日龄时极显著升高(P<0.01)。高邮母鸭在30~90日龄期间,血清中NPY浓度呈逐渐下降趋势,与绍兴母鸭血清中NPY浓度的变化模式相似;120日龄时显著升高,但在150日龄时极显著下降(P<0.01),表现出与绍兴母鸭不同的变化模式。2品种鸭血清E2浓度变化趋势相同,30~120日龄处于低水平状态,150日龄显著增加,150日龄绍兴母鸭血清E2浓度极显著升高且极显著高于同日龄高邮母鸭(P<0.01)。结果提示:(1)绍兴母鸭下丘脑G nRH-Ⅰ基因表达的上调可能是其性成熟启动早的关键因素;(2)NPY可能以性激素依赖性方式促进鸭性成熟的启动。

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  • 实时荧光定量PCR检测PrP基因表达标准品质粒和标准曲线的构建

    宁章勇,赵德明,杨建民,崔亚利,孟丽平,吴长德,秦秀慧,马李颖

    对金黄地鼠P rP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明P rP基因保守区段已经成功克隆。将107~102拷贝/反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,10次重复C t值平均分别为17.50±0.5、21.38±0.2、25.29±0.7、29.12±0.7、31.34±0.4、33.89±0.1,系统自动分析软件显示C t值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.998。对动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,该标准曲线的灵敏度为102拷贝/反应。荧光PCR P rP基因表达检测标准品质粒和标准曲线的建立,为检测P rP基因的组织特异性表达和动物传染性海绵状脑病发生的分子机理奠定了基础。

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  • 猪CD4分子的全长cDNA克隆与序列分析

    王建华,杨汉春,郭鑫,陈艳红,查振林

    CD 4分子为动物辅助性T细胞(TH)和部分胸腺细胞的共受体与信号传导分子,参与TCR介导的TH细胞活化和胸腺细胞分化过程。本研究应用RT-PCR和RACE技术从猪胸腺细胞总RNA中扩增克隆了猪CD 4全长cDNA序列,并进行了序列特性分析。序列分析结果表明,在猪胸腺细胞和外周血淋巴细胞中存在2种方式剪接的CD 4 mRNA转录本,其中一种mRNA转录本缺失编码40个氨基酸残基的120 n t序列,提示该转录本可能编码猪分泌型CD 4分子;猪CD 4全长cDNA序列为2 715 n t,其中5′非编码区159 n t,3′非编码区1 183 n t,1 374 n t的开放阅读框编码457个氨基酸的猪CD 4前体蛋白(含4个糖基化位点);猪CD 4分子的7个Cys残基(Cys43、Cys122、Cys327、Cys418、Cys421、Cys444和Cys446)和2个Ser残基(Ser432和Ser439)在动物种间保守;在猪CD 4分子胞浆区,存在高度保守的S rc家族蛋白酪氨酸激酶p56lck识别位点KKTCQC和内化相关双亮氨酸基序。推导氨基酸序列分析结果显示,猪与人、兔、猫、狗和鼠CD 4蛋白的氨基酸同源性分别为56.0%,54.5%,56.9%,56.5%和44.9%。

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  • 金黄色葡萄球菌gyrA、gyrB、grlA、grlB和norA基因突变与环丙沙星耐药性的关系

    闭兴明,李乾学,韩春田,郭建顺,周学章,于录,曾凡勤

    采用药敏纸片法测定了临床分离的160株金黄色葡萄球菌对14种抗菌药物的耐药性,同时进行了M RSA的检测,并采用琼脂稀释法测定纸片法筛选出的45株金黄色葡萄球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度(M IC)。根据金黄色葡萄球菌gy rA、gy rB、g rlA、g rlB和norA基因的核苷酸序列设计引物,以筛选出的45株金黄色葡萄球菌染色体DNA为模板,对gy rA、gy rB、g rlA、g rlB和norA基因片段进行PCR扩增,回收PCR产物,并与pM D 18-T载体连接,转化DH 5α感受态大肠杆菌,提取质粒并测序,进一步分析考查金黄色葡萄球菌gy rA、gy rB、g rlA、g rlB和norA基因及其启动子区突变与环丙沙星耐药性的关系。结果表明,g rlA中的2个突变(位于80和84密码子)及gy rA中的2个突变(位于84和88密码子)与环丙沙星耐药性明显相关。

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  • 细胞外高钙对鸡肾小管上皮细胞活力和NO产生的影响

    郭小权,黄克和,陈甫,骆建兵

    为探讨一氧化氮(NO)在高钙致鸡痛风中的作用,利用已建立的鸡原代肾小管上皮细胞的体外研究模型,经不同浓度的钙进行处理,通过M TT比色法观察了高钙对细胞活性的影响;采用硝酸还原酶法测定了不同浓度高钙处理原代肾小管上皮细胞后培养上清液中亚硝酸根/硝酸根(NO2-/NO3-)的含量(NO的静态氧化形式)。结果表明,分别用4.0 mm o l/L(试验组Ⅰ),8.0 mm o l/L(试验组Ⅱ),12.0 mm o l/L(试验组Ⅲ),16.0 mm o l/L(试验组Ⅳ)C a2+处理细胞,各时段组的细胞活性与对照组相比均显著降低(P<0.01),且细胞外钙浓度越高,细胞活性降低越明显。高钙处理细胞24 h后,各组培养液中NO的含量较对照组升高不显著;48 h后,试验Ⅳ组的NO比对照组显著升高;72 h后,各试验组与对照组相比NO的含量均显著升高。这些结果说明,细胞外高钙能够直接损害肾小管上皮细胞,而NO可能在肾小管上皮细胞的损害中起一定的作用。

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  • 鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株感染鸭胚成纤维细胞的超微结构观察

    郭宇飞,程安春,汪铭书,周伟光,文明,贾仁勇,袁桂萍,徐超,韩晓英,廖永洪

    通过超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态结构进行了研究。结果发现,DEV CH强毒株病毒核酸呈圆形颗粒状,直径35~45 nm,在胞核内常集中分布;病毒核衣壳呈圆形,直径90~100 nm,在胞核和胞浆内都有分布;DEV核衣壳可根据所含核酸形态的差异分为空心核衣壳、内壁附有颗粒型核衣壳、同心圆形核衣壳和实心核衣壳;成熟的病毒粒子具有囊膜和皮层结构,呈圆形,直径150~300 nm,存在于胞浆空泡内;DEV可在DEF中分别形成胞浆内和胞核内包涵体结构;伴随子代病毒在细胞内的出现,胞浆内还出现豆荚状、马蹄形、半圆形、圆形、同心圆形等与病毒发生有关的电子致密结构。

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  • 新型鸭肝炎病毒感染雏鸭血液生化指标的动态变化

    胡薛英,蔡双双,谷长勤,程国富,苏敬良,佘锐萍

    用新型鸭肝炎病毒人工感染9日龄健康樱桃谷雏鸭,对感染雏鸭的临床症状、病理变化进行观察,并测定了感染雏鸭在接种后12、24、48、96、168 h和14 d时血糖、谷草转氨酶、谷丙转氨酶等13项血液生化指标。结果表明:血清葡萄糖含量(G lu)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)均降低,仅总蛋白在接毒后24 h有一过性升高;血清谷草转氨酶(A ST/GOT)、谷丙转氨酶(ALT/GPT)的活性升高;胆碱酯酶(CHE)仅在接毒后12 h明显升高。碱性磷酸酶(ALP)在接毒后12、24和96 h表现出明显变化,其中接毒后12 h和96 h呈降低状态,接毒后24 h升高。血清尿酸(UA)的浓度在接毒后168 h降至最低值,以后便恢复正常。血清肌酐(CRE)的含量在接毒后12 h降低,随后在24 h升高,其他时间无变化。血清钙(C a)、磷(P)变化无明显规律。血清α-淀粉酶(-αAm y lase)活性在整个试验期间无明显变化。说明新型鸭肝炎病毒感染雏鸭血清葡萄糖、总蛋白、白蛋白含量和谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性的变化规律与患1型鸭肝炎雏鸭的变化规律相一致。

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  • 斑点叉尾鮰疑似疱疹病毒感染的病理形态学观察

    耿毅,汪开毓

    对四川省一些养殖场斑点叉尾鱼回大规模死亡的病鱼组织进行了光镜和电镜观察,在其肾和肝组织的细胞中发现一种圆形或椭圆形病毒颗粒,有囊膜的病毒颗粒存在于胞浆中,直径150~200 nm,无囊膜的病毒颗粒既存在于胞浆中,也存在于胞核中,直径为80~110 nm,同时在细胞核内可见无病毒核心的空衣壳,根据其形态特征初步确定为一种疱疹病毒。病鱼主要表现为鳍条基部和皮肤(特别是腹部和尾柄)充血、出血,腹部膨大,眼球突出,鳃发白,腹腔内充有淡黄色或淡红色的腹水,胃肠道扩张,其内充满大量淡黄色的粘液,肝、脾和肾肿大。病理组织学变化主要为全身组织器官广泛性水肿、出血、变性、坏死和炎症细胞浸润,特别是肾、肝、胃肠道、脾和脑的损伤较为严重。肾间质水肿,造血组织坏死,巨噬细胞和中性粒细胞浸润,肾小管上皮细胞空泡变性和坏死;肝水肿,狄氏间隙增宽,肝细胞空泡变性及坏死;胃肠道粘膜上皮变性、坏死,脱落,固有膜、粘膜下层水肿,淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞浸润;脾淤血,出血,淋巴细胞减少,大量巨噬细胞和中性粒细胞浸润;脑水肿,神经细胞肿胀,甚至坏死固缩。超微结构上,被病毒感染的细胞发生明显的病变,线粒体肿胀,嵴断裂,溶解,粗面内质网扩张,核糖体颗粒脱落,细胞核体积增大,染色质浓缩,边集。

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  • 恩诺沙星免疫抗原与检测抗原的制备及鉴定

    林本夫,张乃生,杨正涛,原丽红,郭昌明

    采用N-羟基琥珀酰亚胺法将恩诺沙星(Enro)半抗原与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)相偶联,制备出了抗En-ro单克隆抗体的免疫抗原Enro-BSA。同样的方法,将Enro与卵清白蛋白(OVA)相偶联制备了抗Enro单克隆抗体的检测抗原Enro-OVA。紫外扫描光谱及动物免疫试验结果表明,其偶联成功。

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  • 3种药物对河北秦皇岛鸡球虫分离株的疗效试验

    李佩国,李蕴玉,张文香,付志新,张香斋,陈丽凤,张艳英

    85只海兰褐蛋公雏随机均分为5组,每组17只,于14日龄,除白对照组外,每只鸡接种1.2×105个河北秦皇岛柔嫩艾美耳球虫卵囊,同时选择球敌(0.2 mL/L)、力克球(0.5 g/L)和氨丙啉(0.6 g/L)3种常用抗球虫药,通过饮水给药的方式,观察了其对球虫的疗效,试验期为9 d。结果表明,球敌和氨丙啉的抗球虫指数(AC I)分别为186.63和181.62,属高效抗球虫药,其中球敌促生长作用显著,整个试验期内的增重分别比红对照组、白对照组、力克球组和氨丙啉组提高65.16%(P<0.01)、6.63%(P>0.05)、28.59%(P<0.01)和13.31%(P>0.05)。而氨丙啉抑制卵囊繁殖和减轻肠道病变的效果明显,但连续应用,对后期鸡的增重有抑制作用。力克球的AC I为157.77,判为低效抗球虫药。3种药物对Hb含量和脾脏、胸腺及法氏囊相对质量无显著影响。

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  • 喹赛多对仔猪产肠毒素大肠杆菌感染的预防效果

    丁明星,袁宗辉,王玉莲,朱惠玲,范盛先

    150只去势长大仔猪随机分为6组,Ⅰ和Ⅳ组饲喂不含抗菌药的基础日粮,Ⅱ和Ⅴ组基础日粮中添加喹乙醇100m g/kg,Ⅲ和Ⅵ组基础日粮中添加喹赛多100 m g/kg。Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组仔猪灌服1010CFU产肠毒素性大肠杆菌(O139∶K88),Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组仅灌服肉汤。结果表明,喹赛多饲喂猪直肠粪便中大肠杆菌总数和接种的血清型大肠杆菌数与喹乙醇饲喂猪均无显著差异(P>0.05),喹赛多和喹乙醇饲喂猪直肠粪便中接种的血清型大肠杆菌数均低于非药物饲喂猪(P<0.05)。Ⅳ组仔猪感染率为68%;Ⅴ和Ⅵ组感染率均为16%。药物饲喂猪平均日增重显著改善(P<0.05),喹赛多饲喂猪平均日增重高于喹乙醇饲喂猪(P<0.05)。Ⅳ组仔猪平均日增重和饲料转化率分别下降9.6%和8.4%,Ⅵ组仔猪日增重和饲料转化率分别提高11.9%和7.9%,均高于Ⅴ组(4.2%和1.5%)。可见喹赛多不仅对断奶仔猪产肠毒素大肠杆菌感染有显著预防作用,而且还有较好的促进生长和提高饲料转化率作用。

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  • 牛奶中四环素类药物残留的确证方法——液质联用法

    张纯萍,刘艳华,门立强,刘智宏,王树槐

    为了确证牛奶中土霉素、四环素、金霉素的残留,建立了电喷雾高效液相色谱/串联质谱法,采用正离子检测,选择离子方式扫描。牛奶样品经M cIlva ine-EDTA缓冲溶液提取离心后,上清液过C18小柱净化后甲醇洗脱,然后氮气吹干,甲醇-水(30∶70)溶解(以去甲金霉素为内标)后进行分析。结果表明,牛奶中土霉素、四环素和金霉素的检测限(LOD s)为0.01 m g/L,定量限(LOQ s)为0.025 m g/L。3种药物在0.05~0.5 m g/L范围内均呈良好线性关系,并且3个添加浓度的平均回收率范围为70.0%~87.6%,批内变异系数不大于10%,以最大残留限量浓度添加后所测得回收率的批间变异系数小于15%。本方法特异性强、灵敏度高、准确可靠,可作为牛奶及其他动物组织中四环素类药物残留的确证方法。

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  • 人工感染泰勒虫羊临床症状、血液学以及抗体水平的变化

    袁建丰,吴鉴三,于建敏,王志亮,宋翠平,姚宝安

    用从甘肃采集的甘肃血蜱人工感染试验羊,观察其临床症状、血液学及抗体水平的变化。在试验中,试验羊表现出2个高温峰,裂殖体在第2个高温期出现。血液学观察表明,裂殖体产生阶段对试验羊造成的危害最大。通过对试验羊临床症状、血液学及抗体水平变化的统计学分析,表明3者之间存在一定的关联。

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  • 用DNA指纹技术研究Zmu-1:DHP豚鼠的群体遗传结构

    刘迪文,母连志

    为了鉴定Zm u-1∶DHP新品系豚鼠的遗传组成,试验以Jeffreys 33.6和33.15探针,分别与Zm u-1∶DHP和DHP 2个品系豚鼠基因组DNA的H in fⅠ和H aeⅢ酶切限制性片段进行Sou thern杂交,绘制豚鼠DNA指纹图,分析豚鼠基因组DNA限制性片段长度的多态性。结果显示,33.6探针与H in fⅠ酶组合应用,多态性程度较高,制图效果好;Zm u-1∶DHP豚鼠的DNA指纹图中,在6 kb和9 kb标记点出现特征性基因序列片段;Zm u-1∶DHP品系内的相似系数Fm=0.834±0.066,显著高于DHP品系内的Fm=0.653±0.158,也高于2个品系的Fm=0.670±0.115;Zm u-1∶DHP豚鼠2随机个体间遗传组成完全相同的机率Fmn=1.07×10-2,高于DHP豚鼠的Fmn=8.474×10-5。表明该方法用于豚鼠遗传质量检测和品系鉴定是可行的。Zm u-1∶DHP和DHP豚鼠都属远交系动物,但前者的遗传基因纯合性显著高于后者,结合性状可以看出,Zm u-1∶DHP豚鼠遗传分化形成了新的品系。

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  • 牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

    高庆华,周虚,王春清,韩春梅

    以M cCoy′s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺,对牛卵巢上大(直径>8 mm)、中(4 mm<直径<8 mm)、小(直径<4 mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。结果表明,M cCoy′s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况,说明颗粒细胞在该培养条件下,其功能可能更接近体内的生理状况。

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  • 江西7个地方鸡品种遗传多样性的微卫星分析

    李慧芳,陈宽维,汤青萍,沈见成,屠云洁,章双杰

    选用30个多态性较好的微卫星标记,检测了丝毛乌骨鸡、康乐鸡、宁都三黄鸡、余干乌骨鸡、瓦灰鸡、崇仁麻鸡、东乡绿壳蛋鸡等江西省7个地方鸡品种的遗传多样性。利用等位基因频率计算出各群体的平均遗传杂合度(h)、多态信息含量(P IC)、群体间的N e i氏标准遗传距离(DS)和DA遗传距离。结果表明,30个微卫星位点中有24个微卫星位点在7个鸡群体中的多态信息含量均为高度多态,可作为有效的遗传标记用于鸡品种的遗传多样性和系统发生关系的分析;在7个品种中,杂合度最低的是余干乌骨鸡,为0.615 5,杂合度最高的是崇仁麻鸡,为0.652 5,各地方鸡品种的杂合度都偏高,反映了群体的遗传多样性非常丰富;7个鸡品种间的DA、DS遗传距离远近关系一致,但DA距离均比DS距离大;用U PGM A法对DA和DS的聚类结果相同,7个鸡品种被聚为3类,余干乌骨鸡、瓦灰鸡、康乐鸡、宁都三黄鸡聚为一类,崇仁麻鸡、东乡绿壳蛋鸡聚为一类,丝毛乌骨鸡独自为一类。

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  • 芦荟乙酰化甘露聚糖对肉仔鸡肠道主要菌群、小肠微绒毛密度、免疫功能及生产性能的影响

    蒋林,冯元璋,杨雪,周兴挺,杨得坡

    为研究芦荟凝胶、芦荟多糖、乙酰化甘露聚糖对肉仔鸡肠道主要菌群、小肠微绒毛密度、免疫功能及生产性能的影响,600只粤黄鸡随机分为5组,每组设6个重复,雌雄各半。分别施以5种不同日粮:①基础日粮添加乙酰化甘露聚糖0.1%;②基础日粮添加乙酰化甘露聚糖0.05%;③基础日粮添加芦荟多糖0.1%;④基础日粮添加芦荟凝胶干粉0.1%;⑤对照组(基础日粮),试验期为56 d。结果表明,肉仔鸡饲粮中添加芦荟凝胶、芦荟多糖、乙酰化甘露聚糖,能显著降低盲肠内容物大肠杆菌浓度,提高盲肠内双歧杆菌和乳酸菌杆菌浓度(P<0.05);回肠微绒毛高度增加、密度加大(P<0.05);免疫器官胸腺、脾脏、法氏囊相对质量均显著增加,新城疫抗体效价显著提高(P<0.05);添加芦荟多糖提高了肉仔鸡的日增重和降低了料肉比,但试验组与对照组之间的差异不显著。

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  • 猪传染性胸膜肺炎的研究进展

    刁有祥,崔治中

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  • 《中国兽医学报》2005年第25卷总目次

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