预防兽医学

  • PRRSV-GP5基因的克隆及其蛋白结构和B细胞表位预测

    陈军义;王开功;罗险峰;周碧君;文明;程振涛;张双翔;路宪礼;刘飞;

    应用RT-PCR扩增PRRSV-GP5目的基因,将纯化DNA与pMD18-T载体连接并转化入DH5α菌株,将阳性重组质粒进行测序和同源性对比。以此基因为材料,应用同源模型化的方法建立其3D结构和DNAStar软件预测其二级结构、亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性,并综合分析了其B细胞抗原表位。结果表明,该基因高度保守,同时PRRSV-GP5蛋白呈现较规则的空间结构,其肽段32~36、51~53、140~142、146~151和196~197可能是其优势B细胞抗原表位区域,该结果将为PRRSV-GP5基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供理论依据。

    2011年06期 v.31;No.174 769-773页 [查看摘要][在线阅读][下载 539K]
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  • 猪乙型脑炎病毒EⅢ与猪细小病毒VP2基因的串联表达及免疫原性

    李云云;郭万柱;徐志文;林华;李宇;漆信桥;

    通过重叠PCR的方法将猪细小病毒(PPV)VP2基因和猪乙型脑炎病毒(JEV)EⅢ基因通过Linker连接,并克隆至真核表达载体pCI-neo,得到重组质粒pCI-VP2-EⅢ。将重组质粒pCI-VP2-EⅢ转染Vero细胞,其表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验的方法检测出目的基因的转录与表达。质粒pCI-VP2-EⅢ在无免疫佐剂参与的情况下,免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,同时设空质粒接种组,猪细小病毒灭活苗和猪乙脑弱毒苗免疫组及磷酸盐缓冲液接种组作为参比对照。结果表明,pCI-VP2-EⅢ免疫组,在二免后1周产生JEV和PPV的特异性抗体,三免后达到高峰;对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显;通过流式细胞仪检测,CD3+T、CD4+T显著高于猪细小病毒灭活苗免疫组和对照组(P<0.05),略低于乙脑减毒苗免疫组,但CD8+T显著高于其他试验组(P<0.05),这表明pCI-VP2-EⅢ接种后可能主要是以CD8+T淋巴细胞介导的细胞免疫。

    2011年06期 v.31;No.174 774-778+794页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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  • 中国西南地区猪群中TTV分子流行病学调查

    伍志伟;王红宁;杨鑫;管仲斌;周英顺;

    为了解西南地区猪群中Torque teno virus(TTV)感染流行情况,以TTV 5′非编码区(5′UTR)保守序列设计引物,建立了猪TTV检测的巢式PCR(nPCR)方法,并对该地区22个规模化养猪场363份血清进行了检测。结果表明,在被检血清样品中TTV1和TTV2感染率为79.6%、87.1%,两者的混合感染率为68.3%。证实TTV在西南地区猪群中广泛存在,提示人们应当重视防止TTV感染的进一步流行。

    2011年06期 v.31;No.174 779-782页 [查看摘要][在线阅读][下载 197K]
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  • 1994—2009年我国部分地区37株鸡传染性支气管炎病毒S蛋白基因序列分析

    王晓红;尹燕博;王守春;李海英;徐守振;王建琳;郭妍妍;

    对自1994—2009年从我国5省区免疫鸡群中分离到的37株传染性支气管炎病毒(IBV)的S蛋白基因序列进行分析,发现S1基因序列存在广泛的氨基酸替换、缺失和插入现象,大部分IBV分离株S1基因的推导氨基酸序列变异主要集中在60~63、73~74、97、128、282~299位等。S2基因较为保守,主要在裂解位点后的2~47、122~152位发生氨基酸的替换,可见IBV S基因的不断变异可能是造成本试验所调查的5省区免疫鸡群IB频发的重要原因。遗传进化分析发现本试验所调查地区近十多年来肾型毒株仍是主要流行株,没有或少有4/91型毒株流行。所调研地区鸡的腺胃炎持续广泛地发生,但是从临床腺胃病料中很少分离到IBV,可见IBV不太可能是引起腺胃炎的主要病原。

    2011年06期 v.31;No.174 783-789页 [查看摘要][在线阅读][下载 330K]
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  • 鹅源副黏病毒致弱株的“拯救”及分子生物学鉴定

    张晓东;孙玉章;刘佳旭;母连志;丁壮;王昌庆;李少丽;

    以本课题组前期构建的鹅源副黏病毒NA-1株的全长感染性克隆为模板设计2对引物,用overlap PCR方法将其F蛋白裂解位点处的112、115和117位碱性氨基酸定点突变成为具有典型弱毒株特征的非碱性氨基酸。随后将突变后的F基因序列替换全长感染性克隆的对应序列,构建突变后的克隆质粒FL-cDNA-F′。将改造后的感染性克隆质粒与pCI-NP、pCI-P和pCI-L 3个辅助表达质粒共转染VT7细胞系,成功拯救出了致弱的鹅源副黏病毒。经过分子生物学鉴定,该毒株F基因序列具有典型的弱毒株特征。救获病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)为96h,表明救获的病毒毒力已被成功致弱,可以作为当前流行的鹅副黏病毒病的一个较为理想的疫苗候选株。

    2011年06期 v.31;No.174 790-794页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K]
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  • 蛋用型祖代鸡群禽白血病病毒感染状态的持续观察

    李中明;王景艳;张青婵;赵冬敏;崔治中;

    为了检测从国外直接进口的蛋用型祖代鸡群是否存在外源性禽白血病病毒(ALV)的感染,将240只1日龄鸡饲养在严格的SPF环境中。在不同日龄采集泄殖腔棉拭子检测ALV群特异性p27抗原、采集血浆分离外源性ALV和采集血清检测ALV-AB及J特异性抗体。结果表明:在近3个月的6次采样检测中,6个不同的配套系间泄殖腔棉拭子检出率显著不同。其中1个配套系6次完全阴性,其余5个则在不同时期呈间隙性阳性。各品系之间ALV p27抗原检出率与快慢羽性状没有相关性。慢羽的配套系C,36只鸡中在45日龄检出了1例ALV-AB抗体一过性阳性,在60日龄检出了2例ALV-J抗体一过性阳性。分别在5、21日龄采血浆在DF1细胞分离病毒,所有的6个配套系的204只鸡外源性ALV的病毒分离均为阴性。

    2011年06期 v.31;No.174 795-798+803页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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  • 禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗在小鼠体内免疫效果试验

    牛明福;宫强;秦翠丽;孙晓菲;王帅涛;程铭;

    应用PCR技术扩增获得禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体,再亚克隆到真核表达质粒载体pCDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcA,体外转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光试验检测其转录表达情况。动物免疫分为3组:pCDNA3.1(+)组、PBS对照组和pcA组,每组16只BALB/c小鼠,pCDNA3.1(+)组和pcA组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周。间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况。强毒攻击,计算小鼠存活数目及保护率。结果显示,间接免疫荧光试验和RT-PCR检测结果均表明pcA可在体外培养的Vero细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,pcA组免疫小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)组和PBS组相比差异极为显著(P<0.01)。经提取的禽多杀性巴氏杆菌总外膜蛋白(Omps)刺激后,pcA组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P<0.05)。脾细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组(P<0.01)。强毒攻击后pcA组保护率明显高于两对照组,可达60%。结果表明,成功构建了禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗,该疫苗可诱导免疫小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答及一定的保护效果。

    2011年06期 v.31;No.174 799-803页 [查看摘要][在线阅读][下载 262K]
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  • 鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和16S rRNA基因序列测定与系统进化分析

    朱明华;朱瑞良;马荣德;孙寅剑;郭文龙;

    从山东泰安一鸡场发病雏鸡眼中分离到1株致病菌(编号为QY),通过细菌形态学等常规鉴定符合奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)特性。用奇异变形杆菌阳性血清诊断结果呈阳性,人工感染证明该菌株是造成该鸡场雏鸡大批发病死亡的致病菌。药敏试验结果显示对头孢类、恩诺沙星等高度敏感,而对青霉素和复合磺胺等不敏感。以细菌16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增,得到QY的16SrRNA基因序列,长约1 453bp(GenBank,登录号为GU477712)。将该序列与GenBank中序列进行Blast比对,发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达98%以上。运用DNAStar软件与其中10株奇异变形杆菌分离株构建系统进化树,结果表明,分离株(QY菌株)与10个代表菌株的同源性均为98.9%~99.9%,其中与AB272366同源性最高为99.9%。从分子水平证明该菌是奇异变形杆菌并分析了其遗传进化规律,为鸡奇异变形杆菌的鉴定及其引起的疾病的诊断与治疗提供了参考。

    2011年06期 v.31;No.174 804-808页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K]
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  • 山羊痘、羊口疮及山羊传染性胸膜肺炎混合感染的检测与分析

    颜新敏;储岳峰;吴国华;李健;朱海霞;朱彩珠;张强;

    利用特异性PCR方法从病山羊组织病料中分别扩增山羊痘病毒、羊口疮病毒和山羊支原体山羊肺炎亚种特异性片段,继而将扩增的特异性片段克隆、测序,并与GenBank上相应的基因序列进行比对、绘制系统进化树,进行流行病学分析。结果表明,从病山羊中可同时扩增出山羊痘病毒、羊口疮病毒和山羊支原体山羊肺炎亚种特异性片段,并通过基因序列比对分析确证了PCR检测结果,首次证实我国存在山羊痘、羊口疮及山羊传染性胸膜肺炎的混合感染,为我国现阶段羊病的流行病学和有效防制措施的制定提供了参考依据。

    2011年06期 v.31;No.174 809-813页 [查看摘要][在线阅读][下载 521K]
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  • 氨基糖苷类耐药鸭大肠杆菌acrD基因mRNA表达水平

    刘建华;苑丽;潘玉善;陈玉霞;胡功政;陈永杰;

    从89株临床分离鸭源大肠杆菌中选择5株氨基糖苷类高水平耐药菌,应用实时荧光定量RT-PCR方法测定其主动外排基因acrD mRNA水平,选用1株中介株、1株敏感株和大肠杆菌ATCC25922作为对照,分析其mRNA转录水平与耐药强度的相关性。结果显示,5株耐药菌的acrD mRNA相对表达量均高于中介株和敏感株,其相对表达量分别是2.00、1.96、2.22、1.84、4.39,敏感对照株为1.67,中介对照株为1.75,除4号菌株外,其余4株耐药菌相对表达量和标准菌株ATCC25922具有显著性差异;同是高度耐药的4号菌和5号菌存在较大差异,5号菌相对表达量是4号菌的2.39倍,这说明对氨基糖苷类不同耐药程度的菌株acrD基因的转录、表达存在差异,且与耐药水平呈正相关,但同时存在其他重要耐药机制介导氨基糖苷类耐药。

    2011年06期 v.31;No.174 814-818页 [查看摘要][在线阅读][下载 298K]
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  • 3种兔球虫18S rDNA部分序列测定与系统发育分析

    方素芳;顾小龙;崔平;

    采用单卵囊分离法从河北某兔场分离大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫,接种无球虫兔后获得大量纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将3种球虫18S rDNA测序结果与GenBank中发布的兔球虫18S rDNA序列用DNAStar软件进行比对。使用MEGA4.0软件对兔球虫18S rDNA进行同源性比较,并绘制遗传进化树。结果表明,大型艾美耳球虫扩增出大小为1 521bp的18S rDNA片段;黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫均扩增出大小为1 520bp的18S rDNA片段。序列比对结果显示,3种河北株兔球虫与GenBank中相应的3种兔球虫18S rD-NA(EF694016、EF694011、EF694012)相似性分别为99.6%、99.6%和100%。3种河北株兔球虫序列和GenBank中兔球虫18S rDNA序列(EF694007-EF694017)位于一个单系集群。

    2011年06期 v.31;No.174 819-821页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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人兽共患病

  • 猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学

    张晓峰;帅江冰;李爱云;方维焕;何永强;吴珊;

    对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析,针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性,且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高10~100倍。利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测。其中,77份人血清样本仅有2份为HEV核酸阳性(2.6%)。而猪粪便样品阳性率则高达20.5%(56/273),且所调查的猪场均存在HEV感染。进一步的分子流行特征分析表明,浙江及周边地区的猪HEV毒株多为基因Ⅳ型,与其他地区的Ⅳ型HEV毒株同源性较高(83.4%~89.5%),但它们之间也存在较多的变异位点。猪源HEV毒株PJ-1则与多数Ⅲ型HEV毒株同源性较高(88%),进化分析也表明其为基因Ⅲ型。人血清样品中检测到的2份HEV毒株Human-1与Human-2与本地区Ⅳ型猪源毒株在分子进化关系上具有很高的亲源性,它们分布于同一分支内,而不构成独立分支。以上分析结果表明浙江及其周边地区猪HEV感染较为广泛,且以基因Ⅳ型毒株为主,但也存在基因Ⅲ型毒株的流行。

    2011年06期 v.31;No.174 822-827页 [查看摘要][在线阅读][下载 428K]
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  • 云南省不同宿主H9N2感染调查和NA分子进化分析

    张泉鹏;李作生;鲍晓伟;李乙江;张富强;郑钧丰;王意银;张应国;张文东;宋建领;邱薇;李刚山;张向荣;范泉水;

    2006年6月-2007年10月,从云南省16个地州随机采集的各种家禽、家猪的喉气管和口腔棉拭子样品7 901份,应用RT-PCR结合血凝、血凝抑制试验和抗原捕捉ELISA,检测H9N2亚型禽流感感染情况,选择具有代表性的阳性样品,克隆NA全基因并进行基因序列分和推导氨基酸的糖基化位点分析。结果表明,云南省2006-2007年H9N2亚型禽流感病毒在全省14个地州均有流行,感染宿主包括鸡、鸭、鹅和猪;分离的19个毒株中的13个鸡源和1个鹅源毒珠的NA全基因长1 407bp,编码469个氨基酸,同源性为96.1%~99.6%,是目前云南省流行的优势亚群;3个鸭源毒株、1个鹅源和1个猪源毒株NA基因长1 398bp,编码466个氨基酸,5个非鸡源毒株的NA基因的同源性为99%,构成云南目前流行的另一分支,推导氨基酸第61~63位3个氨基酸的缺失是与优势分支的特征性区别;2个分支间NA基因同源性为90%,与国内外其他毒株比较神经氨酸酶基因序列具有多态性。

    2011年06期 v.31;No.174 828-834页 [查看摘要][在线阅读][下载 737K]
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  • 利用反向遗传技术拯救H9N2重组病毒

    井波;李呈军;陈化兰;

    为研制高效特异的H9N2亚型AI疫苗,选取我国具有代表性的毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2)(简称SH10),以12质粒系统为基础,利用反向遗传操作技术构建了1株表面基因由SH10提供、内部基因由12质粒系统提供的重组病毒SH/PR8,为新型疫苗的研制提供了新的毒株。

    2011年06期 v.31;No.174 835-837+851页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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  • 猪源链球菌对大环内酯类主要耐药基因的检测

    芮萍;马增军;陈翠珍;段玲欣;郭玉芳;房海;

    为了解猪源链球菌对红霉素相关耐药基因ermB、ermA和mefA的分布,对河北省及辽宁部分地区的64株猪源链球菌分离株,用PCR方法检测51株红霉素耐药株和13株红霉素敏感株中ermB、ermA和mefA基因。结果显示,耐药菌株中ermB基因的检出率为98.04%(50/51),ermA的检出率为25.49%(13/51),没有检出mefA基因。初步表明河北省及辽宁部分地区的猪源链球菌对红霉素的耐药机制以ermB基因介导为主。20株菌的ermB基因核苷酸序列与GenBank中同源序列相似性为99%~100%。与参照序列AJ972604.1相比,20株菌的ermB氨基酸序列的突变位点较少,主要有Thr 75→Ser、Ser 100→Asn、Arg 118→His、Leu 175→Ile,以100和118位突变为主,进一步说明ermB基因是相对稳定的。

    2011年06期 v.31;No.174 838-842页 [查看摘要][在线阅读][下载 575K]
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  • 猪链球菌2型在家兔体内的分布及致病性

    胡东波;何孔旺;倪艳秀;俞正玉;吕立新;周俊明;茅爱华;范红结;

    用猪链球菌2型SS2-1株按109 CFU/只分别以静脉、肌肉、皮下、滴鼻、口服5种途径人工感染健康家兔,结果前4种感染途径均可引起发病并死亡,口服不发病,且以静脉感染发病最急。当分别静脉注射109,108,107,106,105 CFU/只SS2-1株,肌肉注射108,106 CFU/只SS2-1株,结果证实感染剂量与发病程度有正相关性,家兔临床症状和病理变化明显。用荧光定量PCR方法检测所有感染家兔组织的含菌量,结果提示发病程度与含菌量呈正相关,且各组织含菌量有差异。另外,人工感染家兔后在不同时间点取动物组织做菌体含量动态监测,结果提示体内含菌量随时间推移递增,发病高峰或死亡时达最高值。试验结果证明SS2-1株对家兔易感,致病性稳定,且细菌在动物体内增殖稳定并具有规律性。

    2011年06期 v.31;No.174 843-847页 [查看摘要][在线阅读][下载 602K]
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  • 重庆地区家畜附红细胞体分子流行病学调查及危险性因素

    聂奎;周作勇;周荣琼;罗洪林;唐成;胡世君;汤明;胡友兰;於剑;

    本试验对重庆地区牛、猪和羊附红细胞体进行分子流行病学调查及危险性因素分析。在2006—2008年期间,采用鲜血压片法、姬姆萨染色法和基于16SrRNA-PCR方法,共检测了307头份牛血样,检测阳性率分别为46%、48%和11%;检测猪血样1 658头份,检测阳性率分别为63%、68%和76%;检测羊血样1 191份,检测阳性率分别为61%、70.4%和16.1%。危险性因素分析结果显示,山区牛附红细胞体感染阳性率极显著高于丘陵地区(OR=16.03,95%CI=5.47~17.11)(P<0.01),山区猪和山羊附红细胞体感染阳性率显著高于丘陵地区(猪:OR=1.38,95%CI=1.06~1.79;羊:OR=1.43,95%CI=0.54~3.82)(P<0.05)。农户散养牛和猪的附红细胞体感染阳性率极显著高于规模化养殖(牛:OR=3.2,95%CI=1.48~6.89;猪:OR=2.28,95%CI=1.79~2.89)(P<0.01)。农户散养山羊附红细胞体感染阳性率高于规模化养殖场(OR=1.19,95%CI=1.09~1.54)(P>0.05),但差异不显著。

    2011年06期 v.31;No.174 848-851页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K]
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基础兽医学

  • 神经肽Y及其Y1受体阳性细胞在鸭腔上囊中的分布及发育变化(英文)

    方静;廖婷彬;崔雪;陈玥;

    神经肽Y及其Y1受体在神经-免疫-网路中发挥着重要作用。二者在许多脊椎动物胸腺和脾脏中的表达已有研究,但它们在腔上囊中的表达及发育变化特征还未见报道。本试验应用免疫组化技术研究神经肽Y及其Y1受体阳性细胞在鸭腔上囊胚胎及胚后发育中的分布及变化特征。结果显示,在鸭腔上囊中神经肽Y及其Y1受体分别最早表达于26和22d胚龄。神经肽Y阳性细胞分布于黏膜上皮、滤泡、肌层和小动脉平滑肌。Y1受体阳性细胞分布于黏膜上皮、滤泡淋巴细胞。各部位神经肽Y及其Y1受体阳性细胞数量表现出明显增龄变化特征。结果说明鸭腔上囊中存在神经肽Y及其Y1受体,二者可能存在的相互作用主要表现在胚后发育阶段,这与B淋巴细胞的发育与分化以及腔上囊的退化密切相关。

    2011年06期 v.31;No.174 852-857页 [查看摘要][在线阅读][下载 1007K]
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  • 奶山羊BLG基因敲除载体的构建

    陈华涛;李倩;胡林勇;王爱华;靳亚平;刘军;杨艳;

    根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。

    2011年06期 v.31;No.174 858-863页 [查看摘要][在线阅读][下载 304K]
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  • 鸭毛囊中ASIP基因片段的克隆及组织表达分析

    梁正翠;杨海明;王志跃;陈宽维;刘桂琼;

    根据GenBank发表的鸡刺鼠信号蛋白(ASIP)基因序列的同源保守区域,设计了1对特异性引物。以番鸭、高邮鸭和英系北京鸭(即樱桃谷鸭)毛囊RNA为模板,经扩增、测序及拼接得到的部分mRNA序列均为编码序列,共308bp,对应编码102个氨基酸。与已发表的原鸡和鹌鹑的ASIP对应的mRNA核苷酸序列进行比对,番鸭、高邮鸭和英系北京鸭的同源性均在92.53%以上,相应编码的氨基酸序列同源性均高于92.16%。高邮鸭与英系北京鸭核苷酸,氨基酸序列一致,同源性为100%。半定量PCR结果显示,番鸭ASIP基因表达具有较高的普遍性,在皮肤组织(毛囊和皮肤)和中枢神经系统(下丘脑)及其他非皮肤中均有表达。皮肤和毛囊的表达差异不显著(P>0.05),下丘脑中的ASIP基因相对表达量最高,极显著高于皮肤中ASIP基因的表达量(P<0.01),而与毛囊中的差异不显著(P>0.05)。

    2011年06期 v.31;No.174 864-869页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K]
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  • 柴胡舒肝汤对脂肪肝模型动物的影响

    张雨;韦倩;

    采用高脂日粮饲喂海兰褐蛋公雏,制作脂肪肝动物模型,再以柴胡舒肝汤进行干预。结果显示,试验组鸡只逐渐出现类似脂肪肝综合征的临床症状,实验室检验血清呈黄色稠膏凝脂状,血脂含量显著升高,剖检肝脏肿大呈土黄色泽,肝脏脂肪含量明显升高,表明以高脂日粮加丙基硫氧嘧啶人工造模成功。中药预防组在其饮水中加入4.5mL柴胡舒肝汤,结果较好地对抗了高脂日粮与丙基硫氧嘧啶的作用,试验鸡没有出现相应临床症状与实验室检验指标,表明柴胡舒肝汤对高脂日粮加丙基硫氧嘧啶所致脂肪肝有预防作用。对已发生脂肪肝病变的鸡以柴胡舒肝汤进行治疗,使相关临床症状逐步消失,肝脏病变与其他检验指标得到恢复,表明柴胡舒肝汤对高脂日粮加丙基硫氧嘧啶所致脂肪肝有治疗作用,可将在其饮水中加入4.5mL柴胡舒肝汤作为推荐剂量。试验中没有发现动物对柴胡舒肝汤呈现不良反应。

    2011年06期 v.31;No.174 870-874页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • 15株临床分离耐药大肠杆菌耐氟喹诺酮类抗生素基因的检测与序列分析

    朱僧;邢艳萍;胡腾;雷连成;

    15株动物源性耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌进行PCR检测、测序、WDNASIS软件分析gyrA基因中的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)、AcrA以及编码与质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药机制相关的qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。结果表明,15株耐药菌中,QRDR基因在其编码第72、75、83位或第87位氨基酸均发生突变;AcrA基因未检测到氨基酸的突变;qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr耐药基因阳性菌各检测到1株,序列分析表明不存在氨基酸突变。QRDR基因编码的氨基酸4个位点发生突变,其中Ser83→Leu和Asp87→Asn 2个基因的突变均与文献报道的突变相同,双突变的7个菌株均表现为高度耐氟喹诺酮类抗生素,表明gyrA基因为大肠杆菌耐氟喹诺酮类抗生素的一个重要机制。高度耐氟喹诺酮类抗生素的菌株中有2株没有检测到氨基酸突变的存在,但是aac-(6′)-Ib-cr基因和qnrS检测为阳性,表明质粒介导的喹诺酮类耐药也可单独导致菌株的耐药。存有一个菌株gyrA基因编码的氨基酸发生突变Ser83→Leu,AcrA基因和qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因检测均为阴性,但是菌株仍然表现为高度耐药,说明还有未知的耐药机制存在。

    2011年06期 v.31;No.174 875-879页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K]
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  • 大鼠感染微小隐孢子虫后小肠、肾及肺脏病理学变化

    刘德义;顾有方;李升和;王珏;

    将40只SPF级SD大鼠随机均分为地塞米松免疫抑制感染组和对照组n=20,免疫抑制感染组大鼠一次性接种1×106个/L微小隐孢子虫卵囊液1mL,空白对照组接种1mL灭菌生理盐水。于试验结束后宰杀大鼠,立即剖检取小肠、脾、肺,Bouin液固定,常规石蜡切片,HE染色,奥林巴斯显微摄影系统观察并显微摄影。结果显示,免疫抑制感染组大鼠小肠绒毛和肠腺受损严重,数量明显减少,结构模糊,绒毛上皮细胞和肠腺细胞明显肿胀、解体,细胞结构消失;肾脏肾小体数量减少,有的血管球明显萎缩甚至碎解,肾小囊腔明显增大,有的肾小囊壁层细胞的连续性遭到破坏;肺脏肺泡隔明显增厚,充血现象严重,肺泡隔内的细胞萎缩,胞核固缩,细胞结构模糊。试验结果表明,微小隐孢子虫对大鼠小肠、肾和肺等器官的组织结构具有明显损伤作用,进而影响大鼠的消化吸收、泌尿和呼吸等功能。

    2011年06期 v.31;No.174 880-883页 [查看摘要][在线阅读][下载 1244K]
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  • 贵州南五味子多糖对鸡细胞免疫和体液免疫的影响

    王宏军;蒋红;邓旭明;

    选用600只15日龄海兰褐雏鸡,随机分为5个处理,每个处理3个重复,每个重复40只鸡,皮下注射贵州南五味子多糖10、20mg/kg、黄芪多糖20mg/kg、环磷酰胺40mg/kg及生理盐水。空白对照组,连续给药3d后免疫新城疫疫苗,分别于免疫后7、14、21、28和35d时,各处理组随机抽取8只鸡检测各项免疫指标,探讨不同处理组对雏鸡免疫功能的影响。本试验结果表明,皮下注射10~20mg/kg贵州南五味子多糖可显著促进鸡外周血T淋巴细胞增殖,IL-2的产生(P<0.01);可使CD4+/CD8+淋巴细胞比值明显升高(P<0.01);可使鸡体内抗ND抗体滴度明显升高(P<0.01);可使法氏囊、胸腺的脏器指数均明显升高(P<0.01)。

    2011年06期 v.31;No.174 884-886页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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  • 表面等离子共振检测蓖麻毒素

    刘文森;李吉平;许娜;邢丽杰;刘林娜;万家余;纪秋野;高宏伟;

    采用氨基偶联的方法,分别将RT抗体分子和RT分子交联固定于葡聚糖表面,进行直接和间接检测溶液中RT的含量,建立了SPR检测蓖麻毒素方法。在0~2 000μg/L范围内,线性相关系数R2=0.988 7,最低检测浓度为0.05μg/L,检测时间为18min。结果显示,RT与其单抗具有良好的特异性和敏感性,能够满足RT快速检测的需求。

    2011年06期 v.31;No.174 887-890页 [查看摘要][在线阅读][下载 285K]
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临床兽医学

  • 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因多态性分型试验

    邓海平;倪春霞;蒲万霞;

    利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2~9条带,产物大小为240~4 500bp。菌株共分为6个基因型,其中Ⅰ型17株(占23.9%)、Ⅱ型3株(占4.2%)、Ⅲ型33株(占46.5%)、Ⅳ型15株(占21.1%)、Ⅴ型2株(占2.8%)、Ⅵ型2株(占2.8%)。Ⅰ型为内蒙古地区的流行优势菌群,Ⅲ型为贵州地区的流行优势菌群。两地区各基因型菌株比例有明显差异,这可能与奶牛养殖业水平和环境差异有关。

    2011年06期 v.31;No.174 891-894+898页 [查看摘要][在线阅读][下载 462K]
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  • 锌、铜对实验性钼中毒绵羊肝脏、肾脏中钼含量的影响

    杨自军;张才;王宏伟;刘凤军;冉林武;汪纪仓;

    小尾寒羊20只,随机分为5组,分别口服钼、铜和锌(mg/kg),Ⅰ组30mg/kg钼、Ⅱ组30mg/kg钼+15mg/kg铜、Ⅲ组30mg/kg钼+15mg/kg锌、Ⅳ组30mg/kg钼+15mg/kg铜+15mg/kg锌,Ⅴ组去离子水。试验90d期满,采取肝脏和肾脏,硫酸-高氯酸消化,原子吸收法测定钼、锌、铜含量,结果显示,Ⅰ组肝脏钼含量与第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);Ⅳ组肝脏铜含量与Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01),与Ⅱ组差异显著(P<0.05),Ⅱ组肝铜含量与Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);组间肝脏锌含量均差异极显著(P<0.01)。Ⅰ、Ⅲ组肾钼含量显著高于Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组(P<0.01);Ⅱ与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);肾铜含量Ⅲ组与Ⅰ组差异极显著(P<0.01);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);各组肾脏锌含量差异均极显著(P<0.01)。结果表明,30mg的钼可使肝脏钼含量显著增加(P<0.01),锌、铜含量降低。锌对肝脏钼有很好的颉抗作用,铜、锌有效地降低了钼在组织中的蓄积。

    2011年06期 v.31;No.174 895-898页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K]
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  • 重金属Pb~(2+)的抗原合成与鉴定

    张志强;杨志强;李建喜;王学智;陈化琦;张景艳;张凯;孟嘉仁;

    本研究旨在为重金属铅的ELISA检测方法建立提供一种免疫抗原并对其进行初步评估。试验采用络合剂CHX-A"-DTPA双功能基团分别特异性结合重金属元素Pb2+和蛋白载体KLH,合成出复合络合物KLH-CHX-A"-DTPA-Pb2+作免疫抗原,最佳合成条件pH值、反应时间、温度分别为9.0、(22±3)h和25℃;用BCA试剂盒、紫外扫描、三硝基苯磺酸法和原子吸收法对合成抗原做了初步评估,免疫抗原蛋白含量为2.66g/L,络合剂与Pb2+的偶联度为77.84%,结构与设计相似;5次免疫BALB/c小鼠后,抗血清可达128 000以上。结果提示,重金属Pb2+的抗原合成成功,免疫小鼠后特异性好,可用于重金属铅的ELISA检测方法研究。

    2011年06期 v.31;No.174 899-902+907页 [查看摘要][在线阅读][下载 390K]
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  • 纳米氧化铜对雏鸡全血和肝脏铜含量及肝脏铜蓝蛋白mRNA表达的影响

    隋菲菲;朱连勤;朱风华;陈甫;王友令;孙金全;

    选取1日龄SPF白莱航蛋用公雏63只,随机分为7组,1组受试鸡饲喂基础日粮;2~4组受试鸡分别饲喂以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜8mg/kg的饲料;5~7组受试鸡分别饲喂以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜175mg/kg的饲料。结果显示,日粮中添加铜8mg/kg或175mg/kg时,纳米氧化铜组受试鸡全血、肝脏铜含量显著高于氧化铜组、硫酸铜组和对照组(P<0.05);纳米氧化铜组受试鸡肝脏血浆铜蓝蛋白(CP)mRNA表达量显著高于硫酸铜组和氧化铜组(P<0.05)。试验至30d,日粮添加铜8mg/kg或175mg/kg时,纳米氧化铜组受试鸡血浆CP活性显著高于硫酸铜组和氧化铜组(P<0.05)。表明纳米氧化铜通过提高脏器组织铜沉积、上调铜酶或铜蛋白的基因表达来提高铜酶活性,从而发挥其生物学作用。

    2011年06期 v.31;No.174 903-907页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K]
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  • 长爪沙鼠脑底动脉Willis环变异缺失类型与脑缺血模型症状相关性分析

    郑振峰;杜小燕;王迎;路静;高丰;陈振文;

    通过观察398只长爪沙鼠右侧颈总动脉结扎脑缺血模型,比较研究其脑底动脉Willis环缺失类型和半脑缺血模型症状的相关性。结果显示,长爪沙鼠脑底动脉Willis环的前、后交通支各有4种类型。在Willis环后交通支缺失的前提下,当行单侧颈总动脉结扎时,一侧脑缺血症状显著程度与前交通支变异类型有关,其中前交通支完整型与其余3种类型的症状有显著性差异(P=0.000)。结果表明,经颈总动脉结扎后半脑缺血模型高发生率和典型症状的基础是Willis环后交通支缺失并伴有前交缺失或细小为前提的。

    2011年06期 v.31;No.174 908-912页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K]
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  • 高原反刍家畜Ca、P代谢

    田发益;巴平;李晓忠;何冰梅;钟国辉;

    西藏农区反刍家畜体格较小,不及内地牛、羊体质量的1/2。对牛、羊各主要物质代谢进行了测定分析后,发现P的沉积量较少,仅为(0.090 1±0.075 0)g/W0.75.d。因海拔高度的升高,引起的血液TCO2和血液CaO2的量降低。采用理论与实际测试相结合,总结出各值与大气压的关系,即,TCO2(mmol/L)=0.01×CO2结合力(CO2CP)(mmol/L)×大气压(kPa);CaO2(mL/dL)=0.002 7×大气压+1.366 8×Hb(g/dL)-1.386 9×Hb(g/dL)×exp(-0.043×大气压);尿P(mg/d)=血磷阈值(mmol/L)×正常TCO2(mmol/L)-高原TCO2(mmol/L)×95%×31(P原子量)×17.37%×每天尿量(0.069 3×W0.75)/正常TCO2(mmol/L),并对各式进行了理论阐述。此式能较合理地反映高原环境下反刍家畜Ca、P的代谢状态。

    2011年06期 v.31;No.174 913-916+925页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K]
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动物科学

  • GMP玻璃化冷冻未成熟牛卵母细胞核成熟及冷冻损伤试验

    许卫华;王学琼;王子玉;王锋;张嘉保;

    本试验通过荧光染色的方法建立了未成熟牛卵母细胞在体外培养过程中第1次减数分裂的各个阶段的参考判定图谱;根据这个标准来观察毛细玻璃管(GMP)玻璃化冷冻对卵母细胞核成熟和冷冻损伤的影响。结果表明,从屠宰场废弃的卵巢表面卵泡内抽取的COCs,70%处于生发泡期,12.5%生发泡开始破裂,7.5%已开始浓缩,这说明从屠宰场获得的COCs有较高的异质性;卵母细胞在成熟培养22h时收获排出第一极体的卵母细胞,可得到丰度较高的极体-胞质染色体对称、紧密相邻的成熟卵母细胞;GMP玻璃化冷冻损伤主要有2种表现形式,首先,直接影响膜结构的完整性,包括细胞膜和核膜,这可从退化的细胞比例看出(8~24h,有21.9%~27.2%的细胞处于该阶段),其次,影响CONDENSED向MⅠ期的过渡,这可从处于CONDENSED卵母细胞的比例看出(8~24h,有24.1%~34.3%的细胞处于该阶段)。

    2011年06期 v.31;No.174 917-920+932页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K]
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  • 水貂EGF基因SNPS与皮张长度的相关性试验

    李玉梅;赵云;孙博兴;闫守庆;张晶;姚纪元;赵志辉;

    以水貂的表皮生长因子基因(EGF)作为候选基因,采用单链构象多态性和DNA测序的方法检测了EGF基因单核苷酸多态性(SNPs)。针对该群体的特点建立合适的统计分析模型,并进行了EGF基因多态性与皮长性状的关联分析。结果表明,EGF基因对水貂的皮张长度有一定影响。BB基因型个体与AA基因型个体之间有一定的差异(P<0.05)。CD基因型个体皮长平均要高于CC和DD基因型,且与CC型个体差异显著(P<0.05),与DD型差异不显著(P>0.05)。统计各基因型之间的组合给水貂皮长带来的影响时,发现多数组合基因型对所检测的水貂皮长有显著影响(P<0.05)。

    2011年06期 v.31;No.174 921-925页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K]
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综述

  • 吸虫线粒体基因组及其应用研究进展

    贾万忠;闫鸿斌;史万贵;郭爱疆;詹芳;

    吸虫病(Trematodiasis)如血吸虫病、肝片形吸虫病等是一类重要的人兽共患寄生虫病,在我国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对吸虫线粒体基因组全序列分析的研究进展、应用和今后的发展方向作一综述。目前,已完成包括复殖亚纲10个种和单殖亚纲4个种总计14种吸虫线粒体基因组全序列测定。吸虫线粒体基因组碱基组成、基因结构与排列、基因变异等分析结果为线粒体功能基因组学研究、比较基因组学研究、分子分类学研究、物种起源、分子系统发育与进化分析及其疾病诊断等提供了重要依据和指导作用。线粒体基因组序列分析有助于解决一些新近发现的种如三平并殖吸虫、中华血吸虫等独立种的分类地位;而怡乐村并殖吸虫和佐渡并殖吸虫是大平并殖吸虫的同物异名吸虫。日本片形吸虫与大片形吸虫的cox1基因序列完全一致,这些日本片形吸虫应为大片形吸虫;大片形吸虫不同株虽然在cox1基因序列上无差异,但nad1基因却有8.3%变异性,这表明大片形吸虫不同株中可能存在隐蔽种。总之,线粒体基因组序列可为吸虫虫种与虫株的分类学地位的确定提供重要依据。同时,人们可根据线粒体基因组序列,通过PCR方法有效地对临床上易混淆的吸虫的种、株或群等作出确切的鉴别与诊断,从而为吸虫病流行病学调查和防治工作等提供重要参考依据。

    2011年06期 v.31;No.174 926-932页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K]
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  • WTO成员因霍乱引发的与水产品国际贸易有关的SPS特别贸易关注研究进展

    李海清;陈向前;陈焕春;

    <正>世界贸易组织(WTO)是多边经济体系的三个国际机构之一[1],WTO是以规则为基础的国际组织[2]。其中《实施卫生与植物卫生措施协定》(《SPS协定》)是《WTO协定》框架下的多边货物贸易协定之一。《SPS协定》旨在赋予各成员为保护人类、动

    2011年06期 v.31;No.174 933-936页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K]
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