预防兽医学

  • 猪GDF11基因部分序列的克隆及组织表达分析

    耿立英;张渝洁;姜运良;

    为了探讨生长分化因子11(Growth differentiation factor11,GDF11,又名BMP11)在胸腰椎数变异中的作用,本试验克隆了该基因包含外显子2在内的部分编码区,并进一步采用RT-PCR技术对其在猪胚胎和初生仔猪中的表达进行了分析。结果表明,在35d的猪胚胎中,后肢、牙龈、脑、肝脏、肾脏、胸椎、腰椎各组织均有明显的表达,而在前肢、眼、心脏、肺脏中的表达较弱,在颈椎和荐尾椎中没有观察到GDF11的表达。在45d猪胚胎的后肢、脑、眼、胸椎组织中GDF11的表达较强,而在前肢、牙龈、肺脏、肾脏、腰椎和荐尾椎的表达相对较弱,在肝脏中的表达极其微弱。在心脏和颈椎中没有检测到GDF11的表达。在55d的猪胚胎中,前肢、后肢、脑、眼、肝脏、颈椎、胸椎、腰椎组织中有明显的表达,肺脏和肾脏组织中的表达较强,牙龈和荐尾椎中的表达较弱,而在心脏中没有检测到GDF11的表达。3d仔猪的后肢、牙龈、脑、肾脏和腰椎组织中GDF11有明显的表达,脾脏组织的表达量较高,前肢、肝脏、心脏、背腰最长肌和肺脏中的表达相对较弱,在眼、颈椎和荐尾椎中的表达极弱,在胸椎中没有检测到表达。在所检测的不同时期的所有组织中,脑和肾脏组织表达明显地高于其他组织。

    2010年03期 v.30;No.159 289-293页 [查看摘要][在线阅读][下载 665K]
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  • PPV SC-1株VP2蛋白Cys-402、214的定点突变对VLPs的影响

    朱玲;徐志文;郭万柱;胡秋炅;王印;王小玉;

    以PPVVP2为基础,定点突变VP2蛋白中的Cys-402(A)、214(B),并构建突变体的真核表达载体,通过电镜技术和小鼠免疫试验探讨突变对VLPs的包装和免疫原性的影响。结果显示,在目标位点成功的引入突变,并构建了真核表达载体pPI-2-EGFP-VP2(A、B);电镜和小鼠免疫试验结果显示Cys-214对VLPs的组装和免疫原性的发挥是必需的,而Cys-402的突变并不干扰VLPs的形成和免疫原性的发挥,推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点。本试验为以PPVVLPs为基础的多价疫苗和抗原转运系统提供了理论依据。

    2010年03期 v.30;No.159 294-298页 [查看摘要][在线阅读][下载 449K]
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  • 抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究

    张鑫;尹逊河;苗向阳;曲朝杰;张秋婷;马艳芳;

    人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。

    2010年03期 v.30;No.159 299-303页 [查看摘要][在线阅读][下载 293K]
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  • 体外筛选对犬具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸

    任继玲;何春燕;周蕾;张培因;万敏;王丽颖;于永利;

    建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的测定方法等条件进行优化。并对自行设计的CpGODN进行了初步筛选。结果显示,犬脾细胞对CpGODN的反应性比外周血单个核细胞好。在犬脾细胞为6×105个/孔,37℃5%CO2条件下,经10mg/LCpGODN2006刺激48h,使脾细胞明显增生。3H-TdR掺入法测得的结果比MTT法更敏感。自行设计的CpGODNR008能显著地刺激犬脾细胞增生,且优于CpGODN2006(P<0.05)。结果表明,优化了犬特异性CpGODN的体外筛选条件,并筛选出了对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。

    2010年03期 v.30;No.159 304-307页 [查看摘要][在线阅读][下载 286K]
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  • 免疫胶体金试纸条检测肉鸡感染H9N2-AIV后NS1抗体消长规律

    张文泽;崔卫涛;彭伏虎;肖运才;刘梅;王喜亮;胡思顺;毕丁仁;

    禽流感病毒非结构蛋白(AIV-NS1)抗体检测可作为禽流感病毒感染的诊断标签。在禽流感NS1抗体鉴别诊断试纸条研制成功的基础上,本试验采用人工感染的方法,探讨了H9亚型禽流感病毒感染肉鸡体内NS1特异性抗体的消长规律。结果表明,肉鸡感染后3d开始检测出NS1抗体,至11d阳性率达89%,然后快速下降,21d检出率下降至10%,26d后完全消失,NS1抗体阳性率高低与感染鸡发病及死亡率高低明显一致。而对照组和疫苗免疫组在整个试验过程中NS1抗体检测均呈阴性。感染组血凝抑制抗体出现早于疫苗免疫组,但二者效价持续上升的结果类似。通过肉鸡人工感染试验,揭示了禽流感病毒感染后肉鸡体内NS1抗体消长情况,同时也证实本研究室研制的AIV-NS1抗体检测试纸条,不仅可以从患有呼吸道感染的病鸡中快速诊断出禽流感病毒感染,而且也可以鉴别禽流感疫苗免疫与病毒感染的鸡群。

    2010年03期 v.30;No.159 308-311页 [查看摘要][在线阅读][下载 116K]
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  • 传染性法氏囊病病毒株VP2基因在重组腺病毒中的表达

    潘群兴;王永山;何孔旺;欧阳伟;王晓丽;王忠灿;唐雨德;

    用RT-PCR方法从传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织AH1与AH2中扩增传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析结果显示,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1350nt,编码450aa,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为98.2%、99.3%,七肽基序均为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。进一步将VP2基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-(IBDV)VP2。利用Western-blot、IFA等方法检测IBDVVP2蛋白的体外表达情况,结果证明VP2基因在腺病毒中获得了表达。

    2010年03期 v.30;No.159 312-316页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 不同鸡种间部分免疫性状的比较

    王存波;王克华;包文斌;雷黎丽;周琼;廖菁;陈蓉;秦玉蓉;胡国顺;龚琳琳;陈国宏;常国斌;

    随机抽取如皋鸡、文昌鸡及安卡鸡各80只,每个品种分为A、B2组,每组分别于49日龄腿肌注射25%绵羊红细胞(Sheep red blood cell,SRBC)0.5、1mL。分别检测了41、56、71、89日龄的异嗜性粒细胞/淋巴细胞(Hetero-phil/Lymphocyte,H/L)值,56、71、89日龄的SRBC抗体滴度以及30、41、56、71、89日龄的新城疫(Newcastle disease,ND)和禽流感(Avian influenza,AI)抗体滴度。结果显示,同一检测日龄H/L值在不同品种间存在差异,随着日龄的增加品种间的差异逐步减小;不同品种H/L值随时间变化的趋势不同,如皋鸡4个日龄变化平缓,文昌鸡和安卡鸡呈先高后低趋势。3个品种SRBC抗体滴度均在56日龄达到最高,其中文昌鸡最高,安卡鸡最低,且差异显著(P<0.05)。除如皋鸡外,其他品种对不同剂量SRBC抗原的敏感程度存在差异。在免疫ND疫苗后3个品种抗体滴度表现出相似的变化规律,但是变化幅度有所差异,安卡鸡前3个检测日龄滴度介于如皋鸡和文昌鸡之间,但免疫后期迅速上升,71和89日龄滴度极显著高于其他2个品种(P<0.001);如皋鸡和文昌鸡之间AI抗体滴度除56日龄之外均不存在显著差异,而安卡鸡在所有日龄均极显著低于其他2个品种(P<0.01)。结果表明,家禽的免疫性状在品种间存在遗传差异,中国地方鸡种比外来鸡种在多个免疫性状上存在不同程度的优势。

    2010年03期 v.30;No.159 317-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 鹅细小病毒VP3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达

    高光;张鑫;徐佳;王淳玉;许洪洁;胡桂学;

    根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白VP3基因,获得大小为1605bp的核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌JM109,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应,将VP3基因克隆入真核表达载体pVAX1,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAX1-VP3转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示,VP3基因克隆成功,与GPVB株核苷酸序列同源性为96.2%;PCR和酶切鉴定结果证实,成功构建了含VP3基因的GPV真核表达载体pVAX1-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA,RT-PCR扩增,在1000~2000bp可见一明显DNA条带;间接荧光抗体染色转染细胞,在细胞表面可见特异荧光。

    2010年03期 v.30;No.159 323-326页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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  • 金黄色葡萄球菌肠毒素A在枯草芽孢杆菌中的表达及其活性分析

    韩佳丽;李昌;沈国顺;胡博;李霄;田明尧;孙珊珊;叶明;金宁一;

    利用优化后的SEA基因片段与带有枯草芽孢杆菌启动子的表达载体pBC38c,成功构建了含有SEA基因的重组表达质粒pBC38c-SEA。通过电转化的方法,将重组质粒pBC38c-SEA转入枯草芽孢杆菌1A751中。对目的蛋白进行表达,采用硫酸铵沉淀法浓缩上清中的蛋白,超声波裂解法裂解菌体沉淀,SDS-PAGE凝胶电泳法检测蛋白表达情况,Western-blot对表达的目的蛋白进行活性分析,并对表达条件与硫酸铵浓度进行优化。结果表明,成功构建了枯草芽孢杆菌表达质粒pBC38c-SEA,并在枯草芽孢杆菌中获得了表达,目的蛋白存在于培养基上清中,且具有抗原性。随着培养时间的延长,目的蛋白表达产量增多,在35h时达到最多,同时硫酸铵终浓度为50%,目的蛋白得到最好沉淀。本试验结果表明,SEA基因得以分泌表达,为进一步研究其生物活性并作为佐剂在临床中应用奠定了基础。

    2010年03期 v.30;No.159 327-331页 [查看摘要][在线阅读][下载 278K]
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  • 致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析

    杨霞;陈陆;许瑞;常洪涛;刘红英;王川庆;

    为探讨分离自河南滑县、武陟等12个地区的猪源肠球菌的亲缘关系,采用对其16SrDNA基因的RFLP分析、序列分析及系统进化树的构建等方法,对12株疑似猪源肠球菌进行了研究;结果显示,12株分离株均与肠球菌同源性最高,同源率达98.1%~100%;而与猪链球菌同源率最高达85.5%,且进化树中12株菌株均位居与猪链球菌并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ、XbaⅠ、EcoRⅠ分别对12株球菌的16SrDNA-RFLP分析发现,它们在该片段上有限制性位点,但没有产生限制性片段长度多态性;而HinfⅠ单酶切结果出现了限制性片段长度多态性,且12株分离株可分为两大rDNA图谱类群,与实际测序分析的酶切位点相一致,且找到鉴定肠球菌的350bp的分子标记。说明所分离12株球菌均是肠球菌,且不同地理种群已出现分化。

    2010年03期 v.30;No.159 332-336页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • 副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱多样性研究

    贾爱卿;李春玲;王贵平;杨冬霞;

    建立了副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型技术,并应用于临床分离菌株的流行病学调查。试验结果表明,47株副猪嗜血杆菌产生28种不同的指纹图谱,分离自同一猪场和相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,不能进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分,证实副猪嗜血杆菌ERIC指纹图谱存在丰富的多样性,ERIC-PCR方法是副猪嗜血杆菌流行病学规律分析的有效方法。

    2010年03期 v.30;No.159 337-339+383页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K]
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  • 新疆不同地区奶牛乳房炎β溶血性金黄色葡萄球菌毒力与基因相关性分析

    王登峰;王治才;李建军;杨学云;玛利亚木;

    从新疆5个地区8个奶牛场乳房炎奶样中分离的101株β溶血性金黄色葡萄球菌中随机选64株用小鼠进行毒力测定,同时用随机引物扩增多态性(RAPD)技术分别以3个随机引物进行基因相关性分析,建立种系进化树。结果表明,55%的菌株对小鼠具有较强毒力(可致小鼠2/3死亡),且在乌鲁木齐、奎屯和伊犁地区占据优势。基因相关性分析表明,当相对基因相关性为0.35时,被检测菌株主要分布于6个进化群,86.5%的菌株分布在A、B、C和E4个进化群。其中,50%菌株属于A群,13.5%属于B群,5.8%属于C群,17.3%属于E群。从地区分布可见,乌鲁木齐、伊犁和奎屯地区分离的菌株分别有69.6%、61.1%和71.4%分布在A群;昌吉3个牛场48%、24%的分离菌株分布在B群和C群;库尔勒牛场35.7%、57.1%的分离菌株分布在A群和E群。26株对小鼠具有致死性的菌株分布在A群,这些菌株占致死小鼠菌株的74.3%。

    2010年03期 v.30;No.159 340-343页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K]
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  • 动物园野生动物支气管败血波氏杆菌的分离鉴定与系统发育树的构建

    李伟杰;赵耘;杜昕波;陈永林;康凯;陈敏;

    采用Biolog和16SrRNA基因序列分析法对分离自北京动物园的8株支气管败血波氏杆菌进行了鉴定。菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明,8株菌株为支气管败血波氏杆菌。菌株经纯化培养,采用菌落PCR方法进行16SrRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后直接进行测序。序列经人工校对后用ClustalX1.83软件进行比对分析,最后用Mega3.1软件构建系统发育树,系统发育分析结果表明,8株菌株与支气管败血波氏杆菌DSM10303的同源性达到了99.9%,并在同一个分支内。

    2010年03期 v.30;No.159 344-346页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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  • 45株鸡卡氏杆菌的分离鉴定

    郑鹿平;杨霞;陈陆;皇甫和平;刘慧敏;郭伦涛;徐雪;付仁一;王泽霖;王川庆;

    通过形态学检查、鉴别培养、Vitek-32全自动细菌鉴定系统、PCR鉴定和序列分析等方法,对101只鸡的10种组织脏器进行细菌分离和鉴定。最终鉴定出45株鸡卡氏杆菌,其中43株分离自输卵管炎产蛋病鸡,2株分离自具有呼吸道病史的产蛋鸡,而从SPF鸡、公鸡及马立克病患鸡体内未能分出卡氏杆菌;分离的卡氏杆菌对庆大霉素、链霉素、氨苄西林、青霉素、强力霉素、诺氟沙星及磺胺类药物等都具有不同程度的耐药性。试验结果表明,卡氏杆菌与产蛋鸡的输卵管炎具有相关性,鸡卡氏杆菌的抗生素耐药现象较普遍,为预防该病原在我国的流行提供了依据。

    2010年03期 v.30;No.159 347-351页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K]
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  • 鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立

    王春平;韦强;鲍国连;崔言顺;刘燕;邵泽香;季权安;肖琛闻;李建亮;

    参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。

    2010年03期 v.30;No.159 352-355页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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  • 牛巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立

    简子健;马素贞;沈炯玉;

    根据GenBank发表的XJ-MSA-2c核苷酸序列(登录号:EU328267)设计的2对特异性引物MS-1、MS-2、MS-3以及MS-4,建立牛巴贝斯虫病巢式PCR快速检测方法。在特异性检测试验中,仅从MSA-2c质粒样本中扩增出622、350bp2条目的片段,与预期片段大小相符,而作为对照样本的双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫、东方巴贝斯虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。第1次和第2次扩增的敏感性分别为1.75、1.75×10-2μg/L。在对46份全血的DNA样本巢式PCR和显微镜检测中,阳性检出率分别为34.8%(16/46)和23.9%(11/46)。结果表明,所建立的巢式PCR方法准确、敏感、特异,作为牛巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。

    2010年03期 v.30;No.159 356-358页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K]
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简讯

人兽共患病

  • H5、H7和H9亚型禽流感病毒多重反转录聚合酶链式反应检测方法的建立

    张文慧;王伟利;郑聪;刘明;钱爱东;

    参考GenBank登录的H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,利用DNAStar软件分析其同源性,利用Primer Premier5.0软件设计3对分别针对AIVH5、H7和H9亚型的特异性引物。3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228、830bp。结果显示,利用3对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术。该方法对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228、830bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原不存在交叉反应。该方法对H5、H7和H9亚型AIVcDNA的最低检出量分别为10-4、10-2和10-4。结果表明,本试验建立了可同时检测鉴别H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术。

    2010年03期 v.30;No.159 359-361页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 抗独特型抗体检测H9亚型禽流感血清抗体

    李宝全;彭军;牛钟相;

    为了探讨用抗独特型抗体替代病毒或病毒亚单位检测H9亚型禽流感血清抗体的可行性,本试验分别用全病毒抗原和抗独特型抗体(Ab2)作检测原,通过琼脂免疫扩散试验(AGP)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了鸡的血清样品。在AGP试验中,分别用Ab2和禽流感病毒(AIV)对10份血清样品检测的符合率为70%。在间接ELISA试验中,Ab2和AIV抗原对10份血清样品检测的符合率为90%。用Ab2间接ELISA试验检测出的血清阳性率(8/10)高于血凝抑制试验(6/10)和AGP试验(5/10)。结果表明,在一定的情况下Ab2可以用来代替具有污染环境风险的病毒抗原来检测抗病毒抗体。

    2010年03期 v.30;No.159 362-364页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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  • 产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备

    田冬青;彭小兵;蒋玉文;杨京岚;陈小云;丁家波;屠伟英;

    PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)中,在37℃1mmol/LIPTG诱导下该基因获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为36600,与预期值一致。Western-blotting试验显示,该重组蛋白可被D型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备天然毒素相似的反应原性。重组ε毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达,且以周质方式为主。重组蛋白在胰酶活化前后均可致死小鼠,活化后毒力可为原来的150倍。以重组ε毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明,重组ε毒素蛋白抗血清每毫升可中和30000个小鼠MLD。毒素-抗毒素中和试验和琼脂扩散试验均表明,该抗血清具有ε毒素特异性。

    2010年03期 v.30;No.159 365-369页 [查看摘要][在线阅读][下载 339K]
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基础兽医学

  • 猪干扰素-γ基因多态性及与部分免疫指标关联性分析

    王大力;刘畅;周淑世;岳续朋;刘继丰;戴立胜;孙博兴;赵志辉;

    为研究干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)基因作为猪抗病育种中一种分子标记的可能性,采用PCR-SSCP及测序方法对军牧1号白猪、杜洛克猪、约克夏猪3个品种共481头个体IFN-γ基因全序列的单核苷酸多态性进行了检测,结果发现在猪IFN-γ基因的内含子1、内含子3、外显子4内各发现1个突变位点,分别为T825C、T2730C、G5301A。除在约克夏猪中没有检测到G5301A突变外,各遗传群体内T825C、T2730C、G5301A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。用最小二乘法分析了各个突变位点基因型与部分免疫指标的相关性,结果表明,T825C位点3种基因型间IgG含量AB型显著高于AA型和BB型(0.01<P<0.05);T2730C位点IgM含量CC型显著高于CD型和DD型(0.01<P<0.05);G5301A位点IgG含量EE型显著高于EF型(0.01<P<0.05)。

    2010年03期 v.30;No.159 370-374页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 昆明系小鼠胚胎干细胞分离培养的优化

    白莹敏;李跃民;邱小燕;肖雄;武建中;

    以昆明系小鼠为对象,经过丝裂霉C处理成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)制备饲养层,对影响小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)分离培养的相关因素进行研究。分别收集小鼠3.5d的囊胚(扩张囊胚)和4.5d囊胚(孵化囊胚)进行培养,比较扩张囊胚和孵化囊胚的贴壁率、原代克隆率及传代率的情况。收集3.5d胚龄的囊胚,通过全胚法和免疫外科法对内细胞团(Inner cell mass,ICM)进行分离培养ICM集落,确定离散ICM的适宜时间。用0.25%胰酶+0.04%EDTA,0.125%胰酶+0.02%EDTA和0.25%胰酶+1%小鸡血清等方法对小鼠ES细胞集落进行传代,观察不同酶浓度对ES细胞分离克隆的影响。结果显示,孵化囊胚的贴壁率高于扩张囊胚(P<0.05),但传代率则相反(P<0.05),原代克隆率差异不显著(P>0.05);一般ICM增殖培养2~3d(免疫外科法)或4~5d(全胚培养法)后,出现典型的克隆集落,再挑取ICM;0.125%胰酶+0.02%EDTA及0.25%胰酶+1%小鸡血清,形成ES原代克隆率较高,2组没有显著性差异(P>0.05);结果表明,分离得到的ES细胞经形态学观察,AKP染色,体外分化试验等表明其具有胚胎干细胞的特性。

    2010年03期 v.30;No.159 375-378页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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  • 鸡脾脏中B淋巴细胞的发育及其定位分布

    杨树宝;张英楠;张延林;高晶晶;杨丽华;栾维民;

    应用IgM、IgG和IgA单克隆抗体的免疫组织化学方法,研究IgM+、IgG+和IgA+B淋巴细胞在鸡脾脏中的出现、迁移、数量变化规律等一系列的发育过程以及组织定位分布特点。结果显示,IgM+和IgA+细胞在胚胎15日龄时开始出现,IgG+细胞在胚胎18日龄时出现,21日龄雏鸡脾脏的红髓和生发中心中出现以IgG型为主的浆细胞。各日龄IgM+、IgG+和IgA+细胞主要分布在脾脏的特征性组织结构—椭球周围淋巴鞘和生发中心中,这些结构也随着B淋巴细胞的增多而不断发育成熟。B淋巴细胞的数量随着日龄增长持续增加,直至21日龄时趋于稳定,各日龄B淋巴细胞数量始终以IgG+细胞最多,IgM+细胞次之,IgA+细胞最少。结果表明,鸡出壳初期,脾脏的体液免疫功能逐渐增强,并在21日龄时达到成熟水平。

    2010年03期 v.30;No.159 379-383页 [查看摘要][在线阅读][下载 686K]
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  • 液相色谱串联质谱测定水产品中吩噻嗪类药物残留的研究

    李春风;岳振峰;赵凤娟;华红慧;韩瑞阳;李丽苏;

    建立了水产品中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪等5种吩噻嗪类药物多残留的液质联用确证方法。用碱性乙睛萃取样品中的5种吩噻嗪类药物,然后用HLB固相萃取柱净化,以YMC-PackProC18色谱柱为分离柱,在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱仪进行测定。在1.0、2.0、4.0ng/g3个质量浓度水平进行验证试验,方法的线性范围为0.5~5.0ng/g,总体平均回收率为75.7%~87.7%,相对标准偏差为9.0%~15.2%。该方法简便、快速、准确,各项技术指标满足国内外法规的要求,可用于水产品中吩噻嗪类药物残留的确证检测。

    2010年03期 v.30;No.159 384-387+392页 [查看摘要][在线阅读][下载 343K]
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  • 复合维生素纳米乳的制备及其质量评价

    张文娟;欧阳五庆;王金虎;

    制备复合维生素纳米乳,并对其进行质量评价。绘制伪三元相图筛选处方,考察其形态、粒径分布及稳定性。通过高效液相色谱测定复合维生素纳米乳中维生素A醋酸酯、维生素D3、维生素E醋酸酯的含量。结果显示,制备的复合维生素纳米乳为黄色透明液体,乳滴呈球形,平均粒径为29.8nm,在湿度75%,4、25、40、60℃条件下放置1个月,常温下放置3个月,体系澄清透明,未见分层、絮凝等物理变化。复合维生素纳米乳中维生素A醋酸酯、维生素D3、维生素E醋酸酯的平均含量分别为1.872、0.021、20.020g/L。结果表明,复合维生素纳米乳稳定性好,是一种很有前途的复合维生素制剂。

    2010年03期 v.30;No.159 388-392页 [查看摘要][在线阅读][下载 380K]
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临床兽医学

  • 高能低蛋白饲粮对蛋鸡肝脏apo B-100基因mRNA表达的影响

    曹华斌;郭小权;张彩英;李浩棠;王小莺;罗军荣;胡国良;

    以海蓝褐蛋鸡为试验对象,探讨高能低蛋白日粮对蛋鸡肝脏载脂蛋白B-100mRNA表达关系的影响。选300日龄海蓝褐蛋鸡60只,随机分为2组,每组30只,分别饲喂正常饲粮(对照组,代谢能:2.75MJ/kg,粗蛋白:17%)、高能低蛋白饲粮(试验组,代谢能:2.99MJ/kg,粗蛋白:12.9%)。于试验0、30、60d每组选取体质量相近的试验蛋鸡6只,取肝脏样品,应用半定量逆转录聚合酶链式反应技术测定不同时期apoB-100mRNA在肝脏中的表达水平;结果显示:试验组载脂蛋白B-100mRNA表达在试验60d显著低于对照组(0.01<P≤0.05)。说明高能低蛋白日粮能导致蛋鸡肝脏载脂蛋白B-100mRNA表达水平下降。

    2010年03期 v.30;No.159 393-397页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K]
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  • 脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞先天性免疫反应

    王亨;孟霞;邱昌伟;马翀;李建基;齐长明;

    采取荷斯坦奶牛乳腺,进行体外分离培养,并纯化细胞。用不同质量浓度(0、1、10、100mg/L)的脂多糖刺激乳腺上皮细胞,采用MTT法检测脂多糖对细胞增殖的影响,半定量PCR检测10mg/L的LPS对乳腺上皮细胞TLR4、TLR2、CD14、MD-2四个基因在不同时间(0、2、6h)mRNA表达水平的差异。结果表明,高剂量(100mg/L)的LPS对乳腺上皮细胞的增殖产生明显影响;LPS刺激乳腺上皮细胞后,导致TLR4、CD14、MD-2mRNA表达迅速升高,而TLR2mRNA弱表达。说明TLR4、CD14、MD-2参与LPS的识别,同时也说明脂多糖刺激乳腺上皮细胞后,乳腺上皮细胞能够产生先天性免疫反应。

    2010年03期 v.30;No.159 398-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • 家兔血清中苦马豆素的气相色谱测定方法

    宋毓民;王建华;王爱华;王研;余永涛;

    建立家兔血清中苦马豆素(SW)浓度的气相色谱测定方法,为SW的毒理学和免疫学研究提供条件。饲喂家兔甘肃棘豆草粉后,分别于5、10、20d采集血液并分离血清;血清经过丙酮沉淀、超声和离心净化处理后,冷冻干燥;冻干物经硅烷化试剂衍生化反应,用气相色谱内标法测定血清中SW的含量。结果显示,测定SW的线性范围为0.00008~2.5g/L,相关系数γ=0.9996,检出限为0.00008g/L。在0.001、0.01、0.1、1.0g/L分别添加SW的回收率为89.81%~96.23%,相对标准偏差为2.46%~4.35%。结果表明,该方法准确、灵敏、快速、简便,适用于家兔血清中SW含量的测定。

    2010年03期 v.30;No.159 402-405页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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动物科学

  • 钙离子及山梨醇对猪卵母细胞孤雌激活的影响

    张廷宇;戴建军;吴彩凤;马恒东;王磊;杨山亭;张德福;

    探讨电激液中不同Ca2+浓度与不同电脉冲强度相互关系对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响;以及山梨醇电激活液在猪孤雌激活中的应用。结果表明,当Ca2+浓度不高时,同时增加电激液Ca2+浓度和电脉冲强度能协同促进孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率的提高,Ca2+浓度为0.05和0.1mmol/L时,分别以1.6kV/cm和1.2kV/cm激活,得到的卵裂率为73.75%、74.70%;囊胚率为37.50%、36.83%,显著高于其余各组(P<0.05);当Ca2+过高,增加脉冲强度卵母细胞孤雌发育能力反而下降,退化率升高;以山梨醇液进行电激活,在1.6kV/cm时,卵裂率和囊胚率最高,分别为77.23%和34.15%;与甘露醇电激液不同,施加交流电,山梨醇液不能对孤雌胚胎发育起到促进作用;将山梨醇、甘露醇电激液等体积混合,交流脉冲后进行电激活,1.2、1.6kV/cm组卵裂率分别为72.33%和70.03%,囊胚率分别为31.03%和29.60%,虽然略低于甘露醇组(77.07%、36.03%),但优于山梨醇组(69.63%、26.93%),差异不显著(P>0.05)。以上结果说明,猪卵母细胞激活所需内流Ca2+浓度存在临界值,临界值内,提高Ca2+浓度或电参数,都能提高卵母细胞的激活效果;超过临界值,效果相反;山梨醇液能够取代甘露醇液用于猪卵细胞的电激活;同时以山梨醇和甘露醇作为电激液的基本成份,完全可以用于猪卵母细胞的电激活或融合。

    2010年03期 v.30;No.159 406-410+418页 [查看摘要][在线阅读][下载 208K]
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  • 甘氨酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

    韩岩;魏丽荣;孙丽丽;张涛;李鹏飞;王洪宝;李钟淑;方南洙;

    为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,研究了在体外培养液中添加不同浓度的甘氨酸对重组胚发育的影响。分别在体外培养液中添加0、7、14、21mmol/L的甘氨酸,结果表明,在体外培养液中添加甘氨酸能够显著提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,且以7mmol/L浓度的甘氨酸囊胚的发育率最高。

    2010年03期 v.30;No.159 411-413页 [查看摘要][在线阅读][下载 93K]
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  • 瘦素及其长型瘦素受体在雌性小鼠体内的表达

    邓艳幔;崔亚利;胡满;王宝;

    采用免疫组织化学SP染色法对长型瘦素受体在雌性小鼠生殖周期不同阶段的下丘脑、卵巢、子宫中细胞定位和分布进行了研究,并用ELISA方法对小鼠血清中的瘦素浓度进行了检测。结果显示,下丘脑神经元胞质中有棕褐色阳性颗粒,且阳性细胞数量随妊娠日龄增加逐渐增加,妊娠期与间情期阳性细胞数差异显著(P<0.05);在卵巢中,卵母细胞胞质中有长型瘦素受体表达,随卵泡的发育,卵泡细胞中免疫反应阳性细胞数量逐渐增加;在胚泡附植期,瘦素受体在子宫腺和子宫内膜上皮细胞中大量表达。妊娠期血清瘦素浓度均高于间情期,且瘦素浓度从间情期到妊娠4日龄,呈上升趋势,妊娠5日龄稍下降,后随妊娠日龄逐渐增加。结果表明,瘦素及其长型受体能够促进卵泡发育,有利于小鼠胚泡的附植。

    2010年03期 v.30;No.159 414-418页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K]
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  • 番鸭A-FABP基因部分序列多态性与屠宰、肉质性状和血清甘油三酯含量关系

    张海波;徐琪;张依裕;段修军;王存波;陈国宏;

    根据家鸭A-FABPmRNA序列和鸡A-FABP基因组序列设计1对引物扩增番鸭A-FABP基因内含子1序列。同时根据扩增产物设计5对引物,利用PCR-SSCP对番鸭A-FABP基因部分进行多态性研究及多态性与部分屠宰性状、肉质性状、胸肌肌内脂肪含量和血清甘油三酯含量关系。结果显示,克隆序列包含番鸭A-FABP基因外显子1、2部分序列和完整的内含子1序列,与家鸭和鸡A-FABP基因内含子1分别有序列94.43%和72.95%的同源性;经SSCP检测,在引物P3扩增片段上发现2处碱基突变:分别为1074处T-G和1089处A-C突变,这2处突变产生3种基因型AA、BB和AB型,χ2检验显示番鸭群体符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。最小二乘分析显示,AA、AB型个体在胸肌率、肌肉pH值以及胸肌肌内脂肪含量均存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,番鸭A-FABP基因内含子1多态性可能对个体生产性能产生重要的影响。

    2010年03期 v.30;No.159 419-423页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 北京鸭×番鸭杂种优势差异表达基因GHR的克隆

    单雪松;陈洋;崔庆媛;李克鹏;杨雨江;

    以北京鸭、法国番鸭及其正反杂交1代为试验材料,采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)方法分析不同试验组肌肉组织基因表达差异,结合抑制性消减杂交(SSH)加以验证,发现生长激素受体(GHR)基因在杂种中上调表达。鸭GHR基因3′端578bp片段测序及比对结果表明,该基因与鸡GHR基因核苷酸序列同源性为90%,氨基酸序列同源性为93%。

    2010年03期 v.30;No.159 424-427页 [查看摘要][在线阅读][下载 660K]
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综述

  • 动物源性食品中糖皮质激素残留检测方法的研究进展

    代娟;陆家海;

    糖皮质激素常用于治疗家畜的炎症反应、免疫性疾病、牛的酮病等,并且能提高饲料的转化率,促进畜禽的生长,因而广泛用于畜牧业中。然而,动物生长过程中过量使用糖皮质激素会导致其在动物源性食品中残留,给人体健康带来极大的危害。世界各国对动物源性食品中糖皮质激素残留实施愈来愈严格的监控,对各种检测方法也提出了越来越高的要求。本文介绍了糖皮质激素在畜牧业中的应用、糖皮质激素残留的危害,并对其残留检测方法进行综述。

    2010年03期 v.30;No.159 428-432页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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