• 嵌合猪圆环病毒PCV2-1感染性克隆的构建

    刘新文;姚清侠;曹胜波;郭东春;陈焕春;

    根据GenBank中发表的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)的核苷酸序列,设计3对特异性引物。通过PCR方法,以引物P1和P2从接毒细胞中扩增到猪型圆环病毒(PCV2)全基因组,克隆入pBluescriptⅡ SK(+)载体构建质粒SK-PCV2,以之为模板,用引物P5和P6扩增不包含PCV2-ORF2的部分基因(SK-PCV2△ORF2);另一对引物P3、P4用于特异性扩增猪型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,与前面得到的SK-PCV2△ORF2基因连接,构建嵌合型质粒SK-PCV2-1,以此为基础构建双联体质粒SK-PCV2-1(DB)。体外转染PK-15细胞,盲传4代后,用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测,结果表明本试验构建的嵌合病毒PCV2-1克隆具有感染性。

    2007年01期 No.127 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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  • 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建

    肖驰;曹三杰;文心田;

    为构建猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列,应用RT-PCR从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)C14-2分离株和欧洲型弱毒疫苗株VP046扩增并克隆获得美洲型重组质粒C14P9(基因号:AY775132)、PRRS-PS9(基因号:AY775134)、U1b(基因号:AY775135)、Y11(基因号:AY775133)、Y12(基因号:AY775136)和欧洲型基因重组质粒E6和E8。PCR法制备的靶基因和探针纯化后,质量浓度分别为300~600mg/L和200~400mg/L。芯片杂交动力学研究表明,杂交信号强度随靶基因和探针浓度的增加而增强,最佳靶基因质量浓度为200mg/L,探针适宜范围为3~3000μg/L,系统灵敏性为3μg/L。靶基因杂交特异性研究表明,除个别靶基因在某一温度下存在交叉反应和杂交信号弱外,大多数靶基因在40~56℃下杂交信号强。采用AY775133、AY775134、E6和E8靶基因构建PRRS诊断DNA微阵列在40℃下预杂交1h、48℃湿盒避光杂交6h后经洗涤和扫读分析,杂交信号强、斑点明显、特异性高,按SNR≥1.5为标准能够区分PRRSV美洲型和欧洲型。应用PRRS诊断DNA微阵列检测了AMER-VAC-PRRS、PRRSV弱毒疫苗、C14-2株、SCU株和临床样本,能正确区分PRRSV基因型。研究结果表明构建的PRRS诊断DNA微阵列可用于PRRS临床诊断和基因分型。

    2007年01期 No.127 6-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 403K]
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  • 猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的原核表达及PPA-NS1-ELISA的初步建立

    陈进会;郭万柱;殷华平;颜其贵;徐志文;王印;罗燕;王小玉;

    含有猪细小病毒SC1株非结构蛋白NS1基因的重组质粒pPNS1通过EcoR+Hind双酶切后,回收NS1基因,将其亚克隆进原核表达载体pET30a(+)中,构建了重组表达质粒pET-NS1,转入表达宿主菌BL21中,通过IPTG的诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组NS1蛋白高效表达,以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的26.7%。并确定了NS1蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6mmol/L,诱导时间为3h。Westernblotting检测表明,表达产物具有良好的免疫原性。重组蛋白经纯化后作为抗原,包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-NS1-ELISA)。结果表明,抗原最佳包被质量浓度为31.3mg/L,血清最佳稀释度为1∶40。阳性标准初步定为:待检血清D490>0.32,且待检血清D490/阴性血清D490>2.0。

    2007年01期 No.127 13-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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  • 携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

    潘志明;焦新安;唐丽华;黄金林;张辉;张晓明;张小荣;刘秀梵;

    根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。

    2007年01期 No.127 17-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • 禽流感病毒单克隆抗体的制备及其抗蛋白抗原的分析

    吴仁蔚;肖运才;胡思顺;李自力;石德时;许青荣;毕丁仁;

    以纯化的H9N2亚型禽流感病毒为抗原,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选,获得了8株能稳定分泌抗禽流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。特异性试验证明,8株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水的特异ELISA抗体效价可达1∶3.2×103~1∶5.1×106,其中2株HI效价达212。8株单抗与H5亚型血凝素分型抗原不发生血凝,与减蛋综合征(EDS-76)病毒、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)均不反应。亚类鉴定证实,除1C7单抗为IgG2b外,其他7株均为IgG1亚类。Westernblotting试验分析初步表明,8株单抗至少针对纯化病毒粒子3种不同的蛋白抗原,其中3株针对核蛋白(NP),2株针对基质蛋白M1,2株针对血凝素HA/HA1。对感染细胞的Western blotting分析结果与纯化病毒结果基本一致,其中1株未明显沉淀纯化病毒粒子蛋白的单抗可以与感染细胞的M2蛋白多肽反应。

    2007年01期 No.127 22-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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  • H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析

    石火英;陈素娟;高崧;刘武杰;刘秀梵;

    选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现,F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知,F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96.6%和98.1%;HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL,但有5个氨基酸的差异,即166位N(F)→D(SS)、198位A(F)→V(SS)、217位V(F)→I(SS)、335位G(F)→R(SS)、504位L(F)→S(SS);2株病毒的NA基因在63~65位都存在氨基酸缺失,但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同,分别是IKKDSRSG(F)和IKEDLRSG(SS)。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关,有待进一步研究。

    2007年01期 No.127 26-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • H7N2禽流感病毒CK/HB/1/02株NA全基因序列分析

    王传彬;孙明;金萍;王宏伟;遇秀玲;陈西钊;田克恭;

    采用RT-PCR扩增了国内H7N2禽流感病毒(AIV)CK/HB/1/02分离株的完整神经氨酸酶(NA)基因节段,测定了其核苷酸序列,并与GenBank中AIV NA基因序列进行了同源性比较和氨基酸编码分析,绘制了NA基因的系统发育进化树。结果表明,AIVCK/HB/1/02分离株NA基因的完整序列长度为1467bp,包括5′-末端和3′-末端的非编码区,其最大阅读框(ORF)编码469个氨基酸,第61~65位氨基酸序列为-NITGI-,不同于国内H9N2AIV的特殊遗传标记。该病毒NA基因的核苷酸序列与GenBank中人类流感病毒A/Leningrad/134/57(H2N2)的NA基因同源性最高,为93.3%;其次为香港的鸭源、人源、猪源H3N2病毒(89%~93%);而与我国北京、广东、香港和韩国的H9N2AIV以及美国的H7N2AIV的同源性较低(85%~88%)。在N2基因系统发育进化树中,CK/HB/1/02分离株处于欧亚分支内,与H2N2人流感病毒的亲缘关系较近;与北美H7N2AIV处在不同分支,遗传距离较远。

    2007年01期 No.127 31-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 556K]
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  • 病毒保护剂在鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中的应用

    朱良全;张万林;金丽霞;王栋;

    2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,2次添加浓度为2%。3批病毒保护剂B扩大中试试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,试验组比对照组蚀斑数平均增加66.5%。HVT活疫苗(病毒保护剂B)特异性试验结果表明,马立克氏病标准阳性血清对其特异性识别;平行冻干后,试验组比对照组蚀斑数高200%;经37℃10d耐热试验表明,试验组比对照组蚀斑数高242%;试验苗免疫攻毒保护率为75%,对照苗为33.4%。

    2007年01期 No.127 35-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 81K]
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  • 区分马立克氏病病毒疫苗株CVI988与其他毒株的PCR方法的建立及应用

    丁家波;姜世金;朱鸿飞;崔治中;

    利用马立克氏病病毒(MDV)疫苗毒CVI988株pp38基因上游启动子区域连续5个碱基的缺失(5′-AGCCG-3′),设计2对特异性引物,建立了能区分MDVCVI988株和MDV其他毒株的PCR诊断方法。该方法对8株MDV毒株(弱毒疫苗株CVI988和814,强毒参考株GA,超强毒参考株RB1B、Md5和Md11,特超强毒参考株648A及1个中国野毒株J-E)的PCR鉴定结果均与预期吻合。以16只疑为MDV感染鸡的脏器组织核酸提取物为模板,用所建立的PCR方法,能从其中7只鸡样品中扩增出特异性条带,其检测结果与细胞分离培养和单克隆抗体的检测结果一致。试验证实,本研究所建立的PCR诊断方法具有良好的特异性和敏感性。

    2007年01期 No.127 39-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 潜伏期马立克氏病病鸡血清型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

    潘风光;郑梅竹;邹亚学;孙莹;艾永兴;崔文璟;罗翔丹;张玉静;

    从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析。结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的。

    2007年01期 No.127 43-45+50页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K]
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  • CpG ODN对仔猪淋巴细胞增殖和细胞因子诱生的影响:在体和离体试验

    张玲华;田兴山;周风珍;

    将CpG ODN、non CpG ODN分别接种初生仔猪,同时分离仔猪的外周血单核细胞,以CpG ODN、non CpG ODN对外周血单核细胞体外培养,分别检测仔猪Th1型细胞因子分泌情况。结果表明,与non CpG ODN和对照组相比,CpG ODN能在体内显著提高仔猪的淋巴细胞白介素-2诱生活性、淋巴细胞增殖、血清中IFN-γ和IL-12水平(P<0.05),亦能在体外刺激仔猪的外周血单核细胞分泌IFN-γ和IL-12(P<0.01)。这显示CpG-ODN能显著增强动物的免疫应答能力。

    2007年01期 No.127 46-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • ALV-J和REV诱导雏鸡胸腺细胞凋亡

    刘玉洁;常维山;杨宪勇;崔治中;

    应用原位末端标记法和HE染色法对人工感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和禽网状内皮增生症病毒(REV)的SPF雏鸡胸腺细胞的凋亡情况进行了检测,同时辅以电镜超薄切片观察。结果表明,ALV-J和REV均可诱导雏鸡胸腺细胞发生凋亡,混合感染诱导的细胞凋亡更加严重;切片中可出现局灶状凋亡,凋亡细胞多于坏死细胞。研究结果表明,细胞凋亡是导致感染鸡胸腺萎缩的主要原因。

    2007年01期 No.127 51-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • 表达狂犬病病毒糖蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的构建

    高佃平;张曼夫;

    利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法,将狂犬病病毒G基因插入腺病毒基因组的E1基因区,构建了带有狂犬病病毒G基因的重组腺病毒质粒。重组质粒经Pme酶切,线性化后转染293细胞,成功获得了均一的复制缺陷型重组腺病毒。荧光显微镜下能观察到重组腺病毒GFP报告基因的表达。用PCR方法证实了重组腺病毒基因组中含有G基因,RT-PCR方法可检测到G基因的转录产物mRNA,Westernblotting方法能检测到重组腺病毒在29细胞中表达的G蛋白。此重组腺病毒在293细胞连续传代10次,PCR方法都能扩增出G基因目的条带。试验结果表明,狂犬病病毒G基因已成功重组到腺病毒基因组中,不但能稳定表达,而且能在重组腺病毒基因组中稳定存在。

    2007年01期 No.127 54-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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  • 以ITS-1+序列鉴定牛源环孢子虫

    肖淑敏;李国清;周荣琼;李韦华;

    根据GenBank上已发表的环孢子虫(Cyclospora)rDNA序列设计并合成1对引物,利用PCR技术对首次在牛体内发现的形态学特征与人环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)极为相似的牛源环孢子虫的ITS-1+序列进行了扩增。将PCR扩增出的片段纯化后,克隆至pGEM-TEasy载体后进行序列测定,并利用NCBI在线BLAST程序对测序结果进行了同源性比较和序列分析。分析结果显示,扩增的ITS-1+大小为865bp的片段,包含18S部分序列(371bp)、ITS-1全序列(385bp)和5.8S部分序列(109bp)。序列同源性分析表明,该牛源环孢子虫为艾美尔科原虫,但不同于目前已知的各种艾美尔科原虫,可能是一种新发现的原虫。

    2007年01期 No.127 59-61+65页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K]
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  • H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对商品蛋鸡的免疫保护效果

    姜永萍;张洪波;张平静;赵有淑;王全英;邓国华;陈化兰;

    将密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5以50μg和10μg剂量单次或加强免疫5周龄海兰褐蛋鸡。单次免疫后3周及加强免疫后2周,用100LD50高致病力禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,并分别于攻毒后3、5、7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果表明,pCAGGoptiHA5以10μg加强免疫后,可以诱导商品蛋鸡产生较高水平的HI抗体,并可保护免疫蛋鸡不发生高致病性禽流感病毒攻击后的死亡。

    2007年01期 No.127 62-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 123K]
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  • 疯牛病和羊痒病Western blotting检测方法的建立

    王辉暖;赵德明;宁章勇;杨建民;吴常德;郝俊峰;白玉;王传武;孟丽平;

    以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的马抗鼠酶标二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western blotting检测方法。对Western blotting各种反应条件进行摸索,并确定了最佳工作条件,结果表明:匀浆缓冲液为RIPA时的最佳反应条件包括浓缩胶电泳电压为恒压90V,分离胶电泳电压为恒压160V,转印的最佳电压和时间为恒压100V1.5h;封闭液为3%BSA时,封闭15min,封闭效果最好;AH6的最佳稀释度为1∶4000,4℃下孵育过夜,马抗鼠二抗的最佳稀释度1∶1000,室温下孵育30min。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics-Check WEST-ERN进口试剂盒的检测结果比较,发现其敏感性为100%,特异性为99.4%,与进口试剂盒(100%,100%)无显著差异,这为国产试剂盒研制提供了条件。

    2007年01期 No.127 66-69+73页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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  • 肉鸡肺动脉内皮细胞的体外培养和鉴定

    潘家强;孙卫东;李锦春;谭勋;王金勇;王小龙;

    分别采用组织贴块法和胶原酶消化法培养肉鸡肺动脉内皮细胞,并对其进行传代。采用形态学和凝血因子相关抗原免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定。结果表明,2种方法均能够获取原代肉鸡肺动脉内皮细胞,采用贴块法培养2周左右可获得单层生长的细胞,而采用胶原酶消化法3~5d即可获得单层生长的细胞。原代肉鸡肺动脉内皮细胞在体外可传5~6代。倒置显微镜和HE染色观察培养细胞的形态符合血管内皮细胞的特征,因子抗原免疫组化染色结果呈阳性进一步证明培养的细胞是肺动脉内皮细胞。

    2007年01期 No.127 70-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K]
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  • 鸡肠上皮细胞的分离及原代培养方法

    马玉龙;许梓荣;郭彤;尤萍;姜俊芳;

    取18日龄鸡胚,研究鸡肠上皮细胞(IEC)分离及原代培养的方法。结果表明:较好的分离条件是肠组织经0.1g/L中性蛋白酶和300U/mL胶原酶联合消化;较佳的培养条件是细胞在含2.5%~5%胎牛血清的DMEM培养基中,39℃、5%~7.5%CO2下培养,IEC可在1~2d贴壁,6~7d明显增殖,11~12d汇合成片。

    2007年01期 No.127 74-76+80页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 鸵鸟口咽腔结构特点与功能关系

    宋卉;彭克美;唐文花;刘华珍;王岩;位兰;杜安娜;唐丽;

    采用光学显微镜对非洲鸵鸟口咽腔及味蕾的结构功能特点进行了研究。结果显示,鸵鸟舌背面黏膜乳头发育不完善,且仅分布在舌尖处;味蕾散在分布于舌咽及上下颌的黏膜上皮,结构简单。另外还观察到,鸵鸟的唾液腺发达,舌、咽部黏膜的固有层内均有分布,腺泡由单层柱状粘液性上皮细胞构成。上述研究结果表明,鸵鸟味觉器官不发达,对食物的选择作用弱;其腺体发达,有利于食团润滑,便于吞咽。由此可见,鸵鸟味蕾及口咽腔的形态学特点与其摄食和吞咽习性相适应。

    2007年01期 No.127 77-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 492K]
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  • 高压静电场对雏鸡免疫器官T细胞功能和IL-2诱生活性的影响

    闵亚宏;吴春艳;郑世民;

    应用细胞培养技术和MTT测定法,对高压静电场照射1日龄雏鸡后,其免疫器官T细胞对ConA增殖功能和IL-2诱生活性的动态变化进行了观测。结果,高压正静电场对雏鸡免疫器官T细胞功能和IL-2免疫调节机能有促进作用,而高压负静电场可使上述被检指标降低。

    2007年01期 No.127 81-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 76K]
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  • 褪黑激素-牛血清蛋白主动免疫对皖西白鹅性腺表征的影响

    凌明亮;黄仁术;

    将64只皖西白鹅母鹅和16只公鹅随机均分为2组:试验组和对照组。试验组在产蛋的中后期应用褪黑激素-牛血清蛋白(MLT-BSA)进行2次免疫。结果,试验组全期产蛋量增加22.26%,平均采精量增加20.58%(P<0.01);进入休产期时,试验组左侧睾丸增重12.58%(P<0.05),右侧睾丸增重8.81%(P>0.05),卵巢增重24.36%(P<0.01);在整个试验期,试验组血清雌二醇、睾酮浓度平均增加30.32%、10.95%(P<0.05),血清孕酮浓度平均增加18.75%(P>0.05)。MLT-BSA对母鹅性腺激素和产蛋量的影响,期(第1次产蛋,在1月)比期(第2次产蛋,在4月)更为明显。试验为增强长日照繁殖动物的繁殖性能提供了新的方法和理论依据。

    2007年01期 No.127 84-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K]
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  • 猪苓菌丝体多糖对小鼠免疫水平的影响

    李太元;田广燕;许广波;李艳茹;金庆日;王浩然;付延军;韩贞珍;

    通过人工液体浅层培养方式培养猪苓菌丝体,用热水浸提法提取猪苓菌丝体多糖(PPS1),经纯化测定其糖含量,用红外光谱分析鉴定多糖;纯化鉴定的PPS1,通过小鼠进行腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、E玫瑰花环试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验、EAC花环试验等5项免疫学试验初步探讨其免疫药理学作用,同时与猪苓菌核多糖(PPS2)进行比较。试验数据经统计学分析显示,E玫瑰花环试验中PPS1与空白对照组相比差异显著(P<0.05);腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验及EAC花环试验PPS1与空白对照组相比差异极显著(P<0.01);5项免疫学试验PPS1与PPS2相比差异均不显著。结果表明,PPS1能明显提高小鼠的免疫功能。

    2007年01期 No.127 88-90+94页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察

    尹秀凤;张书霞;王艳;姜平;汤景元;

    用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。

    2007年01期 No.127 91-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 524K]
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  • β-内酰胺类药物对临床分离猪链球菌2型的体外抗菌活性

    李乾学;郭建顺;张锦霞;张作新;吴永魁;夏志平;

    采用微量稀释法测定了32种药物对临床分离猪链球菌的体外最小抑菌浓度(MIC),以美国临床检验标准委员会(NCCLS)的临界浓度做为判断标准,判定了猪链球菌2型对10种β-内酰胺类药物的耐药性。结果表明,临床分离的菌株以耐药菌为主,头孢他定(CTD)、头孢噻吩(CFT)、头孢曲松(CRX)、阿莫西林/舒巴坦钠(AMO/SUL)对猪链球菌2型的耐药率最高,达100%;其次为青霉素G(PEN)、苯唑西林(OCL)、哌拉西林钠(PPC),达90%以上,只有头孢噻肟(CTX)有微弱的抗菌活性,其耐药率也达82.6%。MIC500.5~32mg/L,MIC902~256mg/L。猪链球菌2型对β-内酰胺类药物耐药性已十分严重,应引起足够重视。

    2007年01期 No.127 95-97+102页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K]
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  • 用表达人溶菌酶基因的重组质粒防治干乳期奶牛乳腺炎

    薛方明;孙怀昌;钱科;仇华磊;吴春华;尹召华;

    将人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ)cDNA插入由pcDNA3改造而成的pcDNAK表达载体,用获得的重组载体pcDNAKLYZ转染COS-1细胞,经免疫荧光试验证明能进行正确表达。将重组载体注射于哺乳母鼠,取其乳汁进行溶菌酶活性测定,结果显示,分泌在乳汁中的重组hLYZ高达139mg/L。根据乳汁体细胞检测结果,选择健康奶牛和乳腺炎阳性奶牛,分别在干奶时和产犊前2周2次注射重组质粒pcDNAKLYZ,注射途径为乳腺基部穿刺,注射剂量为300μg/乳区,于产犊后1个月采集奶样进行体细胞检测,结果显示,对前一泌乳期发生的奶牛乳腺炎的治愈率为91.5%,对下一泌乳期奶牛乳腺炎的预防有效率至少为96.97%。由此认为,构建的表达hLYZ基因的重组表达质粒,可以替代抗菌素类油乳剂用于干乳期乳腺炎的防治。

    2007年01期 No.127 98-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K]
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  • 酮病、脂肪肝奶牛胰岛素受体mRNA丰度

    祝兴林;王哲;刘国文;何剑斌;孙玉成;

    选择自然发生的酮病奶牛、脂肪肝奶牛和正常围产期荷斯坦奶牛(对照)各5头,通过手术方法采取其肝脏样品,采用半定量RT-PCR方法检测了这3组奶牛肝脏样品胰岛素受体(InsR)mRNA丰度的变化。结果表明,酮病奶牛InsRmRNA相对表达量低于正常对照奶牛,而高于脂肪肝奶牛;脂肪肝奶牛InsRmRNA相对表达量低于正常对照奶牛和酮病奶牛(P<0.05)。可见,酮病奶牛InsRmRNA相对表达量下降,提示此有利于酮病奶牛糖异生和脂肪动员,从而缓解能量负平衡;脂肪肝奶牛InsRmRNA相对表达量降低,提示奶牛胰岛素应答显著减弱,此时奶牛可能发生了胰岛素抵抗。

    2007年01期 No.127 103-105+110页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 饲粮添加V_C对腹水肉鸡缺氧诱导因子-1α基因表达及机体氧化与抗氧化能力的影响

    曾秋凤;陈代文;张克英;余冰;丁雪梅;

    通过饲粮添加1.5mg/kg三碘甲状原氨酸(3,3′,5-triiodothyronine,T3)诱导肉鸡产生腹水综合征(AS),研究了饲粮中添加不同剂量的VC对肉鸡机体氧化与抗氧化能力、肺脏缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达及AS发病率的影响。结果表明:饲粮中添加不同剂量的VC可不同程度降低肉鸡心脏指数和AS发病率,1000mg/kgVC可显著降低肉鸡心脏指数(P<0.05);饲粮VC可增加AS肉鸡肝脏和血液的总抗氧化能力,降低MDA的含量,饲粮添加100、1000和10000mg/kgVC可显著降低AS肉鸡肝脏和血液MDA的浓度(P<0.05),添加100、500和10000mg/kgVC可显著提高血液T-AOC活性(P<0.05);VC可以显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低AS肉鸡肺脏HIF-1αmRNA和蛋白质表达水平,在1000mg/kg时,HIF-1α蛋白的表达量达到极显著性差异(P<0.01);从血液生化指标来看,VC可降低AS肉鸡血液中乳酸的水平和乳酸脱氢酶(LDH)的活力,在500、1000mg/kg时达到显著性差异(P<0.05)。以上结果表明饲粮中添加1000mg/kgVC对肉鸡AS有较好的防治效果。

    2007年01期 No.127 106-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K]
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  • 鸡肉组织中环丙沙星残留的ELISA与HPLC检测方法比较

    李岩松;周玉;李吉平;谭建华;

    利用单克隆抗体间接竞争ELISA方法测定了鸡肉中环丙沙星的残留,同时利用HPLC方法进行了比较分析。间接竞争ELISA法的线性范围为6.25~400μg/L,最低检测限为4.10μg/L。HPLC法的线性范围为0.06~500μg/L,最低检测限为0.06μg/L。在标准品添加量为1.5625×10-4~1.25×10-3g/kg时,ELISA方法的平均回收率为73.81%,批内变异系数为8.75%,HPLC方法平均回收率为80.41%,批内变异系数为1.27%。结果显示,ELISA方法与HPLC方法具有很好的相关性(r2=0.9925),该ELISA方法可用于鸡肉样品中环丙沙星的检测。

    2007年01期 No.127 111-113+117页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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  • 序贯培养法对猪孤雌激活胚胎发育能力的影响

    刘珠果;邱业锋;沈晓峰;阎新龙;吴晓洁;叶华虎;林艳丽;邓继先;

    经体外成熟、孤雌激活和培养获得猪胚胎,研究了不同培养体系、共培养体细胞和序贯培养对猪孤雌激活胚胎发育的影响。试验表明:孤雌激活卵母细胞在SOF+10%FCS培养体系中分裂效果最好,添加胎牛血清的NCSU-23和颗粒细胞对胚胎发育有促进作用,培养6d后发育到桑囊胚的比率增加(P<0.05)。在序贯培养的前3d,SOF培养基(不含葡萄糖)和颗粒细胞对胚胎的发育有促进作用,分裂率(P<0.05)和突破4细胞阻滞的数目显著增加,在培养的后3d,添加胎牛血清的NCSU-23和输卵管上皮细胞能支持较多胚胎发育到桑囊胚,桑囊胚的发育率为(59.5±3.2)%(P<0.05)。结果表明,SOF培养基和颗粒细胞+添加胎牛血清的NCSU-23和输卵管上皮细胞的序贯培养系统能较好的促进胚胎的发育。

    2007年01期 No.127 114-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K]
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  • 含海藻糖稀释剂增补EDTA对猪精子冷冻能力的影响

    金一;陈宠霞;王晓明;魏世宝;

    探讨了猪精子冷冻保存液中添加不同浓度的海藻糖(trehalose)和EDTA(0.05mol/L trehalose、0.05mol/L trehalose+2.0mmol/LEDTA、0.05mol/L trehalose+5.0mmol/L EDTA、0.1mol/L trehalose、0.1mol/L tre-halose+2.0mmol/LEDTA、0.1mol/L trehalose+5.0mmol/LEDTA)对猪精子冷冻效果的影响。结果表明,精子冷冻解冻后,0.1mol/Ltrehalose+2mmol/LEDTA混合处理组精子活力显著高于0.1mol/Ltrehalose处理组(P<0.05),0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组的精子生存率最高。0.1mol/Ltrehalose和2~5mmol/LEDTA混合处理组精子顶体完整率显著高于trehalose处理组(P<0.05),0.05~0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组低渗膨胀精子率显著高于trehalose处理组(P<0.05)。trehalose和EDTA混合处理组精子内活性氧(ROS)含量总体上高于trehalose处理组(P<0.05)。这些结果显示稀释剂中trehalose和EDTA增补能改善精液特性,但不能抑制精子内ROS的发生。

    2007年01期 No.127 118-120页 [查看摘要][在线阅读][下载 94K]
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  • 交感神经阻断小鼠妊娠早期子宫内肥大细胞的分布

    董玉兰;陈耀星;王子旭;荆海霞;

    为了研究交感神经对哺乳动物早期胚胎发育的影响机制,通过腹腔注射6-羟多巴胺使交感神经阻断后,观察了小鼠妊娠前期胚胎早期发育和肥大细胞数量和型别的变化。结果显示,交感神经阻断后,不仅对胚胎早期发育有影响,使胚胎着床数降低64.4%,而且影响子宫内肥大细胞的数量及其型别分布。妊娠4d(E4)时肥大细胞数量明显升高(P<0.01),同时肥大细胞分型也有所变化,即黏膜型肥大细胞主要存在于胚胎着床前和着床后,结缔组织型肥大细胞没有明显差异,混合型肥大细胞主要存在于着床期间。这一结果表明,妊娠早期子宫肥大细胞数量与型别的变化可能是交感神经影响早期胚胎发育的途径之一。

    2007年01期 No.127 121-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 417K]
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  • 澳洲波尔山羊胚胎3种冷冻方法对其胚胎移植效果的影响

    洪琼花;朱士恩;田树军;冯建忠;刘国世;曾申明;张忠诚;

    在25℃室温下,采用细管法(一步法、二步法)和OPS法,以不同浓度的EFS、EDFS为玻璃化冷冻液,对澳洲波尔山羊致密桑椹胚和囊胚进行玻璃化冷冻保存。同时利用1.5mol/LEG为抗冻保护剂对胚胎进行常规法冷冻保存。分别将上述3种方法冷冻解冻后的胚胎移植于同期发情后6~7d的云南黑山羊受体。结果表明,细管法胚胎玻璃化冷冻保存效果均以EFS40组为佳,解冻后胚胎移植产羔率分别为40.54%(15/37;一步法)和51.35%(19/37;二步法)。与新鲜胚胎移植产羔率(52.50%,21/40)和常规法冷冻保存的胚胎移植产羔率(45.16%,14/31)相比无显著性差异(P>0.05)。另外,用EDFS30玻璃化溶液,OPS法冷冻解冻后的胚胎移植产羔率高达51.43%(18/35),为整个玻璃化冷冻试验的最佳值。玻璃化冷冻方法简便、迅速,无论是细管法还是OPS法均获得了比较理想的胚胎移植效果。

    2007年01期 No.127 126-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 100K]
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  • 牦牛卵母细胞的体外成熟

    阎萍;许保增;郭宪;潘和平;杨博辉;

    以屠宰场牦牛卵巢为材料,比较了抽吸加切割法和抽吸法2种卵母细胞离体采集方法的效率和5种成熟培养液的培养效果,并研究了卵泡位置、形态对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:在牦牛乏情期,平均每个卵巢用抽吸加切割法回收卵数极显著高于抽吸法(9.33±4.30VS4.70±2.62,P<0.01),可用卵数也极显著高于抽吸法(5.63±4.19VS4.37±2.32,P<0.01)。将牦牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)分别置于5种成熟培养液中培养,其中M199(缓冲体系为Earles盐)+10% FBS+5.0mg/LLH+1.0mg/LE2+双抗(青霉素100IU/mL和链霉素100mg/L)的成熟液效果最好,成熟率为81.33%,卵裂率为49.33%。来自卵巢表面卵泡的COCs的成熟率和卵裂率均高于来自卵巢内卵泡的COCs(分别为81.33%VS69.33%,P>0.05;49.33%VS34.67%,P<0.05)。来自明亮卵泡的COCs的成熟率和卵裂率均极显著高于来自浑浊卵泡的COCs(分别为81.33%VS33.33%,P<0.01;49.33%VS3.33%,P<0.01)。

    2007年01期 No.127 130-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 102K]
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  • 聚乙烯吡咯酮与促卵泡素对奶牛活体采卵效率的影响

    江明生;韦英明;梁兴伟;梁嫒嫒;张明;蒋如明;卢克焕;

    采用4×4拉丁方设计,研究聚乙烯吡咯酮(PVP)溶解促卵泡素(FSH)一次肌肉注射对奶牛活体采卵效率和体内血清FSH含量的影响。将8头荷斯坦空怀母奶牛随机分为4组,每组2头,分别用5mgFSH+5mL15%PVP(15%PVP组)、5mgFSH+5mL30%PVP(30%PVP组)、5mgFSH+5mL生理盐水(对照组)和常规注射FSH(常规组)处理供体奶牛。试验期4个月,每月处理1次,各组均为处理后4d应用B型超声波导引采卵。结果如下:30%PVP组每头次平均可采卵泡9个,获可用卵母细胞4枚,与常规组比较差异不显著(P>0.05),但与对照组比较差异显著(P<0.05);15%PVP组每头次平均可采卵泡6个,获可用卵母细胞2.25枚,与对照组比较差异显著(P<0.05);体内血清FSH浓度,30%PVP组与常规组变化趋势相似,维持适宜FSH浓度时间较长,15%PVP组次之,而对照组注射后4~12h血清FSH浓度较高,以后急剧下降,表明PVP可延长FSH在体内存留时间,但以30%PVP效果最佳。

    2007年01期 No.127 134-136+141页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K]
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  • 影响黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的因素

    龙翔;余荣;耿利英;周木清;杨利国;

    从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析了影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加FSH(10IU/mL)、HCG(20IU/mL)和17β-E2(1mg/L)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著促进作用;等量牛卵泡液(BFF)与新生牛血清(NCS)对体外受精胚胎发育效果影响不显著,以15%BFF为宜;颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞+输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果显著。

    2007年01期 No.127 137-141页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K]
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  • 自杀性DNA疫苗

    孙世琪;郭慧琛;谢庆阁;

    2007年01期 No.127 142-144页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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