预防兽医学

  • NA-1株鹅源副黏病毒表面结构蛋白HN的真核表达

    冯新;宋战昀;母连志;丁壮;

    应用特异性引物,从鹅源副黏病毒NA-1株中扩增出HN蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHN。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHN,回收目的基因HN片段并将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαAHN。用SacⅠ酶切pPICZαAHN使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western-blot分析。结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为63000的重组蛋白,且该重组蛋白可与NA-1株病毒多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明NA-1的HN蛋白片段在Pichiapastoris中获得成功表达。

    2010年06期 v.30;No.162 709-712页 [查看摘要][在线阅读][下载 245K]
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  • 猪圆环病毒2型感染对口蹄疫O型合成肽疫苗免疫应答的影响

    司兴奎;张济培;陈建红;顾万军;马春全;

    采用阻断ELISA方法对单独接种口蹄疫O型(FMD)组(C组,n=3)及PCV2人工感染4周后接种FMDO型疫苗组(PC组,n=4)后不同时相血清中的FMDO型抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析。结果显示,除接种后4周C组白细胞及淋巴细胞含量与略低于PC组外,接种疫苗后2~8周C组白细胞及淋巴细胞含量均略高于CP组,且在接种疫苗后2周,C组淋巴细胞含量显著高于PC组(P<0.05);在整个试验过程中PC组的幼稚型Th细胞含量均高于C组,且在接种疫苗后0周和8周2组间幼稚型Th细胞含量差异显著(P<0.05);在接种疫苗后2~6周期间,除在接种疫苗后4周2组间Tc细胞含量较为接近外,C组的Tc细胞含量均高于PC组;除在8WPIPC组CD4+CD8+记忆/激活Th细胞含量略高于C组外,在接种疫苗后0~6周过程中,C组记忆/激活Th细胞含量均略高于PC组,且在接种疫苗后6周,2组间记忆/激活Th细胞含量差异显著(P<0.05);在接种前疫苗4周和前2周(-4-2WPI)期间,C组的抗体阻断率均高于PC组,在接种疫苗后4~8周2组间抗体阻断率差异逐渐变小,且PC组抗体阻断率略高于C组。结果表明,PCV2感染对机体产生针对FMDO型特异性抗体早期有一定的抑制作用,但在后期这种抑制作用逐步减弱,甚至消失;PCV2感染确实可以在一定程度上抑制机体对猪FMDO型合成肽疫苗体液免疫应答,导致机体的淋巴细胞及白细胞含量降低,进而导致Tc细胞及记忆/激活Th细胞含量下降。

    2010年06期 v.30;No.162 713-716+726页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 禽流感病毒PB2亚单位抗血清的制备

    葛叶;邓国华;李雪平;陈化兰;

    采用RT-PCR方法分段扩增PB2基因,将目的基因定向克隆至含HisTAG的原核表达载体pET-32a,经序列验证正确后,转化BL21大肠杆菌,诱导表达重组蛋白。靶蛋白经Ni+柱纯化后与弗氏免疫佐剂混合免疫新西兰大耳白兔,获得高效价的抗PB2的抗血清。Western-blot检测结果证实制备的抗血清可与PB2蛋白发生特异性反应。进一步将PB2全长基因准确插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞表达PB2蛋白,通过IFA检测发现,抗血清与细胞表达的PB2蛋白发生反应,出现特异性荧光,经激光共聚焦检测PB2亚单位只在细胞核中出现荧光,说明PB2亚单位单独表达仅限于细胞核内。上述研究为进一步探索PB2亚单位的生物学特性及其结构与功能研究打下基础。

    2010年06期 v.30;No.162 717-720页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K]
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  • 禽Ⅰ型副黏病毒不同禽源株P基因编码蛋白的分子特征分析

    钟登科;魏建超;黄兵;于可响;张训海;

    采用RT-PCR技术对禽Ⅰ型副黏病毒鸡源分离株(WF00C)、鹅源分离株(WF00G)和鸽源分离株(WF00P)P基因进行了克隆和序列分析。结果表明:这些毒株的P基因最大ORF的长度均为为1188bp,编码395个氨基酸。P蛋白同源性和系统发育分析显示,WF00C株和WF00G株与NA-1、ZJ1、FP1/02、PX2/03、Duck/1/05、SP02和SRZ03的同源性较高,WF00P株与意大利鸽源分离株IT-227/82、2736/00和法国鸽源分离株99106、99299的亲缘关系较近,而且WF00C株、WF00G株和WF00P株均与传统疫苗株或弱毒株HB92、LaSota、Clone30和B1以及国内标准强毒株F48E9的遗传距离较大,这预示目前流行的APMV-1已经发生了较大程度的变异。V蛋白羧基端氨基酸比对分析发现,APMV-1V蛋白的特有序列有较高的一致性,即氨基酸序列(132KKG134)和V蛋白羧基端的5个Cys残基位点在所有的毒株中是高度保守的,但在138~170位和201~240位存在较大的变异,APMV-1毒株V蛋白羧基端氨基酸的突变呈现"基因型一致性"。

    2010年06期 v.30;No.162 721-726页 [查看摘要][在线阅读][下载 650K]
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  • 河南不同临床型鸡支气管炎病毒流行毒株的分离鉴定及其S1基因变异分析

    徐雪;王川庆;王泽霖;杨霞;陈陆;王宏魁;刘春生;刘慧敏;郑鹿平;郭伦涛;王新娟;

    经鸡胚接种、RT-PCR、气管环培养等方法从河南地区发病鸡群中分离、鉴定出2株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitic virus,IBV),分别命名为HN/HL株和HN/SG株。应用RT-PCR方法对尿囊液中HN/HL株和HN/SG株以及本室保存的H120株的S1基因全序列进行了扩增,并对其进行克隆测序。结果显示,3株IBV目的片段全长分别为1828、1825、1819bp,3个序列相互之间存在多位点的变异,同时存在插入和缺失现象;对推导的氨基酸序列进行分析表明,HN/HL株S蛋白裂解识别位点序列为HRRRR,而HN/SG株和H120株S蛋白裂解识别位点同为RRFRR。将测序结果同GenBank上登录的其他IBVS1基因相比较,发现本试验的HN/HL株与疫苗H120株的同源性仅为78.1%,HN/SG株与H120株的同源性仅为81.1%,而HN/HL株与HN/SG株的同源性为87.9%。同源性及遗传进化分析还发现,已报道的腺胃型ZJ971株和QX株在分子水平上应该分别属于呼吸型和肾型IBV。

    2010年06期 v.30;No.162 727-733页 [查看摘要][在线阅读][下载 1036K]
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  • 新城疫病毒F蛋白抗原表位串联基因的构建及其原核表达

    程宝艳;彭明义;余为一;张丹俊;詹凯;

    用自行设计的3对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因3段抗原表位区段,大小分别为81、108、105bp。应用添加互补性酶切位点的基因工程方法,将3段抗原表位基因片段拼接成多表位串联基因,大小为306bp。将此基因片段插入含组氨酸(His)基因的质粒pET-32-a中,构建了重组质粒pET-32-a-F306。经诱导表达,获得相对分子质量约为31000的融合蛋白,其中F蛋白抗原表位串联基因片段表达产物约为11000。经亲和层析,获得纯化His-F306融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗新城疫病毒F蛋白抗体。经过琼扩、ELISA及Western-blot检测,表明该融合蛋白中的抗原表位串联基因所表达的蛋白具有良好的抗原性。

    2010年06期 v.30;No.162 734-737页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K]
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  • 牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用

    季新成;牛国辉;员丽娟;张彦明;李鹏;段晓东;于学辉;

    根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10~100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。

    2010年06期 v.30;No.162 738-743+747页 [查看摘要][在线阅读][下载 809K]
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  • 水貂肠炎病毒的分离及鉴定

    谭婷婷;张国军;马建;王玉平;吕九云;马建章;张彦龙;

    应用细胞培养技术,从2006年山东某貂场送检的水貂病料中分离出1株水貂病毒,经PCR及VP2测序分析证明为水貂肠炎病毒(ZYL-MEV-1);动物感染试验表明是一株强毒株,培养1~20代细胞培养物对猪的红细胞血凝结果表明具有低血凝性,与2009年在大连地区流行的水貂肠炎病毒VP2的基因测序相比较同源率100%,提示此分离株可能为我国目前水貂肠炎病毒的主要流行株。

    2010年06期 v.30;No.162 744-747页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K]
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  • 猪大肠杆菌LT基因位点突变、真核表达及小鼠免疫效果

    袁秀芳;王一成;徐丽华;刘邓;牛登元;王朝文;

    大肠杆菌不耐热性肠毒素具有免疫增强的作用,为了更好的研究LT免疫增强效果,我们从临床分离大肠杆菌,提取基因组DNA,扩增出大肠杆菌不耐热性肠毒素基因LT,经位点突变,将LT210位的A突变为G,突变后的LT克隆到真核表达载体pCI质粒中,命名为pCI-LT(R210G),磷酸钙共沉法转染IBRS细胞证实LT(R210G)体外获得表达。将pCI-LT(R210G)免疫小鼠,ELISA结果表明:免疫小鼠两周后体内检测到特异性抗LT抗体,4周达到最高值。同时,MTT试验结果表明免疫小鼠产生强烈的淋巴细胞增殖反应。研究结果证明已成功构建pCI-LT(R210G)真核表达质粒,是一种极有发展前景的基因疫苗。

    2010年06期 v.30;No.162 748-752页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K]
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  • 枯草芽孢杆菌对肉鸡生长性能和抗氧化力的影响

    翟玲;李卫芬;余东游;

    将300羽1日龄健康振宁雏公鸡随机分成对照组和试验组,每组设3个重复,每个重复50羽。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.75g/kg的枯草芽孢杆菌制剂,活菌数为108CFU/g。试验期为77d,分试验前期(1~35d)和试验后期(36~77d)。结果显示:与对照组相比,日粮中添加枯草芽孢杆菌分别提高前期肉鸡的体质量和日增重,但差异不显著(P>0.05),后期肉鸡的体质量和日增重分别提高了6.72%(P<0.05)和13.69%(P<0.05),全程肉鸡的体质量和日增重分别提高了6.75%(P<0.05)和8.22%(P<0.05);枯草芽孢杆菌对肉鸡采食量影响不明显(P>0.05);料重比在试验前期有所提高,试验后期和全程均呈下降趋势,但无显著差异(P>0.05)。从抗氧化指标看,试验组肉鸡血清中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(SOD)、超氧化物歧化酶(GSH-Px)分别比对照组提高了25.75%(P<0.05)、20.10%(P<0.05)和18.12%(P<0.05),丙二醛(MDA)含量有所降低,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,枯草芽孢杆菌可提高肉鸡的抗氧化能力、减少氧化应激,从而提高肉鸡生长性能。

    2010年06期 v.30;No.162 753-755+761页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K]
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  • 鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

    刘拂晓;李明义;范根成;单虎;程增青;吴海燕;

    根据鸭疫里默氏杆菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的荧光定量PCR检测方法。利用该方法分别对自然和人工感染病例不同脏器的细菌进行定量检测,并对临床疑似阳性病例进行诊断。试验证明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点;在自然感染和人工感染的鸭病例中,脑组织和心脏的细菌含量最高。该检测方法能够很好地应用于鸭疫里默氏杆菌的快速检测。

    2010年06期 v.30;No.162 756-761页 [查看摘要][在线阅读][下载 571K]
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  • 禽病原性大肠杆菌温度敏感性血凝素(Tsh)突变株的构建

    贺生中;刘静;陈祥;高崧;

    运用基因重组方法将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下目的片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APECE037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株。E037和E037(Δtsh)株的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明,E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有了明显降低。

    2010年06期 v.30;No.162 762-765+783页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 金黄色葡萄球菌聚集因子A基因与牛IL-18基因真核共表达载体的构建与表达

    陈智;刘少宁;曹丙蕾;孔娜;李宏梅;胡敬东;赵宏坤;

    参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE/ClfA/BoIL-18。在Cellfectin Reagent的作用下转染293T细胞,用间接免疫荧光试验检测ClfA和BoIl-18蛋白。结果表明,重组质粒pBUDCE/ClfA/BoIL-18在293T细胞中同时表达了ClfA和BoIL-18蛋白。该重组载体的成功构建为研究ClfA和BoIL-18重组共表达产物的生物学活性及其防治奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用奠定基础。

    2010年06期 v.30;No.162 766-769+788页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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  • 微小隐孢子虫p23基因在干酪乳杆菌中的表达及其表达产物的鉴定

    格日勒图;布仁贺希格;白梅;贾洪林;玄学南;张和平;

    应用DNA重组技术把微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)子孢子抗原p23基因克隆入表达载体pMG36e当中,成功构建了可在干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)胞浆中表达的重组载体pMG-p23。并以SDS-PAGE、Western blotting以及IFAT试验方法,分别在破碎菌体组分和活菌体当中鉴定p23基因表达产物并确定其在细胞中表达的位置。本试验为进一步构建分泌型或锚定型干酪乳杆菌(L.casei Zhang)活菌载体奠定了基础。

    2010年06期 v.30;No.162 770-773页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K]
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人兽共患病

  • 狂犬病病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒穿梭载体的构建及表达

    谭业平;祝艳蕾;孙招金;郭霄峰;

    提取HEP-Flury株狂犬病病毒RNA,RT-PCR方法扩增糖蛋白G基因,并克隆入pMD18-T载体,进行测序鉴定和序列分析。之后双酶切下G基因,将其亚克隆入腺病毒穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-1,经卡那霉素抗性、PCR、双酶切及测序鉴定,获得重组单G腺病毒穿梭载体pShuttle-G。应用PCR方法在G基因末端引入口蹄疫病毒2A自剪切肽序列,并克隆入T载体,同时构建含G基因的T载体,分别双酶切回收以上2片段并将他们定向亚克隆入pShuttle-IRES-hrGFP-1,经系列鉴定,成功构建由2A自剪切肽序列连接双G基因的重组腺病毒穿梭载体pShuttle-dG。转染以上2个表达质粒入Ad-293细胞,荧光显微镜观察到GFP的表达,斑点印迹试验结果显示G蛋白成功表达。

    2010年06期 v.30;No.162 774-778页 [查看摘要][在线阅读][下载 289K]
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  • 应用巢式PCR检测隐孢子虫

    李巍;吴康;张西臣;李建华;张国才;李淑红;宫鹏涛;杨举;

    应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)建立了一种检测隐孢子虫(Cryptosporidium)的方法。试验中隐孢子虫卵囊纯化采用庶糖密度梯度离心法,以液氮-热水浴反复冻融及酚-氯仿抽提冷乙醇沉淀法制备模板DNA,根据隐孢子虫18S rRNA序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。该方法特异性强,可检出牛源微小隐孢子虫(C.parvum)、羊源微小隐孢子虫(C.parvum)、牛源安氏隐孢子虫(C.andersoni)、鸡源贝氏隐孢子虫(C.baileyi)及猪源隐孢子虫(C.suis);敏感性高,该方法最低核酸DNA检测量达到10fg。初步应用结果表明,所建立的Nested PCR方法适合于隐孢子虫病的诊断和分子流行病学调查。

    2010年06期 v.30;No.162 779-783页 [查看摘要][在线阅读][下载 455K]
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基础兽医学

  • 人溶菌酶基因hLYZ在小鼠乳腺中的表达及其抗菌活性检测

    吕爽;欧阳萍;雷连成;杨鹏;赵瑞丽;韩文瑜;

    从人胎盘组织中克隆获得人溶菌酶基因hLYZ,选用体内表达载体pcDNA3.1,构建表达载体pcDNA3.1hLYZ,并转染至小鼠体内,采集小鼠乳汁和乳腺组织,通过RT-PCR方法检测基因的表达水平,用免疫组化反应、Western blotting检测蛋白的表达,并通过体外抗菌活性检测重组人溶菌酶的抗菌活性。经酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组质粒pcDNA3.1-hLYZ构建正确,小鼠乳清的SDS-PAGE电泳显示在约14700处有特异的蛋白条带出现,Western blotting检测表明成功表达了人溶菌酶,根据回归方程计算酶活性为4011U/mL,体外抗菌活性检测结果显示重组人溶菌酶对大肠杆菌有明显裂解作用。本试验成功地在小鼠乳腺中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,这些结果为哺乳动物乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

    2010年06期 v.30;No.162 784-788页 [查看摘要][在线阅读][下载 442K]
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  • 猪IL-2成熟蛋白在昆虫细胞中的表达及生物学活性鉴定

    陈红英;郭小参;崔保安;王彦彬;张红英;方剑玉;

    以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增猪IL-2成熟蛋白基因。将猪IL-2成熟蛋白基因定向克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含猪IL-2基因的重组质粒rBacmid-IL2,转染昆虫细胞。间接免疫荧光试验表明重组猪IL-2在Sf9昆虫细胞中获得了表达,SDS-PAGE可检测到相对分子质量为20000的重组蛋白,Western-blot证实该重组蛋白可与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应,重组猪IL-2经纯化后能明显促进猪T淋巴细胞转化。结果表明,重组猪IL-2在昆虫细胞中得到表达,表达的重组蛋白具有一定生物学活性,为进一步开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。

    2010年06期 v.30;No.162 789-792页 [查看摘要][在线阅读][下载 239K]
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  • 鸡氨肽酶N基因转染BHK-21细胞后IBV感染情况的改变

    明晓波;张颖;刘澜澜;魏萍;

    构建了带绿色荧光蛋白基因及鸡氨肽酶N全长基因的真核表达重组载体,重组载体转染BHK-21细胞后12h开始可见绿色荧光,36h荧光最强,试验中转染24h后感染IBV鸡胚肾细胞适应毒,72h收获病毒接下一次转染的BHK-21细胞,如此在转染细胞上连续传5代,用间接免疫荧光检测各代次病毒感染转染BHK-21细胞,可见随着代次增加,感染程度增加;病毒毒力EID50逐渐增加,第5代时原病毒毒力基本恢复,半定量RT-PCR检测各代次病毒也可见病毒含量逐渐增加。结果表明,鸡氨肽酶N转染至IBV非易感的BHK-21细胞系后,BHK-21细胞变得对IBV敏感,鸡氨肽酶N可能用作IBV感染的细胞受体。

    2010年06期 v.30;No.162 793-797+861页 [查看摘要][在线阅读][下载 488K]
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  • 胰岛素样生长因子-1对奶牛成骨细胞增殖及分化的影响

    李素华;尹红斌;郭定宗;周文君;黎兵;

    研究了外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的奶牛成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。应用组织块移行法分离奶牛成骨细胞,姬姆萨染色及碱性磷酸酶(ALP)染色进行鉴定。MTT法检测不同质量浓度IGF-1对成骨细胞增殖的影响,比色法检测及放射免疫法(RIA)分别测定细胞基质ALP活性及骨钙素(OC)水平,评价细胞分化功能。结果显示,1~200μg/LIGF-1均能促进奶牛成骨细胞增殖,100μg/L组具有最大刺激效应,且IGF-1干预组细胞光密度值(D值)从第1天到第5天逐渐增加,第7天降低。与对照组相比,10μg/L与100μg/LIGF-1均可显著增强ALP活性及OC水平,增幅达20%~180%(P<0.05或者P<0.01)。结果表明,IGF-1是奶牛成骨细胞增殖和分化代谢促进剂,因此推测IGF-1可以成为动物骨代谢性疾病潜在治疗手段。

    2010年06期 v.30;No.162 798-802页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K]
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  • 慢性砷暴露对雌鼠乳腺组织ER mRNA和PR mRNA表达的影响

    郝光;杨英;夏雅娟;

    建立慢性砷暴露小鼠动物模型,通过实时定量PCR方法检测慢性砷暴露小鼠乳腺组织中ER、PR mRNA表达量。结果显示,(1)对照组mRNA表达量ER为0.0025±0.0011、PR为0.0190±0.0150;(2)0.05mg/L组ER为0.0085±0.0080、PR为0.0470±0.0180;(3)0.1mg/L组ER为0.0027±0.0003、PR为0.0210±0.0200;(4)0.2mg/L组ER为0.0037±0.0025、PR为0.0390±0.0130;(5)0.4mg/L组ER为0.0029±0.0018、PR为0.0072±0.0031。与对照组比较,各组砷暴露小鼠ER表达均升高,其中0.05mg/L组ER表达差异显著(P<0.05);除0.4mg/L组表达降低外,其他各暴露组PR表达也升高,0.05mg/L组PR表达差异极显著(P<0.01);0.2mg/L组的PR表达差异显著(P<0.05)。结果表明,慢性砷暴露小鼠乳腺组织中ER、PR表达量较对照组发生改变,可能作为一种环境内分泌干扰物发挥雌激素效应进而产生毒性作用。

    2010年06期 v.30;No.162 803-805+810页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K]
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  • 蝉新型抗菌肽Cryptonin在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

    刘德辉;焦颖;徐蕙;吴锋;张春红;黄毓茂;

    根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的Cryptonin基因片段。基因克隆到pPICZα-C质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-Cryptonin。pPICZα-C-Cryptonin通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33内。PCR检测Cryptonin基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在AOX(醇氧化酶)启动子调控下,Cryptonin蛋白获得分泌表达,其相对分子质量约为2700。表达产物耐热性强,在100℃条件下10min内抗菌活性不变,煮沸30min以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很好的抑菌活性。

    2010年06期 v.30;No.162 806-810页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K]
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  • 奶牛群体生长激素基因多态性与产奶量关联性

    张海容;吴建平;

    设计7对引物,利用PCR-SSCP技术检测GH基因在130头中国荷斯坦奶牛群体的遗传多态性,研究该基因对产奶量的影响。结果发现在GH基因的第3内含子、第5外显子和3′端存在多态性。GH基因第3内含子等位基因A、B的基因频率为0.775和0.225,3′端等位基C、D在奶牛群体中的基因频率为0.729和0.271,GH基因第5外显子等位基因E、F和G、H在奶牛群体中的基因频率分别为:0.507、0.138和0.259、0.096,GH基因第3内含子座位上不同基因型对305d产奶量有显著效应,AB基因型305d产奶量显著高于AA和BB型(P<0.05)。

    2010年06期 v.30;No.162 811-814+821页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
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  • 甲砜霉素在感染多杀性巴氏杆菌鸡体内的药物动力学

    郭桂芳;杨大伟;李勇军;周伟伟;薛伟芳;沈巍;苏帅;贺生中;

    30只健康杂交肉鸡随机分成3组,每组10只,雌雄各半,分别进行健康鸡静脉注射、健康和巴氏杆菌感染鸡口服给药的药动学研究。静注和口服的给药剂量按体质量分别为15mg/kg和30mg/kg。以反相HPLC测定血浆中甲砜霉素的质量浓度,药物浓度-时间数据用3P97药动学程序软件处理。健康鸡单剂量静注给药后,血药浓度-时间数据符合无吸收二室开放模型,其主要动力学参数分别为:V(c)为(0.58±0.09)L/kg,t1/2α(0.11±0.03)h,t1/2β(0.95±0.18)h,AUC为(11.99±0.90)mg/(L.h),CL(s)为(1.26±0.10)L/(kg.h)。健康鸡和巴氏杆菌感染鸡单剂量口服给药血药浓度-时间数据均符合一级吸收一室开放模型。健康鸡口服给药的主要动力学参数分别为:Lagtime(0.04±0.02)h,t1/2ka(0.16±0.08)h,t1/2ke(1.64±0.22)h,T(peak)(0.57±0.18)h,C(max)(6.34±0.56)mg/L,AUC为(19.02±1.48)mg/(L.h),F为79.32%。巴氏杆菌感染鸡口服给药的主要动力学参数分别为:Lagtime(0.07±0.02)h,t1/2ka(0.54±0.26)h,t1/2ke(1.74±0.27)h,T(peak)(1.31±0.39)h,C(max)(5.28±0.73)mg/L,AUC为(21.75±1.03)mg/(L.h),F90.70%。与健康鸡相比,甲砜霉素在感染鸡的t1/2(ka)、T(peak)和Lag-time显著延长(P<0.05或P<0.01),且比健康鸡具有更高的生物利用度。但甲砜霉素在巴氏杆菌感染鸡体内的消除速度未受影响。

    2010年06期 v.30;No.162 815-817+846页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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  • 镉诱导仔猪睾丸支持细胞氧化酶活性降低及DNA的损伤

    张明;邬静;袁慧;邓思君;袁莉芸;郭成志;朱丽;

    以仔猪睾丸支持细胞为试验模型,采用二步酶消化法分离支持细胞进行培养。探讨了0、10、20、40、80μmol/L的氯化镉对支持细胞的毒性作用。结果表明:10μmol/L以上的氯化镉有抑制支持细胞生长的作用,并能使支持细胞氧化酶活性下降,造成支持细胞DNA的损伤。

    2010年06期 v.30;No.162 818-821页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • 大鼠输尿管中α_1肾上腺素能受体亚型的分布特征

    梁春宇;高建邦;张培因;段志雄;潘日润;

    采用放射配基结合法,利用GraphPad PRISM5.01软件计算出受体及其亚型的密度,从而比较α1肾上腺素能受体(α1-AR)亚型在大鼠输尿管各段中的分布情况。α1-AR在大鼠输尿管各段的结合位点是非均匀分布的,下段输尿管的Bmax为(14911±1253)pmol/g,明显高于上段(9077±211)pmol/g及中段(9164±158)pmol/g,上段与中段的分布差别不显著。粗制膜标本经过CEC预温育后,α1-AR与[125I]-HEAT的最大结合容量Bmax比对照组下降约64%。在有α1-AR亚型高特异性拮抗剂(5-MU,Cyclazosin,BMY7378)存在时α1-AR与[125I]-HEAT的最大结合容量Bmax均有不同程度的下降。放射性配基结合试验结果显示,α1-AR在输尿管下段的密度要高于上段及中段,但Kd值及Hill系数并没有区别。通过单点竞争抑制反应表明,大鼠输尿管中存在3种α1-AR亚型,即α1A-AR、α1B-AR和α1D-AR亚型,但是α1D-AR亚型与α1A-AR亚型的分布要明显多于α1B-AR亚型,而α1D-AR亚型分布略高于α1A-AR亚型。

    2010年06期 v.30;No.162 822-824页 [查看摘要][在线阅读][下载 115K]
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临床兽医学

  • 高氟对雏鸡肾脏抗氧化功能的影响

    柏才敏;彭西;龚涛;陈涛;崔恒敏;

    300只1日龄艾维茵肉鸡随机分为4组,分别喂以对照日粮(F23mg/kg)和高氟日粮(F400mg/kg,高氟Ⅰ组;F800mg/kg,高氟Ⅱ组;F1200mg/kg,高氟Ⅲ组)6周。结果显示,与对照组比较,高氟Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肾脏组织丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(NEFA)含量显著升高(P<0.01或P<0.05),肾脏超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著降低(P<0.01);同时,血清SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.01或P<0.05),MDA、NEFA显著升高(P<0.01或P<0.05)。结果表明,日粮氟含量400mg/kg及其以上可引起肾脏和血清抗氧化酶活性降低,抗氧化功能受损,肾脏组织自由基和过氧化产物产生过量,造成细胞损伤,终致肾脏功能降低。

    2010年06期 v.30;No.162 825-828页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K]
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  • 高能低蛋白日粮致脂肪肝出血综合征鸡抗氧化能力和肝损伤的研究

    郭小权;胡国良;曹华斌;张彩英;李浩棠;王小莺;

    选用140日龄健康海兰褐壳蛋鸡102只,随机分为对照组(饲喂日粮代谢能与粗蛋白分别为11.51MJ/kg、15.58%)和试验组(饲喂日粮代谢能与粗蛋白分别为14.47MJ/kg、12.55%),每组设3个重复,每个重复17只。于试验期第15、25、35、45、55天,每组取6只鸡测定其血清和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,同时对肝脏作病理组织学检查。结果显示:(1)试验组蛋鸡表现肝脂蓄积,肝脂肪变性,出现典型脂肪肝出血综合征病变,证明高能低蛋白日粮可以成功复制蛋鸡脂肪脏出血综合征。(2)与对照组相比,试验组血清和肝脏匀浆中MDA含量升高,抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力最终都降低,表明机体抗氧化能力下降。结果表明,自由基在高能低蛋白日粮致脂肪肝出血综合征的发生、发展过程中起重要作用。

    2010年06期 v.30;No.162 829-832页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • 试验性甲砜霉素中毒对肉鸡血液生化指标的影响

    唐海蓉;陈仕均;王选年;银梅;刘开永;李敬玺;林勋然;张炳新;

    选用4日龄AA+肉鸡304只,随机分为4组,分别在饲料中添加0mg/kg(对照组)、500mg/kg(Ⅰ组)、1000mg/kg(Ⅱ组)、1500mg/kg(Ⅲ组)的甲砜霉素。试验期8周。分别在第14、28、42、56天测定肉鸡红细胞数量(RBC)、血红蛋白含量(Hb)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)和血清铁(Fe)含量。结果显示,肉鸡持续采食甲砜霉素后红细胞数量和血红蛋白含量显著降低(P<0.05);血清总蛋白和白蛋白随着试验进程先升高后降低(P<0.05);谷草转氨酶活性显著降低(P<0.05);肌酐和尿素氮极显著升高(P<0.01);血清铁显著升高(P<0.05)。结果表明,甲砜霉素对肉鸡的上述血液指标影响明显,并且存在明显的剂量效应关系。

    2010年06期 v.30;No.162 833-836页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K]
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  • 秦瞿制剂对大鼠溃疡性结肠炎的抗炎作用机制

    邓孝廷;田淑琴;邢丽丽;

    以秦皮为主药,瞿麦为辅药,探讨纯中药制剂抗炎作用机制。选用Wistsar种清洁级雄性大白鼠60只,体质量(216±2.8)g,随机分为4组,除空白对照组外,用10%乙酸造成溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)。采用酶联免疫分析法(ELISA)测定了正常、造模及治疗后1、3、7d大白鼠血清中前列腺素E2(Prostandin,PGE2)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)的水平;同时,采用放射免疫分析法检测了UC模型大鼠结肠黏膜组织中环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)含量的变化,探讨抗炎作用机制。结果显示,在大鼠患UC时,血清中PGE2、IL-1和TNF-α明显升高,黏膜组织中cAMP显著降低(与空白对照组比较,P<0.01);该方治疗后,大鼠UC模型血清中PGE2、IL-1和TNF-α的含量显著降低,cAMP含量显著升高(与模型对照组比较,P<0.01)。结果表明,该方剂抑制结肠黏膜组织促炎因子的释放和提高cAMP含量是其抗炎作用机制之一。

    2010年06期 v.30;No.162 837-839+851页 [查看摘要][在线阅读][下载 138K]
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动物科学

  • 不同繁殖力湖羊垂体组织BMP/Smad信号通路基因mRNA表达量

    徐业芬;李齐发;李二林;涂飞;胡冬利;谢庄;陈玲;

    湖羊是世界著名的多胎绵羊品种,BMP/Smad信号通路与绵羊生殖有密切关系,为探讨高繁殖力和低繁殖力湖羊垂体组织中BMP/Smad信号通路基因mRNA表达水平差异,本试验选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后屠宰记录卵巢排卵数,并采取垂体组织,利用荧光定量PCR技术对湖羊BMP/Smad信号通路各信号分子基因(包括BMP蛋白家族基因:BMP2、BMP4、BMP7;BMP受体基因:BMPRⅠA、BMPRⅠB、BMPRⅡ;细胞内Smad蛋白家族基因:Smad1、Smad4、Smad5)mRNA在垂体组织中的表达水平进行分析。结果显示,多羔组卵巢排卵数极显著高于单羔组(P<0.01);在垂体组织中,BMP2、BMP7、BMPRⅠA、BMPRⅡ、Smad1和Smad4基因表达量在单羔组和多羔组间没有显著差异(P>0.05),但是,多羔组BMP4、BMPRⅠB和Smad5基因表达量显著低于单羔组(P<0.01),且与卵巢排卵数分别呈不同程度的负相关,说明发情期湖羊垂体组织BMP4、BMPRⅠB和Smad5基因表达量差异可能是引起湖羊较高产羔数的原因之一。

    2010年06期 v.30;No.162 840-846页 [查看摘要][在线阅读][下载 800K]
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  • 牛孤雌激活囊胚冷冻复苏后胚胎存活率和胚胎质量

    张鹏;王中伟;马馨;高飞;唐博;张嘉保;李子义;

    使用2种不同的冷冻载体冷冻保存牛孤雌囊胚,并且使用差异染色的方法计数囊胚细胞数。结果显示,开放式毛细玻璃管(GMP)和冻精管(Straws)冷冻牛孤雌囊胚复苏后囊胚孵出率存在显著性差异(GMP法为70.29%,冻精管法为27.31%,P<0.05)。差异染色结果显示,牛囊胚冷冻复苏后囊胚细胞数目为91.37,而对照组(正常孤雌囊胚)囊胚细胞数目为93.70,两者差异不显著(P>0.05),并且前者内细胞团数(ICM)与滋养层细胞数(TE)比例为0.23,而后者为0.24,差异不显著(P>0.05)。结果表明,GMP法更适合冷冻保存牛孤雌囊胚,并且其冷冻复苏后囊胚的孵出率达到70.29%。同时使用GMP冷冻囊胚对囊胚细胞的损伤较小。

    2010年06期 v.30;No.162 847-851页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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  • 中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛MSTN基因多态性分析

    吕文发;杨连玉;贺实伟;杨雨江;张嘉保;

    分别以20头中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛为研究对象,采用创造酶切位点PCR与降落PCR相结合的方法对3个品种的基因外显子1的突变位点扩增,分析了3个肉牛品种之间的Myostain(MSTN)基因多态性。运用1对特异性引物扩增3个肉牛品种的MSTN基因已知外显1SNP位点,扩增片段大小为217bp。运用CRS-RFLP方法鉴定60头牛MSTN基因在3个群体中的分布情况。结果表明,在西门塔尔群体中等位基因C占优势,等位基因频率为60%,AA基因型频率为0;在夏洛莱群体中等位基因A优势,等位基因频率为57.5%,CC基因型频率为0;而在利木赞群体中未检测到这一突变。

    2010年06期 v.30;No.162 852-854+868页 [查看摘要][在线阅读][下载 290K]
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综述