• 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗肌肉注射诱导小鼠的细胞免疫

    陈希文;程安春;汪铭书;希尼尼根;豆文波;李雪梅;刘伍梅;王刚;张平英;

    将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF 5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF 5)以50、100、200μg 3个剂量肌注免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载体质粒pcDNA为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(M TT法)分别对小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数和淋巴细胞转化功能进行了检测。结果,3个剂量的pcDNA-PRRSV-ORF 5接种小鼠后,其外周血都对ConA有明显的反应性,试验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4+T淋巴细胞数在免疫后7 d高于对照组(P<0.01),CD8+T淋巴细胞在免疫后28 d高于对照组,大剂量基因疫苗免疫小鼠的细胞免疫应答高于中、小剂量。结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF 5免疫小鼠能够诱导机体产生良好的细胞免疫应答,并表现一定的剂量依赖性。

    2006年02期 111-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 136K]
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  • 3个不同基因型新城疫病毒间的抗原同源性比较

    邱玉玉;孙淑红;李晓霞;崔治中;

    分别以鸡新城疫病毒(NDV)基因Ⅱ型弱毒疫苗株L aSota、基因Ⅶ型鸡源野毒株Y 98F 9和基因Ⅵ型鸽源野毒株PB 9601为灭活疫苗,制备相应的抗血清。将3株病毒分别与相应的抗血清做交叉血凝抑制试验(H I)和在细胞培养上做交叉病毒中和试验(V I),以此比较3个基因型病毒间的抗原同源性关系。在交叉H I中,L aSota株与基因Ⅶ型的Y 98F 9株间的同源性为90.0%,而基因Ⅵ型的鸽源PB 9601株与Y 98F 9株间的抗原同源性仅为74.2%,与L aSota株间的抗原同源性更低至65.2%。在交叉V I中,也表现出非常类似的同源性关系,L aSota株与Y 98F 9株间的同源性为90.1%,而鸽源PB 9601株与Y 98F 9株间的同源性也仅为75%,与L aSota的同源性进一步低至65.8%。

    2006年02期 114-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 95K]
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  • 重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究 Ⅱ.试剂盒阴阳性临界值的测定及其与IDEXX公司试剂盒的比较

    吴延功;徐天刚;王志亮;张喜悦;王君玮;宋翠平;刘佩兰;徐培莲;宋芳;许立华;陈溥言;

    对临床上采集的899份猪血清样本,用以纯化的重组N蛋白为包被抗原建立的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接EL ISA进行检测,运用统计学方法摸清了检测结果的分布规律,并和国外IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒同时对460份血清样本进行检测,结果表明,2种方法的符合率为91.73%。利用TG-ROC软件确定了自制的EL ISA酶标板(NP-EL ISA)的临界值,并标定试剂盒的特异性和敏感性均为92.6%。EL ISA的结果判定标准是:当以血清样本L为标准参考阳性血清时,样品与阳性血清的比值(S/P)小于或等于0.4为阴性;S/P在0.4与0.5之间为可疑;S/P大于或等于0.5为阳性。与IDEXX公司PRRSV抗体检测试剂盒对临床样品的检测结果进行比较后,初步判定所建立的EL ISA之所以出现较多的假阴性,可能是目前临床上出现了PRRSV欧洲型所致。

    2006年02期 117-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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  • 鸡传染性支气管炎X毒株S1基因的克隆与真核表达

    柏佳宁;马同锁;赵宝华;

    根据G enB ank中报道的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计了1对引物,克隆了IBV强毒株X的S1基因,基因大小为1.62 kb。将其导入真核表达载体系统pIRES1neo中,表达蛋白为61 000。

    2006年02期 122-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 832K]
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  • 上海地区鸡传染性支气管炎病毒S2基因的检测及分析

    刘惠莉;陆承平;朱伟云;

    参考G enB ank发表的传染性支气管炎病毒(in fectious bronch itis v irus,IBV)S基因序列,设计合成了1对引物,模拟PCR表明,该引物能扩增现已发表的所有IBV的S2基因部分核酸序列,扩增片段493 bp。建立的RT-PCR检测体系检测灵敏度达10~50 ELD50,检出限量为0.1 ng。采集上海地区12个鸡场疑似IBV禽样品34份进行检测,阳性为32份,序列分析表明均为肾变型IBV S2基因片段,S2基因同源性较高(≥99%),与其他地区肾变型IBV也有较高同源性,而与腺胃型和呼吸型相比较,序列差异较大。进化分析表明,尽管IBV S2片段变异率明显低于S1基因,但二者表现相同的进化趋势,S2基因亦可反映出IBV的分子变异及毒株间的亲缘关系。

    2006年02期 126-128+132页 [查看摘要][在线阅读][下载 392K]
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  • 犬瘟热病毒小熊猫株H、F和N基因的克隆及表达

    闫芳;夏咸柱;谢之景;扈荣良;黄耕;

    根据G enB ank中发表的犬瘟热病毒(CDV)的核苷酸序列,设计并合成了扩增CDV H、F和N基因的3对引物,经RT-PCR分别扩增获得了CDV小熊猫株(LP株)H、F和N基因,并对H、F及N基因进行了克隆和序列测定。序列分析表明,CDV LP株属于强毒谱系,与CDV流行株的亲缘关系近,H基因含有较多潜在的糖基化位点,F和N基因相对比较保守。将CDV LP株H、F和N基因克隆入真核表达载体pVAX 1的CM V启动子下游,构建了CDV基因疫苗表达载体pVAXLPH、pVAXLPF、pVAXLPN,体外转染BHK-21细胞,用间接EL ISA方法检测到目的蛋白的表达。用构建的3个表达质粒免疫小鼠,从小鼠血清中检测到了抗CDV抗体,初步证实用CDVH、F和N基因作为核酸疫苗免疫动物,可以激活机体的免疫应答。

    2006年02期 129-132页 [查看摘要][在线阅读][下载 341K]
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  • 禽呼肠孤病毒σ_2基因的克隆和表达

    邓显文;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;唐小飞;

    采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株和广西分离株R 1的2σ基因。将2σ基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明,插入的片段为2σ目的基因。切下目的基因2σ重组到含有谷胱甘肽(G ST)的融合蛋白质原核表达载体PGEX-4T-1,获得重组质粒。经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表达2σ基因插入的位置、大小和读码框架均正确,表明成功构建了融合表达载体PGEX-S1133-2σ和PGEX-R 1-2σ。构建好的重组质粒,在大肠杆菌JM 109α中经1 mm o l/L IPTG诱导得到了表达。融合蛋白G ST-2σ和G ST R 1-2σ的相对分子质量为65 100,以包涵体形式存在。W estern-b lot分析表明,融合蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。

    2006年02期 133-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 335K]
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  • 一种新型鸭瘟病原的分离鉴定及其特性

    刁有祥;吕桂霞;郑福英;杨杰华;陈庆普;刘悦竹;

    从2000年起,山东省的潍坊、临朐、昌乐、昌邑、沂源等饲养肉鸭集中的地区发生一种同鸭瘟症状、剖检变化相似的疾病,但该病主要侵害1月龄以下的雏鸭,成年鸭发病率较低。从自然感染该病典型病死鸭脏器中获得1株病毒,病毒粒子直径80~200 nm,呈圆形,有囊膜。进一步试验鉴定,该病毒核酸类型为DNA,ELD50为1-0 3.46/0.2 mL,对樱桃谷鸭胚、番鸭胚、麻鸭胚及SPF鸡胚的致死率分别为100%、90%、20%和0%。该病毒对氯仿、乙醚、酸碱处理敏感,56℃30 m in能使病毒灭活。该病毒无血凝活性,不能凝集“O”型人、鸡、鸭、鹅、猪、小鼠、豚鼠、绵羊等的红细胞。血清学试验表明,该病毒与鸭肝炎病毒阳性血清、雏番鸭细小病毒阳性血清、小鹅瘟阳性血清之间无中和作用,而能部分中和鸭瘟病毒阳性血清,表明该分离株与传统鸭瘟病毒呈部分相关性。初步确定该病毒为疱疹病毒属疱疹病毒科成员。鉴于该病用传统的鸭瘟疫苗不能预防,故现暂定名为“新型鸭瘟”。

    2006年02期 136-139页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K]
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  • 酶标单抗阻断ELISA检测鸡白痢和鸡伤寒抗体

    徐耀辉;焦新安;胡青海;潘志明;黄金林;曾显营;

    以辣根过氧化物酶标记的沙门氏菌O9单抗3-47-0与包被的鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体阻断EL ISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌感染。该方法基于待检血清样品抑制酶标单抗与脂多糖的结合,以检测鸡白痢和鸡伤寒特异性抗体。对72份已知鸡白痢阳性血清(抑制率为(98.5±4.0)%)、54份已知鸡白痢阴性血清(抑制率为(15.3±8.0)%)、42份SPF鸡血清(抑制率为(0.8±7.2)%)检测的结果表明,该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中,从第2周开始,该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体,比全血玻板凝集试验(PAT)早1周时间。对344份种鸡血清的检测结果表明,单抗阻断EL ISA比PAT特异性好、敏感性高。另外,该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌有共同抗原的沙门氏菌感染产生的抗体。

    2006年02期 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 323K]
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  • 大菱鲆(Scophthalmus maximusL.)鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)感染症及其病原特性

    房海;陈翠珍;张晓君;葛慕湘;何振平;巩元芳;

    对一养殖场所发生的大菱鲆(S cophtha lm usm ax im us L.)病害进行了发病情况、临床表现、病理变化及病原等方面的检验,结果表明为细菌性败血感染症。通过对15尾病(死)大菱鲆病变组织中细菌检查、细菌分离与鉴定,以及人工感染试验的致病作用等,表明所检出的细菌为利斯顿氏菌属(L istonella M acD one ll and Co lw e ll 1986)的鳗利斯顿氏菌[L.angu illarum(B ergem an 1909)M acD one ll and Co lw e ll 1986],系该病例的病原菌。

    2006年02期 144-146页 [查看摘要][在线阅读][下载 95K]
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  • 减毒沙门氏菌为载体传递鸡球虫DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

    杜爱芳;王素华;胡松华;

    将携带鸡柔嫩艾美耳球虫5401基因的真核表达质粒pcDNA 3-5401的减毒沙门氏菌Z J111菌株(Z J111/pcD-NA 3-5401)口服接种于3日龄非免疫鸡,2周后进行第2次接种。结果表明,利用该减毒沙门氏菌作为载体具有相对安全性,用限制性酶切分析和PCR鉴定证实,体内试验和体外培养的重组质粒在受体菌Z J111菌株内比较稳定。用Z J111/pcDNA 3-5401(108cfu)口服接种非免疫鸡,2周后用相同剂量加强免疫1次,二免后2周用柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊攻击,观察其免疫效果。结果表明,重组Z J111/pcDNA 3-5401菌既能诱导产生抗鸡柔嫩艾美耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平(P<0.05);其抗球虫指数为164.98。试验结果显示,利用减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。

    2006年02期 147-150页 [查看摘要][在线阅读][下载 402K]
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  • 捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)氨基肽酶基因克隆、表达及重组蛋白活性分析

    严若峰;李祥瑞;

    通过RT-PCR扩增出捻转血矛线虫(H aem onchus contortus)氨基肽酶基因,并对该基因进行克隆、鉴定及序列测定。捻转血矛线虫氨基肽酶ORF由2 919个碱基(972个氨基酸)构成,和G enB ank中的捻转血矛线虫氨基肽酶(H 11抗原)同源性高达98%,与秀丽新杆线虫(C aenorhabd itis eleg ans)肽酶M 1家族同源性为61%,且具有氨基肽酶特征性基序HEXXH和GAM EN。将该基因亚克隆到原核表达载体并进行了表达,通过测定重组蛋白分解氨基肽酶底物的能力以及对酶抑制剂敏感性试验,进一步证实了H 11抗原具有一定的酶活性。

    2006年02期 151-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 611K]
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  • 镰形扇头蜱中2个新基因的分离、克隆与序列分析

    龚海燕;周金林;周勇志;向飞宇;

    为了对镰形扇头蜱中的生物活性分子进行相关研究,从中得到有价值的抗蜱候选分子,本试验从已构建的镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库中,随机克隆得到100个EST(expressed sequence tag)序列。其中8号和2号序列带有完整的po lyA尾,根据此2序列设计引物,经5′RACE(rap id am p lification of cDNA ends)得到2序列的全长基因,分别命名为RhHp 1和RhHp 2。RhHp 1基因全长1 823 bp,ORF(开放阅读框)为1 521 bp,编码区从110~1 631bp,编码506个氨基酸。RhHp 2基因全长1 002 bp,ORF为848 bp,编码区从31~879 bp,编码282个氨基酸。经蛋白序列分析,RhHp 1基因预期编码的蛋白与G enB ank中所登陆的序列同源性均小于20%,RhHp 2与其他序列同源性最高可达50.81%。经RT(reverse transcription)-PCR分析,与其他各发育阶段相比,RhHp 1基因在镰形扇头蜱卵中表达量较低;RhHp 2基因在镰形扇头蜱若蜱中低度表达,在其他各发育阶段表达量较高。结果表明,RhHp 1和RhHp 2基因为镰形扇头蜱唾液腺中分离出来的2个新基因,其表达量随着蜱的发育阶段而发生改变。此2个新基因所编码蛋白的结构和具体的分子生物学功能有待深入研究。

    2006年02期 155-157+168页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K]
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  • 朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定

    肖运才;胡思顺;许青荣;李自力;毕丁仁;

    用禽流感病毒EL ISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测,发现5份粘液样本均呈禽流感阳性;随后取相应气管组织材料接种于9~11日龄鸡胚分离病毒,发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集,用禽流感病毒H 5、H 7、H 9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作H I试验,结果禽流感病毒H 5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到27,而禽流感病毒H 7、H 9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度,说明从朗德鹅分离到的病毒为H 5亚型禽流感病毒。

    2006年02期 158-159页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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  • 禽流感病毒H5和H9亚型多重RT-PCR快速检测方法的建立

    耿士忠;曾显营;潘志明;黄金林;焦新安;刘秀梵;

    根据禽流感病毒(A IV)核蛋白(NP)和血凝素(HA)基因序列,设计1对用来鉴定A型A IV特异性引物(NP-F,NP-R)和2对用来鉴定A IV H 5和H 9不同亚型特异性引物(H 5-F,H 5-R;H 9-F,H 9-R),建立了多重RT-PCR快速检测方法。该方法能同时从一种病毒扩增出2条核酸带,分别为型(NP:330 bp)和亚型(H 5A:550 bp,或H 9A:490 bp)。通过对105份样品进行检测,并与病毒分离及琼脂扩散(AGP)血清学方法作平行对比,两者之间符合率达100%;试验灵敏度为102ELD50。结果表明,建立的多重RT-PCR为检测H 5、H 9亚型A IV提供了一种快速、经济、易行的技术。

    2006年02期 160-161页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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  • 猪源肠毒素性大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立

    华荣虹;张书霞;何孔旺;

    为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K 88、K 99、F 41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K 88、K 99、F 41和987p 4种菌毛的扩增产物分别为201,314,380和459 bp。对4种扩增产物分别进行酶切鉴定,结果均得到与预期一致的2个片段。对各个参考菌株不同组合的检测结果为100%符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于ETEC性腹泻的辅助诊断及ETEC菌毛抗原分型检测。

    2006年02期 162-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K]
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  • 猪伪狂犬病病毒双基因缺失突变株(HB-98株)安全性、稳定性和免疫原性测定

    何启盖;陈焕春;方六荣;吴斌;刘正飞;肖少波;金梅林;

    对以伪狂犬病病毒鄂A株为亲本毒株构建的TK和gG双基因缺失突变株(P rV HB-98株)的增殖能力、安全性、毒力稳定性和免疫原性进行了测定。结果表明,P rV HB-98株在BHK-21细胞上的增殖滴度为107.0TC ID50/0.1mL以上,与亲本毒株相当,但高于B artha株;与P rV鄂A株相比,病毒量为107.0TC ID50的P rV HB-98株不引起BALB/c小鼠的死亡,毒力也低于B artha株;将P rV HB-98株在PK-15细胞连续培养25代和在猪体内上连续继代5次,各代次突变株TK基因和L acZ基因能被稳定扩增,未出现毒力回复现象,表明该毒株具有良好的遗传稳定性;以105.0、106.0、107.0TC ID50等3个不同剂量的P rV HB-98株接种于妊娠50~60 d母猪和1日龄仔猪,母猪均能正常产仔,仔猪也未出现任何临床症状,证明该毒株有较好的安全性。另外,以105.0TC ID50的P rV HB-98株接种于妊娠50~60 d母猪和1日龄仔猪,分别于接种后28 d和20 d,用107.0TC ID50P rV鄂A强毒进行攻击,结果免疫猪都能抵抗强毒的攻击,获得保护,表明该毒株具有很强的免疫原性。综合上述结果表明,P rV HB-98株可以作为候选毒株,用于伪狂犬病基因工程疫苗的研制。

    2006年02期 165-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • 伪狂犬病病毒PK基因的克隆与PK、gG双缺失转移载体的构建

    方六荣;肖少波;姚林;潘永飞;谢京国;陈焕春;

    地高辛标记伪狂犬病病毒(PRV)E a株短区段蛋白激酶(PK)基因3′端0.4 kb片段,Sou thern杂交确定短区段PK基因定位在基因组DNA B amHⅠ4.0 kb片段中。将该片段克隆获得重组质粒pSB 304,对pSB 304亚克隆,构建了仅含完整PK基因约1.3 kb片段的重组质粒pSB 305,并进行了序列测定。结果表明,PK基因存在2种可能的同框编码方式,分别编码388或334个氨基酸残基,并具有真核细胞蛋白激酶催化结构域序列。同国外PRV N IA-3、K a株相比,氨基酸同源性分别为98.8%和97.3%,有意义的是E a株、K a株均较N IA-3株在同一位置缺失2个氨基酸(A sp,G ly)。进一步对pSB 305和含gG全基因以及部分gD基因的质粒pU SK进行酶切拼接,将PK基因大部分编码区、gG基因5′端部分编码区进行缺失,构建成两端同源侧翼分别为3.1 kb和1.6 kb的PK、gG双缺失转移载体pLR 001。上述结果为深入研究PK基因功能及研制更安全的TK-/PK-/gG-三缺失基因工程疫苗奠定了基础。

    2006年02期 169-172+179页 [查看摘要][在线阅读][下载 835K]
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  • 转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得

    张二芹;李世访;王春凤;钱爱东;成卓敏;

    根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou thern杂交方法进行鉴定,结果表明,VP 6基因已成功地转入烟草中。

    2006年02期 173-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 问号钩体(Leptospira interrogans)Ⅲ型分泌系统相关基因分析

    丁希喆;李文俊;杨宏亮;郭晓奎;姜叙诚;

    根据鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统和大肠杆菌鞭毛系统中已知蛋白,以NCB I/B last软件搜索问号钩体全基因组中与之高度同源的蛋白;用TMHMM-2.0对所得蛋白跨膜区进行分析;用In terpro对所得蛋白结构域进行分析,初步整理出问号钩体Ⅲ型分泌系统组成,发现10个被注释为鞭毛系统的相关基因和Ⅲ型分泌系统有关,并和鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白有较高同源性。6个为跨内膜蛋白,4个为胞内蛋白,并共同组成Ⅲ型分泌系统的内膜孔道,但没能发现组成外膜孔道的蛋白组分。问号钩体Ⅲ型分泌系统与鞭毛组装系统共用相同的部分组分,但钩体Ⅲ型分泌系统和经典Ⅲ型分泌系统有一定程度的差别:它缺乏外膜孔道结构,且分泌产物先进入胞周间隙。

    2006年02期 175-179页 [查看摘要][在线阅读][下载 455K]
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  • 神经肽Y免疫反应神经元在鸽小脑中的定位——SABC法研究

    陈文钦;刘华珍;罗冠中;王岩;位兰;彭克美;

    采用石蜡切片和免疫组化SABC法(链霉亲合素-生物素-过氧化物酶连结法),对10只肉鸽小脑内神经肽Y免疫反应神经元的分布状况进行了研究,并与北京鸭、乌鸡、肉鸡及大鼠的相关结果进行了比较。在光镜下观察分析了阳性神经元的分布状况,并用图像分析软件进行了半定量分析。结果显示:(1)小脑内神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)阳性神经元主要存在于小脑皮质的蒲肯野氏细胞层,且以小叶顶端的蒲肯野氏细胞阳性明显;(2)小脑白质中央核可见到少量阳性神经元,不同于乌鸡、肉鸡及大鼠;(3)分子层、颗粒层未见阳性反应细胞。表明:鸽小脑NPY阳性神经元的分布在皮质中与鸡、大鼠大体相似;在白质中与鸡、大鼠有差异。

    2006年02期 180-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 751K]
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  • 大豆黄酮对奥利亚罗非鱼生长及相关激素水平、血液生化指标的影响

    余祖功;夏德全;吴婷婷;

    挑选体质量相近的奥利亚罗非鱼,随机放入网箱,分为对照组(基础日粮)、大豆黄酮(D a)组(基础日粮+D a 10m g/kg),并各设2个重复,试验期为32 d。结果,与对照组比较,D a组雄鱼日增重提高14.9%(P<0.05),体质量特定生长率增加15.2%(P<0.05),生长激素(GH)水平提高29.1%,甲状腺激素(T3)水平提高13.2%,睾酮水平提高27.3%,雌二醇水平下降22.8%;雌鱼日增重及体质量特定生长率变化不大(P>0.05),GH水平提高24.8%,T3、睾酮水平几无变化,雌二醇水平下降10.5%。D a组雄、雌鱼脲氮水平分别下降51.5%、17.3%(P<0.05);血清抗氧化能力分别上升79.5%、48.1%(P<0.05);肝抗氧化能力分别上升73.9%、33.3%(P<0.05);血钙、血糖水平变化不大。结论:D a可能通过提高生长激素和睾酮水平促进奥利亚罗非鱼雄鱼生长。

    2006年02期 183-185页 [查看摘要][在线阅读][下载 86K]
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  • 雏鸭胰脏组织损伤在新型鸭肝炎病毒感染过程中的变化特点

    胡薛英;谷长勤;王德海;程国富;苏敬良;佘锐萍;周诗其;

    对新型鸭肝炎病毒人工感染9日龄樱桃谷雏鸭的胰脏损伤特点进行了研究。对感染雏鸭在接毒后12、24、48、72、96、168 h以及14 d时胰脏病理组织学变化的观察结果表明:感染雏鸭的胰脏组织在接毒后24 h出现胰腺细胞的局灶性坏死及嗜酸性小体,且在接毒后48 h分布广泛而严重;接毒后72~168 h期间,胰脏组织中出现炎性细胞浸润并且逐渐增多,而胰腺的局灶性坏死及嗜酸性小体逐渐减少;接毒后14 d,仅见到组织炎性细胞的浸润。应用透射电镜对接毒后48 h胰脏的超微结构观察结果显示,胰腺细胞发生坏死,同时出现凋亡细胞的形态特征。本试验结果表明,在新型鸭肝炎病毒感染雏鸭时,胰脏的局灶性坏死是典型病理变化之一,胰腺细胞在发生坏死的同时,可能也发生凋亡,二者同时出现在同一胰脏组织内。

    2006年02期 186-188+191页 [查看摘要][在线阅读][下载 1270K]
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  • 白色念珠菌和鼠伤寒沙门氏菌的荧光标记及其对细胞粘附作用的影响

    周东蕊;杨利国;唐祖明;郭小英;张春秀;陆祖宏;

    比较了几种荧光染料标记白色念珠菌和鼠伤寒沙门氏菌的效果及其对病菌生长和与H e la细胞粘附能力的影响,旨在为建立简便有效的荧光标记方法奠定基础。将2种致病菌分别在添加了罗丹明B、荧光素N a盐或吖啶橙的LB培养液,37℃条件下培养1 d,结果发现这2种致病菌都可以被荧光素N a盐标记,鼠伤寒沙门氏菌还可以被罗丹明B标记,但这2种致病菌都不能在吖啶橙中生长。测定致病菌荧光强度发现,随罗丹明B标记剂量的增加,致病菌荧光强度增强,而荧光素N a盐小剂量组处理的致病菌荧光强度最强。此外还发现,致病菌与H e la细胞的粘附不受荧光标记的影响。

    2006年02期 189-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 99K]
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  • 鸡大肠杆菌O78对喹诺酮类药物高耐药株的分子鉴定

    李乾学;邓旭明;郭建顺;周学章;刘立国;曾凡勤;

    就临床分离的鸡大肠杆菌O 78对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(M IC)进行了测定,得到对喹诺酮类药物有不同耐药水平的细菌23株。根据G enB ank已公布的QRDR s序列,设计了分别扩增gyrA、gyrB、parC和parE基因的4对引物,以筛选的23株耐药菌DNA为模板,进行了PCR扩增。序列分析及A crA的W estern b lotting检测结果表明,临床分离的鸡大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药水平与G yrA和ParC的突变密切相关,而A crAB外输泵的表达水平无显著变化。提示临床分离的鸡大肠杆菌O 78的耐药水平与喹诺酮类药物的选择性压力有关,它诱导了DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的基因突变,可能不能激活A crAB外输泵。

    2006年02期 192-193+196页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K]
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  • 复方中药成分对新城疫疫苗免疫雏鸡外周血T淋巴细胞转化和血清抗体效价的影响

    王德云;胡元亮;孙峻岭;张宝康;刘家国;

    选择4种中药成分(黄芪多糖、淫羊藿多糖、峰胶黄酮、人参皂甙)组成2个复方,各按3个剂量水平与新城疫疫苗混合后免疫雏鸡,以无佐剂苗和油乳苗为对照,分别于免疫后7、14、21、28、35、42 d采血,用M TT法和微量血凝法测定T淋巴细胞转化和血清抗体效价的动态变化。结果表明,中药佐剂能显著促进淋巴细胞转化,提高血清抗体效价,多数时间点与油佐剂的效果相当,部分时间点显著强于油佐剂。综合判定方1高剂量和方2中剂量的效果最好。

    2006年02期 194-196页 [查看摘要][在线阅读][下载 98K]
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  • 谷氨酰胺对内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎的影响

    钟凯;王艳玲;邹思湘;陈伟华;

    40只SD雌性大鼠使之交配受孕。在确定其怀孕后,取35只孕鼠随机分成正常对照组(Con,n=5)、阳性对照组(P,n=15)和实验组(T,n=15)。阳性对照组与实验组内分为3个剂量组,分别为P1、P2、P3组和T1、T2、T3组。实验组大鼠每天按体质量灌喂谷氨酰胺(G lu tam ine,G ln)0.34 mm o l/kg,直至处死,而对照组大鼠灌喂相应体积的生理盐水(PSS)。孕鼠于产后72 h,分别用灭菌PSS(正常对照组)和不同剂量(5、10、50μg)的大肠杆菌内毒素(阳性对照组和实验组)经乳头管灌注到大鼠第4对(腹部)乳腺内。灌注后24 h处死大鼠,取乳腺组织固定,进行组织学观察。观察显示,3个剂量的内毒素均可诱发大鼠实验性乳腺炎,其中P3组大鼠乳腺组织破坏得最为严重。P3组大鼠乳腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG ase)活力,与正常对照组相比显著升高(P<0.05);T3组大鼠乳腺组织中TNF-α浓度,与P3组相比显著降低(P<0.05)。阳性对照组大鼠乳腺组织中白细胞介素-2(IL-2)浓度,与正常对照组相比有所降低;T3组大鼠乳腺组织中IL-2浓度,与P3组相比显著升高(P<0.05)。与正常对照组相比,阳性对照组与实验组大鼠乳腺组织中碱性磷酸酶(A lka line phosphatase,AKP)活力显著升高(P<0.05)。与正常对照组相比,阳性对照组与实验组大鼠血清中细胞因子和分泌性IgA浓度、酶的活力均无显著变化(P>0.05)。由此表明,灌喂G ln可以抑制乳腺组织内炎性细胞因子TNF-α的释放,减轻炎症对T淋巴细胞增殖反应的抑制,对内毒素诱发的大鼠实验性乳腺炎有一定的保护作用。

    2006年02期 197-199+203页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K]
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  • 环丙沙星人工抗原的合成与鉴定(英文)

    周玉;李岩松;王哲;谭建华;柳增善;

    采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明,环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分别为6∶1和13∶1。非变性凝胶电泳显示,即使只有6个环丙沙星分子与载体蛋白偶联,偶联物在凝胶中的迁移轨迹与载体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明,非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。

    2006年02期 200-203页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K]
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  • 绵羊精子膜蛋白PH-20 mRNA在睾丸和附睾中表达的分析

    娜仁花;旭日干;

    提取绵羊睾丸总RNA,并以此为模板,采用RT-PCR技术扩增出精子表面特异性蛋白PH-20的cDNA。应用T/A克隆策略,将扩增的PH-20基因克隆入T载体,通过酶切和测序进行鉴定,结果表明,PH-20 mRNA在绵羊睾丸和附睾中均有表达。

    2006年02期 204-206页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K]
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  • 猪孤雌激活胚胎的体外培养

    王金勇;王震;曾申明;姜午旗;姚宁;刘敬浩;

    试验研究了不同培养体系对猪体外成熟卵母细胞电激活后的体外发育的影响。试验1比较了猪孤雌发育胚胎在NCSU 23、G 2.2添加氨基酸(G 2.2-aa)和G 2.2培养体系中的体外发育效率,结果表明,3个组卵裂率差异不显著(P>0.05),NCSU 23体系的囊胚率显著高于其他2组(14.37±3.77 vs.2.67±2.68和3.13±0.45,P<0.01),但3组间囊胚细胞数差异不显著(21.29±5.27 vs.19.33±2.54和20.27±4.72,P>0.05)。试验2探讨了胚胎培养72h后更换培养液对孤雌发育胚胎的影响,结果显示,培养液更换对卵裂率和囊胚细胞数的影响差异不显著(P>0.05),但更换组囊胚率显著下降(12.50±1.49 vs.5.56±1.89、6.25±1.13、4.64±1.56,P<0.05)。试验3研究了在G 2.2-aa添加胰岛素、亚牛磺酸和半胱氨酸对孤雌激活胚胎发育的影响,结果显示,以上添加剂对卵裂率和囊胚细胞数无显著影响(P>0.05);在G 2.2-aa添加胰岛素、亚牛磺酸和半胱氨酸能明显提高囊胚发育率(6.38±1.00、6.20±2.08、8.73±1.03 vs.2.99±2.21,P<0.05),但以上各组的囊胚率明显低于NCSU 23体系(P<0.05)。结论:NCSU 23是猪孤雌激活发育胚胎较为理想的培养液。

    2006年02期 207-209页 [查看摘要][在线阅读][下载 108K]
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  • 小鼠4-细胞胚胎OPS法冷冻保存技术

    周光斌;金方;侯云鹏;杨中强;刘国世;田见晖;朱士恩;

    在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40,对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,以解冻后培养72 h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1~3 h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管(OPS)二步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10%EG或10%EG+10%DM SO)中平衡30 s,再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中,分别经35、30或25 s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明,小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87.7%和88.6%,与对照组(93.0%)差异不显著(P>0.05)。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50~60 h的受体母鼠,结果有4只妊娠产仔17只,妊娠产仔率为42.5%(17/40),与对照组59.4%(19/32)差异不显著(P>0.05)。

    2006年02期 210-212页 [查看摘要][在线阅读][下载 105K]
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  • 几个地方绵羊品种线粒体DNA(mtDNA)细胞色素b基因多态性研究

    巩元芳;李祥龙;刘铮铸;吴建华;张艳英;

    用12种限制性内切酶分析了6个地方绵羊品种线粒体DNA(m tDNA)细胞色素b(cytb)基因的RFLP。结果表明,在71只绵羊个体中,检出的14种限制性态型可归结成4种单倍型,其间的差异主要来源于几个限制性位点的点突变;4种单倍型间和6个绵羊群体间的平均遗传距离(D)分别为0.412%和0.041%,遗传多态程度(π)为0.028%,说明遗传多样性较为贫乏;单倍型聚类结果和群体聚类结果提示,我国地方绵羊品种的起源可能是单一的。

    2006年02期 213-215页 [查看摘要][在线阅读][下载 97K]
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  • 干奶期不同能量摄入水平对产后奶牛生产性能的影响

    李红梅;李艳飞;左之才;牛淑玲;徐闯;刘彩霞;王哲;

    将围产期健康奶牛30头随机分为3组,分别于产前28 d开始饲喂NRC标准日粮(能量摄入100%组)、NRC标准增加20%日粮(能量摄入120%组)和NRC标准减少20%日粮(能量摄入80%组),产后各组奶牛均饲喂标准日粮,至产后56 d结束,观察干奶期不同能量摄入水平对产后奶牛生产性能的影响。结果表明,高能量组奶牛产后干物质采食量和产奶量均显著低于其他2组,并且体质量消耗明显。由此认为,干奶期能量摄入水平是影响和调节产后干物质摄入量、产乳量和能量平衡状态的重要因素。

    2006年02期 216-218页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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  • 内皮素-1与肉鸡肺动脉高压综合征

    周东海;郭定宗;杨世锦;

    2006年02期 219-221+225页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
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  • 生长激素释放肽Ghrelin的研究进展

    徐春兰;汪以真;

    2006年02期 222-225页 [查看摘要][在线阅读][下载 160K]
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  • 畜禽养殖中营养、生产环境与动物福利的关系

    杨玲媛;谭支良;Glatz P C;

    2006年02期 226-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 94K]
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