预防兽医学

  • 经密码子优化的小反刍兽疫病毒H蛋白在昆虫细胞中的表达

    刘拂晓;吴晓东;李林;柳增善;王志亮;

    小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)属于副黏病毒科、麻疹病毒属成员。本实验室已经证明,该病毒的囊膜糖蛋白H蛋白在未经密码子优化条件下难以在昆虫细胞中表达。本研究首先对其密码子进行优化,然后构建了在昆虫细胞中表达该蛋白的重组杆状病毒。经Western-blot和间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒在昆虫细胞中能够表达H蛋白,但表达量相对较低。

    2014年04期 v.34;No.208 521-525页 [查看摘要][在线阅读][下载 404K]
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  • 抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性

    包英夫;宋德光;贺文琦;张希牧;李吉达;王改丽;毕经影;赵魁;高丰;

    利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸同源性分别为84.3%(H7与H38)~100%(H5与H6)不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1~H49的VH区段自动聚类为2个相对独立的单位。通过BLAST-N程序在GenBank数据库在线搜索,并结合其他参考序列进行比较分析,分析数据显示,D片段从9到46个碱基长度不等,无论是在核苷酸还是氨基酸序列上,其同源性均存在高度的变异性;结合其亲水性分布图可知,可变区的亲水性氨基酸主要分布在VH区域和D高变区,对照抗原指数图和表面可能性图,亲水性强的VH区域和D高变区易形成抗原决定簇。

    2014年04期 v.34;No.208 526-529页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K]
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  • 传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制

    刘静静;王永山;欧阳伟;夏兴霞;潘群兴;王晓丽;毕振威;诸玉梅;朱瑞良;

    为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P>0.05)。

    2014年04期 v.34;No.208 530-535页 [查看摘要][在线阅读][下载 520K]
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  • 欧亚类禽H1N1与古典H1N1亚型猪流感病毒NA基因遗传进化分析

    王伟利;孟庆峰;丛彦龙;冉伟;朱利塞;杨金生;钱爱东;

    本研究对2011年分离自吉林省猪群的3株流感病毒进行了遗传进化分析。结果表明欧亚类禽H1N1猪流感病毒和古典H1N1猪流感病毒在吉林省猪群中共同流行,因此加强猪流感流行病学调查具有重要意义。

    2014年04期 v.34;No.208 536-540页 [查看摘要][在线阅读][下载 566K]
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  • 雏鸭感染坦布苏病毒后对其生长性能和血液生化指标的影响

    王友令;袁小远;于可响;张玉霞;艾武;杨金兴;徐怀英;李玉峰;王莉莉;

    将200只1d龄雏鸭随机分为2组,攻毒试验组150只,对照组50只,自由采食,预饲7d。8d龄时按100ELD50感染剂量进行雏鸭攻毒,攻毒7d内每日称取体质量并采血分离血清进行生化指标检测。攻毒3d后攻毒组体质量与对照组存在显著差异(P<0.01),攻毒组谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺转移酶(GGT)、胆碱酯酶(CHE)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(Cre)、尿酸(UA))等指标各自在不同时间阶段与对照组存在显著差异(P<0.01)。所以雏鸭感染坦布苏病毒后不仅对其生长产生抑制,而且对机体器官尤其是肝脏和肾脏的性能造成影响。以上研究雏鸭感染坦布苏病毒后对其生长性能和血液生化指标的影响,为鸭感染坦布苏病毒的致病机理提供了理论依据。

    2014年04期 v.34;No.208 541-545+559页 [查看摘要][在线阅读][下载 412K]
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  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在Marc-145细胞中的表达

    田志平;薛江东;霍晓伟;刘锴;王学理;杨明霞;马徳慧;

    针对PRRSV E基因设计1对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,以PRRSV CC-1株为模版进行RT-PCR扩增,获得带有酶切位点的目的片段插入pMD18-T载体,对阳性重组质粒进行测序鉴定。将阳性质粒进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切,回收目的片段将其插入EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的真核表达载体pEGFP-N1中构建重组质粒pEGFP-N1-E,将重组质粒用脂质体转染Marc-145细胞,通过荧光显微镜观察显示,在转染后24h出现荧光,48h出现荧光高峰,筛选阳性细胞株,进行目的基因转录、Western blot检测目的蛋白的表达鉴定。结果表明:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-E,建立了稳定表达的细胞株。为研究E蛋白如何与宿主细胞结合形成通道,PRRSV吸附、穿入宿主细胞的作用机理以及筛选特效的粒子通道阻断剂奠定了基础。

    2014年04期 v.34;No.208 546-550页 [查看摘要][在线阅读][下载 510K]
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  • 应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果

    杨宇航;宋纪伟;时坤;曾范利;李健明;刘红娜;王文玉;郝俊伟;刘东旭;杜锐;

    为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。

    2014年04期 v.34;No.208 551-559页 [查看摘要][在线阅读][下载 1648K]
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  • 5种外来病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

    苗富春;付云红;张守锋;刘晔;扈荣良;李月红;

    通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350~550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。

    2014年04期 v.34;No.208 560-563+570页 [查看摘要][在线阅读][下载 547K]
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  • APEC强毒力岛核心基因irp2、fyuA敲除对其致病性影响的研究

    邵颖;涂健;汪雪雁;周秀红;白灏;韩先干;祁克宗;

    采用Red同源重组技术分别构建出APEC irp2单基因敲除株△AE17和irp2、fyuA双基因敲除株△△AE17。运用活菌计数法分别观察AE17、△AE17、△△AE17黏附鸡胚成纤维细胞DF-1的能力。并且应用Real-time PCR检测AE17、△AE17和△△AE17中的luxs,pfs,tsh,ibeA,stx2f,iss,ompA,fimC 8个毒力基因转录水平。结果成功构建出基因敲除株△AE17和△△AE17,它们黏附DF-1细胞的能力分别下降为AE17的66.04%和53.54%。同时,Real-time PCR结果显示,△AE17的luxs,iss,ompA和fimC等4个毒力基因的转录水平均极显著下降(P<0.01),△△AE17的luxs,pfs,tsh,iss,ompA和fimC等6个毒力基因的转录水平极显著的下降(P<0.01)。结果表明强毒力岛中核心基因的敲除能够减弱APEC黏附DF-1的能力,并且使其毒力基因的转录水平有所降低。irp2、fyuA双基因敲除较irp2单基因敲除对APEC的致病性影响更显著。

    2014年04期 v.34;No.208 564-570页 [查看摘要][在线阅读][下载 722K]
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  • 基于牛支原体P81基因环介导等温扩增方法的建立及应用

    金云云;王静梅;剡根强;

    为快速检测牛支原体(M.bovis),根据GenBank中登录的M.bovis P81基因序列设计特异性引物,通过条件优化,建立了M.bovis环介导等温扩增(LAMP)检测方法。将该方法的灵敏度与巢式PCR进行对比,并用其检测牛支原体外的其他几种病原菌,同时对疑似感染M.bovis的临床病料进行检测。该方法的灵敏度比巢式PCR高103倍,最低检出限为1.1ng/L,对其他几种病原菌的检测结果均为阴性,临床病料检测结果与分离培养符合率为100%。建立的M.bovis LAMP检测方法灵敏度高、特异性强、检测快速准确,且不需要专门的仪器设备,可用于牛支原体病的临床检测。

    2014年04期 v.34;No.208 571-577+582页 [查看摘要][在线阅读][下载 859K]
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人兽共患病

  • 犬源大肠杆菌耐药与毒力的分子特征

    纪雪;王嵘;孙洋;赵相胜;郭学军;刘军;祝令伟;冯书章;

    从9份病犬血便和6份健康犬粪便样品中分离出17株大肠杆菌,分别进行了生化鉴定,耐药基因blaCTX-M、blaTEM和blaSHV以及24种毒力基因的PCR扩增,13种抗菌药的药敏检测,以及ESBL表型鉴定、MLST分型、菌株分群和质粒分型。研究发现,病犬分离出的大肠杆菌多为致病性的ESBL表型耐药菌,携带多种质粒以及blaCTX-M和/或blaTEM-1基因,检测到10种毒力相关基因,健康犬分离出的大肠杆菌对多数抗菌药敏感,绝大部分未检测到质粒及blaCTX-M、blaTEM和blaSHV耐药基因。本研究从健康犬大肠杆菌分离株检测到3种新的ST型,分别为ST4001、ST4002和ST4003。结果表明,犬致病性大肠杆菌耐药情况十分严重,其临床治疗难度以及耐药性传播风险将加大,并对于人类健康具有潜在威胁,应予以重视。

    2014年04期 v.34;No.208 578-582页 [查看摘要][在线阅读][下载 536K]
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  • 检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌的比色LAMP法的建立与应用

    韩明明;刘旭平;母连志;赵静;刘慧;刘晓飞;

    为了快速有效检测水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌,本研究结合金属指示剂HNB特性建立了快速检测绿脓杆菌比色LAMP法。根据绿脓杆菌外毒素A基因设计引物,建立了检测LAMP法;并且对该方法进行了特异性、灵敏性分析;同时进行了初步应用。结果显示,该方法特异性强,灵敏性好,可检测167CFU/mL的菌体,对病貂肺脏检出率高。结果表明,该比色LAMP法可以有效地检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌。

    2014年04期 v.34;No.208 583-587页 [查看摘要][在线阅读][下载 645K]
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基础兽医学

  • PYY对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6分泌的影响

    李志强;崔敏;陈福军;李苏楠;张晓静;薛文静;刘红梅;陈巍;柳巨雄;

    为明确PYY对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本试验分离培养健康小鼠腹腔巨噬细胞,不同浓度PYY预处理后,以LPS刺激。ELISA方法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量,半定量PCR方法检测细胞中TNF-α、IL-6mRNA表达变化。结果显示:高浓度的PYY1-36(10-9~10-7 mol/L)和PYY3-36(10-8~10-7 mol/L)对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α分泌具有显著抑制作用(P<0.05);PYY1-36对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌无明显作用(P>0.05);不同浓度PYY3-36(10-11~10-7 mol/L)对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌均具有显著抑制作用(P<0.05)。表明PYY对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α及IL-6的分泌具有一定的抑制作用,提示PYY可能通过抑制炎性细胞因子的分泌而抑制炎症性疾病的发生发展。

    2014年04期 v.34;No.208 588-592页 [查看摘要][在线阅读][下载 881K]
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  • 银杏内酯A对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

    董海兵;夏方;郭勋;胡汐柔;吕爽;张立艳;白换力;吴帅成;付本懂;申海清;韦旭斌;伊鹏霏;

    为了研究银杏内酯A对非特异性肺损伤小鼠的保护作用,采用脂多糖(LPS)滴鼻法建立了小鼠急性肺损伤(ALI)模型。于造模前1h给予银杏内酯A(50,100mg/kg),在LPS滴入后18h检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,观察肺部组织学的病理变化。结果表明:银杏内酯A可以显著抑制肺组织中炎性细胞的浸润,抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)炎性细胞因子的产生。由此得出结论,银杏内酯A对LPS诱导的小鼠ALI具有一定的保护作用。

    2014年04期 v.34;No.208 593-595+600页 [查看摘要][在线阅读][下载 894K]
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  • 三段冷却方式对淘汰奶牛背最长肌宰后生化变化和嫩度的影响

    孟质文;张瑞红;安玥;薛冰;韩冬雪;贺旺琳;俞龙浩;

    分别取淘汰奶牛的左侧背最长肌,在2℃冷却24h作为对照组;右侧背最长肌在2℃冷却3h,15℃冷却6h,然后在2℃冷却15h(三段冷却方式),作为处理组。测定结果显示,对照组的肌肉中心温度宰后10h时已降至4.1℃,处理组肌肉中心温度在宰后3~9h维持在(16±0.5)℃范围内,到宰后13.5h降到4℃。处理组宰后8和24h的肌糖原含量显著低于对照组,宰后8h处理组的pH值显著低于对照组。这一结果表明,宰后4h开始处理组的肌糖原分解速度快于对照组,从而加快宰后处理组pH值的降低速度。处理组宰后8,24,48h的肌节长度显著大于对照组,宰后1和3d的剪切力值显著低于对照组。这一结果提示,淘汰奶牛宰后在2℃持续冷却,可能导致背最长肌的严重冷收缩,从而对嫩度产生负面影响,三段冷却方式可以改善淘汰奶牛宰后嫩度品质。

    2014年04期 v.34;No.208 596-600页 [查看摘要][在线阅读][下载 666K]
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  • 环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶联合用药在猪体内的血浆药动学

    张巧艳;林晶;毛江昌;汪建妹;吉小凤;钱鸣蓉;

    采用高剂量CIP(20mg/kg体质量)和SMM(100mg/kg体质量)联合肌注给药,同步检测试验猪各采血点的血药浓度,通过DAS药物动力学程序软件分析血药浓度—时间数据。结果显示:CIP和SMM在联用时药时数据均符合一级吸收二室开放模型,CIP主要的药动学参数:t1/2为(4.98±0.60)h,Vd为(6.61±0.81)L/kg,AUC为(21.79±1.01)(mg/L)·h,Cmax为(7.56±0.26)mg/L,t1/2Ka为(0.93±1.86)h;SMM主要的药动学参数:t1/2为(4.98±0.92)h,Vd为(1.06±0.19)L/kg,AUC为(679.99±13.17)(mg/L)·h,Cmax为(72.75±3.26)mg/L,t1/2Ka为(0.72±0.36)h。联合用药符合生产中多种药共用的情况,为以后多类属药物残留消除规律研究提供参考。

    2014年04期 v.34;No.208 601-605页 [查看摘要][在线阅读][下载 714K]
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  • 质粒介导的喹诺酮耐药基因在动物源金黄色葡萄球菌的流行分布

    王丽华;吕殿红;张荟;杨彪;魏文康;蒋红霞;

    为了解广东省动物源金黄色葡萄球菌耐药现状、分析耐喹诺酮类金黄色葡萄球菌耐药分子特征,本研究从2010—2011年广东33个养殖场的不同动物来源的样本中分离鉴定出46株金黄色葡萄球菌,采用二倍琼脂稀释法测定对14种抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐喹诺酮金黄色葡萄球菌grlA、grlB、gyrA、gyrB基因在喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变特征、质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因(qnr、aac6′-Ib-cr、oqxA和qepA)的流行分布特征,同时还检测了β-内酰胺酶编码基因(blaCTX-M、blaCMY和blaSHV)、质粒介导金黄色葡萄球菌耐氟苯尼考的基因(cfr和fexA)和万古霉素耐药基因(vanA、vanB和vanC)。结果表明,46株金黄色葡萄球菌对克林霉素耐药率最高为67%,对环丙沙星和氟苯尼考耐药率为52%,对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、红霉素、四环素和复方新诺明的耐药率在40%~50%之间,对苯唑西林和氯霉素耐药率为28%,对妥布霉素耐药率为13%,对头孢噻肟的耐药率在10%左右,有2株耐万古霉素。20株耐环丙沙星金黄色葡萄球菌的grlA和gyrA基因的QRDR发生了碱基突变并导致编码的氨基酸发生改变,GrlA氨基酸只有1种突变模式,Ser80→Phe,而GyrA氨基酸存在3种突变模式:Ser84→Leu,Ala或Phe。PMQR基因中,oqxA检出率最高(80%),其次是aac6′-Ib-cr占13%,qnrS1检出3株、qnrD检出2株。检测到2株菌株携带超广谱β-内酰胺酶编码基因blaSHV-12;23株氟苯尼考耐药菌株全部携带fexA基因,其中3株同时携带cfr基因;2株耐万古霉素菌株未检测到相关耐药基因。广东省动物源金黄色葡萄球菌多重耐药现象较为普遍,本研究首次在动物源金黄色葡萄球菌中检测到超广谱质粒编码的喹诺酮耐药基因流行分布广泛,大多数菌株同时携带2种以上质粒编码的耐药基因,提示养殖过程或治疗过程中使用任何一种药物(尤其是动物促生长剂)都可以筛选出耐药菌株。

    2014年04期 v.34;No.208 606-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 676K]
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  • 连翘酯苷诱生干扰素-γ对AAⅠ诱导的RTECs转分化的影响

    赵海焦;田娅慧;候晓林;高磊;吴国娟;张中文;

    体外培养小鼠RTECs,将其随机分为6组,CCK-8法测连翘脂苷对RTECs的增殖率及存活率的影响,ELISA检测转化生长因子β1(TGF-β1)和干扰素-γ的含量,RT-PCR和Western blot检测CK18和Smad7等相关因子的表达变化。结果显示连翘酯苷质量浓度为160mg/L以下对RTECs无毒性,且诱生干扰素2.392μg/L;用药E组与模型B组比较TGF-β1表达显著下降(P<0.01);用药组与模型组相比Smad7mRNA极显著高表达(P<0.01)、CK18mRNA显著高表达(P<0.05),而vimentin、α-SMA mRNA抑制表达(P<0.01);Western blot结果表明上调了Smad7的表达量。试验表明连翘脂苷可以提高Smad7的表达量,阻止Smad2/Smad3磷酸化,抑制TGF-β1/Smads信号通路,有效改善AAI诱导的肾小管上皮细胞转分化。

    2014年04期 v.34;No.208 613-617+632页 [查看摘要][在线阅读][下载 936K]
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  • HSP27和Annexin A2蛋白对PRRSV感染的影响

    曹宇航;王斐;刘晓云;张潇;逄大欣;张明军;任林柱;

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵染Marc145过程中HSP27和Annexin A2蛋白可参与病毒粒子的组装过程,且HSP27可起到抑制侵染早期细胞凋亡,增加病毒复制时间的作用。本研究分别构建HSP27和Annexin A2下调的Marc145细胞系,经PRRSV感染后发现,与空白对照相比,两者子代病毒TCID50值有明显下降。这一结果为研究PRRSV侵染过程及HSP27和Annexin A2调控机制奠定了基础,也为疫苗的研制提供了新的思路。

    2014年04期 v.34;No.208 618-621+684页 [查看摘要][在线阅读][下载 1001K]
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临床兽医学

  • 健康与子宫内膜炎奶牛阴道菌群结构的比较研究

    孙城涛;赵静;王军;李向楠;吕文发;

    利用16SrDNA结合PCR-DGGE技术分析比较了产后45d健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛阴道内细菌群落多样性及其差异,并通过切胶、克隆测序等步骤分析了奶牛阴道细菌种类。研究结果表明,患病奶牛DGGE图谱的条带数量、多样性指数均显著高于健康奶牛;健康奶牛阴道优势菌主要有清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei subsp.)、魏斯杆菌(Weissella koreensis sp.)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),而患病组奶牛阴道内此3种优势菌含量显著降低或缺失,且也无其他明显优势菌存在;从健康和患病奶牛阴道内均分离出脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、溃疡拟杆菌(Bacteroides helcogenes)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae)、普氏菌(Prevotella dentalis)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens str.)和肠球菌(Enterococcus hirae)等常见病原微生物,在患病奶牛阴道内分离出大肠杆菌(Escherichia coli str.K-12 substr.)、梭杆菌(Fusobacterium nucleatum subsp.)等特定致病菌。研究结果提示,子宫内膜炎奶牛阴道内菌群结构比健康奶牛更为复杂,且无优势菌,阴道菌群结构失衡可能是奶牛发生子宫内膜炎的原因。

    2014年04期 v.34;No.208 622-627页 [查看摘要][在线阅读][下载 814K]
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  • MAPKs信号通路在镉致大鼠大脑皮质神经细胞毒性中的作用

    江辰阳;徐卉;胡飞飞;张康保;袁燕;刘学忠;卞建春;刘宗平;

    为了研究MAPKs信号通路在镉致大鼠大脑皮质神经细胞毒性中的作用,对体外培养的神经细胞用不同浓度醋酸镉(0、5、10、20μmol/L)作用12h,通过免疫组化和免疫印迹法检测了MAPK蛋白磷酸化水平,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化。结果表明,与对照组相比,各染毒组细胞ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平随染毒剂量增加而显著升高(P<0.05或P<0.01),细胞核出现固缩浓染、碎裂等典型的凋亡特征。说明MAPKs信号通路激活在镉致大鼠大脑皮质神经细胞毒性中发挥作用。

    2014年04期 v.34;No.208 628-632页 [查看摘要][在线阅读][下载 1040K]
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  • 静脉注射草酸钾对犬肾功能和肾组织结构的影响

    关华伟;王亨;Walaa Mohamaden;李建基;

    为研究草酸钙尿结石期间犬肾功能和肾脏组织结构变化,将10只比格犬随机分为2组,每组5只。按体质量(0.13mL/kg)经头静脉对处理组犬每天注射草酸钾溶液(0.5mol/L),对照组犬注射等剂量的生理盐水,每天3次,连续注射7d。观察犬的临床表现,每天采集的血清用于生化检查;在最后1次注射8h后,用手术方法采取肾脏,通过HE&Pizzolatos染色和过碘酸—雪夫氏染色(PAS)以及扫描电镜(SEM)与透射电镜(TEM)观察其病理组织结构和超微结构的变化。结果显示,处理组犬肾有点状出血灶,肾小球呈不同程度的破坏,肾小管中有大量结晶沉积,间质内有炎性细胞浸润;足细胞核皱缩、足突排列紊乱,有明显融合现象,线粒体脊断裂、双层膜结构消失;血清生化检查结果表明肾脏虑过功能下降。因此,草酸钾可导致犬肾小球功能下降,损伤肾小管上皮细胞,草酸钙结晶可在肾小管内大量沉积,并进一步导致肾功能衰退。

    2014年04期 v.34;No.208 633-637页 [查看摘要][在线阅读][下载 1032K]
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  • 胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞CPT-Ⅰ和CPT-ⅡmRNA表达的影响

    丁红研;李玉;史珍;杨威;张仁和;杨文涛;邓清华;刘国文;王哲;李小兵;

    体外原代培养犊牛肝细胞,添加不同浓度的胰岛素(insulin,INS)(0、1、10、100、1 000nmol/L)和胰高血糖素(glucagon,GLN)(0、1、10、100、1 000nmol/L),每个处理做3个重复,分别培养1h后,提取总RNA。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,检测肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅰ)和肉碱棕榈酸转移酶Ⅱ(carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅱ)mRNA表达的变化。结果显示,随着培养液中INS含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量逐渐降低,呈现一定的剂量依赖性。随着培养液中GLN含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量均升高,呈现一定的剂量依赖性,且当GLN的添加浓度高于100nmol/L时,CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量显著升高(P<0.01)。结果表明,INS可在一定程度上抑制脂氧化关键酶的表达,GLN可显著促进脂氧化关键酶的表达。

    2014年04期 v.34;No.208 638-640+652页 [查看摘要][在线阅读][下载 748K]
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  • 亚硝酸盐中毒抑制小鼠成体神经发生

    王久涛;张伟;安磊;卢习;宋玲珍;张亚妹;颜润川;胡新德;陈树林;赵善廷;

    雄性成年昆明小鼠分为亚硝酸盐染毒组和生理盐水对照组,通过灌胃进行亚硝酸盐染毒,用BrdU腹腔注射和免疫组织化学方法研究齿状回神经干细胞的增殖和新生细胞的存活状况,用多重免疫荧光标记研究神经干细胞的分化和迁移方向。结果显示,染毒组小鼠齿状回颗粒层中的BrdU阳性细胞数量、存活率均极显著低于对照组(P<0.01),表明亚硝酸盐中毒对小鼠新生神经干细胞的增殖和存活产生了影响。染毒组BrdU/NeuN双阳性细胞的数量极显著低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,染毒组中神经干细胞的迁移方向无显著性差异(P>0.05)。结果表明,亚硝酸盐中毒能显著抑制小鼠神经干细胞增殖,降低新生细胞的存活率。

    2014年04期 v.34;No.208 641-646页 [查看摘要][在线阅读][下载 1444K]
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  • 钼对TM3小鼠睾丸间质细胞周期和凋亡的影响

    杨自军;宋超;曹晓丹;郭书周;张菲菲;尚泽松;

    以体外培养的小鼠睾丸间质细胞系TM3 为材料,加入不同质量浓度的钼酸钠溶液(0,10,20,40,80,160mg/L)染毒培养,分别在干预4,8,12,24,48h采用MTT法检测细胞的增殖。干预48h后,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的变化。结果表明:与对照组相比,不同剂量钼酸钠作用24h后,睾丸间质细胞的增殖活性均受到抑制;不同质量浓度的钼酸钠作用48h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,20mg/L及其以上剂量组G0/G1期细胞百分率与对照组相比显著升高(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,各剂量组TM3 小鼠睾丸间质细胞凋亡率显著升高,差异极显著(P<0.01);细胞尾部DNA含量及细胞尾长随着钼剂量的增加呈不同程度的增加,且存在着剂量—效应关系。结论说明钼能够引起睾丸间质细胞周期的紊乱,并诱导睾丸间质细胞发生DNA损伤和凋亡。

    2014年04期 v.34;No.208 647-652页 [查看摘要][在线阅读][下载 1051K]
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动物科学

  • 日粮中添加女贞子CO_2超临界萃取物对于猪免疫性能的影响

    王佳丽;单安山;刘天阳;张超;

    试验旨在研究不同添加水平女贞子CO2超临界萃取物(supercritical CO2ligustrum lucidum extract,LLE)对猪免疫功能的影响。选择健康无病、体质量接近(平均体质量为7.43kg)的杜×长×大三元杂交断奶仔猪96头,公母各半,随机分为4个处理组,每个处理4个重复,每个重复6头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.05%、0.1%、0.2%的LLE。结果表明:(1)免疫后14、78、114d各LLE组猪瘟(classical swine fever virus,CSFV)和口蹄疫(foot and mouth disease virus,FMDV)抗体效价相对于对照组均有一定提高,第114天,0.1%、0.2%LLE组CSFV抗体效价相对于对照组分别有显著提高(P<0.05)。(2)不同阶段猪血清溶菌酶水平随添加LLE量的提高有提高趋势,但没有达到显著水平(P>0.05)。(3)0.05%和0.2%LLE组断奶仔猪脾脏指数相对于对照组有上升趋势(P>0.05);不同水平LLE组断奶仔猪胸腺指数相对于对照组也均有提高,但不显著(P>0.05)。综合分析,饲粮中添加LLE能够在一定程度上改善猪的免疫性能。

    2014年04期 v.34;No.208 653-657+684页 [查看摘要][在线阅读][下载 814K]
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  • 猪精子与慢病毒作用机制的探讨

    周均云;习欠云;关立增;江青艳;吴珍芳;张永亮;

    在制备转基因动物的方法中,精子载体法(与质粒结合)因操作简单而备受关注,但整合效率低,遗传稳定性较差,而慢病毒载体具有良好的感染效率和整合效果,慢病毒与精子孵育制备转基因动物是转基因方法的有益尝试。本研究采用这一新方法成功制备出转基因猪。为了探索精子与慢病毒的相互作用机制,首先制备慢病毒,经梯度稀释法测定其滴度为1.2×105 ifu/mL。然后,用DNA酶消化去除慢病毒液中载体质粒,将慢病毒液与精子在17℃下共孵育2h后,再用RNA酶消化慢病毒颗粒,对精子进行RT-PCR、PCR和FISH检测。结果提示,慢病毒颗粒可能进入精子中。该发现为这一转基因新方法的建立提供了理论依据。

    2014年04期 v.34;No.208 658-663页 [查看摘要][在线阅读][下载 1046K]
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  • 地衣芽孢杆菌对肉鸡肠道菌群和小肠形态学的影响研究

    杨家军;钱坤;章薇;许月英;陈胜;唐焰;

    将408只青脚麻鸡随机分配成4组,每组3个重复,每个重复34只。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加地衣芽孢杆菌,依次为低剂量组(1×107 CFU/g),中剂量组(5×107 CFU/g),高剂量组(1×108 CFU/g)。试验期为56d,结果显示:在各添加组中,盲肠内容物中肠杆菌,肠球菌和葡萄球菌的数量显著低于对照组(P<0.05),肠乳杆菌和双歧杆菌数量显著高于对照组(P<0.05)。在各芽孢杆菌添加组中,十二指肠、空肠和回肠的肠绒毛显著高于对照组(P<0.05),十二指肠和回肠的隐窝深度显著低于对照组,肉鸡小肠绒毛高度与隐窝深度的比值(V/C值),显著高于对照组(P<0.05)。研究提示:给肉鸡饲喂地衣芽孢杆菌可以显著改善肠道菌群和促进小肠绒毛的发育。

    2014年04期 v.34;No.208 664-668页 [查看摘要][在线阅读][下载 1222K]
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综述

  • 临床16S rRNA甲基化酶的研究新进展

    区炳明;陈琳;宋玉洁;朱国强;

    16SrRNA甲基化酶是近年来出现于临床的一种新耐药决定因子,介导细菌对多种氨基糖苷类高水平耐药,最初发现于肠杆菌科中,目前在革兰阴性菌中已发现至少由12种等位基因编码的10种16SrRNA甲基化酶。由于大多编码16SrRNA甲基化酶的基因常位于可动遗传因子如接合型质粒、整合子、转座子、插入序列共同区上,易引起耐药性和耐药基因的传播,导致临床抗感染治疗的失败。本文综述了临床16SrRNA甲基化酶的新发现,其介导的耐药性、作用机制、临床流行特点、传播特点及分子遗传背景、来源及进化,为临床合理应用氨基糖苷类抗生素、开发16SrRNA甲基化酶抑制剂奠定基础。

    2014年04期 v.34;No.208 669-684页 [查看摘要][在线阅读][下载 1024K]
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