• 9株猪瘟分离毒株的致病特性

    王琴;宁宜宝;赵耘;王在时;张广川;范学政;宋立;秦玉明;沈青春;丘惠深;余兴龙;吕宗吉;徐兴然;涂长春;

    采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试验猪进行同居感染。如此进行,GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传至3代。结果显示:上述分离株传至3~5代过程中均表现出毒力增强的趋势,从3~5代传代到8(7)代的过程中毒力进一步增强并保持稳定,且均超过了标准石门强毒株的发病特点。所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,解剖后均表现出不同程度的病理变化,死后或解剖后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象进一步证实了猪是猪瘟病毒的敏感动物,各毒株之间毒力没有明显差异。对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1~F8代中的F6代有2个核苷酸的差异,引起1个相应氨基酸的变异,其余毒株的不同代次没有碱基发生变异,初步说明猪瘟病毒基因型表现相对的稳定性。

    2007年02期 No.128 145-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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  • 原核高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的特性及应用

    吴国平;郭川;曹敏杰;刘冰心;梁银龙;苏文金;

    从已构建的PRRSV ORF7重组质粒pUCm-T-ORF7中用PCR扩增ORF7基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-ORF7并转化大肠杆菌。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,成功表达了谷胱苷肽转移酶(GST)融合的核衣壳蛋白(N),重组N蛋白表达量约为菌体总蛋白的35%,主要以可溶的形式存在,且能形成同源二聚体。重组N蛋白经谷胱苷肽凝胶(glutathione sepharose 4B)亲和层析后得到高度纯化,并将该蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法。利用该方法对某猪场76份猪血清进行检测并将结果与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果作比较,2种方法的总符合率达93.4%,检测结果之间差异不显著(P>0.05)。结果表明大肠杆菌表达的重组GST融合N蛋白具有良好的抗原性,因而有望利用该重组蛋白开发为试剂盒应用于临床PRRSV抗体的检测。

    2007年02期 No.128 150-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 猪2型圆环病毒Cap蛋白在伪狂犬病病毒中的表达

    宋云峰;肖少波;曹胜波;张松林;陈焕春;金梅林;

    用EcoR酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ+基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞。收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2+。用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证明该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白。重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定。该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8TCID50/0.1mL。

    2007年02期 No.128 155-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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  • 猪圆环病毒2型感染对猪CD80和CD86 mRNA表达的影响

    周双海;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林;

    通过构建猪共刺激分子CD80和CD86的缺失cDNA竞争分子,用竞争PCR技术定量检测了猪圆环病毒2型(PCV2)感染后猪肺泡巨噬细胞(PAM)中CD80和CD86的mRNA水平,分析了PCV2感染对猪共刺激分子CD80和CD86的mRNA表达的影响。结果显示,PCV2感染后,PAM中CD80和CD86的mRNA水平变化趋势一致,只是CD86的升降幅度更大。在PCV2感染后3d,CD80与CD86的mRNA水平下降至最低,随后迅速上升,至14d达到高峰,尔后快速下降,21d及以后恢复正常。本研究结果表明,PCV2初期可明显抑制猪共刺激分子CD80和CD86的基因转录。

    2007年02期 No.128 159-163+167页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K]
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  • 鸡传染性法氏囊病病毒地方流行毒株的免疫原性

    马增军;芮萍;李佩国;刘华格;崔学文;张志全;董淑珍;

    从河北省一些发病鸡场分离到JD1~JD10共10株鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)毒株,用IBD标准阳性血清以琼扩试验进行了初步鉴定。并进行了IBDV分离物及其鸡胚适应毒免疫原对标准强毒IBDV-BC6/85株免疫保护试验,D78弱毒疫苗对IBDV各分离毒株的免疫保护试验以及分离毒株间交互免疫保护试验。结果表明,D78疫苗对JD2,JD5和JD10 IBDV分离株的保护率较低,分别为40%、50%和60%。分离毒株JD5、JD2及其鸡胚传代物E-JD2对强毒株的免疫保护率可达100%。交互免疫保护试验表明,JD2对其余各分离株的免疫保护指数达到80%以上,对标准强毒株和地方分离株均可产生有效免疫保护。

    2007年02期 No.128 164-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • 核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用

    莫胜兰;刘惠莉;陆承平;

    以地高辛(DIG)标记鸡传染性支气管炎病毒(IBV)pol基因的保守片段制成核酸探针,与IBV参考株、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽流感病毒、正常鸡胚尿囊液及正常鸡肾组织等的RT-PCR产物进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与IBV毒株的RT-PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒和组织的RT-PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,探针最低能检出约3.4pg的IBVRT-PCR产物。用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性;而用RT-PCR法扩增IBVS2基因确诊为阳性的只有29份。对人工接种IBV H52弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性。结果表明,利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。

    2007年02期 No.128 168-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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  • 鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达

    毕玉海;丁壮;徐明;李志杰;常爽;黄海楠;宋子运;尹仁福;杜眉;

    根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。

    2007年02期 No.128 172-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K]
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  • 鹅副粘病毒F基因的克隆及遗传变异分析

    董国英;丁壮;

    以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体。经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序。测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1~374bp氨基酸序列。序列分析表明,LN-7-02株F蛋白裂解位点区的氨基酸组成为112R-R-Q-K-R-F117,与禽型副粘病毒(APMV-1)强毒株特征相符。将LN-7-02与AMPV-1株CH2000、F48E9和LaSota进行同源性比较,结果LN-7-02与CH2000、F48E9和LaSota的同源性分别为91.8%、86%和84%,表明该毒株相对于经典的APM V-1在F基因上已发生了较大变异。根据国内外70株APM V-1的F基因核苷酸序列绘制系统发育进化树,结果疫苗株Lasota属于基因Ⅱ型,经典株F48E9属于我国特有的基因Ⅸ型,而LN-7-02株与鹅副粘病毒JS-9-01、ZJ-100和GD-QY97同属于APMV-1基因Ⅶ型。

    2007年02期 No.128 176-179页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
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  • 副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用

    尹秀凤;王艳;姜平;李玉峰;蒋文明;

    通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA,结果为阳性;检测肝脏、脾脏、脑组织样品抽提的DNA,结果为阴性。用该法检测人工感染发病仔猪及自然感染仔猪肺组织,并结合细菌分离培养,证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离菌体,可有效地用于HPs的诊断。检测110份来自发病猪场的患病仔猪肺脏病料,其中有53份为阳性,表明HPs所致发的Glasser′s病已在我国部分地区发生和流行。

    2007年02期 No.128 180-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性

    邢海云;高英杰;宁官保;赵建增;乔彦良;李朝阳;

    鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺。结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG0.2~1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响。经LabImage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在。将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性。12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长。

    2007年02期 No.128 184-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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  • 鸡毒霉形体pMGA基因中TGA的同义突变及其原核表达

    胡思顺;肖运才;李自力;毕丁仁;

    为了进一步研究鸡毒霉形体黏附素蛋白(pMGA)基因的生物学特性,利用PCR对该基因进行分段扩增,同时同义突变编码色氨酸的TGA及另外2个氨基酸的编码子以便形成酶切位点。将扩增片段连入pMD18-T载体获得含不同长度片段的质粒pMD-Ⅰ,pMD-Ⅱ,pMD-Ⅲ和pMD-Ⅳ,利用限制性内切酶消化pMD-Ⅰ和pMD-Ⅱ及pMD-Ⅲ和pMD-Ⅳ后回收相应的片段并进行连接获得pMD-Ⅴ(Ⅰ+Ⅱ)和pMD-Ⅵ(Ⅲ+Ⅳ)。再用限制性内切酶消化pMD-Ⅴ和pMD-Ⅵ,回收Ⅴ和Ⅵ,并将其插入表达载体pGEX-KG中构建了含突变基因的GST融合表达载体。同时分别构建了片段Ⅲ及Ⅳ的GST融合表达载体。在IPTG诱导下,构建的表达载体在BL21(DE3)中获得了高效表达。表达产物相对分子质量大小分别为92000、39000、60000,经Western blotting分析证明均具有免疫原性。

    2007年02期 No.128 188-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 237K]
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  • 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体毒素对小鼠体内猪蛔虫三期幼虫的作用及其免疫组织化学定位

    冯汉利;姚宝安;周艳琴;赵俊龙;孙明;喻子牛;

    将培养好的感染性猪蛔虫卵以每只5×103个虫卵感染小鼠,于次日以不同方式(灌胃、肌肉注射、静脉注射和腹腔注射)注入苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,Icps),对照组静脉注射BSA(小牛血清白蛋白),每只0.5mL,连续3d。小鼠于第6天剖杀,肝脏分离幼虫,计算减虫率。取肝脏,以4%多聚甲醛固定48h,制作石蜡切片,应用免疫组织化学SABC法定位蛔虫幼虫体内的Icps。研究结果显示,静脉注射晶体蛋白毒素效果最好,减虫率达到72.7%;肌肉注射、灌胃、腹腔注射效果次之,分别为19.1%、14.6%、14.36%。免疫组织化学研究显示,Icps结合到虫体的体表及肠道。

    2007年02期 No.128 192-194+199页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K]
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  • 狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗田间免疫效果评定

    肖跃强;李海涛;刘澜;张守峰;扈荣良;

    以狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗pVGN免疫3月龄至8岁龄家犬302条,分为2组:组201条,两侧股内侧肌注;组101条,单侧股内侧肌加单侧耳廓皮内联合注射。免疫3次,剂量为每条犬每次300μg,于试验的0d和35d分别进行。三免后21d用间接ELISA检测特异性抗体,Western-blot分析抗体组成,间接免疫荧光和小鼠中和试验测定抗体中和效价。结果显示,三免后抗体阳转率为58%,组间抗体水平差异不显著(P>0.05),机体产生了抗糖蛋白、核蛋白2种特异性抗体,抗体稀释8~512倍后,每50μL可以中和100 TCID50狂犬病病毒SRV9,个别稀释到2048倍仍具有中和作用,抗体稀释8~16倍后每15μL可中和120 MICLD50狂犬病病毒CVS,少部分犬三免后抗体稀释16~32倍后能中和300 MICLD50狂犬病病毒CVS。说明该疫苗具有良好的免疫原性,且诱生的抗体能发挥病毒中和作用。

    2007年02期 No.128 195-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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  • 禽流感病毒H5亚型主要保护性抗原在禽痘病毒中的高效表达

    陈素娟;孙蕾;石火英;彭大新;刘秀梵;

    将H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因克隆入插入载体p11S中获得重组转移质粒p11SH5A,通过酶切鉴定获得了预期的转移质粒p11SH5A,将质粒p11SH5A和野生禽痘病毒(wtFPV)共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-11SH5A。以间接免疫荧光法证实,HA基因得到了表达。将该重组病毒rFPV-11SH5A以105PFU/只免疫7日龄SPF鸡,于7、10、14、18、21d分别采血分离血清检测HI抗体,于免疫21d后用105ELD50的野生病毒进行肌肉注射观察疫苗保护率。结果表明,该疫苗能提供100%的保护。

    2007年02期 No.128 200-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K]
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  • 鸡输卵管表达的重组人溶菌酶的鉴定

    朱秋菊;孙怀昌;赵敏苏;王永娟;李国才;

    为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗兔IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同pH的溶液稀释,40℃孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0~11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用。这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱。

    2007年02期 No.128 203-206+210页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K]
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  • Tet-on系统诱导表达c-myc转基因小鼠的建立

    吴红;张成香;郑逸梅;金宇娟;孙强;李厚达;

    从Hela细胞RNA中通过RT-PCR扩增出c-myc基因的cDNA,将c-myc cDNA克隆入Tet-on系统的反应元件pTRE2载体,与含有Tet-on系统的调控元件pBC-rtTA基因混合显微注射到FVB小鼠受精卵的雄原核中,共注射603枚卵,将注射后存活的263枚卵移植到21只假孕母鼠输卵管内,有17只怀孕,共产仔59只。PCR和Southern blotting检测有2只双基因阳性公鼠和1只c-myc单基因阳性公鼠。3只公鼠的F1代PCR检测表明,其携带的c-myc外源基因均具有遗传性。

    2007年02期 No.128 207-210页 [查看摘要][在线阅读][下载 285K]
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  • 中国鲎(Tachypleus tridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性

    郑伟;韩文瑜;韩俊友;张钫;雷连成;乔红伟;

    从中国鲎血细胞RT-PCR扩增抗菌肽tachyplesins基因,经改造构建原核和真核表达载体pET-KRN、pPIC9-KRY,并分别在大肠杆菌DE3和毕赤酵母GS115中诱导表达。用Tris-Tricine SDS-PAGE检测并进一步电洗脱纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,表达产物KRN对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌的抑菌环为25、22、25、16mm;MIC值为3.57、7.14、3.57、14.28mg/L。表达产物KRY对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌和李氏杆菌的抑菌环为26、22、25、18、16mm;MIC值为1.57、3.14、1.57、6.28、6.28mg/L,对水霉的抑菌效果尤其显著,抑菌环达35mm。

    2007年02期 No.128 211-213+217页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K]
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  • 猪尿液中抗菌药物快速筛选拭子法的建立

    伍金娥;宋士波;王玉莲;范盛先;常超;袁宗辉;

    为防止抗菌药物在动物性食品中的残留,以枯草芽孢杆菌为受试菌,建立一种检测活体动物尿液中抗菌药物残留的快速筛选拭子法,进行宰前活体检疫。添加试验测定猪尿液中5类抗菌药物最低检测限分别为:β-内酰胺类青霉素和氨苄青霉素均为0.05mg/L;氨基糖苷类庆大霉素0.05mg/L、新霉素0.4mg/L;四环素类金霉素0.1mg/L;大环内酯类红霉素0.05mg/L和氟喹诺酮类恩诺沙星0.2mg/L。各抗菌药物添加回收率范围均在64.0%~107.7%,变异系数均小于15%。假阴性结果显示,除青霉素(5%)和氨苄青霉素(4%)出现假阴性外,红霉素、庆大霉素、新霉素、恩诺沙星和金霉素均未出现假阴性。与国外同类试剂盒比较,结果显示两者对10种抗菌药物的检测限一致。

    2007年02期 No.128 214-217页 [查看摘要][在线阅读][下载 102K]
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  • FSH分泌细胞在皖西白鹅脑垂体中的分布与定位

    李福宝;李梅清;方富贵;蒋书东;王慧;

    采用免疫组化SABC法并结合DAB显色技术对皖西白鹅脑垂体结构和促卵泡素(follicular stimulating hormone,FSH)分泌细胞进行了研究和定位。结果发现,皖西白鹅的垂体前叶由远侧部和结节部构成,没有中间部。垂体FSH免疫阳性细胞分布广泛,但前叶远侧部分布较多,从而表明皖西白鹅整个垂体都有FSH分泌,主要分泌部位在垂体前叶的远侧部。

    2007年02期 No.128 218-220页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K]
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  • 日本开发出禽流感病毒快速检测法

    2007年02期 No.128 220页 [查看摘要][在线阅读][下载 32K]
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  • 硼对鸡10项生理生化指标的影响

    商常发;顾有方;莫俊生;陈会良;

    300羽1日龄固始鸡随机分为4组,探讨在饮水中补充硼对鸡10项生理生化指标的影响,为研究硼的生物学作用提供科学依据。结果表明,补硼鸡体温、心跳和呼吸次数无明显变化;全血硼含量增加;红、白细胞数、血红蛋白含量和血清钙、磷、镁随着补硼量的增加而降低。

    2007年02期 No.128 221-223页 [查看摘要][在线阅读][下载 88K]
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  • 实验性天府肉鹅锌中毒症的病理学观察

    彭西;崔恒敏;邓俊良;赵翠燕;黎德兵;

    1日龄天府肉鹅健雏200只,随机分为4组,分别喂以:(1)基础日粮(Zn100mg/kg日粮,对照组)、(2)基础日粮+Zn900mg/kg、(3)基础日粮+Zn1400mg/kg、(4)基础日粮+Zn1900mg/kg,试验期7周,进行系统的病理学观察。中毒组雏鹅出现生长迟缓、拉稀、跛行等临床症状。组织学观察,肝细胞颗粒变性,骨骼肌及肌胃平滑肌变性坏死,胸腺、腔上囊和脾脏淋巴细胞数量减少、变性、坏死。血液病理学变化,主要是血清碱性磷酸酶活性下降,骨/肝碱性磷酸酶比值升高,谷丙转氨酶、肌酸激酶及淀粉酶活性程度不同地升高,血清胰岛素含量升高,仅基础日粮+Zn1900mg/kg组49日龄降低。结果表明,高锌对鹅可产生明显的毒害作用。

    2007年02期 No.128 224-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 418K]
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  • 犬瘟热自然病例脱髓性脑病发生的机理

    潘耀谦;龙塔;董发明;刘志军;

    为了进一步调查脑组织的髓鞘脱失与神经胶质细胞等成份的关系,用12只犬瘟热自然病例通过病理组织学和免疫组织化学染色法进行了本试验。结果表明:髓鞘脱失部位的脑组织伴有明显的血液循环障碍,即淤血、水肿、血栓形成和弥漫性血管内凝血;少突胶质细胞发生代谢紊乱和凋亡;用抗犬瘟热病毒(CDV)抗体染色,星状胶质细胞呈现强阳性反应;用抗GFAP染色,纤维性星状胶质细胞在脱髓区呈较强阳性反应,用TUNEL染色可检出发生凋亡的星状胶质细胞;一些室管膜细胞也被CDV感染,许多含有包涵体和凋亡的室管膜细胞在脑室壁被发现;少数神经元变性和皱缩,其核发生浓缩。据此认为,脑组织的髓鞘脱失主要与血液循环障碍和少突胶质细胞的代谢紊乱及凋亡有关;脑组织的髓鞘脱失是许多病因共同作用的结果,并非是一种病因所致。

    2007年02期 No.128 229-233+236页 [查看摘要][在线阅读][下载 550K]
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  • 实验性猕猴1型糖尿病模型的建立及评价

    庞荣清;何占龙;王惠萱;张步振;方伟;屈璐;周平;潘兴华;

    7~10岁健康猕猴15只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组5只,分别按照100、125、150mg/kg的剂量一次性静脉注射链脲菌素,连续观察血糖、血浆C肽和胰岛素浓度的动态变化,观察期15周。结果:与注射链脲菌素前比较,注射后1周,Ⅰ组猕猴血糖浓度明显升高,血浆C肽和胰岛素浓度显著下降(P<0.01),随后趋于正常水平,而Ⅱ、Ⅲ组猕猴血糖浓度明显升高并在随后的时间内持续维持在高水平,血浆C肽和胰岛素浓度持续维持在低水平(P<0.001),Ⅲ组动物至15周全部死亡。结论:按照125mg/kg的剂量一次性给猕猴静脉注射链脲菌素,可成功复制1型糖尿病动物模型,其维持高血糖和低胰岛素及C肽浓度至少15周。

    2007年02期 No.128 234-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 73K]
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  • 银杏叶提取物对大鼠脾脏免疫细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

    何玉龙;范光丽;吴月红;阿依木古丽;田光明;王根辈;

    24只SD雌性大鼠随机分为假手术组(A组)、卵巢摘除组(B组)、卵巢摘除并银杏叶提取物(EGb)治疗组(C组),利用免疫组化染色检测脾脏中Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达。结果发现,B组大鼠脾脏内Bcl-2蛋白表达显著减少,而Bax蛋白表达显著增加;C组Bcl-2蛋白表达明显回升(P<0.01),而Bax蛋白表达明显回落(P<0.05)。表明银杏叶提取物可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2与Bax的比值(Bcl-2/Bax)而维护脾脏的免疫自稳状态。

    2007年02期 No.128 237-239页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的大鼠实验性乳腺炎的作用

    朱于敏;陈伟华;邹思湘;

    72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),对照组于产后0h左后腿胫骨前肌内注射0.01mol/L、pH7.2 PBS100μL/只;试验组肌注CpG-DNA 200μg/只。产后72h经乳头管灌注2×1012CFU/mL金黄色葡萄球菌各100μL/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前0h,灌注后8、16、24、48和72h(n=6)颈静脉放血处死。结果显示,乳腺组织细菌数在灌注后24h上升至最高,CpG-DNA能显著降低8、16和72h的细菌数。IL-2在不同时间点有显著下降,对照和试验组乳腺组织IL-2分别在16和24h下降至最低。TNF-α在24h达最高,CpG-DNA能显著提高0、24和72h乳腺组织TNF-α水平。CpG-DNA能显著提高血清感染后各时间点及乳腺组织0和16h MPO水平。乳腺组织NAGase和白蛋白在24h上升至最高,血清中24h下降至最低。CpG-DNA能显著降低48和72h乳腺组织NAGase活力,并极显著降低8和72h乳腺白蛋白浓度。上述结果显示,CpG-DNA可促进细胞因子的产生,减少乳腺组织细菌数量,减轻炎症介质对细胞和血-乳屏障完整性的损伤,提示CpG-DNA对金黄色葡萄球菌感染诱发的大鼠乳腺炎有一定的保护作用。

    2007年02期 No.128 240-244页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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  • 豆类丝核菌次级代谢产物的急性毒性与致突变性试验

    何欣;杨鸣琦;朱晓飞;路宏朝;云彦;白慧;娜琳;刘磊;

    通过经口急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验对豆类丝核菌次级代谢产物的急性毒性和致突变性进行了研究。结果表明,以该代谢产物中苦马豆素的量计算,小鼠经口急性毒性试验的LD50为226.46mg/kg,LD50的95%可信限为158.49~323.59mg/kg,是治疗肿瘤剂量的14~84倍,属于实际低毒级药物。微核试验和精子畸形试验的各试验组与阴性对照组比较差异均不显著(P>0.05),说明豆类丝核菌次级代谢产物无明显致突变性;各试验组之间比较差异均不显著(P>0.05),说明微核的形成和精子畸形的形成与受试物无量效关系。结论:豆类丝核菌次级代谢产物是一种较安全的抗肿瘤药物。

    2007年02期 No.128 245-247页 [查看摘要][在线阅读][下载 68K]
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  • 瘦蛋白(Leptin)对体外培养新生牛脂肪细胞Leptin、HSL基因表达的影响

    张才;牛淑玲;王哲;张嘉保;张国才;刘国文;陈玉江;

    取单层生长良好的脂肪细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100μg/L的外源牛重组瘦蛋白(Leptin),培养12h后提取总RNA,每个处理3个重复(孔),应用半定量PCR方法检测外源Leptin对脂肪细胞Lep-tin mRNA和HSLmRNA水平的影响。结果表明,Leptin对脂肪细胞内Leptin mRNA表达具有抑制作用,但一定浓度的Leptin能提高脂肪细胞内HSL mRNA水平,其中以5μg/LLeptin的作用最为明显;当Leptin的质量浓度超过5μg/L,HSL mRNA表达水平呈下降趋势。

    2007年02期 No.128 248-251页 [查看摘要][在线阅读][下载 297K]
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  • 德发现植物具有特殊免疫系统——为动物免疫专家提出了新课题

    2007年02期 No.128 251页 [查看摘要][在线阅读][下载 24K]
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  • 不同培养基对小鼠胚胎干细胞培养的影响

    黄奔;石德顺;蒙超衡;杨素芳;

    探讨了培养基中各组成(基础培养基、添加物、血清)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)培养的影响。结果如下:GMEM与DMEM这2种基本培养基在对ES细胞维持培养上差异不显著。GMEM+18%血清+4mmol/L谷氨酰胺+0.1mmol/L非必需氨基酸、DMEM+18%血清+4mmol/L谷氨酰胺+0.1mmol/L非必需氨基酸以及DMEM+18%血清,这3种培养基都有较好的对ES细胞维持培养能力。在培养基中不需要额外添加谷氨酰胺和非必需氨基酸。血清浓度会直接影响ES细胞培养效果,应使用18%的优质血清。

    2007年02期 No.128 252-254页 [查看摘要][在线阅读][下载 253K]
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  • 猪精子α-L-岩藻糖苷酶活性定位及其在精-卵结合及受精中的作用

    宋学雄;朴英姬;曹国强;张金玉;

    本试验旨在证明猪精子中α-L-岩藻糖苷酶的存在及其在受精中的作用。猪精子α-L-岩藻糖苷酶活性用分光光度计405nm波长测定,并在受精液中添加α-L-岩藻糖苷酶特异抑制因子(deoxyfuconojirimycin hydrochloride,DFM-H)或特异单糖(L-岩藻糖)来检测对该酶活性的影响。结果显示,猪精子含有明显的α-L-岩藻糖苷酶活性。当精子用10μmol/L钙离子载体A23187处理1h后,有70%精子发生顶体反应和72%的酶活性被释放。体外受精液中添加250μmol/LDFM-H或30mmol/L L-岩藻糖,可分别抑制66%或63%的精子α-L-岩藻糖苷酶活性,并相应抑制37%或36%的透明带表面精子结合数及56%或67%的精子侵入卵数。这些结果证明,猪精子α-L-岩藻糖苷酶主要分布于精子顶体中,特异地作用于透明带寡糖链中的α-L-岩藻糖残基,而参与精子穿入透明带的过程。

    2007年02期 No.128 255-259+263页 [查看摘要][在线阅读][下载 314K]
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  • 牛体细胞核移植胚胎的批量化生产

    谭世俭;石德顺;

    利用2枚显微去核后的半卵与1枚供体细胞同步融合,并结合微穴法(WOWs)培养体系批量化生产成年牛克隆胚胎(日产40~80枚)。结果,重构胚电融合率95.7%(3059/3197)、卵裂率87.1%(2637/3027)、囊胚率41.1%(1244/3027)和可冻胚率(72.5%,933/1244)均达到较高水平。克隆胚胎采用玻璃微管玻璃化冷冻保存数月后移植,30日龄时妊娠率为28.1%(48/171),已经产下5头足月克隆牛续。结果表明,该方法具有产业开发潜力。

    2007年02期 No.128 260-263页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K]
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  • 牛卵泡卵母细胞的体外成熟和冷冻保存

    许卫华;王子玉;王锋;偶健;周冬仁;

    在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟;无论是程序冷冻还是玻璃化冷冻,乙二醇(EG)与甘油(GLY)相比更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻效果;在程序冷冻中,冷冻液中添加0.1 mol/L蔗糖比添加0.3mol/L的蔗糖更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻;在玻璃化冷冻中,37℃和25℃的平衡温度比4℃更适合牛卵泡卵母细胞的冷冻;在10%、5%、1%的预平衡浓度之间,5%的预平衡浓度即可达到预平衡的效果;在解冻时,多步脱除保护剂更能保护冷冻的卵母细胞;比较了几种最小样本量(minimum size sample,MSS)玻璃化冷冻方法,解冻成熟培养后的成熟率,拉细毛细玻璃管冷冻法为(41.67±3.19)%,极显著高于未拉细毛细玻璃管冷冻法(glassmicropipette,GMP)的(30.19±1.93)%和固体表面冷冻法(solid surface vitrification,SSV)的(28.33±2.89)%(P<0.01)。

    2007年02期 No.128 264-269页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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  • 冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞发育的影响

    李雪松;桑润滋;李俊杰;孙树春;

    比较了不同冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活后的发育效果。结果表明,开放式拉长塑料细管(OPS)法的效果好于玻璃化细管法和常规冷冻法;在OPS法中,20% EG+20% DMSO对卵母细胞的冷冻保护效果好于EDFS40,而在玻璃化细管法冷冻中,则是EDFS40好于20% EG+20% DMSO。对于常规冷冻法而言,则是1.5mol/L EG的冷冻效果好于1.5mol/LPROH。

    2007年02期 No.128 270-273+278页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 地方鸡种与隐性白羽鸡遗传变异的AFLP指纹

    高玉时;屠云洁;钱勇;李慧芳;陈宽维;童海兵;

    利用6对AFLP引物组合对我国12个地方鸡种和引进鸡种隐性白羽鸡进行了遗传检测,统计了每个引物组合在各个品种中检测到的多态性条带和特异性条带,计算了13个鸡种的遗传相似系数和遗传距离,并据此构建了UPGMA聚类关系图,分析了所研究鸡种的遗传关系。结果表明:6对AFLP引物组合在13个鸡种中共检测到290条多态性条带,平均每个引物组合产生48.3条多态性标记,同时在每个品种群体中还检测到了数量不等的特异性条带,其中寿光鸡和东乡黑鸡最多,为9条,旧院黑鸡、兴义矮脚鸡和隐性白羽鸡最少,为1条。13个鸡种聚为4类,其中隐性白羽鸡单独聚为一类,鸡种间的遗传相似系数及聚类结果与各个鸡种的地理分布、现实状况相吻合,从而表明AFLP指纹用于我国地方鸡种的遗传多态性分析、品种鉴定及品种间亲缘关系分析是可行的。

    2007年02期 No.128 274-278页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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  • 纳米载铜蒙脱石对断奶仔猪腹泻、肠道菌群及肠粘膜形态的影响

    马玉龙;郭彤;许梓荣;

    选用96头健康“杜长大”三元杂交断奶仔猪,随机分为3组,每组8头,设4个重复,分别饲喂基础日粮(对照组)、基础日粮+2.0g/kg纳米蒙脱石(MMT)、基础日粮+2.0g/kg纳米载铜蒙脱石(MMT-Cu),研究了MMT-Cu对断奶仔猪腹泻、肠道菌群及其肠粘膜形态的影响。结果表明,与对照组相比,饲料中添加2.0g/kg MMT-Cu,能显著(P<0.05)提高断奶仔猪的平均日增重和饲料转化效率,显著降低腹泻率(P<0.05);显著降低(P<0.05)小肠和结肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌的数量;显著提高(P<0.05)小肠绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度的比值;显著提高(P<0.05)十二指肠微绒毛高度。与对照组相比,添加2.0g/kg MMT也能显著降低断奶仔猪腹泻率(P<0.05),提高(P<0.05)小肠绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度的比值,但对于断奶仔猪的生长性能和肠道菌群无显著影响(P>0.05)。与添加2.0g/kg MMT相比,添加2.0g/kg MMT-Cu能显著降低(P<0.05)小肠和结肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌的数量。

    2007年02期 No.128 279-283页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K]
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  • 热休克蛋白70研究新进展

    孙培明;王志亮;李金明;鲍恩东;

    2007年02期 No.128 284-288页 [查看摘要][在线阅读][下载 120K]
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  • 《中国兽医学报》荣获首届中国高校特色科技期刊奖

    本刊编辑部;

    2007年02期 No.128 288页 [查看摘要][在线阅读][下载 30K]
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