预防兽医学

  • 伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立

    阳爱国;郭万柱;赵银丽;徐志文;王小玉;

    试验以pPGE DNA为模板,用1对分别含有EcoRⅠ和Bam HⅠ酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物,扩增出约1.7kb的含完整gE基因的DNA片段;目的片段经EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切后,插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE,并转化大肠杆菌DH5α;对温敏诱导表达所获产物进行SDS-PAGE、Western-Blot和琼脂双扩散检测。结果表明,gE糖蛋白得到了高效表达,表达产物约占总蛋白的17%。为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪,用表达纯化的gE蛋白为抗原,建立了GE-ELISA方法。选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6mg/L,血清最适稀释度为1∶40。测试结果:与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应,而与PRV标准阳性血清呈阳性反应。这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于猪伪狂犬病的临床诊断,尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别。

    2007年03期 No.129 289-291+304页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K]
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  • 猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立

    杨利峰;杨建民;周向梅;彭红;赵德明;

    将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。

    2007年03期 No.129 292-295页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用

    何永强;云涛;梁华丽;林林;华炯钢;

    对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。

    2007年03期 No.129 296-299页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • 实时荧光定量RT-PCR检测中、强毒力新城疫病毒RNA

    岳华;俞宁;汤承;李名杨;

    根据新城疫病毒(NDV)核苷酸序列,设计针对中、强毒力NDV F基因编码融合蛋白裂解位点的核苷酸序列引物和TaqMan探针,建立了实时荧光定量反转录荧光定量PCR(RRT-PCR)检测中、强毒力NDV RNA的方法。该方法能从含有NDV系疫苗毒、NDV标准强毒株F48E9(基因型)、分离鸡源强毒株(基因型)和鸽源强毒株(基因型)样本中检出NDV RNA,不与NDV弱毒株(LaSota、Clone30、B1、V4)、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒及健康鸡组织RNA发生交叉反应,对NDV核酸的最小检出量为60个拷贝,具有检测速度快、特异性强、灵敏度高、重复性和稳定性好等特点。从9个临床样本中均检测出阳性信号(9/9),PCR产物经测序证明均含有NDV强毒株F基因裂解位点;用其中8份病料接种SPF鸡胚分离病毒,分离率为5/8。

    2007年03期 No.129 300-304页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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  • 上海地区野鸟和家禽中PRRSV抗体的血清学调查

    孙泉云;周锦萍;刘佩红;鞠龚讷;薛霞;李凯航;

    2005年3~5月,采用ELISA法对来自于上海地区的208份野鸟和357份家禽的血清样品进行了猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体的血清学调查。结果表明,受检的5种家禽存有不同程度的抗体阳性率,而野鸟的阳性样品集中于绿头鸭和麻雀。

    2007年03期 No.129 305-306+310页 [查看摘要][在线阅读][下载 80K]
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  • 传染性法氏囊病免疫保护试验中3种评定指标的比较

    程太平;蒋桃珍;胡建兵;荣俊;

    100只SPF鸡均分为5组,A、B、C3组免疫后攻毒,接种3批次自制的IBD基因工程重组亚单位油乳剂疫苗;D组不免疫不攻毒,E组不免疫而攻毒。免疫后第22天,感染IBDV强毒株BC-6/85。攻毒后第4天,将所有存活的鸡只以颈脱臼致死,收集法氏囊,以3种方法和指标(法氏囊眼观病变;法氏囊显微病变;法氏囊中IBDV抗原检测)进行分析,以评定免疫保护率。结果显示,以这3种方法和指标评定,A组免疫保护率为90%,B、C组免疫保护率均为95%;试验鸡A3、A14、B7、C16、E1~E20,法氏囊眼观病变明显,法氏囊显微病理损伤评分为3~5分,琼脂免疫扩散试验检测法氏囊中IBDV抗原均为阳性;其他试验鸡,法氏囊眼观无明显异常,法氏囊显微病理损伤评分在3分以下,琼脂免疫扩散试验检测法氏囊中IBDV抗原均为阴性。结果表明,这3种方法和指标在IBD疫苗免疫保护试验评定中具有很好的一致性。

    2007年03期 No.129 307-310页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K]
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  • 应用基因芯片技术检测禽4种主要疫病的研究 Ⅱ.检测基因芯片的构建及制备

    曹三杰;文心田;肖驰;张焕容;肖国生;杨利;

    本试验进行了NDV-IBV-AIV-IBDV检测基因芯片的构建及制备。以构建的重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备靶基因,异丙醇沉淀法进行纯化,制备的靶基因质量浓度可达161.88~1218.36mg/L。将靶基因以点样缓冲液稀释至100mg/L,以芯片点样仪SpotArray24将靶基因点制在氨基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。点样基片经室温干燥2h、水合处理10s、紫外线交联25min和0.2%SDS洗涤5min等系列处理后,成功制备出检测基因芯片。试验以PCR扩增标记制备检验探针,对制备的检测芯片进行质量检验。结果表明,制备的NDV-IBV-AIV-IBDV检测基因芯片质量好,可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行检测。

    2007年03期 No.129 311-314+318页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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  • 血清Ⅰ型鸭源副粘病毒HN蛋白基因的遗传变异及原核表达

    刘艳华;丁壮;常爽;毕玉海;徐明;

    参考GenBank发表的鹅副粘病毒(GPMV)SF02株基因组核苷酸序列,设计并合成了1对特异性引物,采用RT-PCR技术扩增鸭源血清Ⅰ型禽副粘病毒DP1/02株的HN基因,并进行遗传变异及原核表达研究。结果显示,HN基因共1716bp,编码571个氨基酸,存在6个潜在的糖基化位点和13个完全保守的半胱氨酸(C)残基。与GenBank中收录的鹅源副粘病毒HN基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为81.3%~98.3%和87.2%~98.4%,系统进化树分析表明DP/02株与鹅源副粘病毒处于同一进化分支。经SDS-PAGE、Western-blot分析,原核表达的HN蛋白相对分子质量在63000左右,1mol/L(终浓度)IPTG时间梯度诱导,3h时HN蛋白表达量最高,占整个菌体蛋白含量的30%,且能与鼠抗鸭源血清Ⅰ型禽副粘病毒阳性血清反应。

    2007年03期 No.129 315-318页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K]
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  • 新城疫病毒V4株主要基因的克隆与序列分析

    刘芳宁;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;杨增岐;

    设计4对引物,利用RT-PCR技术分别扩增出新城疫病毒(NDV)V4株长约4.2、4.1、4.1、3.5kb的4个互相重叠的核苷酸片段,并分别进行了克隆和序列测定。将这4个片段的核苷酸序列拼接后,得到长为15061bp的核苷酸序列。该序列包含有NDV V4株结构基因NP的全部编码区和5′端非编码序列,结构基因P、M、F、HN及L基因的全部编码区和非编码区序列,各结构基因之间的间隔序列以及基因组5′端部分尾巴序列(108bp)。序列比较分析表明,NDV V4株F蛋白裂解位点序列为112GKQGRL117,HN基因编码616个氨基酸,符合无毒株的特征;NDV V4株同基因组长度为15186bp的毒株一样,在基因组的1647~1648bp间比基因组长为15192bp的毒株少了6个碱基。

    2007年03期 No.129 319-321+362页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立

    闻晓波;崔玉东;朱战波;朴范泽;

    通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigentic E.coli,ETEC)的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg2+、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,在优化条件的基础上,确定多重PCR的特异性和灵敏性,以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测,结果2株为F41、K99和STa阳性,4株为F41、STa阳性,1株为K99、STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明,该方法特异性强、敏感性高、简便、快速,适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。

    2007年03期 No.129 322-324页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • 胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖输出基因部分序列的克隆鉴定、序列拼接和分析应用

    肖国生;曹三杰;段丽丽;文心田;肖驰;马晓平;杨利;

    用设计的引物对胸膜肺炎放线杆菌1、3、6、9型标准株的荚膜多糖输出部分基因序列进行了扩增、克隆、测序,分别获得4个型的部分cpxDC基因序列和3型的部分cpxD基因序列。对克隆序列和GenBank中已知序列进行序列拼接,分别拼接出1、3、6型的荚膜输出cpxD基因全序列。通过基因序列分析发现,胸膜肺炎放线杆菌1、3、5、6、9型荚膜多糖输出基因已知序列间的同源性很高,达89%~99.88%。1、3、5、6型cpxD基因的推导氨基酸序列间的同源性为93%~99%。在cpxDC基因的保守区内设计出1对种特异性引物,对胸膜肺炎放线杆菌进行鉴定和检测,结果从8个标准型菌株和3株分离株中均扩出约720bp的阳性片段,其他6种能引起猪呼吸道疾病的细菌均呈阴性。所建立的PCR方法最低检出量为10pg,最适模板量为5ng(50μL)。试验结果表明,胸膜肺炎放线杆菌不同血清型间的荚膜多糖输出基因存在着高度的保守性。设计出的种特异性引物能用于胸膜肺炎放线杆菌的检测和鉴定。

    2007年03期 No.129 325-329页 [查看摘要][在线阅读][下载 555K]
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  • 斑点叉尾嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及系统发育分析

    耿毅;汪开毓;陈德芳;黄小丽;

    从发生在四川、重庆等省市的斑点叉尾急性流行性传染病病鱼的肝脏、肾脏内分离到1株高致病性菌株(CCF00024),人工感染健康鱼表现出与自然病鱼相同的症状,并从中分离获得同种细菌,证实其为斑点叉尾急性流行性传染病的病原菌。形态、生理生化检测表明,该菌为非发酵型直杆菌,严格需氧,革兰氏阴性,极生多鞭毛,对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸,氧化酶阴性,DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性,MR、VP阴性。在以该菌16S rDNA序列(GenBank登录号AY970826)和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)聚在一簇,特别是与S.maltophilia M5-1的同源性最高,序列相似性达99.6%,结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrop homonas maltophilia)。药敏试验结果表明,对磺胺甲口恶唑、磺胺异口恶唑、阿齐霉素、洛美沙星高度敏感,而对新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢唑啉、先锋霉素和链霉素不敏感。

    2007年03期 No.129 330-335页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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  • 大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立

    卢士英;周玉;李岩松;任洪林;霍方珍;王颖;柳增善;于光;

    利用BALB/c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸(okadaic acid,OA)的单克隆抗体,并以此抗体为探针建立了OA的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法直接和间接竞争抑制性ELISA方法,2种检测方法的回归方程和相关系数分别为:y=-38.678x+130.01,R2=0.9886和y=-34.212x+83.49,R2=0.9784,线性范围为1.56~75μg/L和0.4~25μg/L,对OA的最低检出质量浓度为0.6μg/L和0.18μg/L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测,样品回收率分别为84.72%和98.38%。结果表明,此方法可满足海产品中贝类样品OA限量标准检测。

    2007年03期 No.129 336-339+411页 [查看摘要][在线阅读][下载 209K]
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  • 球虫抗药性分子生物学检测技术的建立

    安健;汪明;王黎霞;盛守强;

    选择在敏感虫株中沉默、抗药虫株中表达的特异序列AGD5设计检测引物,采用RT-PCR方法,以总RNA反转录的cDNA为模板,RT-PCR方法能够鉴别马杜霉素抗药虫株和3株马杜霉素敏感虫株(2株对所有药物敏感的不同地理株,1株地克珠利抗药性虫株对马杜霉素敏感),此鉴定结果与鸡体试验的结果一致,说明敏感虫株和抗药虫株在该序列上的差异发生在转录水平。而以卵囊总DNA为模板的PCR方法不能鉴别敏感和马杜霉素抗药性虫株。

    2007年03期 No.129 340-342+346页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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简讯

人兽共患病

  • 抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

    薛琳;夏咸柱;高明华;高玉伟;侯小强;

    将狂犬病病毒ERA株纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C7、C4和H3。经过鉴定:其腹水效价分别为1∶1×105、1∶5×104及1∶1×104;且与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)不发生交叉反应;3株单抗均为IgG类型。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的单抗腹水用FITC(异硫氰酸荧光素)标记制备荧光抗体,建立了检测狂犬病病毒的荧光染色法。结果表明,该方法对狂犬病的实验室诊断具有快速和特异性高的特点。

    2007年03期 No.129 343-346页 [查看摘要][在线阅读][下载 130K]
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  • 破伤风毒素C片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

    刘婷;焦新安;潘志明;张晓明;黄金林;

    应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株基因组中扩增出1356bp的破伤风毒素C片段基因,该片段是与靶细胞起结合作用的重链C端基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登陆的序列AF154828的同源性达到99.2%。将此基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pET-30a(+),构建成重组表达质粒pET-TetC,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物约为50000的重组蛋白,其表达量占菌体总蛋白的33.5%,经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。动物试验证明,此重组抗原具有良好的免疫原性,能保护动物免受破伤风毒素的攻击。

    2007年03期 No.129 347-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 236K]
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  • H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究

    王泽霖;刘岩;李建丽;陈少渠;杨大光;柴丽娜;

    对1998-2002年间在河南省豫北地区分离到的5株H9N2亚型禽流感病毒的抗原性变异进行了研究。经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验及攻毒保护试验证明,5株H9N2亚型间已经发生了抗原性漂移。98A5和99S毒株间的保护力接近100%,HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验的相关性均在0.74以上,表明2毒株间的抗原性相近;用00Y毒株攻击其他4株免疫的鸡,其保护率仅为60%~80%;而02Y株对除00Y株外的4株的免疫保护率分别为60%、75%、80%、100%,与分离年代呈负相关性,HI、鸡胚中和试验、细胞中和试验也取得类似结果,说明2000年后的毒株间已发生抗原性变异。

    2007年03期 No.129 351-354页 [查看摘要][在线阅读][下载 100K]
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  • 多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌方法的建立及应用

    陈博文;罗宝正;陈竞帆;薄清如;徐海聂;杨素;陈静静;黄新民;侯亚琴;

    建立了一种快速检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis)的多重荧光PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction)方法。首先,从GenBank中获得Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原编码基因簇中的cps2I和溶菌素释放蛋白基因mrp,用Primer Express2.0设计引物和Taqman荧光探针,在ABI7500荧光PCR仪上进行荧光PCR检测。荧光曲线表明该多重荧光PCR可以特异性地检测型猪链球菌,而参考猪链球菌、大肠杆菌等细菌和空白对照均为阴性;检测方法灵敏度达10个细菌的最小检测量,整个过程仅需60min;稳定性试验表明,2次检测所得的Ct值之间无统计学差异(P>0.05)。本试验建立的多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法快速、特异性强,灵敏度高,稳定性好,适合于大批量样品的检验,可广泛用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。

    2007年03期 No.129 355-358页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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基础兽医学

  • 抗鸡补体C3抗体的制备及其应用

    马雪云;牛钟相;

    选取鸡源补体C3α链的21个氨基酸残基序列,人工合成模拟C3分子的21肽[741-761],与牛血清白蛋白载体偶联结合后,制成人工合成抗原复合物。将此人工合成抗原加弗氏佐剂制成油乳剂疫苗,免疫注射家兔制备成抗21肽抗体。从抗血清中提纯IgG,用以检测不同动物血清中C3含量。结果表明,人工合成的C3分子的21肽复合抗原具有很强的免疫原性,制成的抗血清的IgG效价达29,且能与不同动物血液的C3分子发生特异性结合;用该IgG对鸡、猪、山羊、牛和豚鼠体内的C3进行了检测,其含量分别为(0.34±0.005)、(1.47±0.008)、(1.70±0.005)、(1.78±0.007)、(4.18±0.008)g/L,发现鸡体内的C3含量明显低于其他几种动物,差异极显著(P<0.01),这可能是鸡体对细菌性疫苗免疫效果不佳的主要原因。

    2007年03期 No.129 359-362页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K]
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  • 大豆黄酮对产蛋后期蛋鸡内分泌及骨代谢的影响

    周振雷;侯加法;陶庆树;胡丹;

    1000只455日龄伊莎褐蛋鸡,随机分为2组,即对照组和大豆黄酮组。日粮处理:对照组为基础日粮,大豆黄酮组为基础日粮+10mg/kg大豆黄酮。试验为期9周。结果显示:与对照组比较,大豆黄酮显著提高蛋鸡的生产性能,其血浆钙和降钙素水平,在试验中期分别增加27.05%(P<0.05)、29.19%(P<0.05);在试验后期分别增加22.69%(P<0.05)和20.28%(P<0.05);整个试验期,大豆黄酮组左胫骨、左肱骨骨密度(BMD)增加18.59%(P<0.05)、11.41%(P>0.05)。结论:大豆黄酮可提高产蛋后期蛋鸡的生产性能并改善骨代谢。

    2007年03期 No.129 363-365页 [查看摘要][在线阅读][下载 70K]
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  • 氧化应激在亚慢性镉中毒引起的肝肾细胞凋亡中的作用

    王金涛;李金龙;徐世文;

    为了探明镉中毒时氧化应激与细胞凋亡的关系,以公鸡为试验动物,在日粮中添加CdCl2150mg/kg,肝脏、肾脏和血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及肝、肾细胞凋亡的检测显示镉使鸡血清、肝脏和肾脏中GSH-Px和SOD活性降低,MDA含量增多,并诱导肝肾细胞凋亡的发生。结果表明,镉能够诱发鸡肝肾细胞发生氧化胁迫,并诱导细胞凋亡的发生,提示氧化应激与细胞凋亡存在一定的关系。

    2007年03期 No.129 366-368页 [查看摘要][在线阅读][下载 264K]
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  • 肉种鸡血浆极低密度脂蛋白质量浓度双向选择的效应

    龚道清;张军;李辉;

    以父母代肉种鸡为材料,以血浆极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)质量浓度为选择指标建立肉鸡高脂系和低脂系,个体测定一世代高、低脂系母鸡产蛋性能、种蛋受精率、孵化率、二世代6周龄体质量,观察血浆VLDL质量浓度选择效应。结果显示,一世代低脂系比高脂系早开产6.7d,低脂系40周龄和54周龄产蛋量显著高于高脂系零世代,一世代低脂系种蛋受精率、受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率均优于高脂系;二世代高、低脂系6周龄体质量差异不显著。结果表明,对血浆VLDL质量浓度的低向选择使种鸡产蛋性能、种蛋受精率、孵化率产生了有益的间接反应,但对早期体质量没有影响。

    2007年03期 No.129 369-372页 [查看摘要][在线阅读][下载 109K]
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  • 内毒素致兔线粒体DNA基因突变的SSCP检测

    高洪;彭辂;王德成;高斌;

    将20只健康实验用白兔随机分为4组(5只/组):正常对照组(A组)、阳离子A处理组(B组)、内毒素处理组(C组)、阳离子A+内毒素处理组(D组),运用改进的碱变性法提取肝细胞的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA),设计4对引物扩增mtDNA的tRNALeu(UUR)、tRNALys、ATPase8、ATPase6基因,同时运用分光光度计法对扩增产物进行质量鉴定,并运用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析技术对PCR产物进行突变分析。结果发现:C组tRNALeu(UUR)基因在凝胶中的带型出现泳动异常,表明该基因发生了碱基突变,序列测定表明该突变为2716位的A→G点突变,同时其他各组的tRNALeu(UUR)基因无突变发生。该结果提示内毒素可以导致mtDNA的tRNALeu(UUR)基因发生突变,而阳离子A对这一突变具有保护效应。

    2007年03期 No.129 373-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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  • 抗脂肪细胞40000特异膜蛋白scFv-Fc融合抗体毕赤酵母表达载体的构建

    高士争;尹革芬;张玉静;汪磊;张曦;

    采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞克隆IgG1Fc片段基因,经序列分析表明,该Fc片段基因长699bp,具有完整的铰链区、CH2和CH3结构区,与GenBank中人IgG1重链Fc片段基因序列完全相同。将Fc片段基因与pPICZαA酵母载体连接先构建pPIgG1质粒,然后将抗脂肪细胞40000特异膜蛋白的噬菌体scFv抗体基因插入到pPIgG1质粒,构建pPIgG1-scFv酵母表达载体。序列分析表明,scFv基因与Fc片段基因拼接正确,阅读框正确无误,表明成功构建了抗脂肪细胞40000特异膜蛋白scFv-Fc融合抗体毕赤酵母表达载体。本试验为下一步在毕赤酵母中大量表达与IgG结构相似、具有较高亲和力和生物活性的scFv-Fc融合抗体分子奠定了基础。

    2007年03期 No.129 376-381+386页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • 不同能量摄入水平对围产期奶牛肝MTP mRNA丰度的影响

    陈仕均;孙玉成;刘国文;王哲;邓俊良;唐海蓉;王雪莹;

    将年龄、胎次相同,年产奶量大于7000kg的围产期荷斯坦奶牛30头随机分为3组,每组10头,低能量组(Ⅰ组)按中国奶牛营养标准2000年版减少20%日粮(能量摄入80%),高能量组(Ⅱ组)则按此标准增加20%日粮(能量摄入120%),对照组(Ⅲ组)按标准日粮(能量摄入100%)饲喂,试验从产前28d到产后56d结束,分娩后各组均按标准配制相同的泌乳日粮。分别于产前28、14d及产后1、14、28、56d采取肝活体组织,应用内对照RT-PCR方法检测肝脏组织MTP mRNA丰度。结果显示,各组奶牛肝MTP mRNA丰度均呈现先升高后降低的趋势,产后均高于产前,且产后1~28d差异显著(P<0.01或P<0.05),而后回降,至56d趋于平稳(P>0.05);组肝MTP mRNA丰度在产后1d达到峰值,而Ⅰ组和Ⅱ组在产后14d达到最大值(P<0.01);Ⅱ组产后1~28d显著高于Ⅰ组,产后14d显著高于组(P<0.01);Ⅲ组产后1d和28d显著高于Ⅰ组(P<0.01或P<0.05)。这些结果表明,围产期奶牛能量摄入水平对肝MTP mRNA丰度有显著影响。

    2007年03期 No.129 382-386页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K]
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  • 家蝇抗菌肽的分离纯化及生物学活性

    屈军梅;黄庭汝;屈孝初;李文平;陈平洁;

    将诱导家蝇提取的家蝇抗菌肽提取物,经凝胶过滤层析和离子交换层析,得到具有抗菌活性的单一峰,质谱结果显示抗菌肽分离物含有4种小肽,相对分子质量678.3~1017.2。家蝇抗菌肽对革兰氏阴性菌(大肠杆菌、巴氏杆菌)的抗菌活性优于革兰氏阳性菌(金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌),对耐药性巴氏杆菌有较强的抗菌活性,对大肠杆菌的MIC为4.2~8.4mg/L,对耐药性巴氏杆菌的MIC为3.8~7.8mg/L。扫描电镜观察发现,家蝇抗菌肽通过损伤细胞壁使细胞质外流而达到杀菌的目的。家蝇抗菌肽对家兔、鸡、猪、小鼠、番鸭、鹅和家鸭红细胞无溶血反应和凝集反应。

    2007年03期 No.129 387-390页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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  • 奶牛酒精阳性乳与微量元素Zn、Cu、Mn、Fe含量及自由基代谢的关系

    王林;王振勇;李龙;曹爱智;王彦明;王鹏;王永;

    对酒精阳性乳患牛全乳、乳清、血清中Zn、Cu、Mn、Fe的含量进行了检测,同时检测了乳清与血清中的抗氧化指标。结果表明:阳性牛乳清与血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性均降低,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量升高;全乳、乳清、血清中Zn含量均极显著降低,血清Mn、Fe含量略低,乳清Cu含量降低。综合分析,酒精阳性牛机体总抗氧化能力下降,不能有效清除氧化代谢产物,以至于过多的氧自由基对乳腺上皮细胞膜造成损伤,从而引起乳腺细胞分泌异常乳。

    2007年03期 No.129 391-393+398页 [查看摘要][在线阅读][下载 103K]
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  • 猪CuZnSOD基因片段的克隆及不同生长阶段猪肝脏CuZnSOD基因表达的差异

    徐春兰;汪以真;

    从体质量1、20、40、60、90kg左右的杜长大猪的肝脏组织中提取基因组RNA,RT-PCR扩增CuZnSOD基因,获得了1条255bp的片段,以pGEM-T Easy Vector为载体,将该片段克隆到大肠杆菌(E.coli)中,筛选阳性克隆测定其序列,分析表明该片段与报道的猪CuZnSOD cDNA部分序列同源性达到100%,编码85个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的一部分。以CuZnSOD基因片段的克隆为基础,构建了优化的半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究不同生长阶段猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达的差异。结果显示,1kg左右猪肝脏组织中CuZnSOD mRNA表达水平较高,体质量1~20kg猪的肝脏组织中CuZnSOD基因表达量呈下降趋势,体质量40kg的猪又显著上升,到生长后期即体质量90kg左右,CuZnSOD基因表达量又急剧下降。

    2007年03期 No.129 394-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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  • 牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、测序及其表达

    韩俊友;乔红伟;赵瑞利;胡博;谢芳;王金玲;郑伟;雷连成;韩文瑜;

    利用RT-PCR的方法从牛蛙皮肤组织中克隆到大小为270bp的片段RCABP,将其克隆到pGEM-T载体,测序获得1个新的碱基序列。将此基因克隆到原核表达载体pQE-80L,获得融合表达质粒pQE-80L/DHFR/ABP,在1%IPTG诱导下进行表达。SDS-PAGE检测表明,重组蛙皮抗菌肽蛋白的表达量占菌体总蛋白的24%,以包涵体形式存在。体外抑菌试验表明,所构建的质粒能在大肠杆菌中表达具有体外抑菌活性的蛙皮抗菌肽,该融合蛋白具有良好的应用前景。

    2007年03期 No.129 399-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 山羊乳腺上皮细胞的生长特性

    郑月茂;安志兴;彭新荣;张涌;

    用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物,根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化,对细胞生长特性进行了光镜观察。结果如下:细胞可形成闭合型细胞群和开放型细胞群。乳腺上皮细胞与成纤维细胞混生时,细胞之间形成许多腔状结构。纯化的乳腺上皮细胞通过单细胞悬浮后传代,部分细胞形成岛屿状聚集,部分细胞以贴壁的自由单个细胞散在形式存在。上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状,称之为乳球体;可产生乳腺上皮细胞并分泌乳汁。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,细胞之间紧密相靠,互相衔接,连接成片,呈蜂窝状;细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2~4枚;部分细胞呈圆饼状,体积较大;出现部分长形细胞;接触抑制的上皮细胞形态不均一。纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常,经透射电镜观察发现细胞表面微绒毛极为发达,细胞质中线粒体和粗面内质网丰富,细胞质内有大量脂滴及小泡,表明第15代山羊乳腺上皮细胞增殖活力旺盛。染色体数目分析表明,该细胞系稳定,在离体培养条件下细胞不发生转化。山羊乳腺上皮细胞系的细胞染色体数目为60,染色体组型为2n=60。

    2007年03期 No.129 403-407页 [查看摘要][在线阅读][下载 701K]
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临床兽医学

  • 东北虎巴氏杆菌病的诊断及病理形态学观察

    贺文琦;成军;佟庆彬;宋德光;陆慧君;金天明;曾凡勤;高丰;

    应用常规的病理剖检技术解剖死亡东北虎,观察其病理变化;将病料无菌操作接种血清肉汤培养基培养获得1株细菌,经形态学观察和动物回归试验证实为高致病性巴氏杆菌;进而对死亡虎的各脏器进行病理组织学观察和分析,为东北虎的巴氏杆菌病提供了相关诊断资料。

    2007年03期 No.129 408-411页 [查看摘要][在线阅读][下载 425K]
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  • 不同黄芩成分对孕鼠免疫功能的影响

    马爱团;钟秀会;孟立根;倪耀娣;许丽;陈耀星;

    怀孕5~7d小鼠皮下注射0.075mg溴隐亭建立流产模型,于怀孕1~7d分别灌服蒸馏水、黄芩煎剂、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素,至怀孕10d宰杀。结果显示,血清中IFN-γ含量,以黄芩煎剂组为最低,子宫匀浆中IFN-γ含量,以黄芩苷组为最低,与对照组比较差异极显著(P<0.01);孕酮含量在血清及子宫匀浆中均以黄芩苷组为最高,与对照组差异显著(P<0.05),各组间IL-10含量差异不显著。这一结果表明,黄芩成分对母体免疫功能有一定调节作用,其中黄芩苷可降低Th1型细胞因子含量,提高孕酮的含量,具有一定的保胎作用。

    2007年03期 No.129 412-415页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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动物科学

  • 不同冷冻剂对鸡胚PGCs的保护效应

    韩威;李碧春;秦洁;朱云芬;陈国宏;

    发育至第19期和第28期的鸡胚性腺原始生殖细胞(PGCs)分离提纯后,在DMEM中添加冷冻保护剂DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖进行超低温冷冻保存,比较冷冻保护剂在单独或联合使用条件下对PGCs的冷冻保护效果,复苏后台盼蓝染色测定细胞存活率,体外接种培养、传代。结果表明:(1)第19期PGCs冷冻保存中,10% EG+10% FBS+0.1mol/L蔗糖条件下细胞存活率最高为(92.20±2.18)%,且与10% DMSO+10% FBS的存活率差异显著(P<0.05),其余各冷冻保护液间存活率差异不显著;第28期PGCs冷冻保存中,5% DMSO+5% EG+10% FBS+0.1mol/L蔗糖条件下细胞存活率最高为(92.41±2.82)%,但各冷冻保护液间存活率差异均不显著(P>0.05)。(2)解冻后体外培养的PGCs,在饲养层和3种细胞因子(LIF、SCF、bFGF)的共同作用下,可持续增殖,传至第3代的PGCs,PAS染色、AKP染色均呈阳性并保持完整的二倍体核型,仍处于未分化状态。

    2007年03期 No.129 416-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 275K]
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  • 公牛精子分离前的保存

    陆阳清;王武陵;张明;韦英明;卢克焕;

    试验采用荷斯坦公牛精液,比较了添加抗生素、TALP稀释以及TALP稀释染色3种处理方法对常温下保存精子活力的影响。研究结果表明,新鲜精液加抗生素处理后直接保存的效果优于另外2个处理组,而分离精子经冷冻解冻后的存活率达40%,说明了该方法的可靠性。

    2007年03期 No.129 420-422页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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  • 高产奶牛性控雌性冻胚规模化移植试验

    张俊功;游伟;黄金明;谭秀文;

    从美国引进高产奶牛性控雌性胚胎,在农村条件下,选择自然发情的黄牛作受体,移植合格受体牛648头。结果显示,自然发情黄牛924头中,经直肠检查合格受体牛648头,使用合格率为70.13%(648/924);氯前列烯醇同期处理476头,使用合格率为36.13%(172/476),差异极显著(P<0.01)。80~100d怀孕检查,自然发情移植成功率41.98%(272/648),同期发情移植成功率40.12%(69/172),差异不显著(P>0.05)。自然发情黄牛不同黄体级别的移植成功率分别为:A级44.09%(41/93),B级42.43%(199/469),C级37.21%(32/86),差异不显著(P>0.05)。单胚移植580头,移植成功率42.41%(242/580),双胚移植68头,移植成功率44.12%(30/68),差异不显著(P>0.05)。正常胚胎单枚移植541头,移植成功率42.51%(230/541),裸胚单枚移植39头,移植成功率30.77%(12/39),裸胚比正常胚移植成功率低11.74%。怀孕牛已出生犊牛83头,其中母犊79头,公犊4头,母犊占95.18%,与自然发情的性比例(50%)相比较,差异极显著(P<0.01)。

    2007年03期 No.129 423-425页 [查看摘要][在线阅读][下载 66K]
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综述