预防兽医学

  • 猪H3N2亚型流感病毒受体亲和性鉴定

    冉伟;丁壮;孙艺学;王伟利;孟庆峰;朱利塞;李鑫;丛彦龙;

    利用固相酶联方法对分离自吉林省猪群中的3株H3N2亚型流感病毒进行了受体亲和性鉴定。结果显示,这3株病毒与SAα2,3和SAα2,6受体都能结合,并且偏嗜SAα2,6受体,暗示它们具有感染人的潜能。因此应该加强猪流感的流行病学调查,及时发现那些具有引发人流感流行潜能的病毒,为防控人间流感提前做好准备。

    2013年07期 v.33;No.199 969-972+1026页 [查看摘要][在线阅读][下载 437K]
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  • 鸭坦布苏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法的建立

    万春和;朱海侠;施少华;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;

    根据鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DFV)NS5基因序列特征设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),该方法检测DFV NS5基因2.74×103~2.74×107拷贝/μL反应范围内有很好的线性关系。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(86.23±0.18)℃,对禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭源禽1型副黏病毒、鸭减蛋综合征病毒、番鸭呼肠孤病毒核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.52%~1.48%,组间变异系数0.71%~2.21%。检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4h。

    2013年07期 v.33;No.199 973-978页 [查看摘要][在线阅读][下载 1034K]
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  • 牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株E0基因的克隆与抗原表位预测

    蒋禄峰;赵月兰;李苏楠;常丽云;张梦茜;包永占;秦建华;

    根据GenBank上发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Oregon C24V株E0基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增BVDV HB-DCZ株E0基因。将PCR产物克隆到pMD18-T载体,克隆产物进行序列测定与分析。结果显示,HB-DCZ cDNA体外扩增获得特异性条带,约为687bp。序列测定结果表明,HB-DCZ株E0基因由681个核苷酸组成,编码227个氨基酸。与已公开发表的BVDV其他毒株核苷酸和推导氨基酸序列同源性相似顺序依次为:CCSYD 99%和98.7%、QHZK10 98.4%和97.8%、VEDEVAC 98.2%和97.8%、Oregon C24V80.9%和89.9%、Yak 74.2%和81.1%。HB-DCZ与CCSYD、QHZK10以及VEDEVAC株的遗传距离较近,与国际标准毒株C24V、Yak株的遗传距离较远。运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,采用Karplus-Schulz方案预测蛋白质的柔性区域,按Jameson-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N-端6~17、23~29、47~53、59~68、70~81、97~109、114~122、127~134、137~143、165~172、186~198和213~220。

    2013年07期 v.33;No.199 979-984页 [查看摘要][在线阅读][下载 1088K]
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  • 山东地区2株基因Ⅶ型新城疫病毒的全基因组测序及其序列分析

    张会娟;张秀美;胡北侠;杨少华;许传田;颜世敢;张琳;李建亮;袁朋;崔言顺;

    测定了基因Ⅶ型新城疫(Newcastle disease,ND)强毒分离株Chicken/China/SD04/2011和Chicken/China/SDWF07/2011的全基因序列,将其与GenBank中已发表的29株基因Ⅶ型新城疫毒株的全基因序列进行比对,同源性在91%~97%之间。2株基因Ⅶ型分离株与中国标准强毒F48E8、国外标准强毒Herts/33及疫苗株chicken/N.Ireland/Ulster/67、B1、Clone30、LaSota、Mukteswar核苷酸序列同源性在83%~87%之间;其F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列均为112 RRQKRF117,符合NDV强毒株的特征;与单抗1E5反应阴性,结合对各蛋白的抗原位点的分析初步推测2株病毒的抗原性可能发生了变化。

    2013年07期 v.33;No.199 985-990页 [查看摘要][在线阅读][下载 710K]
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  • 1株鸡传染性支气管炎病毒变异株的分子特征和抗原性分析

    胡北侠;文心田;杨少华;曹三杰;许传田;张琳;黄艳艳;张秀美;

    从山东省发病商品鸡群分离鉴定了1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为CK/CH/SD09/005。S1基因序列分析发现,该株和同期分离的16个IBV流行株与疫苗株H120和491同源性分别为65.2%和66.0%。BLAST发现,CK/CH/SD09/005株仅与GenBank中3个广东分离株同源性较高(98.6%~98.8%),并形成独立的进化群。分别以H120和491为参考株,除了广泛的点突变,CK/CH/SD09/005S1基因在多个位点发生了插入和缺失,CK/CH/SD09/005N基因仅发生了点突变,没有基因插入和缺失;M基因除了发生点突变之外,分别在16~18和7~18位发生了碱基插入。鸡胚中和试验结果显示,CK/CH/SD09/005与H120和491均有交叉中和性,抗原相关性分别为0.18和0.09,应属于Mass和793/B之外新的血清型。结果表明,IBV S1基因可同时通过点突变、插入和缺失产生变异株,增加了免疫预防的难度。

    2013年07期 v.33;No.199 991-994页 [查看摘要][在线阅读][下载 533K]
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  • 鹅源新城疫病毒的分离鉴定及其致病性

    谷松至;王新;杜冬菊;蒋运博;胡桂学;

    从吉林省某发病鹅场分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定证实,该毒株为新城疫病毒,命名为MHK-1株。毒力测定结果表明,该病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)为43h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.63,鸡胚半数致死量(ELD50)为10-8.3/0.2mL,表明该毒株为新城疫病毒强毒株。经致病性试验表明,该病毒对鹅有很强的致病性。分子病毒学分析表明,MHK-1株F基因裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株氨基酸序列特点。

    2013年07期 v.33;No.199 995-998页 [查看摘要][在线阅读][下载 547K]
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  • 猪链球菌2型山东强毒株的分离鉴定

    赵蕾;李书光;李坤林;吴立志;陈金龙;韩文瑜;沈志强;

    对某养猪场发生呼吸道感染及神经症状的病猪脑组织进行了病原菌分离,对其优势菌进行菌落形态学观察、生化试验、PCR检测、药敏试验和毒株致病力试验。结果显示,成功分离到1株猪链球菌2型,其含有目前已知的mrp、sly、ef3种毒力基因,该菌株对昆明系小鼠、新西兰白兔具有一定的致病性,动物回归试验证实该菌株对断奶仔猪具有较强的致病性。

    2013年07期 v.33;No.199 999-1002页 [查看摘要][在线阅读][下载 582K]
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  • 快速检测兔支气管败血波氏杆菌环介导等温扩增(LAMP)方法的建立及应用

    李科;刘燕;肖琛闻;韦强;鲍国连;季权安;

    利用Primer ExplorerV4软件,针对兔波氏杆菌16SrRNA基因设计4条LAMP引物,优化反应条件,检测特异性、敏感性并对临床样品进行检测。结果显示,LAMP反应在62℃恒温扩增1h即可完成,操作简便,不需要PCR仪等复杂仪器,结果可经电泳检测及肉眼观察;具有良好的特异性;敏感性为普通PCR的100倍,最低可检测到1.65×10-6 mg/L的细菌基因组DNA。用建立LAMP检测方法对32份疑似兔支气管败血波氏杆菌(Bb)样品检测呈阳性,与PCR检测结果相符。该方法的建立为Bb的临床快速检测提供了新的思路。

    2013年07期 v.33;No.199 1003-1006+1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 611K]
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  • 巢式PCR检测猪鼻支原体方法的建立及应用

    白方方;武昱孜;靳蒙蒙;刘茂军;冯志新;熊祺琰;邵国青;

    应用巢式聚合酶链式反应(Nested PCR)建立了一种检测猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)的方法,试验中以酚-氯仿法制备模板DNA,根据猪鼻支原体P37序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。在特异性检测试验中,设计的引物不能扩增出猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体、胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原体;敏感性试验表明,第1次PCR和第2次PCR的敏感度分别为3.01mg/L和3.01×10-4 mg/L。对41份临床样品肺组织的检测中,普通PCR和巢式PCR的检出率分别为29.3%(12/41)和82.9%(34/41)。结果表明,巢式PCR方法明显优于常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性,为猪鼻支原体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。

    2013年07期 v.33;No.199 1007-1010页 [查看摘要][在线阅读][下载 580K]
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  • 金黄色葡萄球菌CP8-ClfA-FnBPB偶联物的制备及其免疫学特性

    王姝懿;郝永清;刘秀丽;杨岚;

    以己二酰肼为间桥,碳二亚胺为偶联剂,将纯化的血清8型荚膜多糖和纯化的ClfA-FnBPB融合蛋白偶联制备偶联物,并在偶联的过程中确定其最佳质量比和偶联比。用制备的偶联物免疫小鼠,同时用间接ELISA法检测抗体水平,并对三免后2周的小鼠进行攻毒保护试验。结果显示,用化学方法制备的多糖-蛋白偶联物在其质量比为1∶2时可成功偶联,计算得到偶联比为1∶1.89。采用间接ELISA法检测抗体水平,二免后7d,偶联物免疫组可产生抗体,且抗体效价最高可达1∶6 400。阴性对照组和单独多糖组均没有抗体产生,而单独融合蛋白组在二免后产生了抗体反应,但抗体效价较低,最高时仅为1∶100。对小鼠进行攻毒保护的结果表明,偶联物组的攻毒保护率最高,可达80%,而阴性对照组、单独多糖组以及单独融合蛋白组的保护率分别为20%、30%和60%。

    2013年07期 v.33;No.199 1011-1015+1031页 [查看摘要][在线阅读][下载 582K]
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  • ADF-IL-2基因重组卡介苗的构建及免疫保护效果

    侯洪烈;张许科;李运娜;孙进忠;李建华;宫鹏涛;李赫;杨举;张西臣;

    构建柔嫩艾美尔球虫ADF基因和鸡IL-2基因的重组卡介苗,并研究其免疫保护性。将柔嫩艾美尔球虫的ADF基因和鸡的IL-2基因串联后连接到至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化卡介苗,制备重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,将构建的基因重组卡介苗分别以不同免疫途径接种雏鸡,研究其对柔嫩艾美耳球虫的攻毒的免疫保护效果。结果显示,成功构建重组rBCG pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,且rBCG滴鼻免疫组的免疫效果较好,其抗球虫指数分别为176.08和172.89。结果表明,构建的基因重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2对柔嫩艾美尔球虫卵囊的攻击具有一定的保护作用。

    2013年07期 v.33;No.199 1016-1020页 [查看摘要][在线阅读][下载 692K]
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人兽共患病

  • 狂犬病“靶向性”中和表位DNA疫苗的构建与瞬时表达

    肖跃强;谢金文;李书光;魏凤;丁壮;刘吉山;沈志强;

    采用RT-PCR获得BALB/c小鼠P41基因,并在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;然后采用定向克隆方法将狂犬病病毒糖蛋白主要中和抗原表位核苷酸序列替换P41序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应以获得带有Kozak调控序列的P41-N分子,以增加目的基因的表达量,并将该含有Kozak序列的P41-N分子克隆插入到真核表达载体pCI-neo多克隆位点,通过PCR与限制性内切酶酶切方法进行鉴定;最后将各中和表位表达载体转染COS-7细胞,Western blotting检测目的基因的瞬时表达。测序分析结果显示,BALB/c小鼠P41基因CDS区为840bp,编码279个氨基酸,与GenBank已登录(NM_010545)核苷酸序列、氨基酸序列均存在多个位点差异;定点突变后获得了P41分子突变体,经PCR及限制性内切酶酶切方法证明成功构建了携带P41-N分子的真核表达载体;Western blotting证实各P41-N分子均在COS-7细胞获得瞬时表达,且表达的目的产物能够与兔抗P41多克隆抗体发生抗原抗体结合反应。结果表明,成功构建了狂犬病病毒主要中和抗原表位的"靶向性"核酸疫苗,为开展在小鼠的免疫学试验奠定了基础。

    2013年07期 v.33;No.199 1021-1026页 [查看摘要][在线阅读][下载 650K]
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  • 快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价

    张雪寒;何孔旺;叶青;倪艳秀;温立斌;李彬;王小敏;周俊明;郭容利;

    利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验。结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果。在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1CFU/g。在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应。试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求。

    2013年07期 v.33;No.199 1027-1031页 [查看摘要][在线阅读][下载 829K]
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  • 单核细胞增多性李斯特菌人工感染小鼠致其脑炎模型的建立及优化

    郑德良;马勋;

    采用不同剂量单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)LM90SB2腹腔注射感染小鼠219只,观察小鼠临床症状,纪录死亡情况,在感染后不同时间采集小鼠脑组织,进行脑组织中细菌回收、鉴定及病理组织学观察。结果显示,不同感染剂量感染小鼠,其临床症状和脑组织病理变化基本一致。但是随着感染剂量的增加,其临床症状出现时间逐渐缩短,死亡率和脑组织中细菌分离的时间明显不同。1/2LD50剂量组小鼠未出现死亡,2/3LD50组和LD50组死亡率分别为12.5%和63.3%;另外1/2LD50组感染后24h开始从脑组织中离到LM,96h所有感染小鼠脑组织均能分离到LM,2/3LD50组感染后12h开始能分离到LM,72h所有脑组织均能分离到LM。从小鼠临床症状及死亡率、脑组织细菌的回收情况和脑组织病理组织学变化综合考虑,以2/3LD50LM LM90SB2腹腔感染小鼠为动物感染模型。

    2013年07期 v.33;No.199 1032-1036页 [查看摘要][在线阅读][下载 1612K]
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基础兽医学

  • 细胞因子对牛乳腺上皮细胞体外增殖作用评价

    李吉霞;葛秀国;王轶敏;丁向彬;郭宏;

    分离纯化了乳腺上皮细胞,对细胞进行角蛋白免疫组化鉴定后,比较不同细胞因子对乳腺上皮细胞生长的影响。结果显示,生长因子EGF或HGF对牛乳腺上皮细胞的增殖具有重要作用,17β-E2不能促进牛乳腺上皮细胞的增殖,但可与EGF协同促进牛乳腺上皮细胞的增殖,表明17β-E2对EGF诱导的乳腺上皮细胞增殖具有重要作用。

    2013年07期 v.33;No.199 1037-1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 938K]
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  • 玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢组织Caspase-3和Caspase-8的表达

    史嘉瑜;周宏超;俞亚玲;杨鸣琦;郭良;陈的;刘晓强;

    10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5mg/kg玉米赤霉烯酮玉米油溶液,分别于3、6、12、24、48、72、96h时剖杀取卵巢组织,检测不同时间卵巢组织Caspase-3和Caspase-8的表达。病理组织学观察发现,卵巢组织出现不同程度损伤,卵泡颗粒细胞发生凋亡。免疫组织化学超敏PV法结果表明,试验组与对照组卵巢组织中均有Caspase-3和Caspase-8的表达,并且随着时间的推进呈现动态变化。Caspase-3和Caspase-8试验组表达量均高于对照组。试验组卵巢组织中Caspase-3在3~96h时表达量均比较高,与对照组相比较差异显著(P<0.05),且3、6、12、24、48h的表达量均高于72h和96h的表达量。6、12、72、96h卵巢组织中Caspase-8表达量与对照组相比较差异显著(P<0.05),3、24、48h时与对照组相比差异不显著(P>0.05),且3、6、12、24、48h的表达量均高于72h和96h的表达量。结果表明,大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡,且Caspase-3和Caspase-8在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中起着重要作用,进一步证明本试验中死亡受体途径的激活可能参与凋亡的发生。Caspase-8表达量在个别时间段与对照组差异不显著还有待于进一步深入研究。

    2013年07期 v.33;No.199 1042-1046页 [查看摘要][在线阅读][下载 1386K]
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  • T-2毒素对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

    肖娟;董晓蓉;陈瑾;张欣;文利新;屠迪;邬静;

    将未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的T-2毒素染毒细胞24h。染毒结束后,采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechst 33258检测卵巢颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax和P53mRNA的表达。结果显示,随着T-2毒素染毒剂量的增加,颗粒细胞的细胞活力逐渐下降;而细胞凋亡率、Bcl-2、Bax、P53mRNA表达水平、Bax mRNA/Bcl-2mRNA比值则逐渐上升;除1nmol/L剂量组外,其余各剂量组与对照组比较差异显著(P<0.05)。结果表明,T-2毒素可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡,并呈浓度依赖关系。

    2013年07期 v.33;No.199 1047-1050页 [查看摘要][在线阅读][下载 625K]
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  • 聚赖氨酸-海藻酸微囊介导的病毒基因组DNA转染

    耿莉;杨盛;张丹;高婷婷;王国卿;张乃生;

    通过多孔CaCO3微粒吸附伪狂犬病毒(Pseudorabies,PRV)基因组DNA,并在其表面依次交替聚合PLL、Alg至7层;以EDTA溶解去除CaCO3内核,制成聚PLL/Alg包被DNA的载体并感染家兔,观察PRV基因组DNA在体内的复制情况。结果显示,Na2CO3与CaCl2反应可获得直径4~6μm的多孔CaCO3微粒,对DNA的吸附效率约为1mg CaCO3微粒可吸附1μg DNA。经PLL/Alg包被后获得直径1~2μm、囊膜厚约200nm的PRVDNA聚PLL/Alg微囊。肌肉注射含6.5μg PRV DNA的PLL/Alg微囊,可引起试验兔死亡,经PCR检测确定为PRV感染引起的。结果表明,聚PLL/Alg微囊能够介导DNA高效转染,在作为DNA疫苗载体方面具有良好应用前景。

    2013年07期 v.33;No.199 1051-1054+1107页 [查看摘要][在线阅读][下载 1027K]
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  • 脂多糖对奶山羊肝脏脂代谢关键基因表达的影响

    李和平;王月影;刘凤娟;祁画丽;王林枫;汪新建;张君;杨国宇;

    12只初产萨能奶山羊被随机分为对照组和脂多糖(LPS)组,每组6只。试验结束后,采集肝脏组织,利用荧光定量PCR的方法检测肝脏TLR4信号通路关键分子、脂肪合成和转运关键基因的表达。结果显示,LPS能上调TLR4、MyD88、IRAK4和NF-κB基因的表达,下调LXRα、CD36、VLDLR、APOB、ACC和SCD的表达,对LXRβ和PPAR的表达影响不大。结果表明,LPS诱导肝损伤的同时能下调肝脏脂代谢基因的表达,进而降低肝脏合成与转运脂肪的能力。

    2013年07期 v.33;No.199 1055-1058+1063页 [查看摘要][在线阅读][下载 755K]
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  • α-半乳糖苷酶对AA肉鸡生长性能和血清生化指标的影响

    马慧慧;李绍钰;

    选用1日龄AA肉仔鸡360只,随机分为5个处理,在基础日粮中分别添加0、0.05、0.10、0.15、0.20g/kgα-半乳糖苷酶制剂,每个处理6个重复,每个重复12只鸡,试验期6周,测定21、42d的平均日增体质量、日采食量和料重比及血清葡萄糖、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量和42d肠道微生物菌群数量。结果显示,0.10、0.15、0.20g/kgα-半乳糖苷酶组显著提高了21、42日龄日增体质量2.56%~4.54%(P<0.05),降低42日龄的料重比1.91%~4.59%(P<0.05)。α-半乳糖苷酶可以使血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量下降,总蛋白、高密度脂蛋白胆固醇、白蛋白含量升高,显著增加AA肉鸡肠道有益菌群的数量(P<0.05)并且使有害菌群的数量明显降低(P<0.05)。结果表明,α-半乳糖苷酶有利于提高AA肉鸡生长性能,以0.1~0.2g/kgα-半乳糖苷酶添加水平较好。

    2013年07期 v.33;No.199 1059-1063页 [查看摘要][在线阅读][下载 627K]
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  • 宁都黄鸡小肠显微结构和甲苯胺蓝染色阳性细胞分布特点

    张晖;肖红;张家禾;彭沙沙;周作红;

    通过石蜡切片和HE染色方法观察了宁都黄鸡小肠的显微结构,同时通过改良甲苯胺蓝染色的方法鉴定小肠中的甲苯胺蓝染色阳性细胞。结果显示,宁都黄鸡小肠与一般禽类小肠显微结构类似,黏膜下层缺乏十二指肠腺,黏膜固有层缺乏淋巴小结。小肠从前到后,杯状细胞逐渐增多。3段小肠的肠腺和回肠杯状细胞呈甲苯胺蓝染色阳性。小肠壁四层结构中都有肥大细胞的分布,主要分布于黏膜上皮细胞下、黏膜下层、肌层和外膜结缔组织中。肥大细胞体积较大,多数呈卵圆形,有的细胞形态不规则,甚至有突起。胞核染色呈深蓝色,胞质中含有紫红色颗粒。结果表明,宁都黄鸡小肠腺细胞和杯状细胞甲苯胺蓝染色呈阳性,说明其能够分泌有助于吸收的活性物质;小肠中具有丰富的肥大细胞,说明宁都黄鸡有较完善的肠道免疫屏障。

    2013年07期 v.33;No.199 1064-1068页 [查看摘要][在线阅读][下载 1359K]
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  • 依普黄酮对骨质疏松症笼养蛋鸡OPG和RANKL表达的影响

    马利芹;利凯;吕文亭;王鹏;杨永红;

    选用200只24周龄健康海兰褐蛋鸡,随机分为4组:对照组(基础日粮中含钙3.55%)、低钙组(日粮含钙1.27%)、试验Ⅰ组(依普黄酮8mg/kg,低钙日粮)和试验Ⅱ组(依普黄酮20mg/kg,低钙日粮),观察依普黄酮对骨质疏松症笼养蛋鸡血清及骨骼骨保护素(Osteo protegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(Receptor activatorof NF-κB ligand,RANKL)表达的影响。结果显示:与低钙组相比,30d时,试验Ⅰ组和Ⅱ组血清OPG分别显著升高33.12%和60.19%(P<0.05);60d时,试验Ⅰ组和Ⅱ组血清OPG分别显著升高35.89%和61.59%(P<0.05);30d时,试验Ⅰ组和Ⅱ组血清RANKL分别极显著降低63.85%和70.87%(P<0.01);60d时,试验Ⅰ组和Ⅱ组血清RANKL分别极显著降低69.98%和72.85%(P<0.01)。与低钙组相比,试验Ⅰ组和Ⅱ组骨组织OPG平均光密度分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)升高,试验Ⅰ组和Ⅱ组蛋鸡骨组织RANKL平均光密度极显著低于低钙组蛋鸡(P<0.01)。试验Ⅰ组和Ⅱ组OPG/RANKL值高于低钙组。结果表明,低钙日粮中添加依普黄酮对蛋鸡骨质疏松症可起到一定改善作用,这可能与OPG上调,RANKL下调,影响RANKL信号通路,使其骨量增加,骨结构改善密切相关。

    2013年07期 v.33;No.199 1069-1072页 [查看摘要][在线阅读][下载 813K]
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  • 鸡IL-2 mRNA SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

    王衡;刘博奇;宁章勇;

    根据GenBank提供的ChIL-2参考序列设计了特异性引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,以二者标准质粒为模板,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术,并采用双标准曲线相对定量方法建立了ChIL-2mRNA荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法该可以在3h左右对低拷贝量的模板(200copy/μL)进行检测,同时该检测方法具有很好的特异性和重复性。雏鸡免疫试验IL-2mRNA检测结果显示,该方法可有效应用于鸡体内IL-2在核酸水平的检测,并为今后IL-2相对定量的检测研究提供参考依据。

    2013年07期 v.33;No.199 1073-1077页 [查看摘要][在线阅读][下载 1157K]
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  • 蹄叶炎奶牛血浆蛋白质组学2-DE图谱的构建及分析

    高昭辉;荔霞;严作廷;王旭荣;阎萍;董书伟;

    采集患病牛和健康牛血浆,用人白蛋白和IgG抗体去除其高丰度蛋白后,通过双向凝脉电泳(Two dimension-al gel electrophoresis,2-DE)技术和PDQuest分析软件比较2组间血浆蛋白组表达差异。结果显示,蹄叶炎奶牛血浆2-DE图谱中有39个蛋白斑点表达上调,23个蛋白斑点表达下调,共检测到62个差异蛋白点。结果表明,奶牛发生蹄叶炎时,其血浆蛋白组表达模式发生了改变,这种改变可能与蹄叶炎的发病机制密切相关。

    2013年07期 v.33;No.199 1078-1082页 [查看摘要][在线阅读][下载 935K]
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临床兽医学

  • 常山提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的观察

    郭志廷;梁剑平;韦旭斌;尚若锋;郭文柱;王学红;郝宝成;

    为了探讨常山提取物对鸡球虫病的治疗效果,通过人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫后在饲料中添加一定比例的药物,试验设常山提取物组(分别为200、100、50mg/kg饲料)、鸡球虫散组(300mg/kg饲料)、地克珠利组(1mg/kg饲料)、感染对照组和健康对照组。结果显示,与感染对照组比较,所有给药组试验鸡盲肠和十二指肠肿胀明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数分别为171.98、169.18、169.01、163.84和166.74,均达到中等抗球虫水平。结果表明,常山提取物具有良好的抗球虫效果,且作为一类中药组分,具有绿色环保、低毒低残留的特点,有望成为新型抗球虫药物。

    2013年07期 v.33;No.199 1083-1085+1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 661K]
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  • 不同种类异位酸添加水平对奶牛瘤胃体外发酵的影响

    沈冰蕾;苗树君;曲永利;邵广;

    选用3头装有永久性瘤胃瘘管的奶牛,采用单因素对照试验设计和体外培养法研究不同种类异位酸的单独添加水平对奶牛瘤胃发酵的影响,并利用多项指标综合指数对培养液pH值、氨态氮浓度、菌体蛋白含量和残留有机物的含量进行综合评定,筛选3种异位酸单独使用的适宜添加量。结果表明,异丁酸0.2%DM和0.4%DM、异戊酸为0.15%DM和0.3%DM、2-甲基丁酸为0.1%DM和0.2%DM添加方式为最佳。

    2013年07期 v.33;No.199 1086-1090页 [查看摘要][在线阅读][下载 674K]
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  • 犬腹腔镜肝部分切除术对肝、肾功能的影响

    张华;石焦;张建涛;张士霞;周志飞;王洪斌;

    选择8条健康杂种犬进行腹腔镜下肝部分切除,于麻醉前、术后4h及术后第1、3、5、7、9、11、13、15天采取静脉血进行肝肾功能指标监测。结果显示,天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶及碱性磷酸酶于术后第1天升到高峰;尿酸、尿素氮和肌酐于术后4h即达到高峰;白蛋白和总蛋白略微有所下降,于术后第1天降到最低;而γ-谷氨酰基转移酶术后变化不大。结果表明,犬腹腔镜肝部分切除术仅仅短期内对肝、肾功能产生影响,且肝、肾功能在术后一段时间内可恢复。

    2013年07期 v.33;No.199 1091-1094页 [查看摘要][在线阅读][下载 661K]
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  • 复方中药“禽康散”对鸭瘟病毒感染鸭胚及成纤维细胞的保护效应

    任志华;邓惠丹;邓俊良;刘小雪;廖轶;左之才;王娅;彭西;崔恒敏;

    将不同浓度复方中药"禽康散"和鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)分别以不同方式接种到鸭胚尿囊膜后观察其对DPV感染的鸭胚保护率;用MTT法测定"禽康散"对鸭胚成纤维细胞(DEF)的安全质量浓度和增殖的影响,及安全质量浓度范围内的"禽康散"对DPV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)能力的影响。结果显示,"禽康散"在10日龄鸭胚内对DPV具有显著的杀灭和阻断感染的作用。"禽康散"对DEF的最大安全质量浓度为2-4 g/mL,在2-4~2-8 g/mL质量浓度范围内对DEF有显著的增殖和抑制DPV感染DEF的能力,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系。结果表明,一定质量浓度的"禽康散"对DEF具有增殖作用,并对DPV在鸭胚内和细胞水平上均有较好的杀灭和拮抗作用。

    2013年07期 v.33;No.199 1095-1098+1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 729K]
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动物科学

  • 保胎无忧散对小鼠诱导性流产的保胎作用

    耿梅英;苑方重;钟秀会;

    选择保胎无忧散预处理试验小鼠,观察保胎无忧散对米非司酮(RU486)诱导流产作用的抑制效果。结果显示,使用RU486在孕7d,颈部注射后,试验小鼠的流产率达到了100%;应用中药方剂保胎无忧散能有效对抗RU486诱导的小鼠流产,试验中动物模型的流产率从100%下降到40%;组织学观察发现,RU486诱导流产小鼠子宫内膜出现明显损伤,而在中药方剂组,试验小鼠子宫得到了有效的保护。

    2013年07期 v.33;No.199 1099-1102页 [查看摘要][在线阅读][下载 1091K]
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  • 转外源基因(pGH)在猪染色体上整合状况

    蒋亚军;吴明明;孙金海;

    应用地高辛标记技术,对通过睾丸注射法制备的转基因猪进行荧光原位杂交,确定外源pGH(猪生长激素)基因在染色体上的整合位点及数目。选用睾丸注射法制备的140日龄转基因长白猪6头与同期同龄非转基因猪2头进行血细胞培养及荧光原位杂交。结果显示,外源基因已整合于染色体上,但在染色体上的整合位点具有随机性,而且不同的转基因猪阳性个体外源基因在染色体上的整合位点有差异,但集中分布于1、6、8、13号染色体上;非转基因猪染色体上无杂交信号;个体杂交信号数越多,其生长速度越快。

    2013年07期 v.33;No.199 1103-1107页 [查看摘要][在线阅读][下载 903K]
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  • 贵州山羊品种RERG基因的克隆及不同组织表达

    陈志;罗卫星;刘若余;张依裕;蔡惠芬;石照应;宋桃伟;

    选择与羊同源性较高的牛ras相关的雌激素调节的生长抑制因子(ras-related estrogen-regulated growth in-hibitor,RERG)基因组序列设计特异性引物,通过RT-PCR技术对RERG基因进行克隆测序及生物信息学分析。结果显示,克隆了羊RERG基因cDNA序列629bp,完整的开放阅读框(ORF)为20~620bp,其编码199个氨基酸。GenBank登录号分别为JN672576、JQ917222和JN580309。通过实时荧光定量RT-PCR技术分析RERG基因在贵州三大地方品种同一年龄段不同组织中的表达情况。结果表明,成年羊肺脏和脾脏表达量是最高,胸腺表达量最低,肌肉表达量为相对中度表达。为进一步研究地方品种羊生长性状的改善提供科学依据。

    2013年07期 v.33;No.199 1108-1112页 [查看摘要][在线阅读][下载 872K]
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  • 荧光定量RT-PCR检测性成熟前与性成熟山羊卵巢α/β-ER mRNA表达的比较

    王洪进;李宏梅;胡洪杰;刘海港;窦文文;井维芳;郭慧君;

    为分析性成熟前与性成熟波尔山羊和沂蒙黑山羊卵巢内α、β雌激素受体(α/β-ER)表达的差异规律,根据已发表波尔山羊α/β-ER基因序列,设计不同引物,对PCR反应条件进行优化,建立稳定检测2种山羊卵巢雌激素受体mRNA含量的荧光定量RT-PCR方法;并对性成熟前后2种山羊卵巢组织中α/β-ER mRNA进行了检测比较。结果显示,性成熟前2种山羊卵巢α-ER和β-ER mRNA表达含量较性成熟山羊低;而且这2种山羊无论性成熟前还是性成熟后,α雌激素受体表达均显著低于β雌激素受体。

    2013年07期 v.33;No.199 1113-1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1198K]
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  • VEGF对绵羊卵泡颗粒细胞FSHR、E_2R表达的影响

    陈洋;杨永梅;谷博;姜怀志;

    血管内皮生长因子(VEGF)可以促进颗粒细胞的增殖,但是否影响同样分布于颗粒细胞上的FSHR、E2R表达效果尚属未知。因此,通过Western blotting和荧光定量PCR分别对添加0、5、10、15、20、25μg/L VEGF卵泡颗粒细胞中FSHR、E2R表达量及FSHR mRNA、E2R mRNA表达量进行检测。Western blotting蛋白检测结果表明,空白对照组和各个不同质量浓度VEGF处理组的颗粒细胞上均有FSHR和E2R蛋白表达,FSHR相对分子质量为75 000,E2R相对分子质量为56 000;荧光定量PCR检测结果表明,添加VEGF的各个处理组中FSHR mR-NA、E2R mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05),各处理组间的FSHR mRNA之间差异不显著(P>0.05),而VEGF添加量20、25μg/L组的E2R mRNA表达量显著高于其他3个处理组(P<0.05),并且这2个组间则差异不显著(P>0.05),其余3个处理组间亦差异不显著(P>0.05)。

    2013年07期 v.33;No.199 1119-1122页 [查看摘要][在线阅读][下载 874K]
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  • 黑羽与黄、白羽鹌鹑杂交后代生长曲线的拟合

    赵淑娟;周虚;庞有志;张小辉;孙宗琦;李航;

    运用Logistic、Gompertz、Bertalanffy和Brody等4种非线性拟合模型对黑羽母鹌鹑与黄羽、白羽公鹌鹑2组杂交后代0~10周龄的体质量生长数据进行曲线拟合与分析。结果显示,4种模型均能较好的拟合其生长曲线,但Gompertz模型对于2个试验组的拟合度均达到0.997 0以上,残差平方和(E)均较低,拐点周龄的拟合值分别为3.030 4周和3.206 4周,拐点体质量的拟合值分别为59.480 9g和54.213 6g,均最接近实际值,故Gompertz模型为最适宜描述2组杂交后代生长曲线的模型。

    2013年07期 v.33;No.199 1123-1126页 [查看摘要][在线阅读][下载 798K]
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  • 催情助孕液对小鼠雌、孕激素水平及其受体mRNA表达的影响

    张世栋;王旭荣;杨峰;李宏胜;潘虎;王东升;严作廷;

    分别以0.1、0.2、0.4mL/d剂量的催情助孕液给21日龄小鼠灌服7d后,检测体质量、脏器指数、血清雌激素和孕激素水平、子宫组织中雌激素和孕激素受体基因mRNA的表达情况,并与腹腔注射雌二醇4d的小鼠进行比较。结果显示与对照组和雌二醇注射组比较,0.2mL的催情助孕液能显著促进小鼠子宫发育,并增强雌激素水平及其受体基因表达,而对孕激素水平及其受体基因表达无显著影响。结果表明,催情助孕液对动物生殖发育与促进发情具有较好的效果。

    2013年07期 v.33;No.199 1127-1131页 [查看摘要][在线阅读][下载 860K]
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  • SC1(pluripotin)对昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的影响

    任卫青;张志平;王新庄;吕婧玉;许晓婷;蒋金航;翟明胜;石凯文;

    比较了在无血清培养体系中分别添加小分子化学物质pluripotin(SC1)和白血病抑制因子(LIF)对昆明小鼠ES细胞未分化状态的维持作用,并探讨了SC1在培养液中的最佳浓度。以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)为饲养层,以含LIF的添加血清替代品(KSR)的培养基(ESC-SR)为对照,分别用SC1浓度为0.3、1、3μmol/L的ESC-SR培养液对昆明小鼠胚胎进行分离培养。结果显示:胚胎在添加3μmol/L SC1的ESC-SR培养液中ICM形成率显著高于对照组(P<0.05),形成的ES集落与对照组形态差异不明显,最高传至第7代,并且在无饲养层条件下可以传至第6代而保持未分化状态。不同浓度SC1培养液中,胚胎在SC1浓度为0.3μmol/L组的F2代形成率显著高于1μmol/L组和3μmol/L组(P<0.05),所分离的细胞AKP染色呈阳性,Oct4、Nanog和Sox2的免疫荧光染色均显阳性,具有ES细胞的特点。结果表明,ESC-SR培养液中SC1可以替代LIF用于小鼠ES细胞未分化状态的维持,并且可以在无饲养层条件下进行昆明小鼠ES细胞的培养。

    2013年07期 v.33;No.199 1132-1136页 [查看摘要][在线阅读][下载 946K]
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