预防兽医学

  • PRRSV山西株ORF5和Nsp2基因序列分析

    姚敬明;刘文俊;罗甜甜;吴忻;王娟萍;孟帆;韩一超;樊振华;米瑞娟;詹海杰;

    采用RT-PCR方法对2009-2011年山西省分离的5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的ORF5和Nsp2(2 503~3 269nt)基因进行克隆和测序,并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒株进行了同源性分析。序列分析结果显示,5株分离株Nsp2基因与国内分离的PRRSV变异株(JXA1、HuN、HUN4、HUB1)的序列同源性最高,为96.8%~98.2%,且缺失位置一致,均存在2个位点30个氨基酸缺失;ORF5基因大小为603bp,编码200个氨基酸,第13、151位均为具有强毒特性的精氨酸(R),137位为丝氨酸(S),表明这5株均为野毒株,与国内分离的PRRSV变异株(JXA1、HuN、HUN4、HUB1)毒株的序列同源性最高,为96.5%~98.0%。结果表明,山西省内目前流行的PRRSV为Nsp2缺失30个氨基酸的变异毒株。

    2014年01期 v.34;No.205 1-5页 [查看摘要][在线阅读][下载 675K]
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  • 猪流感病毒毒株感染对猪外周血淋巴细胞炎性因子转录时相的影响

    张云;张龙现;王亚宾;李金磊;陈雅君;崔保安;胡慧;

    试验用猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)(毒株)体外感染猪外周血淋巴细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),利用real-time PCR方法对病毒感染不同时间细胞中的病毒量和炎性细胞因子mRNA表达量进行检测。结果显示,感染后1h就可检测到病毒,但病毒量相对较小;在24h时病毒开始大量增殖;在72h病毒量达到最高峰,为1h时20倍以上。IL-1βmRNA的表达量在48h增加到最高;IL-6 mRNA的表达量在感染后1h内显著增加;IL-8mRNA的表达量在12h时达到最大量;IL-12P35mRNA的表达量在72h迅速上升,为对照的56.1倍;IL-12P40mRNA的表达量在1~2h表达量较高;IL-13在72h达到最大值,为对照的30.7倍;IL-17mRNA的表达量在72h达到最大值,为对照的4.9倍;IL-18mRNA的表达量在12h达到对照的1.9倍。结果表明,SIV感染PBMC后,随着病毒的大量复制,多种炎性细胞因子表达量显著增加。

    2014年01期 v.34;No.205 6-9+16页 [查看摘要][在线阅读][下载 396K]
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  • 犬瘟热病毒N蛋白的B细胞抗原表位预测

    张海雷;白换力;薛慧亮;李志萍;苏红艳;唐志文;靳朝;夏志平;

    将1段犬瘟热病毒N蛋白氨基酸序列(GenBank编号为:AEV77096.1)与Gen Bank登录的其他氨基酸序列进行比对,分析其同源性;通过DNAStar生物信息学分析软件中的Protean模块及The PredictProtein server在线蛋白分析工具预测犬瘟热病毒N蛋白的理化性质、二级结构、亲水性、表面可及性、柔韧性、抗原指数、跨膜螺旋、蛋白相互作用位点、蛋白功能位点等特性,并预测其B细胞优势抗原表位。结果显示,犬瘟热病毒N蛋白具有规则的二级结构、亲水性、柔韧性片段多,多处于表面可及性大,抗原指数高,蛋白质相互作用位点区域。潜在的B细胞优势抗原表位为12~18、61~66、243~246、410~415、421~429、434~447、452~456、480~487氨基酸序列。结果表明,本试验预测了犬瘟热病毒N蛋白的B细胞优势抗原表位,为进一步设计犬瘟热病毒的诊断抗原多肽、免疫用抗原多肽和研发血清学检测试剂盒奠定了理论基础。

    2014年01期 v.34;No.205 10-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 692K]
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  • 盐酸川芎嗪体外抗IBDV活性及其作用机制

    张晋强;牛丽;丛向明;白喜云;贺俊平;白元生;马海利;李宏全;

    为在体外成纤维细胞培养体系上探讨盐酸川芎嗪抗鸡传染性法氏囊病病毒的活性及其作用机制,采用MTT法结合细胞病变观察法,通过病毒感染抑制、复制抑制、吸附抑制和直接灭活试验进行评价。结果显示,盐酸川芎嗪在体外对鸡传染性法氏囊病病毒具有较强的作用,其EC50为(92.52±21.13)mg/L,SI≥21.62,最大抑制率达83.7%;盐酸川芎嗪对病毒具有较强的直接杀灭作用,但不能阻止病毒吸附;在复制抑制试验中,盐酸川芎嗪的抗病毒作用具有时间依赖性,分别在病毒吸附0、2、4h时将盐酸川芎嗪加入到体系中,盐酸川芎嗪显示出较强的抗病毒作用,随着病毒吸附时间的延长,盐酸川芎嗪对鸡传染性法氏囊病病毒的抑制作用逐渐减弱。结果表明,盐酸川芎嗪可通过直接杀灭鸡传染性法氏囊病病毒或/和干扰其早期复制过程而表现出抗病毒活性。

    2014年01期 v.34;No.205 21-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 562K]
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  • 检测鸭呼肠孤病毒抗体间接ELISA方法的建立

    孙陈莉;杨瑞;王义敏;赵娜;张小荣;彭大新;吴艳涛;

    RT-PCR扩增鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的σB基因,克隆到pET-32a(+)表达载体,再转化大肠杆菌Transetta(DE3);含有重组质粒pET-σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55 000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Western blotting显示,σB重组蛋白能够与兔抗DRV多抗血清特异性结合。以高亲和NI-NTA树脂在变性条件下纯化、梯度尿素复性的σB重组蛋白为包被抗原,建立了检测DRV抗体的间接ELSIA方法。分别以间接ELSIA方法和血清中和试验对DRV感染鸭血清和SPF鸭血清进行检测,两者的符合率为100%。该间接ELSIA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒和禽流感病毒阳性血清均无交叉反应。

    2014年01期 v.34;No.205 26-29+38页 [查看摘要][在线阅读][下载 438K]
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  • 鸭坦布苏病毒山东株的分离鉴定及其特性

    葛平萍;刁有祥;唐熠;刘鑫;高绪慧;于春梅;曲俊姿;

    采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从山东某地区以瘫痪为主要特征的雏鸭脑组织中分离到1株病毒,并对分离病毒的生物学特性和理化特性进行了研究。结果显示,该病毒与GenBank上已发表的坦布苏病毒核苷酸同源性均高于98%,最高可达99.7%;病毒的ELD50为10-3.17/0.2mL,接种9日龄鸭胚,68h左右鸭胚死亡,胚体出血,肝脏肿大出血,尿囊膜增厚;病毒对胰蛋白酶、酸、氯仿和热敏感,0.5%的胰蛋白酶、pH<5和4.8%的氯仿条件下可将其灭活,56℃水浴20min或60℃水浴15 min可将其灭活,37℃处理24h毒力由10-3.17/0.2 mL下降至10-1.8/0.2mL;Mg2+不能提高病毒在50℃60min的稳定性;病毒未经酸碱处理不具有凝集鸡、鸭、鸽等红细胞的特性。接种7日龄雏鸭,48h后陆续发病,表现为病毒性脑炎;剖检变化为雏鸭脑水肿,脑部毛细血管充血、肝脏出血、腺胃出血、肺出血水肿,临床表现与自然发病相同。结果表明,该病毒分离株为坦布苏病毒。

    2014年01期 v.34;No.205 30-33+44页 [查看摘要][在线阅读][下载 661K]
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  • B亚型禽偏肺病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

    王丽荣;刁有祥;唐熠;鞠小军;于春梅;

    根据GenBank登录的B亚型禽偏肺病毒(JN224985.1)F基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出214bp的目的片段。回收目的片段并与pMD18-T载体连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后,筛选出阳性质粒作为模板,建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物T值在83.0~83.7℃之间,灵敏度为7.9×102拷贝/μL,特异性和重复性较好。本试验建立了检测B亚型禽偏肺病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断以及感染程度的定量分析奠定了基础。

    2014年01期 v.34;No.205 34-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 539K]
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  • 1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定

    薛聪;唐熠;陈琳;崔京腾;欧全宾;孙晓艳;裴苹苹;刁有祥;

    从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料,通过RT-PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料,以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚,盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养,呈现禽偏肺病毒典型细胞病变(CPE):细胞变圆、悬浮,有合胞体形成。将分离株接种于Vero细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序,并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示,与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高,为97.4%~99.3%;与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低,为77.4%~78.1%;而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低,为69.5%~69.7%。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒,将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。

    2014年01期 v.34;No.205 39-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 691K]
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  • 金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK的表达及其多克隆抗体的制备

    李跃;宫鹏娟;夏斐斐;宋军;顾敬敏;张蕾;杨梅;孙长江;冯新;韩文瑜;

    将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b-lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。

    2014年01期 v.34;No.205 45-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 582K]
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  • 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定

    李淼;李春玲;岳磊;宋帅;杨冬霞;

    副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应,同时可以用于特异性的血清学诊断,本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1(1~204aa),P5F2(170~296aa)及P5F3(280~371aa)3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a(+)中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段(280-371aa)是Omp P5的免疫优势决定区。为了进一步对该免疫优势决定区进行抗原表位鉴定,设计了一套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280~371aa片段。每一个短肽合成1对寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描,鉴定出其表位位于336 TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPS Omp P5上的一个抗原表位,为建立一种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础,同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制,以及研究病原菌感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。

    2014年01期 v.34;No.205 50-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 805K]
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  • 健康畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒检测

    林居纯;舒刚;张辉建;曹三杰;文心田;

    采用微量肉汤稀释法检测455株大肠杆菌对24种抗菌药物的敏感性;多重PCR检测菌株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因;采用PCR-RFLP和PCR-测序法对整合子-基因盒进行序列分析。结果显示,455株菌除对头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻呋和阿米卡星耐药率低于40%外,对其余药物表现出高耐药率,99.23%菌株呈多重耐药性;455株菌Ⅰ型整合子阳性率87.69%,Ⅱ型整合子1.98%,未检出Ⅲ型整合子;随机选取的204株整合子阳性菌中174株(85.29%)扩增出了基因盒可变区。基因盒主要以编码氨基糖苷腺苷基转移酶和二氢叶酸还原酶的aadA、dfrA基因为主,耐药基因排列成Ⅰ型整合子8种基因盒,Ⅱ型整合子3种基因盒。Ⅰ型整合子以dfrA1-aadA1(32.76%)基因盒为主,其次是aadA22(24.14%)和dfrA17-aadA5(24.14%)。Ⅱ型整合子以dfrA1-sat2-aadA1(66.67%)为主,Ⅱ型整合子阳性菌含有Ⅰ型整合子-基因盒;菌株含整合子-基因盒越复杂,其多重耐药性越严重。结果表明,本次分离的健康动物肠道大肠杆菌耐药非常严重,整合子-基因盒分布广泛,已成为耐药基因储库,对耐药基因扩散起重要作用。

    2014年01期 v.34;No.205 56-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 601K]
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简讯

人兽共患病

  • 荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用

    钟志军;乔凤;于爽;任志华;徐杰;王玉飞;黄祥明;陈泽良;兰景超;吴孔菊;彭广能;

    采取质粒shuffling方法,将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBR1MCS-2经KpnⅠ酶切后连接,转化DH5α,利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌,获得荧光标记布鲁菌,并用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞J774A.1,探讨其用于细胞侵袭试验的可行性。结果显示,成功构建布鲁菌荧光报告质粒pBBR1-GFP,用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞后,在细胞内观察到带荧光的布鲁菌,且荧光强度与胞内细菌数成正比。细胞侵袭动态试验结果表明,细菌与细胞共孵育45min后,胞内细菌达到饱和。结果表明,成功构建了布鲁菌的荧光质粒报告系统,可用于布鲁菌细胞侵袭试验。

    2014年01期 v.34;No.205 61-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 709K]
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  • 粗糙型布鲁菌M111菌壳的制备

    张瑞安;刘军;蒋大伟;夏力亮;孙洋;祝令伟;纪雪;郭学军;冯书章;

    将含有裂解酶基因重组温控裂解质粒pBBR1MCS∷PR-PL-E电转化至粗糙型布鲁菌M111中,构建重组布鲁菌M111(pBBR1MCS∷PR-PL-E)。重组菌株在28℃培养,42℃诱导表达裂解酶E,从而制备布鲁菌菌壳。绘制布鲁菌生长曲线及裂解曲线,计算裂解率并用透射电镜观察布鲁菌菌壳的形态。结果显示,成功制备了布鲁菌菌壳,温控裂解质粒pBBR1MCS∷PR-PL-E对布鲁菌的裂解率为100%。透射电镜观察可见细菌内容物部分流出,细菌表面出现不同程度的皱缩,细胞形态发生变化。结果表明,本试验成功制备了粗糙型布鲁菌菌壳,初步研究了其基本特性,为下一步开展布鲁菌菌壳疫苗的研究奠定了基础。

    2014年01期 v.34;No.205 66-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 659K]
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  • Omp25蛋白的真核表达及其对巨噬细胞的作用

    吕亚辉;邵萌;杜谦;陈恒;黄勇;童德文;

    本试验旨在构建表达猪布鲁菌(Brucella suis)外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,并探讨Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞生长活性及细胞因子分泌的影响。以猪布鲁菌基因组DNA为模板,设计带有6×His标签的引物克隆Omp25基因,扩增产物克隆入pCI-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定正确后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,检测其对巨噬细胞生长活性和分泌细胞因子的影响。RT-PCR和Western blotting检测结果证实Omp25蛋白获得正确表达。显微镜观察细胞形态表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的形态无明显影响。MTT结果表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的生长活性有轻度但不显著的抑制作用。ELISA检测TNF-α和IL-12蛋白表达水平表明,Omp25蛋白可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。本试验成功构建了表达猪布鲁菌外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,该蛋白对猪肺泡巨噬细胞的细胞形态没有明显影响,对其生长活性有轻度但不显著的抑制作用,可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。

    2014年01期 v.34;No.205 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 729K]
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  • 伪狂犬病病毒gE/gI双基因缺失株的生物学特性

    魏凤;郭广君;吕素芳;张文通;王金良;董炳梅;沈志强;

    为了解gE和gI双基因缺失株伪狂犬病病毒gE-/gI-PRV SA738和野毒株PRV-SA的生物学特性,对该病毒进行了理化特性和体外增殖曲线的研究。结果显示:该缺失株对氯仿、酸、热及冻融次数敏感,从双基因缺失毒株与野毒株在BHK-21细胞上的增殖曲线来看,在病毒培养50h之前野毒株的毒价均高于缺失株,而在50h以后缺失株的毒价又高于野毒株,并且在36h时2株病毒的毒价均达到最高峰。

    2014年01期 v.34;No.205 75-77+82页 [查看摘要][在线阅读][下载 712K]
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  • 2型猪链球菌烯醇化酶的原核表达及其对体外血脑屏障模型通透性影响的检测

    李娜;雷连成;朱僧;孙莹莹;潘风光;孙长江;韩文瑜;

    通过原核表达的方式获得能在多种病原菌表面表达的烯醇化酶(Enolase,Eno),探索Eno在脑膜炎致病过程中的作用。根据GenBank上公布的基因序列设计Eno特异性引物,通过PCR技术扩增2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的Eno基因序列,克隆到pMD18-T载体,进一步亚克隆到原核表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒pET28a-Eno,转化入大肠杆菌BL21Codon Plus(DE3)感受态中诱导表达,经镍离子螯合柱纯化后,检测其对体外血脑屏障模型通透性的影响。结果显示,经1mmol/L IPTG诱导5h为最佳诱导条件,目的蛋白约54 000,与预期蛋白大小相符合;纯化的蛋白Western blotting分析表明,其具有较好的免疫原性;Eno可致体外血脑屏障模型通透性增加。结果表明,Eno作为SS2潜在的毒力因子在SS2引起脑膜炎的致病过程中起到重要的作用。

    2014年01期 v.34;No.205 78-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 696K]
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基础兽医学

  • 重组RTB蛋白对巨噬细胞活化及对NF-κB信号通路的影响

    李松岩;许娜;刘洋;肖世峰;刘林娜;万家余;张建营;孙成彪;周铁忠;刘文森;

    采用重组RTB蛋白刺激RAW264.7细胞,对iNOS、IL-6和TNF-αmRNA表达及IκB-α和NF-κBp65磷酸化蛋白表达进行分析,探讨重组RTB蛋白对巨噬细胞活化及对NF-κB信号通路的影响。结果显示,重组RTB蛋白组RAW264.7细胞iNOS、IL-6和TNF-αmRNA的表达显著高于对照组(P<0.01),并呈现时间和计量依赖性;加入NF-κB抑制剂BAY后,iNOS、IL-6和TNF-αmRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。随RTB刺激RAW264.7时间的延长,IκB-α蛋白的磷酸化程度增强,NF-κBp65磷酸化蛋白表达逐渐增高,表明重组RTB蛋白具有促进巨噬细胞活化及活化NF-κB信号通路的功能。

    2014年01期 v.34;No.205 83-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 682K]
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  • 围产科尔沁牛外周淋巴细胞HSP70的表达

    侯睿;耿万友;丁宁;李光辉;毛景东;鲁金波;杜立银;

    选择经同期发情处理的妊娠科尔沁牛5头(2~3胎),于分娩-14、-6、-2、0、2、6、14d颈静脉采血,分离淋巴细胞,采用RT-PCR、Western blotting法分别检测淋巴细胞的HSP70mRNA与蛋白表达。结果显示,各受试牛的HSP70mRNA与蛋白表达变化趋势基本一致,即从-14d开始逐渐下调,0d最低,继而再逐渐上调。结果表明,HSP70作为淋巴细胞内重要伴侣分子,随着分娩的启动和发生其表达抑制显著增强,但在分娩后被迅速解除,其表达逐渐上调。

    2014年01期 v.34;No.205 87-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 702K]
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  • 非酯化脂肪酸对体外培养犊牛原代肝细胞中炎性因子表达及其活性的影响

    史晓霞;王建国;李玉;宋玉祥;丁红研;韩盈盈;张玉明;殷立恒;王婷婷;张仁和;郭立辉;邓清华;李心慰;李小兵;刘国文;王哲;

    在建立犊牛原代肝细胞体外培养模型的基础上,通过培养液中添加不同浓度的非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acids,NEFAs),运用实时荧光定量PCR和ELISA方法,测定NEFAs对肝细胞中炎性因子TNFα、IL-6和IL-1β的mRNA表达及其活性的影响。结果显示,NEFAs作用肝细胞9h后,与对照组相比,高浓度NEFAs(1.8mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β的mRNA表达水平显著增加(P<0.05),IL-6的mRNA表达水平在2.4mmol/L时极显著增加(P<0.01),低浓度NEFAs(0.6、1.2mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);并且TNFα、IL-1β的活性在NEFAs浓度达到1.8、2.4mmol/L显著高于对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性作用,IL-6的活性在在NEFAs浓度达到1.8mmol/L显著高于对照组(P<0.01),在2.4mmol/L也高于对照组,但差异不显著。结果表明,高浓度NEFAs在一定程度上能引起或加剧奶牛肝细胞炎性反应,可能是导致产后奶牛肝功能炎性损伤主要因素。

    2014年01期 v.34;No.205 92-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 689K]
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  • 不同CO_2气腹压对小型猪循环系统的影响

    张士霞;周志飞;张华;曹峥;王超;张建涛;范宏刚;王洪斌;

    选择30只健康小型猪随机分为A、B、C、D、E等5组。分别以0、0.8、1.06、1.33、1.6kPa的气腹压进行充气腹试验,以探讨不同CO2气腹压对小型猪循环系统的影响。结果显示,A组试验猪血压和心率持续降低。B、C、D、E组试验猪会引起血压和心率的升高。本试验确定了不同气腹压对小型猪循环系统的影响程度是E组>D组>C组>B组。因此,在小型猪腹腔镜手术充气腹时,选用1.33kPa气腹压值对循环系统的影响较小,同时能保证小型猪腹腔的充分膨胀隆起,便于手术操作,从而为今后开展小型猪腹腔镜手术奠定了理论基础。

    2014年01期 v.34;No.205 97-99+104页 [查看摘要][在线阅读][下载 660K]
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  • GnRH受体在山羊结状神经节的分布

    王勃;王志豪;范洁;徐永平;任妮;吴卫妮;金意敏;

    取山羊结状神经节5对,采用免疫组织化学SP法观察促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormon,GnRH)受体在结状神经节的分布特点。结果显示,GnRH受体在结状神经节上广泛分布,神经元、卫星细胞、神经纤维、血管内皮细胞均有不同程度的免疫阳性染色。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质有GnRH受体强阳性产物分布,核不着色;卫星细胞、血管内皮细胞也有强阳性产物分布;神经纤维存在弱阳性产物分布。图像分析结果表明,神经元中GnRH受体的相对表达量与其他非神经结构相比差异性显著(P<0.05)。结果表明,山羊结状神经节中的GnRH受体主要存在于神经元中,山羊结状神经节中的内脏感觉传入神经元对GnRH具有反应性,提示GnRH结状神经节内脏感觉传入神经元的GnRH受体可能作为GnRH对内脏器官的内分泌调节和自主神经对内脏器官的神经调节这2种途径协调作用的节点。

    2014年01期 v.34;No.205 100-104页 [查看摘要][在线阅读][下载 898K]
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  • GHSR-1a在奶山羊胃肠道的分布与表达

    于高水;张文龙;黄勇;赵晓民;李伟;童德文;

    试验采用免疫组织化学、Real-time PCR和Western blotting方法测定ghrelin的功能性受体GHSR-1a(Growth hormone secretagogue receptor-1a,GHSR-1a)在奶山羊胃肠道的分布和表达。免疫组织化学结果显示,GHSR-1a免疫阳性细胞广泛分布于奶山羊胃肠道。在皱胃主要定位于黏膜层和肌层;瘤胃、网胃和瓣胃黏膜层及肌层中也可见GHSR-1a免疫阳性细胞;在小肠主要位于十二指肠、空肠和回肠的黏膜层、黏膜下层和肌层;在结肠、盲肠和直肠GHSR-1a免疫阳性细胞也有广泛分布;GHSR-1a主要表达于内在神经丛神经细胞、胃底腺上皮细胞、肠腺上皮细胞、复层鳞状上皮细胞、平滑肌细胞中。real-time PCR和Western blotting结果显示,皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠GHSR-1a的表达水平相对较高,显著高于瘤胃、网胃和瓣胃的表达(P<0.05)。结果表明,ghrelin可能通过GHSR-1a对奶山羊胃肠功能具有重要的调节作用。

    2014年01期 v.34;No.205 105-109+115页 [查看摘要][在线阅读][下载 1033K]
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  • 雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性

    师润;吕文强;陈陆;杨霞;刘红英;余秋颖;明星;王川庆;

    设计1对引物,建立RT-PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡β1基因表达水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用此方法测定1~20日龄雏鸡不同肠段组织β1基因表达水平。结果显示,从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA;检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致(扩增曲线斜率差<0.1),满足使用比较Ct值法对β1基因mRNA进行相对定量分析的前提;扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明,1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明,鸡肠组织中存在β1基因表达,并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。

    2014年01期 v.34;No.205 110-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 828K]
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  • Solexa测序技术分析鸡与鹌鹑属间杂交雌性和雄性胚胎的差异microRNAs

    郑炜;赵宗胜;李青峰;班谦;李洪涛;梁耀伟;

    分别从孵化3d的已鉴定性别的鸡与鹌鹑属间杂交早期雌性和雄性胚胎组织中提取小RNA,并构建各自的cDNA文库,通过Illumina/Solexa二代测序平台对两样本Small RNA进行高通量深度测序,结合生物信息学的方法对其属间杂交早期的雌性和雄性胚胎中已知的和预测的miRNAs的类型、长度、丰度以及参与的KEGG通路等进行了初步的统计和分析。结果显示,鸡与鹌鹑属间杂交早期雌性胚胎组织的比对序列有16 058 009条,雄性组织有17 943 294条;雌性胚胎预测得到132种miRNA,雄性胚胎预测得到460种miRNA;雌性和雄性样本间差异显著的miRNA有117个(P<0.01);KEGG通路分析表明,这些差异miRNAs的靶基因主要参与了Wnt信号通路、MAPK信号通路、TGF-beta信号通路等与胚胎生长发育相关的途径。结果表明,就已知的miRNAs而言,在鸡与鹌鹑属间杂交雌性和雄性胚胎间存在着一定的差异,这些差异的miRNAs将为后续的功能和调控机理实验研究提供依据。

    2014年01期 v.34;No.205 116-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 736K]
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  • 鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

    王肖祎;苏倩倩;李恩扩;胡敬东;

    应用识别不同表位的鸡白细胞介素18成熟蛋白(Mature chicken interleukin-18,mChIL-18)的2株单克隆抗体(mAb)1G9和2E6,建立检测mChIL-18的双抗体夹心ELISA,并利用此方法对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)人工感染SPF鸡体内mChIL-18的分泌水平进行检测。结果显示,捕获抗体的最佳质量浓度为8mg/L,检测抗体的工作效价为1∶800,待检样品的最佳稀释度为1∶400,检测敏感度可达31.5ng/L,与其他细胞因子等抗原蛋白无交叉反应;跟对照组相比,REV感染鸡体内mChIL-18的表达量在7、14、21、28、35、42、49d均呈现升高,但只有14日龄时表现差异显著(P<0.05)。结果表明,本试验成功建立了ChIL-18的双抗体夹心ELISA,为鸡传染病的细胞免疫学研究提供了可靠方法。

    2014年01期 v.34;No.205 123-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 697K]
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  • L.fermentum 1.2029对坏死性肠炎肉鸡回肠上皮紧密连接蛋白表达的影响

    曹力;杨小军;刘南南;李宗军;孙菲菲;武晓红;姚军虎;

    将240只AA肉鸡随机分为3个处理组:对照组、坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)模型组及乳酸杆菌处理组。28日龄,每组屠宰24只鸡,对各组肉鸡肠道损伤进行肉眼评分,并采集回肠黏膜样本分别用于电镜下形态观察和Real-time PCR检测紧密连接蛋白claudin-1和occludin的表达。结果显示,乳酸杆菌处理组降低了炎症的损伤程度(P<0.05);电子显微镜观察显示,乳酸杆菌处理组鸡回肠上皮微绒毛较NE模型组有改善;real-time PCR分析显示,乳酸杆菌处理组claudin-1和occludin的表达显著高于NE模型组(P<0.05),但与对照组没有差异。该试验结果表明,L.fermentum1.2029可降低NE的损伤程度,并能有效上调NE条件下claudin-1和occludin的表达,显示其具有保护肠道屏障功能的作用。

    2014年01期 v.34;No.205 127-130页 [查看摘要][在线阅读][下载 729K]
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  • 玉米赤霉烯酮对Leydig细胞凋亡及caspase-9、caspase-3蛋白表达的影响

    王亚军;刘青;郑王龙;卞晓娇;顾建红;袁燕;刘学忠;刘宗平;卞建春;

    以不同浓度的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig)细胞进行染毒,采用噻唑蓝比色法观察了ZEA对Leydig细胞活力的影响;流式细胞术分析检测了ZEA对细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化的影响;Western blotting等技术检测了Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP蛋白的表达情况。结果显示,ZEA可明显抑制睾丸Leydig细胞的活力(染毒各组与对照组比较P<0.05),40mg/L染毒组相对活力为40.67%;与对照组比较,5、10、20mg/L ZEA染毒组睾丸Leydig细胞凋亡率均极显著升高(P<0.05),呈明显剂量关系;线粒体膜电位变化测定显示,各染毒组与对照组比,线粒体膜电位均下降(P<0.05),且有明显的剂量关系;Western blotting分析显示,与对照组比较,5、10、20mg/L ZEA染毒组Bax、caspase-9、caspase-3、PARP蛋白表达均上调,bcl-2蛋白表达均下调。结果表明,ZEA能诱导大鼠睾丸间质细胞发生凋亡,Bax、Bcl-2、caspase-9、caspase-3等基因参与ZEA诱导Leydig细胞凋亡的调控。

    2014年01期 v.34;No.205 131-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 884K]
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临床兽医学

  • 4种中药单体物质的体外杀螨活性

    邓云夏;王靖菲;殷中琼;贾仁勇;陈振振;贺常亮;梁晓霞;吕程;

    以苦参碱、对叶百部碱、瑞香素、青蒿素为试验用药,采用浸杀方式测定中药单体对兔疥螨幼虫的离体杀螨活性,并测定最强杀螨活性药物的半数致死浓度(Median lethal concentration,LC50)和半数致死时间(Median lethal time,LT50)。结果显示,在药物质量浓度为10.00g/L时,苦参碱、对叶百部碱、瑞香素和青蒿素的起效时间分别为45.00、127.50、165.00、263.50min,全部死亡时间分别为1 455.00、1 890.00、2 130.00、2 280.00min。质量浓度为25.00g/L的苦参碱在试验24h时的LC50为2.86g/L;质量浓度为25.00、12.50、6.25g/L的苦参碱LT50分别为7.54、9.85、14.55h。结果表明,4种中药单体都具有一定的体外杀螨活性,其中苦参碱的杀螨活性最强,对叶百部碱和瑞香素次之,青蒿素杀螨活性最弱。

    2014年01期 v.34;No.205 136-139+143页 [查看摘要][在线阅读][下载 760K]
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  • 杨树花、千里光、连翘与抗菌药联用对鸡大肠杆菌的体外抑菌作用

    张国祖;贾艳华;郭振环;马仲彬;李荣誉;刘梅;

    采用琼脂稀释法分别测定杨树花、千里光、连翘与头孢噻呋、氟苯尼考、恩诺沙星3种抗菌药联用对大肠杆菌的抑菌效果。结果显示,3味中药与头孢噻呋联用以协同作用为主,与恩诺沙星联用以拮抗作用为主,杨树花和连翘分别与氟苯尼考联用均100%表现为协同作用,千里光与氟苯尼考联用90%表现为协同作用,10%表现为无关作用。结果表明,杨树花、千里光、连翘在体外均可与氟苯尼考联用,且以连翘与氟苯尼考联用效果最好。

    2014年01期 v.34;No.205 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 665K]
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  • 复方中药“禽康散”对人工感染新城疫病毒肉鸡血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的影响

    邓惠丹;杨军;邓俊良;申渝波;左之才;王娅;任志华;

    10日龄的健康艾维茵肉仔鸡250只,随机分为5组。21日龄时除阴性对照组(Ⅳ组)外均用新城疫病毒(Newcastle disease,virus,NDV)强毒株攻毒,各治疗组(Ⅰ~Ⅲ组)在22~25日龄饲料中分别添加0.5%、1.0%、2.0%的复方中药"禽康散",第Ⅳ、Ⅴ组(阳性对照组)不用药。在攻毒前1d和攻毒后1、3(用药后2d)、7(停药后2d)、15(停药后10d)d观察血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的变化。结果显示:Ⅰ、Ⅱ组血清IgG在攻毒15d(停药10d)时与Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);Ⅰ~Ⅲ组血清IgA浓度在攻毒后3、7d均明显高于第Ⅴ组(P<0.05或0.01),以1%治疗组效果最佳;各组之间血清中IgM含量无显著差异(P>0.05)。Ⅰ~Ⅲ组新城疫抗体效价在攻毒7d后各阶段均高于阳性对照组(P<0.05或0.01),以第Ⅲ组最佳。结果表明,日粮添加1.0%~2.0%质量分数的"禽康散"能明显增加血清中IgG、IgA含量和新城疫抗体效价,从而提高机体体液免疫功能,达到提高机体抗NDV的能力。

    2014年01期 v.34;No.205 144-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 663K]
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  • 日粮添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道菌群多样性的影响

    刘丹;杨俊花;罗爱琼;刘家国;缪德年;赵志辉;

    900羽21周龄海兰褐蛋鸡随机分成5组,每组6个重复,每个重复30羽。分别在基础日粮中添加0、0.1%、0.5%、2.5%、5%NaHCO3,持续10周。结果显示,与对照组相比,0.1%组蛋鸡盲肠乳酸菌数量增加,大肠杆菌数量降低,菌群多样性指数提高(P>0.05)。0.5%组蛋鸡粪便pH值显著提高(P<0.05),乳酸菌数量增加,菌群多样性指数提高(P>0.05)。2.5%、5%组蛋鸡粪便pH值、水分含量极显著高于其他组(P<0.01)。同时,2.5%、5%组盲肠乳酸杆菌数量降低(P>0.05或P<0.05),大肠杆菌数量增高(P>0.05或P<0.05),5%组菌群多样性指数亦显著降低前3组(P<0.05)。结果表明,日粮添加NaHCO3超过2.5%,蛋鸡腹泻严重,肠道菌群平衡严重破坏。而当NaHCO3的添加量低于0.5%时,肠道有益菌数量和菌群多样性指数呈增加趋势,蛋鸡生产性能维持正常。因此,本试验提示蛋鸡生产中饲料添加剂NaHCO3最高耐受量为0.5%。

    2014年01期 v.34;No.205 148-152+164页 [查看摘要][在线阅读][下载 860K]
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  • 槲皮素对Aroclor1254诱导的孕鼠肝细胞CYP450表达的影响

    徐丽娜;孙立云;李楠;钟秀会;马玉忠;

    采用胶原酶二步灌流法获取怀孕大鼠的原代肝细胞,以Aroclor1254诱导肝细胞损伤,用不同剂量的槲皮素分别处理损伤的肝细胞24~72h,RT-PCR及Western-blot法检测肝细胞中细胞色素酶P450(CYP450)的表达。结果显示,槲皮素处理损伤的肝细胞后,肝细胞CYP1A1、CYP2B1及CYP2E1的表达随槲皮素浓度的增加和处理时间的延长而呈先升高后降低的趋势。10mg/L Aroclor1254是诱导体外培养的原代肝细胞损伤的最适质量浓度,10μmol/L槲皮素是对损伤的怀孕大鼠肝细胞的最佳保护浓度。结果表明,槲皮素对损伤的怀孕大鼠肝细胞具有保护作用。

    2014年01期 v.34;No.205 153-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 936K]
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动物科学

  • 澳系进口荷斯坦奶牛CXCR1基因遗传多态性与泌乳性状及体细胞评分的关联性分析

    张美荣;廖想想;陈丹;毛永江;刘坤;陈亮;王杏龙;杨章平;杨利国;

    采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对以海丰奶牛场588头澳系进口荷斯坦牛牛趋化因子受体1(Chemokine receptor 1,CXCR1)基因的遗传多态性进行分析;采用混合动物模型分析CXCR1基因2个突变位点与测定日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、305d产奶量、305d乳脂量、305d乳蛋白量及体细胞评分7个性状的相关性,寻找可用于生产实际的分子标记。结果显示,CXCR1基因5′侧翼区-1830位点发生了A→G的突变,检测到AA、AG和GG 3种基因型,频率分别为0.684、0.289和0.027,等位基因A和G的频率分别为0.828和0.172;GG基因型奶牛的日产奶量、SCS和305d产奶量均极显著高于AA基因型(P<0.01),而其乳脂率和乳蛋白率却显著低于AA基因型奶牛(P<0.05)。编码区783位点仅发现AA和AC 2种基因型,基因型频率分别为0.886和0.114,等位基因A和C的频率分别为0.943和0.057。AA型的个体的日产奶量、305d脂肪产量和305d蛋白产量极显著高于AC型个体,而其乳脂率、乳蛋白率和SCS却极显著低于AC型个体(P<0.01)。结果表明,CXCR1基因遗传突变对澳系进口荷斯坦牛泌乳性状和乳房炎抗性有较大的遗传效应,可用于澳系进口荷斯坦牛的分子标记辅助选择。

    2014年01期 v.34;No.205 159-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 848K]
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  • 猪卵巢发育的组织学特点及糖组织化学

    盛洁;胡蓉;袁苏娅;文依信;杨懿;张龙祥;卿素珠;

    运用组织学常规石蜡切片-HE染色和过碘酸-雪夫染色(PAS)方法,分别对3日龄及165日龄育成猪卵巢组织结构、各级卵泡的发育变化特点及其黏多糖分布情况进行了研究。结果显示,3日龄的猪卵巢皮质、髓质界限模糊,皮质部分由外向内依次分布着密集的卵原细胞和卵原细胞巢、共质体样的卵原细胞群,皮质深层与髓质相邻处分布着合胞体样的卵母细胞簇状结构和卵泡。育成猪卵巢中,皮、髓质界限明显,能观察到原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及近成熟卵泡,但是很少能见到黄体的结构。PAS染色结果表明,3日龄的猪卵巢中PAS阳性反应主要分布于卵原细胞周围的基质、卵原细胞巢和合胞体的外膜上,以及原始卵泡周围的基质、初级卵泡的卵泡膜及刚形成的透明带上,此外卵巢的白膜、髓质的结缔组织、血管壁及卵巢网周围也可见到广泛的阳性着色。育成猪卵巢中,PAS阳性反应主要分布于基质、生长卵泡的卵泡膜、卵泡的透明带、次级卵泡的卵泡液、黄体被膜及髓质的结缔组织和血管壁。

    2014年01期 v.34;No.205 165-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 1543K]
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  • 羊驼毛囊干细胞分离、培养与鉴定

    赵奎;庞全海;王振华;王恩峰;

    采用0.2%中性蛋白酶Ⅱ和0.25%胰酶∶0.02%EDTA(1∶1)"两步酶"消化法从羊驼背部皮肤分离得到羊驼毛囊干细胞。用无血清角质细胞培养基(K-SFM)培养进行形态学观察、细胞生长曲线克隆形成率及免疫组化染色检测。结果显示,细胞生长曲线表明,不同代次毛囊干细胞接种前3d生长缓慢,4~6d进入倍增期,有无限增殖的趋势,所分离的羊驼毛囊干细胞具备毛囊干细胞特征(体积小、立体感强),呈现未分化特征;CK19、CK15、β1-integrin和CD34免疫组化染色阳性;第3、5、7、9代克隆形成率分别为(32.7±2.27)%、(47.0±3.46)%、(46.3±3.18)%和(43.3±3.76)%。结果表明,用"两步酶"消化法成功分离获得羊驼毛囊干细胞,无血清角质细胞培养基(K-SFM)可使羊驼毛囊干细胞体外维持未分化状态并传代至12代。

    2014年01期 v.34;No.205 171-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 1020K]
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