预防兽医学

  • 猪圆环病毒2型原位杂交检测方法的建立

    刘雯;李勇;张宁;马丽敏;李琳;胡乐鹏;靳朝;夏志平;

    参照GenBank发表的PCV2ORF1基因序列设计了1对引物,利用PCR地高辛探针合成的方法制备了长度为494bp的特异性探针,经检验具有良好的特异性和敏感性,可检测最低质粒DNA质量浓度为0.972 8μg/L。用该探针建立了原位杂交组织切片检测方法,并用来检测PCV2感染猪的扁桃体和淋巴结组织,结果表明阳性信号主要存在于巨噬细胞胞浆中,信号强、背景良好,阴性对照无显色,说明该方法可作为PCV2实验室诊断和机理研究的一种有效检测方法。

    2012年01期 v.32;No.181 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 502K]
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  • 不同CSF免疫状态下猪PRRS易感性及IFN-γ分泌细胞应答

    白雪;付云云;单月;郭敏;郎广平;梅林;温涛;赵建增;梁志选;杨举;罗胜军;邢海云;高英杰;

    采用酶联免疫斑点检测技术(ELISpot)检测自然状态下猪外周血单核细胞(PBMC)中分泌IFN-γ的细胞数,并用带T细胞表位的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)特异性小分子多肽刺激培养的PBMC,观察IFN-γ的分泌变化。结果显示,猪瘟病毒(Classical fever virus,CSFV)抗体阳性组中感染PRRSV比率小于CSFV抗体阴性组。CSFV抗体阳性猪PBMC中IFN-γ分泌细胞数量均高于CS-FV抗体阴性组,CSFV抗体阴性且受PRRSV感染猪的PBMC对PRRSV多肽刺激不应答。结果表明,对CSFV疫苗应答好的猪对PRRSV感染有一定的抵抗,其细胞免疫处于活动状态,提示2种传染病的免疫应答机理有部分相关性。

    2012年01期 v.32;No.181 5-7+12页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K]
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  • PCV2ELISA诊断试剂盒稳定剂的筛选与应用

    董林;王金良;张春玲;沈志强;

    为进一步提高猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)间接ELISA诊断试剂稳定性,以纯化的PCV2重组Cap蛋白0.625mg/L包被酶标板,通过经验法和方阵法将甘油、蔗糖、PEG4000、海藻糖、明胶、EDTA等组成不同配比的抗原包被、酶结合物和标准对照品稳定剂,通过在4℃和37℃条件下试剂盒的稳定性试验,使用4P拟合曲线等分析其效果,以期筛选出最佳稳定剂配组。结果显示,1%蔗糖、20%甘油、0.000 5%MgCl2和1%蔗糖、0.2%BSA、1.0%海藻糖、0.1%PEG4000、0.02mol/L PMSF及0.1%明胶、0.1%EDTA、1%海藻糖、8%甘油、1.3%氯化钠分别为最佳抗原包被、酶标抗体和标准对照品的稳定剂。使用该稳定剂组装的PCV2ELISA试剂盒放置在4℃条件下8个月和37℃条件下8d,其D450值4P数据分析R2值均在0.99以上,说明配制的试剂盒稳定剂对ELISA试剂具有良好的保护作用,在4℃条件下有效期可达8个月。

    2012年01期 v.32;No.181 8-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 407K]
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  • 高效抑制O型口蹄疫病毒shRNA分子的筛选与验证

    马铈委;陈创夫;乔军;

    针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease veirus,FMDV)基因组高度保守的VP1和3D区段,选取了120个干扰靶位,根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒;通过细胞攻毒试验,提取细胞毒液RNA,然后RT-PCR,最后real-time PCR检测病毒和shRNA的表达量。结果显示,干扰质粒组基因表达抑制率为63%~96.8%,其中pSiRe-Zs-VP1-54和pSiRe-Zs-3D-12等2个表达质粒抑制效率最好,分别为96.8%和87%,表明这2个表达质粒能够明显抑制FMDV的复制。

    2012年01期 v.32;No.181 13-17+22页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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  • 基于山羊痘病毒P32蛋白间接ELISA方法的建立

    程振涛;岳筠;周碧君;许乐仁;王开功;文明;李永明;

    通过Ni柱亲和层析和G-100层析技术对真核表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE分析GPV P32蛋白纯化效果;应用琼脂扩散试验检测纯化蛋白的抗原反应性,并以纯化蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示,从真核表达产物中获得了纯化的GPV P32蛋白,琼脂扩散试验显示纯化的GPV P32蛋白具有良好的抗原反应性;基于纯化蛋白建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。结果表明,本试验建立的间接ELISA方法可用于山羊痘流行病学的调查和血清抗体水平的监测,为山羊痘的防控提供了有效技术。

    2012年01期 v.32;No.181 18-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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  • 禽偏肺病毒地高辛核酸探针的制备与应用

    陈琳;刁有祥;鞠小军;慕榕;郑新颖;刘霞;孙静;吴海洋;

    根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒F基因的保守序列设计并合成1对引物,利用RT-PCR扩增出1条与目的片段大小一致的725bp基因片段,回收、纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的aMPV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与aMPV核酸发生特异性杂交,而与H9N2亚型AIV、NDV、IBV、ORT和E.coil的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对aMPV的最低检出量为5pg。应用制备的探针对山东省不同地区的605份商品肉鸡和122份商品肉鸭进行了核酸探针检测,阳性检出率分别为36.59%和34.51%。本试验制备的aMPV地高辛探针特异性强、敏感性好,对样品的检测结果表明山东省部分地区的商品肉鸡、肉鸭中普遍存在aMPV感染。

    2012年01期 v.32;No.181 23-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K]
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  • 商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

    颜赟;刁有祥;孙杰;刘霞;吴焕荣;

    从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒(Marek′s disease virus,MDV)、网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheli-osis virus,REV)、鸡传染性贫血病病毒(Chicken anemia virus,CAV)和禽呼肠孤病毒(Avian reoviruses,ARV)检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69.30%、57.46%、63.60%和67.11%;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36.96%、43.48%和30.42%,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85.96%和43.46%。用X2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV+REV、REV+CAV的检出率和未检出的比例差异极显著(P<0.01);REV、MDV+CAV检出率差异显著(P<0.05)。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。

    2012年01期 v.32;No.181 28-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 291K]
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  • Ⅰ群禽腺病毒12个血清型毒株Hexon蛋白全基因序列测定和酶切位点分析

    李海英;尹燕博;徐守振;王建琳;王晓红;王守春;

    利用3对引物(A、B、C)分别进行Ⅰ群禽腺病毒的12个血清型毒株的Hexon全基因序列PCR扩增,并进行序列测定和PCR-RFLP分析,通过DNAStar软件和MEGA软件进行序列分析并绘制遗传发育进化树。结果显示,Hexon基因全长为2 800左右个核苷酸,编码约940个氨基酸,不同血清型之间的同源性为75.2%~99.5%,变异范围是0.0%~24.3%。推导的氨基酸同源性为20.7%~98.8%,差异性为0.0%~24.2%。12个血清型之间Hexon全基因序列信息用来评价Ⅰ群禽腺病毒家族的种系发育关系,构建的进化树显示出5个主要的分支。选用限制性内切酶HaeⅡ,利用存在差异的Hexon序列片段D特异性可以有效区分大部分血清型。结果表明,获得了Ⅰ群禽腺病毒12个血清型不同毒株的Hexon全基因序列并进行了分子进化分析,同时结合12个血清型PCR-RFLP分析,为进一步分析鉴别Ⅰ群禽腺病毒不同血清型提供依据。

    2012年01期 v.32;No.181 33-37+43页 [查看摘要][在线阅读][下载 639K]
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  • 副猪嗜血杆菌OmpA抗原表位预测、克隆及表达

    张东霞;罗永文;郭霄峰;

    运用生物信息学软件DNAStar对副猪嗜血杆菌S4型OmpA的二级结构、表面特性及抗原表位等进行分析,联合重组抗原表位基因片段,并对其进行密码子改造,人工合成改造后的基因片段。将其插入pET-32a构建重组表达载体pET-pA,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达、鉴定及纯化。结果显示,OmpA胞外段的抗原表位分布于40~61、94~108、138~148、193~214氨基酸残基。重组后的表位基因序列与理论设计序列完全一致,表达产物为28 000大小的融合蛋白且其能与兔抗Hps S4型多抗血清特异性地反应。融合蛋白经过柱纯化并经脱盐处理后质量浓度为4~40g/L。结果表明,成功构建表达OmpA多抗原表位的重组质粒pET-pA,并对融合蛋白进行分离纯化,为单克隆抗体的制备、检测方法的建立及疫苗的研制奠定了基础。

    2012年01期 v.32;No.181 38-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 397K]
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人兽共患病

  • 猪脑心肌炎病毒RT-LAMP检测方法的建立

    张岭岭;王金凤;李巍;李宁;孙继国;

    针对猪脑心炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)3D基因保守序列的6个特异性部位设计了2对引物,利用Bst DNA聚合酶,63℃恒温保持50min即可完成反转录与扩增反应,产物中加入SYBR GreenⅠ染料,在紫外光下可直接观察判定扩增结果,试验成功建立了猪EMCV的RT-LAMP检测方法。结果表明:该方法灵敏度比RT-PCR高100倍,具有良好的重复性和稳定性,而且对其他病毒均无扩增结果,可作为猪EMCV的快速诊断方法。

    2012年01期 v.32;No.181 44-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 199K]
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  • 3株嗜水气单胞菌弱毒株的毒力相关特性分析

    罗志飞;胡萌;陆承平;刘永杰;

    对健康鲫鱼和水体环境中分离的3株嗜水气单胞菌NJ-4、NJ-13和CS-13的毒力相关特性进行分析。采用PCR技术检测该菌5种主要毒力基因:气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、温敏胞外蛋白酶(eprCAI)和丝氨酸蛋白酶(ahp),并进行溶血性、溶蛋白性、细胞毒性、细胞黏附特性和主要外膜蛋白(MOMP)图谱分析,以及斑马鱼致病性试验。结果显示:NJ-4不含上述5种毒力基因,NJ-13只含有ahp基因,CS-13仅具备aer基因。3个菌株培养上清均不溶血、不溶蛋白;NJ-4和CS-13培养上清不能致细胞病变,NJ-13上清对细胞的毒力效价达1∶128;而强毒株BSK-10培养上清的溶血价、溶蛋白效价和细胞毒力效价分别为1∶128、1∶256和1∶256。NJ-4、NJ13和CS-13对HEp-2细胞有一定的黏附能力,但与强毒株BSK-10相比,黏附能力较弱。NJ-4、NJ-13和CS-13的培养液上清均不致斑马鱼死亡,菌体有一定致病作用,对斑马鱼的LD50超过108 CFU/mL;而BSK-10培养上清和菌体致病性均很强,菌体对斑马鱼的LD50小于105 CFU/mL。NJ-4、CS-13的MOMP条带与BSK-10相似度很高,而与NJ-13有一定差别,可能与菌株的来源有一定关系。结果表明,3株细菌均属弱毒株,特别是NJ-4的毒力最弱。

    2012年01期 v.32;No.181 48-51+57页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • 山羊免疫弓形虫代谢分泌抗原后的免疫应答

    芦赟;张燕丽;曹丽艳;王艳华;苟惠天;付宝权;李文卉;张德林;

    将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊外周全血及涂血片,IHA法检测抗体滴度的动态变化;ELISA法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的表达水平;ANAE染色法检测T淋巴细胞的动态变化。结果显示,免疫后各免疫组的IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4及T淋巴细胞水平显著高于对照组(P<0.05),各免疫组的抗体水平均高于对照组。结果表明,E/SA可引起IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、T淋巴细胞及抗体水平的升高,说明E/SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。

    2012年01期 v.32;No.181 52-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • 细粒棘球蚴SmadC蛋白及其MH2结构域酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定

    李静;张传山;吕国栋;王俊华;魏绪法;李朝旺;范金亮;林仁勇;剡根强;

    从重组克隆载体pMD18-T-egsmadC中扩增细粒棘球蚴egsmadC基因及其MH2编码序列,将其克隆入酵母双杂交载体pGADT7和pGBKT7中,经PCR、限制性酶切鉴定及序列测定正确后,PEG/LiAc法转化酵母菌株,测定融合蛋白对酵母菌生长的影响和自激活活性。结果表明,egsmadC基因及其MH2编码序列表达的蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性和自激活作用,可为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定基础。

    2012年01期 v.32;No.181 58-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K]
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基础兽医学

  • 健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺线粒体蛋白组差异表达分析

    王建锋;陶金忠;张勇;赵兴绪;

    运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,分离纯化亚细胞结构再进行蛋白质组学研究,可提高低丰度蛋白在双向凝胶电泳中的检出率。通过对比分析乳腺炎奶牛乳腺与正常奶牛乳腺线粒体蛋白质组的表达变化,为奶牛乳腺炎的生物学治疗及抗病育种工作筛选出目基因和蛋白。超速离心法分离线粒体,双向凝胶电泳分离蛋白,PDQuest7.4软件分析差异蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定差异蛋白。从奶牛乳腺线粒体蛋白2-DE图谱中筛选出17个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达蛋白(6个蛋白在奶牛乳腺炎发生过程中下调,8个上调,1个只在正常情况下表达,2个只在乳腺炎乳腺组织中表达)。筛选出的差异蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、mRNA的加工成熟及调亡调控等许多方面,表明奶牛乳腺炎发生时乳腺线粒体组织结构和代谢状态都发生了明显的变化。

    2012年01期 v.32;No.181 63-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
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  • 乙酸和β-羟丁酸对体外培养牛肝细胞脂代谢部分关键酶表达的影响

    白鸽;许远靖;王冲;孙勇;陈灰;李心慰;王振全;邓清华;王建国;刘国文;周昌芳;

    以体外原代培养的奶牛肝细胞为模型,添加不同浓度的乙酸(Acetic acid,AcOH)和β-羟丁酸(β-hydroxybu-tyrate,BHBA)共培养24h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法检测脂代谢关键酶长链脂酰辅酶A合成酶1(Long-chain acyl-CoA synthetase-1,ACSL1)、柠檬酸合成酶(Citrate synthase,CS)和乙酰辅酶A羧化酶α(Acetyl coenzyme A carboxylaseα,ACCα)mRNA丰度的变化。结果显示,适当浓度的AcOH能够促进肝细胞脂肪酸活化及氧化途径关键酶ACSL1和CS的转录,而高浓度AcOH能够抑制脂肪酸从头合成途径关键酶ACCα的转录;高浓度BHBA能够抑制肝细胞ACSL1、CS和ACCα的转录。结果表明,血液中适当浓度的AcOH能够促进肝脏脂肪酸氧化并抑制脂肪酸从头合成,高浓度BHBA能够抑制肝脏脂氧化和合成,影响乳脂前体物的供应,进而影响乳脂合成。

    2012年01期 v.32;No.181 69-72+88页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性

    闫若潜;马文涛;吴志明;王东方;李桂喜;刘梅芬;张盼盼;黄清;

    采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达;对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)进行纯化。分别检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应及促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活性。结果显示:成功构建了PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白相对分子质量约28 000,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别具有与单一重组PoIL-2、PoIL-6蛋白(rPoIL-2、rPoIL-6)对照相近的生物学活性,可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应,并可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖。结果表明,rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在体外具有单一rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性,这为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。

    2012年01期 v.32;No.181 73-78+82页 [查看摘要][在线阅读][下载 424K]
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  • 厚朴酚在体外对LPS诱导细胞因子释放及ERK通路激活的影响

    仲伟婷;霍美霞;郭维霄;陈娜;冯海华;

    利用MTT方法检测厚朴酚细胞毒性,ELISA方法检测厚朴酚对LPS介导炎症中IL-1、IL-6、IL-10释放的调节作用,Western-blot方法检测对ERK1/2活化的调节作用。结果显示,LPS处理过的RAW264.7细胞在经过不同剂量厚朴酚处理后,其IL-1、IL-6的释放随厚朴酚剂量的增加在减少,而IL-10则随药物剂量增加而增加;厚朴酚对LPS介导的ERK/MAPK通路激活作用显示一定的抑制作用。结果表明,在一定剂量范围内厚朴酚可以缓解LPS刺激的细胞因子的释放,在炎症过程中可以通过抑制ERK/MAPK活化来抑制炎症发生。

    2012年01期 v.32;No.181 79-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K]
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  • 利用基因芯片技术研究隐性白鸡不同时期肌肉组织相关差异表达基因

    栾德琴;常国斌;龚琳琳;周伟;陈丹艳;刘岩;王克华;窦套存;陈国宏;

    应用包含13 319条鸡基因探针序列的表达谱芯片,对从隐性白鸡不同时期肌肉组织抽提及纯化的cRNA进行芯片杂交,并对基因表达谱进行分析,旨在筛选隐性白鸡不同时期肌肉组织相关差异表达基因,探讨造成不同时期肌肉组织生长发育的分子生物学机理。结果显示,在不同生长时期(2周和12周)共筛选出差异表达基因78条(表达上调34条,表达下调44条),其中已知功能基因39条,主要涉及生长发育、分子代谢、免疫应答、生物合成、细胞通信以及蛋白质合成与分解等相关基因,其中包括一些尚未在GenBank上登陆的序列,推测可能是未知的新基因,它们在鸡生长发育、能量代谢等的过程所起到的作用还需进一步证明。

    2012年01期 v.32;No.181 83-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K]
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  • 5-甲基胞嘧啶到5-羟甲基胞嘧啶的转变过程参与小鼠雄原核的DNA主动去甲基化

    张鹏;王中伟;张胜;唐博;周好乐;李子义;

    利用5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC)特异性抗体对小鼠原核时期胚胎进行免疫荧光染色。同时使用荧光定量PCR方法检测Tet(Ten eleven translocation)基因在小鼠早期胚胎中的表达。免疫荧光染色结果显示早期原核阶段(PN1到PN3),雄原核中5mC的含量逐渐减少,而5hmC的含量逐渐增加。但是雌原核中5mC和5hmC的含量基本不变。在原核后期阶段(PN4到PN5)5hmC主要存在于雄原核中。荧光定量结果显示在小鼠MⅡ卵母细胞和植入前胚胎中Tet1和Tet2基因表达量较低,但是Tet3在卵母细胞和原核时期表达量较高,随着胚胎的发育其表达量逐渐降低。结果表明,在小鼠原核时期阶段5mC到5hmC的转变过程主要是由TET3蛋白催化的,并且此过程参与小鼠雄原核的DNA主动去甲基化。

    2012年01期 v.32;No.181 89-92+96页 [查看摘要][在线阅读][下载 335K]
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  • 大鼠丘脑氨基酸类神经递质与塞拉嗪麻醉相关性

    尹柏双;龚都强;马海昆;王洪斌;高利;

    将32只Wistar大鼠随机分成4组,分别为对照组、麻醉组、恢复Ⅰ组、恢复Ⅱ组。采用反向高效液相色谱法测定丘脑Glu、Asp、GABA和Gly的含量。结果显示,腹腔注射塞拉嗪40mg/kg后,麻醉组大鼠丘脑内GABA和Gly含量与对照组比较显著升高(P<0.01),Glu和Asp含量显著降低(P<0.05或P<0.01);恢复Ⅰ组丘脑Glu和Asp的含量与对照组比较差异显著(P<0.05);恢复Ⅱ组丘脑内GABA和Gly的含量与对照组比较差异显著(P<0.05),Glu和Asp的含量恢复显著(P>0.05)。结果表明,塞拉嗪作用下引起丘脑内GABA、Gly、Glu和Asp含量的变化可能与塞拉嗪引起麻醉作用机制相关。

    2012年01期 v.32;No.181 93-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 217K]
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  • IL-21及其受体在IBD大鼠结肠、大脑组织中的表达规律

    李苏楠;付守鹏;李洋;刘颖;杨占清;李志强;王玮;柳巨雄;

    从脑-肠互作的角度出发,研究IL-21及其受体在TNBS化学诱导的IBD模型大鼠的结肠、大脑组织中mR-NA表达水平以及血清蛋白水平变化,以此探讨IL-21在炎症性肠病中的调节作用。建立了大鼠IBD模型,用荧光定量PCR方法检测IL-21及其受体mRNA在结肠、大脑组织中的表达水平变化,并采用ELISA方法测定血清中IL-21在IBD大鼠不同发病时期的蛋白水平。结果显示:IL-21及其受体在IBD大鼠结肠和大脑组织中的mRNA水平的呈现一致变化,即随着炎症的加剧而逐渐增加,在病变最为严重的时候达到最大值,而随着炎症的消退逐渐恢复至正常水平。在血清中,IL-21蛋白浓度变化也表现出一致的变化趋势。结果表明,IL-21参与了肠道炎症进程,并且IL-21可能通过脑-肠互作来调节IBD的炎症进程。

    2012年01期 v.32;No.181 97-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 528K]
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  • let-7g对小鼠乳腺发育和泌乳相关功能基因Tgfbr1的作用及其机理

    冯丽;李庆章;崔巍;丁巍;

    运用生物信息学方法对let-7g进行靶基因预测,构建含有与其结合位点互补序列的荧光素酶报告质粒将其与phRL-TK及let-7g mimics或negative control共转染小鼠乳腺上皮细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定荧光素酶的表达;用let-7ginhibitor和let-7g mimics或negative control分别转染小鼠乳腺上皮细胞,并应用细胞活力分析技术、qRT-PCR技术、Western blotting、HPLC分析let-7g的表达变化及其对小鼠乳腺上皮细胞的影响。结果显示:经酶切及测序证实荧光素酶报告质粒构建成功;将荧光素酶报告基因、phRL-TK与let-7g mimics共转染小鼠乳腺上皮细胞,荧光素酶活性与对照组(即共转染荧光素酶报告基因、phRL-TK与Negative Control的小鼠乳腺上皮细胞组)相比显著降低(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组相比较,let-7g inhibitor转染后,TGFβRⅠ蛋白表达量显著增加(P<0.01),细胞活性显著增强(P<0.05),β-酪蛋白表达量增加(P>0.05),而let-7g mimics转染后,TGFβRⅠ蛋白表达量显著减少(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.05),β-酪蛋白表达量显著减少(P<0.05)。结果表明,在小鼠乳腺上皮细胞中,let-7g能够靶向结合Tgfbr1,且负调控其表达;let-7g可通过抑制靶蛋白TGFβRⅠ的表达,进而调控小鼠乳腺上皮细胞的增殖及β-酪蛋白的分泌。

    2012年01期 v.32;No.181 103-107+129页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K]
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  • 十大功劳对大肠杆菌耐药性的消除作用

    张秀英;高光;段文龙;赵晖;孙玉梅;赵富华;宋立;董建辉;万仁玲;

    取阔叶十大功劳叶和功劳木,分别用水提和醇提2种提取方式制得4种提取物,经高效液相色谱法分析,这些提取物中主要成分为小檗碱、药根碱、巴马汀等,对18株耐药大肠杆菌的抑菌活性很低,功劳叶水提物的最小抑菌浓度(MIC)范围为15.6~250g/L(生药),其余提取物的MIC均大于250g/L(生药)。在耐药菌的肉汤培养基中加入不同质量浓度的中药提取物进行传代培养,18株耐药菌有8株菌的MIC降低了8倍以上,耐药逆转率为44%。结果表明,十大功劳提取物能消除大肠杆菌的耐药性。

    2012年01期 v.32;No.181 108-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 105K]
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  • 枯草芽孢杆菌B10对饲喂高脂日粮小鼠抗氧化功能的影响

    文静;林志伟;周绪霞;吴红照;崔志文;李卫芬;

    将45只体质量(35±1)g的普通ICR小鼠随机分为对照组(基础日粮)、高脂组(高脂日粮)、处理组(添加0.1%芽孢杆菌B10的高脂日粮)。每组3个重复,每个重复5只。结果显示,高脂日粮组小鼠的试验末期体质量和平均日增重高于对照组和处理组。与对照组相比,高脂组小鼠肠黏膜总抗氧化能力显著降低了28.34%(P<0.01);肝脏中TrxR、SOD、GSH-Px和CAT活力分别降低了36.42%(P<0.05)、22.91%(P<0.05)、37.34%(P<0.01)和47.47%(P<0.01),血清中抗超氧阴离子、GSH含量、GSH-Px活性分别下降8.206%(P<0.05)、30.73%(P<0.05)、47.26%(P<0.01)。与高脂组相比,处理组肝脏的抗氧化能力显著改善,GSH-Px活力提高了141.35%(P<0.01),MDA含量降低了26.85%(P<0.01)。血清中总抗氧化能力、GSH含量、GSH-Px活力分别提高9.46%(P<0.05)、28.50%(P<0.05)、39.95%(P<0.01)。结果表明,枯草芽孢杆菌B10能够显著提高不同组织中部分抗氧化酶活力,缓解高脂日粮引起的小鼠氧化应激,在肝脏组织中尤为明显。

    2012年01期 v.32;No.181 111-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 115K]
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  • 人参皂苷Rh_2硫酸化衍生物抗炎作用的分子机制

    毕文岩;付本懂;宋舟;张翠;秦倩倩;吕爽;吴帅成;伊鹏霏;贺常亮;张长帅;申海清;韦旭斌;

    通过构建的细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的体外炎症模型,研究了不同质量浓度人参皂苷Rh2硫酸化衍生物B2(Rh2-B2)对TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10合成的影响,以及对NF-κB信号通路的影响。结果显示,1mg/L和5mg/L的人参皂苷Rh2-B2能显著抑制RAW264.7合成TNF-α、IL-6和IL-1β(P<0.01),同时显著促进IL-10的合成(P<0.01),并且通过显著抑制IκBα的降解而阻止NF-κB/p65易位入核(P<0.01)。结果表明,人参皂苷Rh2-B2可能通过阻断NF-κB信号通路,抑制LPS诱导的炎性细胞因子的产生,进而发挥其抗炎作用。

    2012年01期 v.32;No.181 115-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 430K]
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临床兽医学

  • 亚慢性铝暴露对大鼠肾脏功能的影响

    邵冰;孙浩;胡崇伟;朱言柱;赵汉嵩;李艳飞;

    选用40只4周龄清洁级Wistar大鼠预饲1周后随机均分为4组,即对照组(C组)、低剂量组(L组)、中剂量组(M组)和高剂量组(H组)。分别于饮水中添加0,64.18,128.36,256.72mg/kg的AlCl3,建立亚慢性铝暴露大鼠模型。于试验120d处死大鼠,全自动生化分析仪检测血清中尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)以及尿液中肌酐(Cr)、尿总蛋白(TP)含量,并计算24h肌酐清除率。结果显示:染铝大鼠血清BUN和UA水平高于C组,且随染铝剂量增加呈升高趋势,但无统计学意义;24h肌酐清除率低于C组,TP含量高于C组(P<0.05,P<0.01),且存在剂量-效应关系。结果说明,亚慢性铝暴露可致大鼠早期肾功能损伤。

    2012年01期 v.32;No.181 120-121+150页 [查看摘要][在线阅读][下载 105K]
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  • 氯化汞对SD大鼠脑组织氧化损伤的影响

    路浩;张浩;赵宝玉;韦冬梅;宋岩岩;

    24只SD大鼠被随机均分为4组,即C组为对照组(饮用蒸馏水),L组为汞低剂量组(50mg/L),M组为汞中剂量组(100mg/L),H组为汞高剂量组(200mg/L),采用自由饮水染毒,染毒时间为21d。采用半自动生化分析仪测定汞对SD大鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示,与对照组比较,各染毒组GSH-Px、SOD和CAT活性及T-AOC均呈下降趋势,部分参数差异显著(P<0.05),而MDA含量则显著升高(P<0.05)。结果表明,低剂量汞暴露对SD大鼠脑组织主要抗氧化酶活性有明显抑制作用,显著降低动物机体的抗氧化能力。

    2012年01期 v.32;No.181 122-124页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K]
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  • 棉酚对雄性小鼠增重及肾脏组织的影响

    闻正顺;潘晓亮;邹晓庭;寇唤起;许梓荣;

    选择体质量为(24.69±1.01)g的雄性昆明小鼠90只,随机分为5组。对照组为不含棉酚的全价饲料组,试验组日粮中添加不同质量浓度的提取棉酚,试验Ⅰ~Ⅳ组添加量分别为每天40、80、120、160mg/kg。结果显示,试验6周结束后,试验小鼠体质量随日龄增加而相应上升,各组之间差异不显著。但试验Ⅱ组到试验后期体质量开始下降。试验组小鼠在饲喂棉酚2周后出现较明显的生理反应:拉稀、活动减少、被毛松散无光泽;试验结束,试验Ⅲ组小鼠解剖肾脏有出血点、质地变脆。试验Ⅳ组小鼠两侧肠膜变黄,腹膜变薄,胃肠蠕动较慢,肾脏有出血点现象。各组在第2周和试验结束后分别取样,发现试验组小鼠肾脏出现不同程度的病变。试验Ⅱ组小鼠肾脏病变较轻微,可试验Ⅲ组小鼠肾脏有不同程度的肾间质出血和肾小管上皮细胞颗粒变性坏死;试验Ⅳ组小鼠肾梗死、肾小球毛细血管扩张,充血,出血。结果表明:棉酚对小鼠的体增重有一定的抑制作用,但对肾脏的生理和病理损伤较大。

    2012年01期 v.32;No.181 125-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 389K]
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  • 日粮添加黄芪多糖对蛋鸡机体抗氧化能力和鸡蛋品质的影响

    左兆云;杨维仁;杨在宾;姜淑贞;张桂国;赵旭;

    选用540只27周龄海兰褐蛋鸡,随机分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复27只鸡。采用单因素完全随机分组设计,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂在基础日粮中分别添加100、200、300mg/kg黄芪多糖的日粮,试验期为70d,探讨日粮中添加不同水平的黄芪多糖对蛋鸡机体抗氧化能力和鸡蛋品质的影响。结果显示:黄芪多糖能不同程度地提高(P<0.05)血清和蛋黄SOD、血清GSH-Px和T-AOC活性,显著降低(P<0.05)血清和蛋黄MDA含量、蛋黄胆固醇质量浓度。随着受试时间的延长,各组内血清SOD活性显著升高(P<0.05),血清MDA含量和T-AOC活性显著降低(P<0.05);对照组的蛋黄MDA含量显著升高(P<0.05),而血清GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结果表明,黄芪多糖能改善蛋鸡机体及其产品抗氧化能力,对蛋黄胆固醇质量浓度有降低作用。

    2012年01期 v.32;No.181 130-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K]
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  • 蛋用鸡连续饲喂低蛋白低有效磷饲粮的安全性和添加植酸酶效果的评价

    李蕴玉;冯敏山;李素芬;李佩国;牛一兵;高山林;宋金昌;

    对蛋用鸡连续饲喂低蛋白低有效磷饲粮的安全性及添加植酸酶的效果进行了探讨。结果表明,2~36周龄蛋用鸡在2~8、9~15、16~18和19~36周龄连续饲喂粗蛋白为17.0%、13.5%、13.0%、15.0%和有效磷为0.35%、0.3%、0.3%、0.3%的低蛋白中磷饲粮,除蛋重降低外,其他生产性能指标与粗蛋白为19.0%、15.0%、14.5%、16.5%和有效磷为0.45%、0.4%、0.4%、0.4%的高蛋白高磷饲粮无显著差异,并使8、15、36周龄鸡的氮、磷排泄量分别减少9.50%(P<0.01)、18.81%(P<0.01)、13.42(P<0.05)和15.93%(P<0.01)、16.18%(P<0.01)、19.21%(P<0.01)。连续饲喂粗蛋白为17.0%、13.5%、13.0%、15.0%和有效磷为0.25%、0.2%、0.2%、0.2%的低蛋白低磷饲粮,可显著降低2~18周龄生长鸡平均日增重和饲料利用率,但添加300IU/kg植酸酶后可达到高蛋白高磷的饲养效果,并使8、15、36周龄鸡的总磷和粗蛋白表观利用率分别提高12.55%(P>0.05)、7.24%(P>0.05)、32.66%(P<0.01)和26.23%(P>0.05)、15.70%(P<0.01)、7.77%(P<0.05),而氮、磷排泄分别减少17.70%(P<0.01)、25.19%(P<0.01)、17.63(P<0.05)和37.41%(P<0.01)、36.71%(P<0.01)、43.17%(P<0.01)。

    2012年01期 v.32;No.181 135-139+160页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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动物科学

  • 鉴定牛体外培养胚胎性别的一种新PCR方法及其应用

    刘卓;李纯锦;李万宏;陆晨;侯晓峰;周虚;

    根据已知序列设计了2对引物,分别在体外扩增SRY基因及1个常染色体基因,能同时扩增出2个基因的胚胎为雄性,只能扩增出常染色体基因的胚胎为雌性。通过该方法对50个卵母细胞进行PCR验证,有49个扩增出1条常染色体基因,准确率为98%;鉴定了48枚用普通精液受精所得胚胎及57枚用经SRY抗体处理的精液受精所得胚胎的性别,雌性比例分别为56%和82%。

    2012年01期 v.32;No.181 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K]
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  • 牛输卵管上皮细胞转人胶原蛋白cDNA基因及转基因克隆胚胎

    吕自力;王亮;刘婷婷;石国庆;

    以2岁奶牛输卵管为材料,用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM/F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞,对其进行了电穿孔转染,转染对象是分子大小为31 085bp的以β-casein启动子为基础的含有人胶原蛋白cDNA基因和EGFP、Neor双标记基因的质粒。电穿孔试验发现,牛输卵管上皮细胞在低渗缓冲液中电转染可以获得阳性转染子,其中以90mOsm/kg为最佳。电压以800V为好,电压高和低都不利于电穿孔的成功。成功转染的细胞用800mg/L G418进行筛选,在10d后获得了较大的阳性细胞克隆簇。对获得的阳性细胞克隆簇进行扩大后,得到了较纯的阳性细胞克隆系,流式细胞仪检测其纯度为81.6%。在荧光显微镜下选择阳性细胞作为核移植供体细胞进行了转基因克隆试验,结果显示以转基因和非转基因细胞为核供体获得的重构胚融合率差异显著(51.9%比63.2%),获得的桑椹胚/囊胚率差异不显著(20.3%比25.5%)。对获得的具有绿色荧光的胚胎进行DNA分析,结果显示这些胚胎成功转入了外源基因,并且转入的外源基因结构完整。

    2012年01期 v.32;No.181 144-150页 [查看摘要][在线阅读][下载 299K]
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  • 绵羊发情周期中VEGF在卵巢中的表达

    王典;陈洋;杨雨江;姜怀志;

    应用免疫组化方法结合计算机图像分析技术,分析同期发情后0、5、9、12、15d的绵羊卵巢中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达强度变化,以期了解VEGF在绵羊卵巢发情周期不同时期的表达规律。结果显示:VEGF阳性目标主要出现于卵泡膜与颗粒细胞。原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡VEGF表达依次增强(P<0.05)。发情周期0~5d,大窦腔卵泡(颗粒细胞4~8层)VEGF表达量骤然上升(P<0.05),而9d开始显著下降,与5d比较差异显著(P<0.05)。12d继续下降(P<0.05)且为最低值,15d又明显上升(P<0.05)。VEGF在卵巢间质呈弱表达,各个时期之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,绵羊卵巢存在着血管周期性新生的变化特点,而VEGF在这种周期性血管新生过程中起着重要的调控作用。

    2012年01期 v.32;No.181 151-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 875K]
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  • 日粮能量对乌鸡外周血清促性腺激素与垂体分泌促性腺激素的影响

    刘立文;周虚;王国华;高志华;管丽辉;穆秀明;

    采用体外细胞培养和放射免疫测定法(RIA)测定日粮能量对乌鸡外周血清促性腺激素与垂体分泌促性腺激素的影响。日粮能量处理:低能Ⅱ组、低能Ⅰ组、对照组、高能Ⅰ组、高能Ⅱ组;体外培养垂体细胞组分:高能组、对照组、低能组。结果显示,血清中FSH含量,对照组与高能Ⅱ组相比差异显著(P<0.05),与低能Ⅰ、Ⅱ组相比差异极显著(P<0.01);血清中LH含量,对照组与高能Ⅰ组、高能Ⅱ组组间差异显著(P<0.05);低能Ⅱ组与高能Ⅰ组、低能Ⅱ组与高能Ⅱ组、低能Ⅰ组与高能Ⅰ组、低能Ⅰ组与高能Ⅱ组组间差异极显著(P<0.01);单层垂体细胞中FSH含量,高能组和对照组与低能组比差异显著(P<0.05);单层垂体细胞中LH含量,高能组与低能组比较差异极显著(P<0.01),对照组与低能组比较差异不显著。结果表明,日粮能量对处理体外培养乌鸡垂体细胞分泌FSH、LH有促进作用。

    2012年01期 v.32;No.181 157-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 116K]
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