简讯

  • ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响

    杨晓农;郭万柱;徐志文;王新;殷华平;王小玉;龙虎;

    设计1对特异性引物AF-P1/AF-P2,从疑似PCV2感染的病料中扩增获得1 767 bp的PCV2全基因组(命名为PCV2-CD),克隆至pMD18-T Simple载体构建重组质粒pTS-PCV2-CD。序列分析表明:PCV2-CD与GenBank中公布的12个PCV2毒株间的同源性高达95.0%~100%。用NcoⅠ酶切pTS-PCV2-CD获得4 459 bp线性目的DNA片段,补平CATG 4个碱基、连接环化构建ORF3基因插入缺失重组质粒pTS-PCV2-CD-C并测序。用SacⅡ酶切pTS-PCV2-CD-C,回收1 771 bp线性目的片段,体外连接环化构建了ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C。PCR-RFLP检测表明,在脂质体转染法转染mPCV2-C、培养并盲传4代的IBRS-2细胞中(PCV1阴性),特异性检测到mPCV2-C的DNA;电镜观察发现,在盲传6代的IBRS-2细胞胞核内观察到突变毒株的病毒颗粒。试验结果表明:ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C具有感染性,能够在IBRS-2细胞中复制增殖,证实ORF3基因不是PCV2复制的必需基因。

    2008年09期 No.141 991-995页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
    [下载次数:202 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:17 ] |[阅读次数:440 ]
  • 致猪水肿病大肠杆菌毒力因子二重PCR检测方法的建立及应用

    杨明柳;吴斌;汤细彪;蔡利军;刘国平;蔡旭旺;陈焕春;

    本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法,对阳性扩增产物测序,结果都有很高的保守性。特异性试验和灵敏性试验表明:与其他6种猪常见致病菌(产毒多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、沙门菌和链球菌)无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为101cfu(D600为0.002)。通过该二重PCR检测方法对2004—2006年自猪肺、脑组织中分离的216株大肠杆菌进行鉴定,得到6株致猪水肿病大肠杆菌,其中3株既具有菌毛又产水肿毒素,另外3株仅产水肿毒素;菌毛阳性菌株占毒素阳性菌株的50%。

    2008年09期 No.141 996-999页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K]
    [下载次数:194 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:425 ]
  • 猪3种重要病毒寡核苷酸芯片诊断方法的建立

    高金拽;王小强;祁会彩;黄鹤;陈超;李铮;

    将猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒-Ⅱ(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)分别应用生物信息学方法,针对病毒基因组保守序列设计特异性强的60-mer寡核苷酸探针,并将其按所设计阵列固定于表面经氨基化修饰的玻片上,制备出寡核苷酸芯片。分别设计出相应的引物,对待测样本进行不对称PCR扩增,从而产生大量可与寡核苷酸探针特异性互补的单链DNA片段,并通过间接荧光标记技术使扩增产物标记上荧光染料。将标有荧光染料的扩增产物与芯片上寡核苷酸探针杂交,扫描、分析芯片上荧光信号。试验结果表明,芯片上各样本对应探针位点呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。不对称PCR技术制备的单链DNA片段与寡核苷酸芯片进行杂交反应可同时、快速、特异性地检测多种猪疫病病毒。

    2008年09期 No.141 1000-1003页 [查看摘要][在线阅读][下载 344K]
    [下载次数:66 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:372 ]
  • 牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体捕获ELISA方法的建立

    钟发刚;程安春;王新华;邓宇;郭燕;

    以纯化的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为抗原免疫BALB/C系小鼠,通过细胞融合和克隆筛选出稳定分泌BVDV抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞接种于BALB/C系小鼠的腹腔内诱生腹水,腹水单抗与BVDV均呈阳性反应。将5A9、2G3和5C2(分别结合不同的抗原结合位点)诱生的BVDV单抗纯化后等量混合包被酶标板,与鸡抗BVDV IgY(检测抗体)联合应用,建立BVDV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法。采用方阵滴定法确定单抗、鸡抗BVDV IgY的最适工作浓度,用阴性组织样品作为判定检测结果的D490临界值,最后以建立的AC-ELISA检测临床粪样棉拭子27份,结果表明:该方法敏感性、特异性高,与全血病毒分离结果的符合率达86.36%;与全血和粪样RT-PCR检测结果的符合率分别为89.47%和94.74%。阴性对照RT-PCR、病毒分离和AC-ELISA检测均为阴性。

    2008年09期 No.141 1004-1007页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
    [下载次数:267 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:14 ] |[阅读次数:457 ]
  • 犬瘟热病毒荧光抗体的制备及其鉴定

    郝淑美;岳妙姝;苏建青;杨松涛;夏咸柱;李牧;

    采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)(Onderstepoort株)核蛋白单克隆抗体(MAb);小鼠腹腔注射阳性克隆生产腹水;以G蛋白亲和层析法进行纯化;用透析法对单抗进行FITC(异硫氰酸荧光素)标记;Sephadex G-25去除游离荧光素;测定F/P值及荧光抗体工作浓度;以吸收、阻断、抗原交叉试验对荧光抗体进行特异性鉴定。结果表明,获得6株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取抗CDV核蛋白的CE3单抗成功地制备了质量较高的荧光抗体。

    2008年09期 No.141 1008-1010页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
    [下载次数:202 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:356 ]
  • 犬瘟热病毒DNA疫苗接种犬的免疫保护

    徐向明;殷俊;杨玲;李娜;薛整风;崔治中;

    用犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白基因(H、F)和核蛋白基因(N)重组质粒DNA和聚乙烯胺(PEI)混合后肌注10只3月龄CDV抗体阴性毕格犬,间隔30 d,共免疫3次,另选择5只犬作为阴性对照。免疫3次后,采用CDV攻毒。对照组呈现出犬瘟热的典型症状和组织病理损害,攻毒3周内,有2只犬衰竭死亡,1只犬症状明显,攻毒第18天外周血淋巴细胞中病毒RNA检测为阳性。DNA疫苗免疫组除出现一过性的体温升高外,未出现明显症状,攻毒后第18天外周血淋巴细胞CDV检测仍为阴性。DNA疫苗免疫后血清ELISA抗体和病毒中和抗体测定显示,首免后机体激发的ELISA抗体滴度很低(101.25±0.615),二免后开始缓慢升高(101.69±0.285),再次免疫后达到102.051±0.214;中和抗体也呈现以上规律,三免后血清中和抗体为101.75±0.190,攻毒后血清ELISA抗体和中和抗体滴度迅速升高(103.02±0.202和102.41±0.245)。试验表明CDV基因免疫对CDV的感染具有较好的保护作用,并能清除进入机体内的病毒。CDV基因免疫只激发较低水平的体液免疫,中和抗体在攻毒前达不到临界保护线(102),但对CDV攻击能产生较好的保护,推测其免疫效力可能源于细胞免疫和记忆性B淋巴细胞。

    2008年09期 No.141 1011-1014+1039页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
    [下载次数:272 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:15 ] |[阅读次数:425 ]
  • 传染性法氏囊病病毒检测系统的建立

    王忠灿;王永山;唐雨德;谭维国;施正良;欧阳伟;

    为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)检测系统,本试验在同一个试验技术平台上对9种IBDV检测方法进行了比较分析。IBDV野毒株盲传4~5代可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,死亡胚体水肿、出血,病变细胞圆缩、脱落。4个血清Ⅰ型IBDV毒株,用交叉中和试验可进一步分为3个血清亚型。用RT-PCR/SSCP技术分析4个毒株,扩增产物的电泳迁移率有差异。AGP、间接ELISA、夹心抑制ELISA以及中和试验等4种方法同时检测不同来源血清样品中的IBDV抗体,其他3种方法比AGP具有更高的敏感性,敏感度相差104倍。用AGP检测法氏囊组织样品,抗原效价可达到1∶10,而细胞培养物和病鸡粪便则没有出现沉淀线;3种样品用夹心ELISA、RT-PCR、cDNA探针斑点杂交、RT-PCR/SSCP检测以及病毒分离等5种方法检测,均为阳性。

    2008年09期 No.141 1015-1019页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K]
    [下载次数:199 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:26 ] |[阅读次数:392 ]
  • 鸡传染性法氏囊病毒JS株毒力测定

    许小琴;刘红梅;秦爱建;周小进;郜平光;Mohammed Kouadir;

    35日龄SPF鸡半数致死量(LD50)和9日龄SPF鸡胚半数致死量(ELD50)试验结果显示,传染性法氏囊病毒(IBDV)JS株的LD50为10-3.60.1 mL/只,ELD50为10-5.20.1 mL/胚;1~6周龄SPF鸡及商品鸡的致病性试验结果显示,IBDV JS株对SPF鸡和商品鸡3周龄后的致病率为100%,最高致死率分别为93.75%和75%;应用RT-PCR方法从IBDV JS株中扩增的VP2基因,经序列测定分析结果显示,IBDV JS株的VP2基因与香港HK46、日本OKYM、英国UK661等国际超强毒株的氨基酸序列的同源性达99%以上。表明IBDV JS株为超强毒株。

    2008年09期 No.141 1020-1022页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K]
    [下载次数:205 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:370 ]
  • 猪胸膜肺炎放线杆菌蛋白酶的分离纯化及特性分析

    张瑞平;刁有祥;张伟;杜爱庆;刘方娜;臧大鹏;

    将血清7型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)山东分离株接种含0.2%NAD的LB液体培养基,37℃培养48 h后,经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素离子交换层析、葡聚糖凝胶分子筛层析,从其培养上清液中分离纯化了1种蛋白酶。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,APP蛋白酶含有相对分子质量约为45 000的亚单位。以酪蛋白为底物测得该酶的最适pH值为7.5,最适温度为45℃;该酶对热有一定的稳定性,80℃加热30 min仍保留部分活性;乙二胺四乙酸(EDTA)可抑制其活性,而苯甲基磺酰氟(PMSF)对其无影响。

    2008年09期 No.141 1023-1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 346K]
    [下载次数:86 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:381 ]
  • 鸡堆型艾美耳球虫单链抗体基因的构建及表达

    康桂英;赵月兰;秦建华;郭红斌;包永占;张宁;郭莉;

    轻链可变区和重链可变区基因产物等摩尔浓度混合后,用重叠延伸拼接法扩增出单链抗体基因,再用带限制性内切酶位点的引物(NcoⅠ和HindⅢ)扩增出带有特定酶切位点的单链抗体基因片段。NcoⅠ和HindⅢ双酶切单链抗体与表达载体pET-22b(+),用回收试剂盒回收酶切后的单链抗体与表达载体pET-22b(+)基因片段,用连接试剂盒将单链抗体与表达载体pET-22b(+)基因片段连接,并将连接产物转化感受态细胞JM109。氨苄青霉素筛选阳性重组子,以T7promoter/T7terminator primer进行菌落PCR鉴定,测定正确后,37℃摇菌扩增,测菌浓度至D600为0.6时,加入IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE初步检测。SDS-PAGE检测显示其相对分子质量是31 000,与预期结果一致,证明单链抗体基因在大肠杆菌中得到表达。

    2008年09期 No.141 1028-1031页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K]
    [下载次数:84 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:324 ]
  • 鸡球虫苗(LCV-2号)对笼养及平养鸡的免疫效果

    闫鸿斌;田广孚;贾万忠;景志忠;才学鹏;

    在试验条件下,研究了鸡球虫苗(LCV-2号)对笼养和平养鸡的免疫效果。笼养鸡免疫试验比较了笼养鸡空白对照组、攻虫对照组、免疫不攻虫组、免疫攻虫组试验期间的相对增重率、存活率、平均每克粪便卵囊(OPG)值、攻虫后第8天的肠道病变和综合抗球虫指数。结果表明,免疫不攻虫组、免疫攻虫组攻虫后没有鸡只死亡;免疫不攻虫组相对增重率最高,为97.74%,显著(P<0.05)高于免疫攻虫组和攻虫对照组(89.72%和69.85%);攻虫对照组攻虫期间平均OPG值最高,为1.26×105,而免疫攻虫组仅为5.813×104;攻虫后第8天肠道平均病变计分,空白对照组0分,攻虫对照组、免疫不攻虫组及免疫攻虫组分别为4、1、2分;4组抗球虫指数(ACI)依次为200、62.18、192.74和178.76。平养鸡免疫试验,比较了平养鸡空白对照组、不免疫不攻虫组和免疫攻虫组(2组在同1个圈)的平均OPG值、相对增重率、攻虫后第8天的肠道病变。结果表明,和免疫攻虫组鸡群一起饲养的不免疫不攻虫组鸡群增重较快,相对增重率为99.39%,而免疫攻虫组鸡群为91.67%,但差异不显著;攻虫后第8天剖检肠道平均病变计分,空白对照组0分,不免疫不攻虫组和免疫攻虫组分别为1、3分;攻虫期间免疫攻虫组鸡群平均OPG为6.025×105、不免疫不攻虫组也达3.675×105,免疫期间分别为7.5×104、3.5×104;3组ACI依次为200、193.39和175.76。从总体看,LCV-2安全性高,对笼养鸡和平养鸡都有较强的免疫效果,且对平养鸡的效果优于笼养鸡。

    2008年09期 No.141 1032-1036页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K]
    [下载次数:108 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:310 ]
  • 藏羚羊中华皮蝇蛆的分子生物学鉴定

    高兴春;蔡进忠;徐梅倩;于明胜;曹杰;李春花;郭敏;王玉梅;朱顺海;黄燕;何国声;

    利用分子生物学技术对藏羚羊感染的中华皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列进行了研究。利用PCR方法扩增出长度为688 bp的序列,经TA克隆后测序,测序结果表明与中华皮蝇、牛皮蝇和纹皮蝇的相似性分别为99.1%、91.4%、93.6%,确定为中华皮蝇,证实藏羚羊中存在中华皮蝇的侵染,从而扩大了中华皮蝇的宿主范围。

    2008年09期 No.141 1037-1039页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K]
    [下载次数:176 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:410 ]
  • 检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6分泌蛋白双抗体夹心ELISA的建立

    唐宇龙;刘湘新;杨华;柳彬;胡忠义;

    用重组蛋白CFP10-ESAT-6免疫新西兰大白兔,通过ELISA方法检测抗体效价水平;高效价抗体用DEAE-32阴离子交换柱纯化后,一部分抗体为包被所用,另一部分抗体用辣根过氧化物酶标记后,作为检测用,建立双抗体夹心法,进行了初步鉴定,确定该方法的可行性。结果表明:抗CFP10-ESAT-6多克隆抗体的效价在1∶16000稀释后D450值基本都达到1.0左右,在纯化、酶标记后,分别以1∶5000为包被工作浓度,1∶3000为酶标工作浓度时,能较高特异性检测结核杆菌培养上清分泌的CFP10-ESAT-6抗原。

    2008年09期 No.141 1040-1042+1056页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K]
    [下载次数:163 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:406 ]
  • 断奶前后仔猪小肠组织中生长素mRNA表达及内源性生长抑素的作用

    杜改梅;夏东;韦习会;张磊;王丽娜;赵茹茜;

    选取新生仔猪18窝,随机分为试验组和对照组。自12日龄起,对照组饲喂基础乳猪料,试验组在基础日粮中添加120 mg/kg半胱胺,以耗竭内源性生长抑素。试验组和对照组均于35日龄断奶。分别在28、35、38、42和45日龄每组各选取6头猪屠宰采样。用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析空肠和十二指肠中生长素mRNA的表达及内源性SS对其表达的影响。结果表明:(1)十二指肠和空肠中均有生长素mRNA的表达;(2)十二指肠生长素mRNA水平在断奶前后呈逐渐下降趋势,38、45日龄时十二指肠生长素mRNA表达明显低于28、35日龄;45日龄时半胱胺显著提高了十二指肠生长素mRNA表达;(3)空肠生长素mRNA水平在38、42、45日龄时明显低于其他日龄点(P<0.05);38日龄时,半胱胺显著提高了空肠组织中生长素mRNA的表达(P<0.05)。以上结果提示,生长素在小肠黏膜组织中的表达呈年龄依赖性变化趋势,并具有组织特异性;半胱胺可通过耗竭生长抑素来促进小肠黏膜组织中生长素mRNA的表达。

    2008年09期 No.141 1043-1046页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
    [下载次数:149 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:8 ] |[阅读次数:545 ]
  • 免疫与未免疫鸡感染MDV后血液部分指标及血浆MDA含量与SOD活性的动态变化

    殷定忠;庞训胜;王正朝;蔡治华;石放雄;

    为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在鸡马立克氏病发病过程中的作用机制,研究了经火鸡疱疹病毒疫苗(HVT疫苗)免疫和未免疫的1日龄健康罗曼雏鸡在感染马立克氏疱疹病毒(MDV)后血液部分指标及血浆MDA含量与SOD活性的动态变化。结果表明:攻毒后外周血液红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、红细胞压积(PCV)、网织红细胞比例(RCC)和血红蛋白含量(Hb)均呈上升趋势,非免疫攻毒组(Ⅱ组)和免疫攻毒组(Ⅲ组)的WBC、RCC和PCV明显高于非免疫对照组(C组)和免疫对照组(Ⅰ组),Ⅱ和Ⅲ组的RBC和Hb明显低于C和Ⅰ组,Ⅰ和Ⅲ组的RBC和WBC低于C和Ⅱ组,Ⅱ组的PCV除了在第7天显著高于C组外,其余均无显著差异;免疫组(Ⅰ和Ⅲ组)血浆MDA含量在攻毒后第7天低于非免疫组(C和Ⅱ组),第14天后便高于或显著高于非免疫组;而免疫组血浆SOD活性在攻毒后第7天低于或显著低于非免疫组,第14天后免疫组和非免疫组之间无显著差异。表明雏鸡感染MDV后血细胞的发育成熟受阻,而免疫对红细胞的发育成熟和白细胞的生成具有促进作用;同时发现雏鸡血浆中MDA含量的降低与SOD活性的提高对雏鸡抗MDV感染有增强作用。

    2008年09期 No.141 1047-1050页 [查看摘要][在线阅读][下载 385K]
    [下载次数:103 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:383 ]
  • 莱芜黑山羊松果体超微结构及5-羟色胺分布的季节性变化

    王凌燕;王树迎;尹逊河;侯衍猛;

    应用5-羟色胺(5-HT)免疫组织化学方法和电镜技术,对莱芜黑山羊4个季节的松果体进行了研究。结果显示:(1)松果体内有大量5-HT阳性的松果体细胞及纤维;(2)松果体5-HT免疫阳性细胞面积以冬季最大,且与其他3个季节差异极显著(P<0.01);夏季最小;春秋季之间无明显差异(P>0.05)。4个季节5-HT阳性细胞的光密度差异不大(P>0.05)。松果体中5-HT阳性面积占总面积的比值,春、秋季相差不大(P>0.05),夏、冬季差异极显著(P<0.01);(3)松果体细胞有明细胞和暗细胞之分,2种细胞超微结构明显不同。明细胞胞核较大,常染色质多,粗面内质网(RER)、游离核糖体丰富,高尔基复合体的扁平囊泡层数较多,线粒体嵴发达,糖原较少;暗细胞的异染色质多,RER和游离核糖体较少,高尔基复合体的扁平囊泡层数少,线粒体嵴缺乏,糖原较丰富。结果提示,明细胞功能较暗细胞活跃;(4)不同季节松果体内明、暗细胞的数量不同,冬季为明细胞,夏季为暗细胞,春、秋2季2种细胞皆有,表明季节是影响松果体结构和功能活动的重要因素。

    2008年09期 No.141 1051-1056页 [查看摘要][在线阅读][下载 1177K]
    [下载次数:98 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:436 ]
  • 氟喹诺酮类药物多组份残留的酶免疫分析法

    杨正涛;张乃生;魏东;

    采用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯法制备诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星完全抗原,经紫外光谱扫描鉴定后,免疫小鼠,ELISA测定抗体交叉反应性,筛选簇特异性抗体,建立多组份ciELISA检测方法。紫外光谱扫描结果证实4种半抗原与载体蛋白发生共价结合,所制备的沙拉沙星与诺氟沙星抗血清效价都在1∶64000以上,环丙沙星和达氟沙星抗血清效价都在1∶32000以上。交叉反应率测定结果表明,沙拉沙星抗血清对沙拉沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星的交叉反应率依次为100.00%、92.68%、89.12%和83.56%;利用沙拉沙星抗血清建立了针对上述4种药物的多组份ciELISA检测方法,最低检测限依次为19.3、34.5、31.3、29.2μg/L,大于5μg/L水平的添加回收率均大于83%。

    2008年09期 No.141 1057-1060页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
    [下载次数:193 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:314 ]
  • 12种藏药对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

    牛家强;王君敏;徐业芬;胡元亮;李德胜;索珍;李家奎;

    为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全质量浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸、二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒(NDV)分别以3种方式(先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)的培养体系中,用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响。结果表明:多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系。藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药。

    2008年09期 No.141 1061-1064+1080页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
    [下载次数:205 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:5 ] |[阅读次数:382 ]
  • REV感染肉种鸡后动态病理学观察与抗原分布及检测

    朱国;刁秀国;成子强;王桂花;孟祥凯;高婷婷;

    用网状内皮组织增生病病毒(REV)人工接种1日龄肉种鸡,定期剖杀,通过病理组织学观察病变特征及肿瘤的发生发展;用免疫组化、PCR检测抗原与病毒在体内各器官的分布规律;超薄切片观察肿瘤细胞、病毒的形态。结果显示,肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊较早出现明显的肿瘤增生灶,在这些器官内免疫组化阳性信号出现最早,且信号最强,在5周龄时,心肌、腺胃、肺、肾、骨髓等器官才开始出现阳性信号,但呈中度的阳性反应,9周龄后阳性信号开始减弱。肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊、骨髓扩增出REV的LTR基因片段,超薄切片显示病毒多分布在胞浆内和细胞间隙内。研究发现病变明显的组织中,阳性反应较强,肿瘤细胞增生明显,即强阳性反应的组织器官易形成肿瘤转移灶及肿瘤结节,同时,抗原最早出现在这些器官说明其中可能存在REV的靶细胞。虽然阳性信号在腺胃出现较晚,但90%以上的腺胃肿大说明腺胃也是REV的主要侵害器官。

    2008年09期 No.141 1065-1069页 [查看摘要][在线阅读][下载 595K]
    [下载次数:147 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:382 ]
  • 东方田鼠卵巢癌模型病理学观察

    俞远京;苏志杰;周智君;马亚东;

    在已建立的东方田鼠封闭群中,收集了12例患有自发性卵巢癌的病鼠,对其进行了病理观察和病理组织学分类,并通过透射电镜和扫描电镜,观察了它们的超微结构和细胞表面改变。结果发现东方田鼠自发性卵巢癌以腹水和恶病质为其主要临床表现,以类似于人类Ⅰ级和Ⅱ级浆液上皮性卵巢癌为其病理组织学特点。通过病理学比较,认为东方田鼠上皮性卵巢癌与人类上皮性卵巢癌极为相似,可作为一种极有价值的卵巢癌动物模型。

    2008年09期 No.141 1070-1073页 [查看摘要][在线阅读][下载 405K]
    [下载次数:151 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:249 ]
  • BALB/c小鼠结肠癌皮下转移模型的建立

    李霞;张西臣;李建华;杨举;宫鹏涛;邓柏林;徐鹏;张国才;

    体外培养人结肠癌细胞株HCT-8,将2×107个/mL人结肠癌细胞(HCT-8)悬液0.2 mL接种于BALB/c小鼠皮下,记录荷瘤生存时间,观察接种瘤生长及转移情况,死亡后解剖并做病理检查。结果显示,皮下转移发生率为94.00%(47/50),淋巴结转移率为96.00%(48/50)。荷瘤鼠平均生存时间(60.20±7.60)d,病理结果提示,转移部位肿瘤细胞与接种部位肿瘤细胞结构相似,符合低分化腺癌的特征。本试验成功建立了小鼠结肠癌皮下转移动物模型,为结肠癌的相关研究提供参考。

    2008年09期 No.141 1074-1076页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]
    [下载次数:425 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:337 ]
  • 冷应激蛋鸡呼吸频率、心电与血清酶活性的变化及其相互关系

    姜冬梅;李士泽;康波;杨焕民;倪江;计红;

    采用冷束缚应激的方法建立冷应激动物模型,测定冷应激前后蛋鸡的呼吸频率、心电及5种血清酶的各项参数值。结果表明:随着冷应激时间的延长,蛋鸡心率和呼吸频率先上升后下降,冷应激3、5 h与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05)。丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)活性在冷应激后明显下降(P<0.05);γ-谷氨酸氨基转移酶(γ-GT)活性先上升后下降,冷应激1、2、3、5 h时与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05);肌酸激酶(CK)活性呈上升趋势变化,冷应激0.5、1、23、h时与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05);乳酸脱氢酶(LDH-L)活性呈上升趋势,各时间点与冷应激0 h相比无显著性差异(P>0.05);天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)先下降后上升,各时间点与冷应激0 h相比差异不显著(P>0.05)。心率与呼吸频率、-γGT、ALT呈强正相关;呼吸频率与γ-GT、ALT呈中等强度正相关,与AST呈中等强度负相关:-γGT与ALT呈中等强度正相关,其余各指标之间呈弱相关。上述结果说明,冷应激对海兰褐蛋鸡呼吸频率、心率及血清酶活性有较大改变,并且所测定的各指标之间存在不同程度的相关关系。

    2008年09期 No.141 1077-1080页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
    [下载次数:260 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:17 ] |[阅读次数:483 ]
  • 串珠镰刀菌素对鸡血清白介素2含量的影响

    王凯;杨丽梅;黄庆敏;刘为民;蒲文珺;

    从广东某饲料厂所用玉米中分离到串珠镰刀菌,并将该菌株接种玉米面进行产毒培养,培养物采用乙腈∶水(95∶5)提取串珠镰刀菌素(MON),用提取的MON对雏鸡进行毒性试验,固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定试验鸡血清中白介素2(IL-2)的含量。结果表明:MON对鸡有毒害作用,鸡血清中IL-2含量比对照组降低(P<0.01)。

    2008年09期 No.141 1081-1083页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K]
    [下载次数:149 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:323 ]
  • 新生奶牛成骨细胞的体外培养、鉴定及生物特性

    李素华;郭定宗;黎兵;赵圣;杨世锦;尹红斌;向金梅;

    取新生奶牛肋骨,剪成1 mm3大小骨片,胰蛋白酶消化5次,D-Hank’s液彻底冲洗后,骨片置于含15%FBS的DMEM中培养,获取单层细胞。采用倒置显微镜下观察细胞形态,改良钙-钴法染色,检测碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)mRNA丰度及骨钙素蛋白浓度等方法,对细胞进行鉴定。通过MTT法绘制生长曲线,研究细胞增殖特性,茜素红染色观察细胞钙化功能。结果显示,采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性:ALP染色呈阳性,活性水平较高;培养7 d后可检测到骨钙素mRNA表达,12 d后细胞上清液中可检测到骨钙素蛋白;诱导培养2周后细胞可形成钙化结节。提示采用胰蛋白酶消化,组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性。本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞。

    2008年09期 No.141 1084-1087+1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
    [下载次数:111 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:389 ]
  • 半胱胺对仔猪生长性能及小肠内容物消化酶活性的影响

    徐雪松;吴金节;李健;胡旭;刘智;王希春;刘莉;

    选取9窝(共90头)新生"杜×长×大"三元杂交仔猪,随机分为3组,每组3窝(共30头),14日龄时分别饲喂基础日粮、基础日粮+120 mg/kg半胱胺和基础日粮+200 mg/kg半胱胺,试验期45 d。在45日龄时,每组随机选取6头仔猪,屠宰后分别迅速刮取十二指肠中段、空肠近、远段、回肠中段内容物,冷冻保存,测定消化酶活性。结果表明,日粮中添加120 mg/kg半胱胺能显著提高仔猪体质量、平均日增重,改善料重比;添加120 mg/kg半胱胺和200 mg/kg半胱胺均能显著提高仔猪十二指肠、空肠近、远端和回肠内容物中的脂肪酶、胰蛋白酶活性以及回肠中淀粉酶活性。试验提示,日粮中添加适量半胱胺可以显著提高仔猪小肠中消化酶活力,改善仔猪生长性能。

    2008年09期 No.141 1088-1091页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K]
    [下载次数:219 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:30 ] |[阅读次数:372 ]
  • 促性腺激素(FSH、LH)对牛腔前卵泡体外发育及E_2分泌的影响

    高志花;周虚;刘立文;付永斌;程玉芳;王净;

    利用McCoy’s 5a基础无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)2种促性腺激素对牛腔前卵泡的体外生长、存活及雌二醇(E2)分泌的影响。结果显示,培养液中单独添加LH对牛腔前卵泡生长影响不大,而单独添加50、100μg/L以上FSH对牛腔前卵泡直径增长和培养后期体外存活有明显的促进作用;当培养液中有10μg/L LH存在时,2种促性腺激素协同刺激卵泡生长的作用更加明显。添加10μg/L LH+50μg/L FSH对腔前卵泡体外生长、发育、存活及E2分泌均具有显著的促进作用(P<0.05)。

    2008年09期 No.141 1092-1095页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
    [下载次数:313 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:15 ] |[阅读次数:304 ]
  • 水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

    付强;张明;郑海英;秦文松;陆阳清;卢晟盛;卢克焕;

    根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率。结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24)。该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用。

    2008年09期 No.141 1096-1100页 [查看摘要][在线阅读][下载 517K]
    [下载次数:153 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:376 ]
  • 显性白毛调控基因(KIT)对羊驼毛色作用的影响

    张巧灵;乔丽英;宋德光;董常生;

    通过同源性比较设计引物,分别扩增羊驼KIT基因exon18~19和intron18,并利用PCR-SSCP技术对我国现有羊驼KIT基因intron18进行多态性分析。结果表明:羊驼KIT基因exon18~19长225 bp,包括54 bp的exon18(全长112 bp)1、08 bp的intron18和63 bp的exon19。从测序结果看,intron18与exon18和exon19交际处有GT-AG规则,符合分子遗传学理论。而用另1对引物扩增不同毛色羊驼Intron18所得的核苷酸序列与exon18~ex-on19中测得的intron18序列完全相同,未发现"AGTT/TGGA/TTAG"缺失突变现象和核苷酸片段大小差异,即不存在多态性。因此推测在同一品种内,KIT基因对毛色影响的原因不一定是由于KIT基因intron18缺失4个碱基导致KIT基因表达失调而致。

    2008年09期 No.141 1101-1104页 [查看摘要][在线阅读][下载 420K]
    [下载次数:215 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:380 ]
  • 貉α-卫星DNA的克隆及序列分析

    闫守庆;范宗兴;祝万菊;邢沈阳;赵志辉;孙金海;

    根据蓝狐、银狐及犬α-卫星DNA序列设计引物RSP1和RSP2,在貉基因组中经PCR扩增获得5条分子质量大小不同的DNA片段,分别命名为RSP1~RSP5,经克隆及测序获得14个RSP序列;序列分析表明,除RSP4外,同类RSP片段的不同序列的长度差异很小且同源性大于90%,不同种类的RSP片段的长度差异很大,最大为1 815 bp,最小为495 bp,但所有序列的3′端约500 bp序列都具有高度的同源性,大于90%;经Blast检索,所克隆的RSP序列的部分区域与蓝狐、银狐及犬α-卫星DNA序列具有约75%的同源性,证明所克隆的RSP序列为貉α-卫星DNA序列,但其单体大小及亚重复的组成还需进一步研究。

    2008年09期 No.141 1105-1108页 [查看摘要][在线阅读][下载 261K]
    [下载次数:96 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:347 ]
  • 高纤维基础日粮添加非淀粉多糖酶制剂对生长鹅生产性能及内分泌的影响

    刘长忠;谢德华;贺永惠;张海棠;王自良;王艳荣;何云;何瑞国;

    选择300只29日龄生长鹅进行28 d的饲养试验,研究了在高纤维基础日粮(粗纤维11.02%)中分别添加0.2%和0.4%的非淀粉多糖(NSP)酶制剂对生长鹅生产性能及内分泌的影响。对生产性能的研究结果显示:0.2%与0.4%的NSP酶制剂对平均日增重提高幅度分别为14.82%与19.69%(P<0.05),对饲料转化率提高幅度分别为13.27%与19.93%(P<0.05),对平均日采食量无显著影响(P>0.05)。对内分泌指标的研究结果显示:0.2%与0.4%的NSP酶制剂显著提高了血糖、总蛋白、T3和IGF-Ⅰ(P>0.05),而总胆固醇、甘油三酯、尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、胰高血糖素、胰岛素、TSH、GH、T4均无显著影响(P>0.05)。

    2008年09期 No.141 1109-1112页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K]
    [下载次数:184 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:343 ]
  • 下载本期数据