预防兽医学

  • 免疫鸭体内副黏病毒的分离及其F基因的分子特征

    杨建朋;毕振威;欧阳伟;王永山;刁有祥;

    为分析当地鸭副黏病毒流行状况及其融合蛋白(F)基因的序列特征,从江苏省某新城疫疫苗免疫过的鸭群中分离到1株病毒,经血清学试验和中和试验鉴定为鸭副黏病毒,命名为JS0920株。生物学特性分析,9日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5.3;9日龄SPF鸡胚的最小致死量平均死亡时间(MDT)为47.7h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.875,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)测定为2.7。用该病毒的培养物(鸡胚尿囊液)经肌肉注射攻毒,鸭的发病率为70%,死亡率为40%;鸡的发病率和死亡率均为100%。用RT-PCR方法扩增该分离毒株的F基因,序列分析表明,JS0920株与标准强毒株F48E9的核苷酸序列和氨基酸序列同源性最高,分别为99.2%和99.5%,与免疫预防用的LaSota株的同源性分别为89.0%和92.2%;其多肽裂解位点为112R-R-Q-R-R-F117,具有高致病性鸭副黏病毒毒株的分子特征;系统发育进化树分析,JS0920株与LaSota株的基因型不同,JS0920株为基因IX型,与F48E9株的亲缘关系最近。试验结果对认识当前DPMV的流行和变异现状以及疫苗研制具有重要的参考价值。

    2013年04期 v.33;No.196 493-499页 [查看摘要][在线阅读][下载 744K]
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  • H9N2亚型禽流感病毒对鸡输卵管致病性的研究

    王晶钰;李成山;陈婷;王利勤;董睿;张渭东;

    为了研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)对鸡输卵管的致病性,本研究首先采用凝集素亲和组化染色法检验了流感病毒受体SAα-2,3Gal在鸡输卵管上的分布;然后用H9N2AIV人工感染产蛋母鸡,制作输卵管的病理组织切片观察其病理变化;最后,采用胶原酶I灌注消化法培养鸡输卵管膨大部的原代上皮细胞,接毒H9N2AIV后观察细胞病变。试验结果表明,鸡输卵管除漏斗部没发现SAα-2,3Gal受体,其余部分均呈强阳性分布;攻毒后病理组织切片观察,输卵管膨大部上皮细胞绒毛脱落,部分细胞坏死、脱落,组织间隙变大,子宫内部组织内部充血出血,其他部分变化不明显;原代细胞接毒72h后,细胞病变不明显,但是上清中HA滴度可以达到3log2。从以上三方面可以看出,鸡输卵管上皮细胞膜上存在禽流感病毒受体,H9N2AIV可以引起侵害鸡输卵管,并引起部分输卵管病变,而且H9N2AIV可以感染鸡输卵管膨大部原代上皮细胞,H9N2AIV有可能通过输卵管感染母鸡。

    2013年04期 v.33;No.196 500-503页 [查看摘要][在线阅读][下载 1154K]
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  • 感染禽流感病毒SPF鸡与SPF鸡心脏和肺脏全基因组DNA甲基化差异分析

    孟纪伦;杨润军;张金玉;宿甲子;郭将;刘一诺;关云涛;李雁冰;赵志辉;

    为研究禽流感病毒感染对宿主全基因组甲基化的影响,本试验使用荧光甲基化敏感扩增片段多态性方法(fluo-rescent labeled methylation sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)检测了SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管上段、气管下段、胸腺、法氏囊9个不同组织,和感染A/Goose/Guangdong/1/96,H5N1,A/Duck/Anhui/1/2006(安徽),H5N1 2株禽流感病毒SPF鸡心脏和肺脏2种组织全基因组甲基化在CCGG位点的CC碱基对甲基化状态,并分别对比了2组感染试验组与SPF对照组全基因组甲基化差异。结果显示,SPF对照组的甲基化程度,9种组织的总甲基化比率均在53%左右,其中气管上段最低(50.00%),肝脏最高(57.33%)。在心脏中,2个感染组样品内甲基化比率、外甲基化比率和总甲基化比率均高于SPF鸡对照组;而在肺脏中,广东株感染组各甲基化比率均低于对照组,安徽株感染组均高于对照组。本研究初步揭示了禽流感病毒感染过程中H5N1对宿主(鸡)不同组织全基因组甲基化水平的影响,为后续家禽抗病性状的分子机制研究提供了理论依据。

    2013年04期 v.33;No.196 504-510页 [查看摘要][在线阅读][下载 699K]
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  • 禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立

    张淑霞;郝华芳;杨涛;杨增岐;王兴龙;杜恩岐;党如意;

    对AEV陕西分离株VP1基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为50 000的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被质量浓度3.8mg/L,37℃2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2h,待检血清1∶50稀释37℃孵育0.5h,酶标抗体1∶4 000稀释,37℃作用30min,底物37℃显色5min,临界值为0.360;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与美国IDEXX公司AEV抗体检测试剂盒检测结果符合率为91.9%。该方法可用于临床样品的大批量检测。

    2013年04期 v.33;No.196 511-515页 [查看摘要][在线阅读][下载 553K]
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  • 环介导等温扩增(LAMP)检测禽脑脊髓炎病毒方法的建立

    谢志勤;谢芝勋;邓显文;谢丽基;庞耀珊;刘加波;范晴;

    根据已发表的禽脑脊髓炎病毒的VP2基因序列,设计并合成了6对特异扩增禽脑脊髓炎病毒VP2基因片段的引物,通过条件优化,成功建立了针对禽脑脊髓炎病毒的环介导等温扩增(LAMP)检测法,并测定其特异性和敏感性,对采集的禽临床样品的核酸分别进行了检测。结果表明,该法只检出禽脑脊髓炎病毒。敏感性扩增结果表明,Lamp检测禽脑脊髓炎病毒为100fg的RNA模板。该LAMP方法有简便、快速和特异性高的优点,可用于临床上对禽脑脊髓炎病毒的快速检测。

    2013年04期 v.33;No.196 516-519+537页 [查看摘要][在线阅读][下载 767K]
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  • 鸭瘟病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用

    张坤;刁有祥;鞠小军;

    为建立一种简便、快速、灵敏、特异的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的DPV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,经优化反应体系,建立了LAMP快速检测方法。结果表明,LAMP方法能够在63℃恒温下,1h内实现目的核酸的大量扩增。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBRGreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法敏感性可达0.245μg/L,比普通PCR灵敏性高10倍;对鸭病毒性肝炎病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭副黏病毒、鸭源偏肺病毒等的核酸无交叉反应;利用建立的LAMP检测方法对40份临床样品的阳性检出率为30%。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测DPV的方法。

    2013年04期 v.33;No.196 520-525页 [查看摘要][在线阅读][下载 901K]
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  • 猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立

    赵传博;王丽;董波;陆慧君;赵魁;贺文琦;高丰;

    采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定。用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1∶2 000稀释,单抗1∶4 000稀释,酶标抗体为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75mg/L。与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致。上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础。

    2013年04期 v.33;No.196 526-531页 [查看摘要][在线阅读][下载 640K]
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  • PCV2 ORF2基因与猪IL-18基因共表达DNA疫苗的免疫原性

    王子馨;李坤;刘金朋;崔保安;王淑娟;朱前磊;陈红英;

    为研制新型的PCV2基因疫苗,本研究将PCV2ORF2和猪IL-18基因插入真核表达质粒pIRES中,构建共表达capsid(Cap)蛋白和猪IL-18的质粒pIRES-OFR2/IL18和表达Cap蛋白的质粒pIRES-OFR2。将质粒pIRES-OFR2/IL18和pIRES-OFR2通过腿部肌肉多点注射8周龄昆明小鼠,间隔3周再免疫1次。加强免疫3周后用PCV2Wuzhi株进行攻毒。pIRES-OFR2/IL18免疫昆明小鼠后能促进外周血T淋巴细胞增殖和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强PCV2DNA疫苗对强毒的攻击保护,pIRES-ORF2/IL18免疫组要优于pIRES-ORF2免疫组及其它对照组,差异显著。表明猪IL-18基因与PCV2ORF2共表达可增强猪体对DNA疫苗的免疫应答,提高对PCV2强毒的抵抗力。

    2013年04期 v.33;No.196 532-537页 [查看摘要][在线阅读][下载 812K]
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  • 猪圆环病毒2型SD/2008株对仔猪的致病性

    杨芳;陈立功;李艳琴;宋勤叶;赵丹萍;李潭清;

    为了明确PCV2-SD/2008株对猪的致病性,将12头5周龄健康断奶仔猪随机分为PCV2组和对照组,每组6头。PCV2组经口鼻途径接种PCV2SD/2008株第3代细胞毒(105.61 TCID50/0.1mL),3mL/头,对照组经相同途径接种3mL细胞维持液。PCV2组中的1头猪从感染后14d开始出现间断腹泻,一直到持续到试验结束。感染后第4、5周,感染组的周平均增重显著低于对照组(P<0.05)。病理组织学检查可见PCV2感染猪的淋巴结和脾脏内淋巴细胞缺失、单核/巨噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润;间质性肺炎、坏死性肝炎和肾炎、小血管炎症等变化,并且感染后35d比感染后14d的病理变化更加严重。应用免疫组化方法在感染猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结、小肠等多种组织中检测到了PCV2抗原,其中颌下淋巴结、肺、小肠中的阳性信号数与检出率最高。结果表明,PCV2SD/2008株对仔猪具有明显的致病性。

    2013年04期 v.33;No.196 538-544+565页 [查看摘要][在线阅读][下载 1949K]
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  • RHDV VP60“通用型”T细胞表位预测

    金明兰;侯继波;郑其升;鲁会军;韩松;南文龙;任静强;刘春霞;金宁一;

    兔病毒性出血症核衣壳蛋白VP60是兔出血症病毒的主要结构蛋白,具有很强的抗原性和免疫原性,可诱导细胞免疫,在抗病毒免疫中起着关键作用。确定T细胞所识别抗原分子上的短肽序列对T细胞表位进行定位,对于研究特异性免疫应答有着重要意义。本研究应用T细胞抗原表位分析的研究方法,预测VP60T细胞蛋白质抗原表位,为后期试验奠定了基础。

    2013年04期 v.33;No.196 545-554页 [查看摘要][在线阅读][下载 4201K]
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  • 苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊的工艺研究

    倪敬轩;孙晓磊;杨英;

    以抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异的猪源唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、两歧双歧杆菌(Bifidobac-terium bifidum)为益生菌和苦豆籽粕为益生素,通过海藻酸钠-壳聚糖包被技术将益生菌和益生素做成1个微胶囊整体。工艺1和工艺3制作的产品活菌数分别达到1.1×109和5.2×107 CFU/g,人工胃液和人工肠液处理后的活菌数分别为2.5×108和1.9×107 CFU/g,常温保存90d后活菌数分别为3.7×107和1.2×106 CFU/g。该结果为防治仔猪早期断奶腹泻、仔猪黄白痢的生产应用提供了科学依据。

    2013年04期 v.33;No.196 555-560页 [查看摘要][在线阅读][下载 1448K]
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简讯

人兽共患病

  • 口蹄疫油乳剂疫苗中添加人参茎叶皂甙对免疫效果和黏滞性的影响

    李禹涛;燕霞;谢锋;胡松华;

    将人参茎叶皂甙(GSLS)和油佐剂混合,然后再与口蹄疫病毒(FMDV)抗原乳化制成口蹄疫疫苗。将FMD疫苗皮下二次免疫小鼠后,检测血清特异性IgG水平、脾脏淋巴细胞增殖指数(SI),脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4mRNA表达水平,并测定GSLS对疫苗黏滞性的影响。结果表明,用200μL的FMD疫苗免疫小鼠,显著促进小鼠产生以4μg组产生最高水平的IgG(P<0.05);与对照组比较,添加GSLS后脾淋巴细胞对ConA和LPS增殖指数,IFN-γ和IL-4mRNA表达也显著增高(P<0.05);吐温浓度为1.0%和1.5%时,添加GSLS能显著降低疫苗的黏滞性(P<0.05)。因此,在FMD疫苗中添加GSLS能提高机体的体液免疫和细胞免疫应答,降低疫苗黏滞性。

    2013年04期 v.33;No.196 561-565页 [查看摘要][在线阅读][下载 766K]
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  • 狂犬病弱毒SRV9对街毒暴露小鼠的治疗效果

    黄飞;李莹莹;李芸;段铭;关振宏;张茂林;

    为评估狂犬病弱毒SRV9对狂犬病街毒暴露小鼠的治疗效果,首先将SRV9通过脑内和肌肉接种3周龄ICR小鼠检测其安全性,然后应用狂犬病街毒接种小鼠,随后在暴露后不同时间用SRV9治疗,研究其保护率。结果显示,SRV9对3周龄ICR小鼠安全,在街毒暴露后1、2、3d,SRV9的保护率分别为70%、60%、30%,而相同暴露时间下单剂量灭活疫苗联合免疫球蛋白的保护率分别是30%、20%、10%。对应用SRV9治疗而成活小鼠的中和抗体检测,发现所有小鼠的抗体水平均达到0.5IU以上,这些数据初步显示活弱毒SRV9具有用于暴露后治疗的潜力。

    2013年04期 v.33;No.196 566-570页 [查看摘要][在线阅读][下载 1113K]
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  • SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性

    吴立志;伍晓雄;张松林;刘磊;肖跃强;夏小静;沈志强;

    运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数,预测MRP的B细胞优势表位簇;PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1),构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1,IPTG诱导表达,以渗透性休克法纯化重组蛋白;使用重组蛋白免疫血清和灭活猪链球菌2型SS2免疫血清Western blotting检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性;纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠,SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力。Western blotting显示预测的950~1 210aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性;攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7%。研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础。

    2013年04期 v.33;No.196 571-575+580页 [查看摘要][在线阅读][下载 1120K]
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  • 布鲁杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

    李秀梅;郭恋;郭立力;李颖;石瑜;杨爱华;王健春;王红军;

    研究针对布鲁杆菌保守的OMP25基因设计了4条LAMP的特异性引物,通过优化反应条件,建立了布鲁杆菌的LAMP快速检测方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测布鲁杆菌,其最低检测限为5cop-ies/μL。扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳、显色反应进行判定。LAMP可以快速、直观、准确地检测布鲁杆菌,是一种适合基层现场应用的检测方法。

    2013年04期 v.33;No.196 576-580页 [查看摘要][在线阅读][下载 896K]
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  • 合肥地区动物源致病性大肠杆菌ESBLs和PMQR基因流行分布

    王彬婷;夏菁;黄运芳;任思琪;李琳;

    从安徽省合肥地区多个养殖厂分离鉴定了65株致病性大肠杆菌,用PCR方法检测ESBLs和PMQR基因的流行分布情况,用微量肉汤稀释法测定30株ESBLs和/或PMQR阳性菌对16种抗菌药物的最小抑菌浓度。PCR结果显示:ESBLs阳性率为24.6%(16/65),分别为blaOXA(16株)、blaTEM(15株)和blaCTX-M(14株),未检出blaSHV;PMQR的阳性率为46.2%(30/65),分别为qnrA(9株)、qnrS(18株)、aac(6′)-Ib-cr(28株),未检出qnrB、qnrC、qnrD和qepA;且携带ESBLs基因的阳性菌株均携带PMQR基因。首次检测出有7株大肠杆菌同时携带ES-BLs基因型(blaOXA、blaTEM、blaCTX-M)和PMQR基因型(qnrA、qnrS、aac(6′)-Ib-cr)。药物敏感性测定结果显示:30株携带ESBLs和/或PMQR基因的阳性大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为16.7%~100%,耐药谱较广,耐药性较严重。16株同时携带ESBLs和PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占87.5%,14株仅携带PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占28.5%,表明携带PMQR基因的同时携带ESBLs基因大大增强了菌株的耐药性,携带耐药基因的数量和种类与菌株的多重耐药性相关。

    2013年04期 v.33;No.196 581-585页 [查看摘要][在线阅读][下载 666K]
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基础兽医学

  • 小鼠IGFBP-6基因shRNA的设计与筛选

    房希碧;田来明;郝林琳;官员;马强;张英;张永亮;刘松财;

    胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)是胰岛素样生长因子结合蛋白家族(IGFBPs)的一员,IGFBP-6不同于IGFBP1-5,其与IGF-2的亲和力显著的优先于IGF-1,受到研究者的广泛关注。本研究在小鼠IGFBP-6基因mR-NA的806、760和908bp处找到潜在靶位点,设计3条shRNA干扰载体,并合成DNA Oligo,体外退火成双链DNA,插入pGU6/GFP/Neo载体,获得3条针对目的基因不同靶序列的干扰载体,瞬时转染NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞48h后,利用流式细胞技术分选收集转染重组载体的细胞,提取细胞总RNA和蛋白质,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法分别检测目的基因mRNA水平,蛋白水平对IGFBP-6的表达。结果表明,IGFBP-6(IGFBP-6,806-826)表现出了最高的干扰效率,转染效率为(79.2±2.3)%时,mRNA水平的沉默效率达(68.9±12.2)%,(P<0.05);蛋白质水平的沉默效率达(46.7±11.3)%,(P<0.05)。本试验为研究IGFBP-6基因对细胞增殖的作用和体内生物学功能奠定了基础。

    2013年04期 v.33;No.196 586-591页 [查看摘要][在线阅读][下载 1124K]
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  • 脂质体转染胚盘细胞将外源质粒pEGFP-C2导入鹌鹑胚的研究

    李艳;李洪涛;段丹丹;赵宗胜;

    运用脂质体转染第X期胚盘细胞的方法将外源质粒pEGFP-C2经脂质体包裹后注射到鹌鹑种蛋X期胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化6d的鹌鹑胚基因组DNA,进行PCR检测,嵌合体阳性率为84%,证实外源基因在胚胎中的表达。对孵化至出壳的G0代鹌鹑组织进行DNA提取并PCR分析,以及组织切片荧光检测,证实外源基因在G0代鹌鹑组织中成功表达。结果表明脂质体转染胚盘细胞是一种制备转基因鹌鹑行之有效的方法。

    2013年04期 v.33;No.196 592-596页 [查看摘要][在线阅读][下载 1077K]
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  • 鹿角盘不同提取部位对环磷酰胺致小鼠骨质疏松的防治作用

    曹胜男;包海鹰;张媛;李欣;

    建立了环磷酰胺所致小鼠骨质疏松模型,利用空白对照组和葡萄糖酸钙阳性组做对比,以小鼠免疫器官脏器指数、股骨计量学、骨钙、磷、镁、骨羟脯氨酸含量为指标观察鹿角盘提取物对小鼠免疫功能、骨量的影响。结果:20mg/(kg.d)环磷酰胺可引起小鼠胸腺指数下降(P<0.01),股骨干重、股骨横径减少(P<0.01),股骨长减少(P<0.05),骨钙、羟脯氨酸含量同时下降(P<0.01),引起小鼠骨丢失;鹿角盘水提物和70%乙醇提取物均可增加小鼠股骨的干重和骨钙的含量,水提物高剂量组和70%乙醇提取物高低、高剂量组使骨羟脯氨酸含量显著提高。结果表明鹿角盘对以低转换型骨丢失为特征的骨质疏松具有一定的预防作用。

    2013年04期 v.33;No.196 597-599页 [查看摘要][在线阅读][下载 579K]
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  • 丙戊酸钠促进猪再克隆胚胎体外发育

    孙羽;王安峰;韩杨;陈仙菊;张明军;

    对VPA处理的最佳处理时间和处理浓度进行探索,希望通过VPA处理来改善再克隆胚胎的发育能力。结果表明,使用1mmol/L VPA处理16h,可以获得较高的囊胚形成率。然后通过免疫荧光检测发现,囊胚时期acH3K9的乙酰化水平在处理组中高于非处理组。多能性因子Oct4、Nanog、Sox2和Klf4的实时定量检测结果则显示,它们之间的表达水平同样差异不显著。结果表明VPA能够显著提高猪再克隆胚胎体内发育能力。

    2013年04期 v.33;No.196 600-603页 [查看摘要][在线阅读][下载 806K]
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临床兽医学

  • 肉牛亚急性瘤胃酸中毒血液学及生化指标变化分析

    赵晨旭;王晓旭;孙国权;张良;陈灰;杨文涛;刘兆喜;王哲;刘国文;

    为了解肉牛发生亚急性瘤胃酸中毒时血液学和相应生化指标的变化,对瘤胃液pH在5.2~5.5、5.6~5.8和5.9~6.8之间的24头肉牛进行了血液学及相应生化指标的分析。结果表明:随着pH值的降低,血液中红细胞(RBC)数量、血红蛋白(Hb)浓度、红细胞压积(PCV)均显著增加;白细胞(WBC)总数上升,白细胞分类(WBC-DC)也有相应的变化,嗜酸性粒细胞和淋巴细胞呈下降趋势,中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞呈上升趋势,单核细胞略微升高;血气指标pO2显著增加,pCO2、HCO3-浓度显著减少;生化指标Ca2+、Cl-显著减少,Na+和尿素氮显著增加,K+差异不显著。肉牛发生轻度和中度亚急性瘤胃酸中毒时,pCO2以及HCO3-含量显著降低,表明机体碱储备不足,缓冲能力下降,存在代偿性酸中毒;同时根据水合状态和血象指标,表明亚急性瘤胃酸中毒病牛存在轻度脱水和炎性反应。

    2013年04期 v.33;No.196 604-607页 [查看摘要][在线阅读][下载 663K]
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  • 糊化淀粉尿素对奶牛生产性能和氮利用率的影响

    邓丽青;张军民;王加启;高小明;李超;

    试验以5头装有瘤胃瘘管的、处于泌乳中后期荷斯坦奶牛为研究对象,采用5×5拉丁方试验设计。对照组饲喂不含尿素日粮,U-16%组用尿素氮替代日粮总氮的16%,S-16%、S-24%和S-32%组分别用糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮的16%、24%、32%。第1期适应期14d,以后每期适应期7d,采样期5d,共67d。比较研究尿素氮和糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮的不同水平对泌乳奶牛生产性能、氮利用率的影响。结果表明糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮的16%、24%,与对照组相比奶牛生产性能均没有显著影响(P>0.05)。当糊化淀粉尿素氮替代水平达32%时,显著降低干物质采食量(P<0.05),并降低了产奶量,但差异不显著(P>0.05);奶牛血液尿素氮随着不同糊化淀粉尿素氮替代水平的增加而提高,但差异不显著(P>0.05),对乳中尿素氮的影响在各组间差异也不显著(P>0.05);糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮的不同水平对氮排放的影响上。当替代水平为16%时,糊化淀粉尿素与尿素相比能降低氮排放,但差异不显著(P>0.05),但是当糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮水平达24%和32%时,排放总氮占摄入总氮的比例显著高于其他各组(P<0.05),会降低日粮氮的利用率,增加氮排放。结果揭示在同时保证奶牛生产性能和不增加氮排放的基础上,在泌乳奶牛上糊化淀粉尿素氮替代日粮总氮的适宜比例为16%,不宜达到24%。

    2013年04期 v.33;No.196 608-615页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K]
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动物科学

  • ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化

    李付娟;王帅;朱亚楠;任久生;柳思源;徐靖博;张阳阳;孙广杰;高妍;张嘉保;陈承祯;

    根据Genbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化。限制性内切酶PstⅠ和BamHⅠ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达。当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为l∶2时,此时转染效率最高,达到53.9%。成功构建了猪ADIPOQ基因的shRNA真核表达载体,并成功将该质粒转入猪的前体脂肪细胞中去,还对质粒与脂质体2000用量比条件进行了优化,此举能为进一步研究ADI-POQ在猪前体脂肪细胞中的功能奠定了良好的基础。

    2013年04期 v.33;No.196 616-621+626页 [查看摘要][在线阅读][下载 967K]
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  • 来航鸡FOXL2基因的克隆与原核表达

    徐萍;李任峰;赵坤;鲁毅;王三虎;

    根据GenBank已发表的红色原鸡FOXL2基因序列(登录号NM_001012612.1)设计引物,以来航鸡全血为模板,PCR扩增出其基因全长编码区,经BamHⅠ-HindⅢ双酶切后定向克隆于pET28a原核表达载体,获得pET28a-FOXL2重组原核表达载体。将携带有重组原核表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过0.5mmol/L IPTG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大小大约为37 000,与预期表达蛋白大小一致。Western blot-ting检测显示该蛋白为His融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。为进一步探索该基因的生物学功能奠定了基础。

    2013年04期 v.33;No.196 622-626页 [查看摘要][在线阅读][下载 511K]
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  • MC3R和MC4R基因多态性位点与犬体型性状的关系

    张轶博;巴彩凤;

    为了探讨犬MC3R和MC4R基因多态性与体质量等体型性状的关系,本研究利用PCR-RFLP、AS-PCR方法对已培育的北方实验用犬MC3R基因A167T,MC4R基因T101N多态性位点与体质量、体长、身高、胸围等体型指标的关系进行分析。结果显示,这2个多态性位点的基因型与犬的体质量、胸围和体质量指数(BMI)等呈显著性相关。另外,方差分析显示MC3R和MC4R合并基因型对体质量、胸围和体质量指数影响显著,MC3R和MC4R基因对体型性状的影响有协同作用。结果表明,MC3R、MC4R基因可以作为犬体型性状的候选基因,可选不同MC3R和MC4R合并基因型的犬用于培育小型或大型实验用犬。

    2013年04期 v.33;No.196 627-629+635页 [查看摘要][在线阅读][下载 324K]
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  • OSP-1启动子在奶山羊卵巢颗粒细胞中的转录活性

    白龙;刘海艳;赵海波;彭甲银;曹斌云;

    采用大鼠OSP-1启动子替换掉pcDNA3.1(+)中的CMV启动子,在其下游插入EGFP基因片段,构建载体pOSP-1-EGFP,脂质体转染不同细胞,利用荧光检测、RT-PCR以及相对定量PCR鉴定该启动子启动基因表达的活性。结果表明,在卵巢颗粒细胞、人卵巢癌细胞系HO-8910中可看到有绿色荧光;OSP-1片段只在卵巢颗粒细胞和人卵巢癌细胞系HO-8910有表达,并在人卵巢癌细胞系HO-8910中表达量较高,但是两者之间差异不显著。说明OSP-1启动子可调控外源基因在奶山羊卵巢颗粒细胞中特异性的表达。

    2013年04期 v.33;No.196 630-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 716K]
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  • 秋水仙素条件优化及其对牛卵细胞c-mos基因表达水平的影响

    任久生;邓琼;刘慧玉;徐靖博;柳思源;李付娟;俞先峰;张嘉保;

    为探讨秋水仙素对牛卵母细胞产生细胞膜突起的最适条件与对减数分裂纺锤体组装起重要调控作用的母源基因c-mos表达量的影响,设计如下试验:比较试验组(Deme+sucrose处理)与对照组1(Deme单独处理)和对照组2(sucrose单独处理)的卵母细胞细胞膜突起率变化。用荧光定量检测最适合秋水仙素浓度处理的卵母细胞与空白组和对照组母源基因c-mos基因表达量的差异。结果表明,用0.6mg/L秋水仙素+0.05mol/L蔗糖处理牛卵母细胞1h细胞膜突起率达72.0%,要显著高于对照组1(13.0%)和对照组2(P<0.05);0.6mg/L秋水仙素浓度优于其他质量浓度(P<0.05)。秋水仙素加蔗糖处理的卵母细胞的母源基因c-mos表达高于蔗糖处理组和空白组c-mos基因的表达(P<0.05)。

    2013年04期 v.33;No.196 636-640页 [查看摘要][在线阅读][下载 803K]
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  • 促性腺激素对输卵管黏膜上皮细胞NGF及TrkA表达影响

    刘立文;马永和;李万宏;王春强;

    利用荧光定量PCR和ELISA技术研究了LH和FSH对输卵管黏膜上皮细胞表达NGF及其受体TrkA的影响。结果显示:FSH能促进NGF及其受体TrkA的mRNA的表达(P<0.05);LH能促进NGF mRNA的表达(P<0.05),也能促进TrkA mRNA的表达,但差异不显著(P>0.05)。ELISA结果表明,添加LH和FSH后,NGF的表达量有所增加,但是差异不显著(P>0.05)。这说明促性腺激素LH和FSH对NGF和TrkA的表达有影响。

    2013年04期 v.33;No.196 641-644页 [查看摘要][在线阅读][下载 687K]
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