预防兽医学

  • 猪传染性胃肠炎病毒样颗粒在杆状病毒表达系统中的体外组装

    宋振辉;卿家超;买买提·艾孜子;齐晓娟;叶翠芳;

    利用RT-PCR方法扩增TGEV M、sM和N结构蛋白基因,分别将M、sM和N基因克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacTMDual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M、pFastBacTM Dual-sM和pFastBacTM Dual-N,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M、Bacmid-sM和Bacmid-N,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M、rBac-sM和rBac-N。通过间接免疫荧光试验检测显示,重组蛋白在杆状病毒感染的sf9细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒按照以下感染组合进行TGEV VLPs组装的研究:rBac-M、rBac-sM、rBac-N单独感染sf9细胞,rBac-M+rBac-N、rBac-M+rBac-sM联合感染sf9细胞。结果表明,rBac-M、rBac-M+rBac-sM、rBac-M+rBac-N感染的昆虫细胞可见类病毒样粒子,rBac-sM、rBac-N单独感染sf9细胞未见形成明显的病毒样颗粒。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。

    2014年06期 v.34;No.210 841-847页 [查看摘要][在线阅读][下载 1352K]
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  • PCV2 ORF2蛋白重组PRV病毒PGO株的生物学特性

    钞安军;郭晓庆;顾阳;朱前磊;付朋飞;崔保安;陈红英;

    PCV2ORF2蛋白重组PRV病毒生物学试验研究表明:重组病毒PGO株在PK15细胞、ST细胞、VERO细胞、IBRS-2细胞上病毒增殖滴度分别为104.125/0.1、106.125/0.1、104.625/0.1、106.25/0.1mL。RT-PCR、倒置荧光显微镜观察、IPMA试验结果表明插入基因在重组病毒中进行表达。该重组病毒具有PRV病毒的通性;安全性试验结果表明该重组病毒对小鼠是安全的;遗传稳定性研究表明包含有PCV2ORF2基因的重组伪狂犬病毒具有稳定的遗传性状;这些研究为研发PCV2病毒重组伪狂犬病毒疫苗奠定了基础。

    2014年06期 v.34;No.210 848-852页 [查看摘要][在线阅读][下载 1668K]
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  • 基于HP-PRRSVN蛋白的快速免疫检测方法的建立

    姚瑶;赵宇亮;王勇鑫;赵宝华;

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)能引起猪的繁殖障碍等疾病,是世界养猪业中的一大难题。本研究以HP-PRRSV病毒的N(核衣壳)蛋白为研究基础,原核表达N蛋白后,获得纯化蛋白,进行动物免疫,获得单克隆抗体株,优化间接ELISA和胶体金试纸条的条件。纯化后重组核衣壳蛋白的纯度大于90%;Western blot出现明显的反应条带;建立间接ELISA试验方法,且无明显交叉反应;筛选出9株针对N蛋白的抗体,特异性较好;组装的胶体金试纸条可检测最低稀释抗原质量浓度约为5mg/L。该试验为快速检测PRRSV、提高检测速率奠定一定的基础。

    2014年06期 v.34;No.210 853-858页 [查看摘要][在线阅读][下载 916K]
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  • 不同特性IgG促进PRRSV在PAM细胞中的增值作用

    杨青原;秦运杰;张宜娜;李珂;王冬梅;杜东颖;夏平安;

    本试验通过研究IgG对猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。分别将抗PRRS特异性IgG(2.64g/L)和非特异性IgG(2.63g/L)作倍比稀释,与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成一系列的感染性免疫复合物(PRRSVIgG)和阴性抗体-病毒混合液(PRRSV+IgG),接种PAM细胞;同时将纯化的猪阴性IgG(2.63g/L)和兔抗猪IgG(2.64g/L l)等体积混合制备免疫复合物(IC),分别与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成免疫复合物-病毒混合液(PRRSV+IC),接种PAM细胞。接种24h后,用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV的mRNA水平。同样的方法,分别将2倍稀释的PRRSV-IgG,PRRSV+IgG和4倍稀释的PRRSV+IC接种PAM细胞,用实时荧光定量PCR方法分别检测感染12、24、36和48h后不同时间段内PRRSV的mRNA水平。结果显示,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体,在感染48h内均能极显著促进PRRSV在PAM细胞中增殖;而适当剂量的免疫复合物,在感染48h内也均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖。结果表明,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖,但是不同特性的抗体对PRRSV的增殖能力存在着差异。

    2014年06期 v.34;No.210 859-864页 [查看摘要][在线阅读][下载 1402K]
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  • 利用SMART技术构建猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库

    宋江伟;田宏;吴锦艳;陈妍;尚佑军;刘湘涛;

    本研究旨在建立猪血管内皮细胞酵母双杂交cDNA文库,进而为研究猪瘟病毒的基因功能及致病机理提供良好的试验体系。体外培养猪血管内皮细胞,提取细胞总RNA,并用Oligotex mRNA Mini Kit纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA)。经CHROMA SPINTM TE-400Column纯化后的dsDNA与线性化的pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞Y187中,以同源重组的方式在酵母细胞内构建猪血管内皮细胞cDNA文库。结果获得的文库容量在6×106 CFU/mL,随机挑选24个克隆进行PCR检测,插入的片段大小集中在400~2 000bp之间,平均插入长度为1 000bp左右,文库重组率为100%。本研究为从文库中高通量地筛选出与猪瘟病毒互作的重组子,即寻找与该病毒相互作用的受体蛋白奠定了坚实的基础。

    2014年06期 v.34;No.210 865-868页 [查看摘要][在线阅读][下载 762K]
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  • 鸡新城疫、传染性支气管炎和禽流感(H9)联合免疫血清学效力与攻毒保护关系

    李新生;彭志领;李燕;孟迪;高文明;崔保安;

    在预防鸡新城疫、传染性支气管炎和低致病性H9亚型禽流感这3种禽类传染病时,临床上常常使用针对这3种疾病的三联疫苗进行预防。为了研究抗原量和它们的HI抗体以及与攻毒保护之间的关系,我们进行了相关研究,结果表明:在一定程度上,每种抗原的量均与HI抗体呈正比;HI抗体的高低与攻毒保护之间呈正比例关系;当传染性支气管炎的HI抗体是初免的3倍以上时,均能对传染性支气管炎病毒强毒的攻击产生较好的保护。

    2014年06期 v.34;No.210 869-873页 [查看摘要][在线阅读][下载 540K]
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  • 一株鸟源H1N2型禽流感病毒全基因序列分析

    郭捷;谢芝勋;彭宜;罗思思;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;范晴;

    2011—2012年,对我国广西活禽市场进行流行病学监测时从麻雀体内分离鉴定出1株H1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/Sparrow/Guangxi/GXs-1/2012(H1N2)。为了解该株H1亚型AIV的来源、特征及其分子演化规律,本研究对其全基因序列进行测定,并与GenBank登录的相关病毒进行遗传演化分析。结果表明:这株分离纯化的H1N2毒株HA基因切割位点附近的氨基酸序列为PSIQSR↓GLF,属于低致病力AIV的特征;NA基因与A/duck/Guangxi/GXd-2/2010(H6N2)在同一分支内,核苷酸同源性为98%;PB1与PB2基因与H5和H4亚型较为接近;PA基因与A/duck/Guangdong/E1/2012(H10N8)同源性最高;NP基因则与A/chicken/Pakistan/NARC-16945/2010(H3N1)同源性达97%;而NS与MP基因分别与A/wild duck/Korea/SH5-26/2008(H4N6)、A/duck/Shanghai/C84/2009(H3N2)同源性最高。因此,推测A/Sparrow/Guangxi/GXs-1/2012(H1N2)可能是不同来源的基因经过复杂重组演变后的1株重组病毒。

    2014年06期 v.34;No.210 874-882页 [查看摘要][在线阅读][下载 3574K]
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  • 鸡IL-6和IL-18基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

    金元昌;李玉峰;袁志栋;

    本研究旨在建立鸡白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素18(IL-18)基因实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测方法。应用RT-PCR方法扩增鸡外周血淋巴白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)的IL-6和IL-18基因片断,分别克隆至pGM-T载体上,将浓度梯度的IL-6和IL-18基因的重组质粒DNA进行实时荧光定量PCR,并建立相应的标准曲线。经PCR、双酶切和测序分析显示,成功地构建了重组克隆质粒pGM-T-IL-6和pGM-T-IL-18。标准曲线分析显示,IL-6和IL-18基因标准曲线的Ct值与其标准品浓度的对数值之间有良好的线性关系,IL-6和IL-18检测的灵敏度均达到10拷贝/μL。为下一步应用实时荧光定量PCR技术检测IL-6和IL-18基因的转录水平奠定了基础。

    2014年06期 v.34;No.210 883-888页 [查看摘要][在线阅读][下载 1495K]
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  • 2012年山东鸡传染性支气管炎病毒分离株遗传进化和免疫保护分析

    张伟;胡北侠;杨少华;许传田;黄庆华;张琳;张秀美;王莉莉;李建亮;伊惠;崔言顺;

    从2012年山东省发病商品鸡群中分离鉴定了9株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),并对其S1基因进行了序列测定和分析。遗传进化分析发现,9个IBV流行株和国内外参考毒株可分成4个基因型。其中8个IBV流行株属于以QX为代表的基因I型,而SDIB781/2012与其他8个流行株遗传距离较远,属于基因IV型。为明确现有弱毒活疫苗对IBV流行株的免疫保护效力,分别用491、2886、MA5和H120弱毒疫苗免疫3日龄SPF鸡,14d后用流行株SDIB821/2012进行攻毒。根据攻毒后试验鸡发病死亡情况,491免疫组保护率为90%;与对照组相比,2886、MA5和H120免疫组几乎没有保护效力。但是攻毒后3、5和7d各免疫组和对照组试验鸡气管、肺和肾脏组织病毒检出率没有明显差异,表明4种IB疫苗均不能有效抵抗病毒在试验鸡气管、肺脏和肾脏组织内复制。

    2014年06期 v.34;No.210 889-893页 [查看摘要][在线阅读][下载 816K]
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  • 广东省猪瘟病毒流行毒株遗传多样性分析

    彭志成;龚文杰;吕宗吉;胡敬东;郭焕成;涂长春;

    猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种严重危害我国养猪业的烈性传染病。病毒囊膜糖蛋白E2是病毒识别和吸附宿主细胞的重要蛋白,同时也是病毒较不保守的蛋白,其编码基因常用于猪瘟病毒的遗传进化分析。为了分析我国猪瘟高发地区—广东省CSFV流行毒株的遗传多样性,本研究利用RT-PCR对采集自佛山等广东省11个城市的CSFV流行毒株E2全长基因进行了扩增和序列测定。系统进化分析表明16株CSFV流行毒株有15株为基因2.1亚型,另外1株属于基因1.1亚型。根据核苷酸同源性的大小,这些2.1亚型病毒株又可进一步划分为3个亚亚型2.1b、2.1c和2.1d。其中2.1c和2.1d亚亚型毒株是首次报道在该地区流行,到目前为止2.1a毒株尚未发现在广东省流行。多序列比对结果表明基因2.1亚型的4个亚亚型具有群特异性的氨基酸替换,这些结果进一步证实了2.1亚型的分型结果。综上所述,基于E2基因序列的系统进化分析和氨基酸多序列比对表明广东省CSFV流行毒株具有遗传多样性,同时发现有新的2.1c和2.1d亚亚型毒株的流行,这些研究结果将为我国广东省猪瘟防控策略的制定提供科学依据。

    2014年06期 v.34;No.210 894-903页 [查看摘要][在线阅读][下载 6109K]
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  • PRRSV GP5抗原表位的串联表达及生物学活性鉴定

    陈如敬;吴学敏;车勇良;王隆柏;刘玉涛;严山;魏宏;周伦江;

    为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白抗原表位在诊断和基因工程疫苗中的应用,本研究选取(PRRSV)GP5蛋白已鉴定的抗原表位(aa31~37和aa192~198)进行串联后克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,转化E.coli BL21后进行条件优化诱导表达。SDS-PAGE、Western blotting结果表明,该重组目的蛋白(约31 000)得到分泌表达,且具有良好的免疫学活性。

    2014年06期 v.34;No.210 904-907页 [查看摘要][在线阅读][下载 808K]
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  • 鸭疫里默杆菌重庆、四川地区分离株ompA基因的遗传变异性

    高继业;王振兴;黄伟;杨致邦;温亚兰;谢立飞;

    为研究鸭疫里默杆菌(R.anatipestifer)外膜蛋白A(OmpA)的遗传变异性,探讨与R.anatipestifer的血清型分类间的关系,对R.anatipestifer重庆、四川地区分离株进行了生化鉴定、16SrRNA基因和OmpA的遗传多样性分析。结果显示,除DY1210株不液化明胶及DZ1212株和JJ1212株水解七叶苷外,其他分离株生化特征均一致。R.anatipestifer所有分离菌株16SrRNA基因序列相似性达99%以上,均属于同一簇。ompA基因序列分3个基因群(Ⅰ群7株、Ⅱ群8株、Ⅲ群1株),其编码氨基酸序列分3个簇(Ⅰ簇8株、Ⅱ簇7株、Ⅲ簇1株),且不同血清型菌株属于同一基因群或氨基酸簇,同一血清型属于不同的基因群或氨基酸簇。结果表明,R.anatipestifer所有分离菌株ompA所属基因群或氨基酸簇与其血清型没有明显的联系。

    2014年06期 v.34;No.210 908-914页 [查看摘要][在线阅读][下载 4588K]
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人兽共患病

  • 3株猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及增值特性

    蔡雨函;周远成;朱玲;王赟;徐志文;

    2012年从四川省多个地区的猪场采集流产死胎10份,采用BHK-21细胞培养方法分离出3株乙型脑炎病毒,分别命名为JEV-SC-1、JEV-SC-2与JEV-SC-3株,E基因与现用疫苗株SA-14-14-2的核苷酸相似性分别为99.24%、99.05%及98.76%,基因分型研究显示3株病毒株均为基因Ⅲ型,分离株在BHK-21细胞中均能产生明显的细胞病变,其TCID50分别为10-5.81/0.025、10-5.12/0.025及10-4.42/0.025mL。以JEV-SC-1株分别感染BHK-21细胞和Vero细胞,观察病变情况并利用荧光定量PCR法绘制其在这2种细胞中的生长曲线,检测该毒株在BHK-21细胞上连续传代后不同代次的病毒含量。结果显示,JEV-SC-1株在这2种细胞中均能增殖,但CPE及病毒滴度有所差异:JEV-SC-1株感染Vero细胞的病毒滴度较BHK-21细胞高,但出现细胞病变时间较晚;JEV-SC-1株在BHK-21细胞上连续传代至20代,第1代至第10代病毒含量呈上升趋势,10代以后病毒含量趋于稳定,波动幅度较小。本试验为大规模生产疫苗提供理论支持,同时也为进一步研究JEV-SC-1株的生物特性奠定了基础。

    2014年06期 v.34;No.210 915-922页 [查看摘要][在线阅读][下载 3983K]
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  • 肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因缺失株的毒力相关功能研究

    姚丰华;张钰;朱国强;

    为研究肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因在肠炎沙门菌感染中的毒力作用,利用Red同源重组系统对2株肠炎沙门菌(国内标准株50336和国际参考株SD-2)SPI-19的Hcp基因进行敲除,成功构建了50336ΔHcp和SD-2ΔHcp基因缺失株,并构建了回补株50336ΔHcp/pHcp和SD-2ΔHcp/pHcp。分析比较缺失株与野生株对人肠上皮细胞系Caco-2黏附和侵袭能力,以及在鸡巨噬细胞HD11的存活能力。结果显示:缺失Hcp基因后,肠炎沙门菌50336对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降39.1%和47.9%;SD-2对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降46.5%和58.9%。吞噬作用2h后,50336ΔHcp和SD-2ΔHcp与野生株相比在HD11的存活量下降了35.7%和37.2%,差异显著。通过Real Time-PCR试验分析,与野生株相比,Hcp基因缺失后fliC、sefA、ompA,ompC这4个重要粘附因子编码基因的表达量显著下降。试验表明,肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因对肠炎沙门菌的毒力具有增强作用。

    2014年06期 v.34;No.210 923-929页 [查看摘要][在线阅读][下载 1344K]
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  • 产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

    孙佳芝;王新桐;刘雪慧;苗增民;刘志浩;王海荣;柴同杰;

    为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,制备腹水型mAb并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制备抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86~375μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A~E型产气荚膜梭菌标准菌株的培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌(NCTC528)中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。

    2014年06期 v.34;No.210 930-935+941页 [查看摘要][在线阅读][下载 1219K]
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  • 猪链球菌的分离鉴定及毒力分析

    王彩先;刘华栋;詹丽娥;陆冰洋;唐娟;詹海杰;景娅丽;李婷婷;

    通过对山西某猪场发病猪组织器官分离的病原菌鉴定以确定病原微生物以及其毒力强弱。主要从发病猪的关节液、肝脏、心脏、脾脏等器官内采集病原菌经过培养、镜检、生化试验初步鉴定后,用PCR方法通过扩增gdh基因和16SrDNA基因,16SrDNA测序后与国内外一些地区分离株的同源性比对,MLST(aroA、cpn60、dpr、gki、mutS、recA、thrA)分型研究、血清学分型以及mrp,ef,sly 3对毒力基因的扩增分析,结果鉴定为猪链球菌2型(SXZ-1株),16SrDNA序列与国内外部分地区菌株序列的同源性达到99%~100%。MLST型为ST7型,具有强致病性(mrp+ef+sly+),表明山西存在ST7型强毒2型猪链球菌。

    2014年06期 v.34;No.210 936-941页 [查看摘要][在线阅读][下载 1688K]
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基础兽医学

  • 肉鸡硫氧还蛋白原核表达载体的构建、蛋白纯化及其活性鉴定

    余文兰;胡莲美;王朵朵;吴富旺;张晓战;郭凯;郭剑英;唐兆新;

    根据GenBank中肉鸡硫氧还蛋白(Trx)基因的cDNA序列及载体pET28a(+)中的多克隆位点设计引物,进行Trx克隆和原核表达载体的构建,并在大肠杆菌中表达。应用镍柱亲和层析对该融合蛋白进行纯化;采用胰岛素还原法对重组Trx进行活性鉴定。结果显示:成功构建了pET28a-Trx重组质粒,纯化的目的蛋白纯度可达到90%,质量浓度为4g/L。纯化的重组Trx(GgTrx)具有较高的还原胰岛素二硫键能力,并且呈现出浓度依赖效应。本研究为Trx蛋白应用于治疗氧化应激性疾病奠定了基础。

    2014年06期 v.34;No.210 942-945页 [查看摘要][在线阅读][下载 914K]
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  • 林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

    张鑫;李思明;邓晨;张昕;陆超;程云云;郝林琳;卢可;

    将本室自制的林蛙皮多肽进行SDS-PAGE和紫外扫描检测,并将其以不同质量浓度作用于人永生化表皮细胞(HaCaT细胞),利用MTS法、Annexin V-FITC/PI法分别检测林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及其凋亡的影响。结果显示,林蛙皮多肽在20%SDS-PAGE条件下呈现弥散状态,灰度分析表明相对分子质量在10 000以下的多肽占总多肽的67.1%。林蛙皮多肽在(50~800)mg/L条件下,随着多肽质量浓度的升高,对HaCaT细胞促进增殖的作用逐渐增强,当林蛙皮多肽质量浓度为800mg/L时,MTS检测HaCaT细胞活力D值是正常对照细胞D值的2.5倍(P<0.01);此时,细胞凋亡率比正常对照细胞降低了(2.7±0.03)%,(P<0.01)。以上结果表明,林蛙皮活性多肽对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用,并对其凋亡有显著的抑制作用。

    2014年06期 v.34;No.210 946-950+954页 [查看摘要][在线阅读][下载 2408K]
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  • 牛MSTN蛋白与T-cap蛋白的相互作用验证

    郑立双;孙城涛;李向楠;刘红羽;贺明;刘勋;吕文发;

    通过体内和体外试验研究牛MSTN蛋白与T-cap蛋白间的相互作用。构建pLEGFP-MSTN及pcDNA3.0-Flag-T-cap真核表达载体,共转染至293T细胞,利用免疫共沉淀技术检测两者间相互作用。再构建pGEX-4T-1-MSTN表达载体,经IPTG诱导表达并纯化GST-MSTN,将pcDNA3.0-Flag-T-cap载体转至293T细胞,通过GSTpull down检测两者间相互作用。利用各抗标签克隆抗体沉淀细胞裂解液,分别进行Western blotting检测,结果显示,体内和体外试验都可以检测到蛋白的表达。从而证实了MSTN与T-cap之间存在相互作用,本试验为在分子水平上为探索MSTN蛋白的新功能提供思路。

    2014年06期 v.34;No.210 951-954页 [查看摘要][在线阅读][下载 913K]
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  • 非洲雏鸵鸟胸腺发育的增龄性变化

    陈敏;黄立;肖柯;郑欣婷;朱黛云;彭克美;

    本研究旨在探讨非洲雏鸵鸟胸腺生长发育规律,为鸵鸟的饲养管理和疾病防治提供理论基础。选取非洲雏鸵鸟1、30、60、90、334日龄(对照)各4羽,宰杀后,取胸腺,做石蜡包埋组织切片、HE染色,光镜下观察胸腺的组织结构变化,并进行形态计量学分析。结果表明:鸵鸟胸腺的皮质与髓质面积比例随日龄增加逐渐降低;在鸵鸟胸腺髓质中观察到3种形态的胸腺小体,依次为单细胞小体、同心圆小体和团块状小体;胸腺髓质内单细胞小体出现较早,同心圆小体和团块状小体出现较晚。

    2014年06期 v.34;No.210 955-958页 [查看摘要][在线阅读][下载 3368K]
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  • 玉米赤霉烯酮对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas及FasL表达的影响

    赵煜;周宏超;杨鸣琦;刘晓强;李引乾;

    为了研究玉米赤霉烯酮(ZEA)对大鼠卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达的影响。将36只8周龄雌性SD大鼠随机分为试验组和对照组,处理组腹腔注射5mg/kg ZEA玉米油溶液,对照组注射等剂量玉米油溶液。2组在注射后6、12、18、24、36、48h各处死3只,取出卵巢组织,4%多聚甲醛固定,免疫组化方法检测不同时间卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白的表达情况。结果显示:试验组卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),且随着时间的推进呈现动态变化。试验组Fas在各时间点表达量均显著高于对照组,且在18h时表达量最高,之后逐渐下降;试验组FasL表达量显著升高,在18和24h表达量显著上调。ZEA诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡过程中,可能激活Fas和FasL相关的死亡受体信号通路。

    2014年06期 v.34;No.210 959-963页 [查看摘要][在线阅读][下载 2371K]
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  • 铜对肉鸡肝线粒体Ca~(2+)、8-OHdG含量及膜电势的影响

    苏荣胜;万婷;胡锴;刘好朋;许冬蕾;唐兆新;

    将200羽1日龄Cobb商品代肉鸡随机分为4组,各组日粮中铜含量分别为:对照组(Ⅰ组)11mg/kg、试验Ⅱ组110mg/kg、试验Ⅲ组330mg/kg、试验Ⅳ组550mg/kg。饲养至10、20、30、40及50d时每组各取5只鸡用于采集肝脏样品,提取肝脏线粒体测定其膜电势及Ca2+、8-OHdG含量。试验结果显示:随着铜质量浓度的增加及饲喂时间的延长,线粒体膜电势降低,Ca2+和8-OHdG含量升高,表明饲喂高铜日粮可导致肝细胞凋亡。

    2014年06期 v.34;No.210 964-966+976页 [查看摘要][在线阅读][下载 662K]
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  • 射干等20种中药对4株真菌的体外抗菌活性

    李曼;殷中琼;程安春;贾仁勇;代如意;蔡红;李莉;

    观察射干等20种中药的体外抗真菌活性。通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法提取射干等20种中药中的抗菌活性部位,采用液体微量稀释法(broth microdilution susceptibility method,M38-A)测定射干等20种中药对石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、须癣毛癣菌和白色念珠球菌4株真菌的体外抗菌活性,并研究抗菌活性较强几味中药的体外联合抑菌活性。射干、白鲜皮、五倍子和苦参4种中药提取物对4株真菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)范围为1.563~12.5g/L;姜黄、杜仲、赤芍、栀子、连翘和柴胡6种中药提取物的MIC值范围为6.25~50g/L;藿香、黄芩、板蓝根、黄柏和大黄5种中药提取物的MIC值范围在50~100g/L;金银花、虎杖、何首乌、知母和佛手5种中药提取物的MIC值>100g/L。联合抑菌试验结果表明,射干、姜黄和栀子的联合抑菌指数(FICI)≤2,五倍子和射干、姜黄、栀子的联合抑菌指数(FIC)>2。结果显示射干、五倍子、姜黄、栀子对4株真菌均具有较好的体外抗真菌活性;射干、姜黄、栀子表现出无关或相加、协同的作用;五倍子和射干、姜黄、栀子表现出了拮抗作用。

    2014年06期 v.34;No.210 967-972页 [查看摘要][在线阅读][下载 690K]
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简讯

  • 声明

    <正>本刊已许可中国学术期刊(光盘版)电子杂志社在中国知网及其系列数据库产品中以数字化方式复制、汇编、发行、信息网络传播本刊全文。该社著作权使用费与本刊稿酬一并支付。作者向本刊提交文章发表的行为即视为同意我刊上述声明。

    2014年06期 v.34;No.210 958页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K]
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临床兽医学

  • 归参汤对免疫抑制小鼠血清中IL-2、TNF-α和脾细胞Th1/Th2细胞因子的影响

    李慧峰;单明辉;程淑琴;

    为了探讨归参汤(GST)对免疫抑制小鼠血清中IL-2、TNF-α和脾细胞Th1/Th2细胞因子的影响。本试验采用环磷酰胺制造免疫抑制模型,利用双抗夹心ELISA法,观察归参汤对小鼠血清中IL-2、TNF-α的影响;RT-PCR法观察归参汤对小鼠脾细胞中INF-γ、IL-4、T-bet和GATA-3的mRNA表达的影响。结果显示:归参汤高剂量组可以显著增加免疫抑制小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量(P<0.01),提高INF-γ的表达(P<0.05),降低IL-4的含量(P<0.05),升高T-bet(P<0.05),降低GATA-3的表达(P<0.05)。归参汤的免疫增强作用与升高血清中IL-2、TNF-α有关,且升高INF-γ/IL-4纠正免疫抑制小鼠Thl/Th2细胞因子的比例紊乱,其机制可能部分归因于对T-bet和GATA-3的mRNA表达的影响。

    2014年06期 v.34;No.210 973-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 1028K]
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  • 小型猪特异性麻醉颉颃剂对XFM麻醉大鼠不同脑区去甲肾上腺素和5-羟色胺的影响

    姜胜;谭丽娟;于世明;范宏刚;王洪斌;

    为探讨去甲肾上腺素和5-羟色胺在小型猪特异性麻醉颉颃剂催醒过程中的作用,40只Wistar大鼠随机均分为单纯麻醉组和麻醉-催醒组。这两组又随机均分为恢复翻正反射即刻和恢复直线爬行即刻2个小组。采用高效液相色谱法检测麻醉大鼠不同脑区去甲肾上腺素和5-羟色胺含量变化。结果显示,注射颉颃剂后,麻醉大鼠各脑区内去甲肾上腺素呈现升高趋势,5-羟色胺呈现降低的趋势,与大鼠苏醒过程行为学变化基本吻合。研究表明小型猪特异性麻醉颉颃剂催醒作用可能与大脑皮层、丘脑内去甲肾上腺素和5-羟色胺的变化有关,这可能是XFM麻醉与催醒的靶位之一。

    2014年06期 v.34;No.210 977-981页 [查看摘要][在线阅读][下载 888K]
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  • 奶牛乳腺上皮细胞培养液中β-酪蛋白提取方法的改进及其对细胞分泌功能的影响

    孙海云;李建国;崔亚利;高艳霞;赵艳姣;

    通过调节乳腺上皮细胞培养液的温度和pH值,建立了提取β-酪蛋白的物理沉淀法,利用Western blot方法进行鉴定。并将该物理沉淀法与其他3种不同方法进行比较,认为物理沉淀法更加简便、快捷、有效。同时,用物理沉淀法对不同培养天数细胞的分泌能力进行了分析。通过绘制细胞生长曲线和Western blot方法检测,结果显示:组织块贴壁培养法培养至9~11d时,乳腺上皮细胞的细胞数量最多,分泌活性最强。

    2014年06期 v.34;No.210 982-985+990页 [查看摘要][在线阅读][下载 1543K]
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  • 奶牛生殖道内益生乳酸菌的筛选及分子鉴定

    赵静;李向楠;王军;孙城涛;刘红羽;贺明;刘勋;王全凯;

    为了筛选出用于制作微生态制剂的候选菌株,选取15头产后30~60d的健康荷斯坦奶牛,使用MRS琼脂培养基厌氧技术从生殖道分泌物中分离得到47株革兰阳性菌株。随后对其抑菌效果和产过氧化氢能力进行测试,从中挑选出抑菌效果和产过氧化氢能力相对较强的菌株4株,通过生化试验和16SrDNA序列分析方法对其进行鉴定。鉴定结果为:1株为魏斯氏菌,1株为大芬戈尔德菌,1株为乳酸明串珠菌,1株为营养泥杆菌。最后测试混合菌株的抑菌效果得出以下结论:大芬戈尔德菌、乳酸明串珠菌、营养泥杆菌混合之后抑菌效果在这几组混合液中抑菌效果是最好的。

    2014年06期 v.34;No.210 986-990页 [查看摘要][在线阅读][下载 1103K]
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动物科学

  • 氨基酸对猪卵母细胞成熟及重构胚发育的影响

    马红;付博;李忠秋;王文涛;刘娣;

    本研究旨在对比必需氨基酸和非必需氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及重构胚发育的影响。在卵母细胞成熟培养液或重构胚培养液中分别添加1%的必需氨基酸或1%非必需氨基酸或同时添加2种氨基酸,无氨基酸组作为对照,分别统计卵母细胞成熟率和囊胚率。结果表明,在成熟培养液中添加非必需氨基酸组的卵母细胞成熟率为83.0%,显著高于其他各组(P<0.05);而在重构胚培养过程中,与对照组相比,非必需氨基酸组的囊胚率最高为20.3%(P<0.05),另外2组的囊胚率下降(P<0.05)。在卵母细胞成熟过程中添加2类氨基酸均能提高成熟率,但只有非必需氨基酸能够促进重构胚的发育。

    2014年06期 v.34;No.210 991-994页 [查看摘要][在线阅读][下载 1124K]
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  • NGF和BDNF对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响

    易康乐;雷虹;李纯锦;陈露;燕海峰;李昊帮;孙鏖;石德顺;周虚;

    在NCSU-23改良培养液中分别添加不同质量浓度的脑源性神经生长因子(不rain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF),观察其对猪孤雌激活胚胎体外生长的影响。结果显示:在培养液中添加40μg/L的BDNF,可促进猪孤雌激活胚胎的囊胚形成;在猪PA胚胎培养液中添加不同质量浓度的NGF,对猪孤雌激活胚胎的在卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率影响不明显。结果表明,在NCSU-23改良培养液中添加一定质量浓度的BDNF可促进猪孤雌激活胚胎体外培养过程中囊胚的形成。

    2014年06期 v.34;No.210 995-998页 [查看摘要][在线阅读][下载 719K]
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  • 超低温冷冻对牛卵母细胞组蛋白乙酰化和膜蛋白CD9表达的影响

    周光斌;曾艳;孟庆勇;侯云鹏;朱士恩;

    本试验旨在探讨玻璃化冷冻对牛体外成熟卵母细胞(MⅡ期)组蛋白乙酰化和膜蛋白CD9表达的影响。牛MⅡ期卵母细胞采用OPS法冷冻,即卵母细胞于10%EG+10%DMSO溶液中预处理30s,然后再移入玻璃化溶液EDFSF30中处理25s,以OPS为承载器投入液氮中。毒性组卵母细胞未投入液氮,其他过程与冷冻组相同,新鲜牛MⅡ期卵母细胞为对照组。卵母细胞解冻后,利用免疫荧光染色法检测存活细胞DNA组蛋白乙酰化;qRT-PCR和Western blot检测CD9mRNA蛋白的表达。结果表明:冷冻组卵母细胞形态正常率(93.8%)和存活率(92.7%)显著低于毒性组(100.0%,97.2%)和对照组(100.0%,98.5%)(P<0.05),而毒性组与对照组之间无显著差异。超低温冷冻后,卵母细胞DNA组蛋白乙酰化水平显著上升(P<0.05),CD9mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05)。以上显示,玻璃化冷冻不但降低了牛体外成熟卵母细胞的存活率,而且改变了DNA组蛋白乙酰化和膜蛋白CD9表达水平。

    2014年06期 v.34;No.210 999-1004页 [查看摘要][在线阅读][下载 1083K]
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  • 摘除卵巢对布尔山羊杂种母羊组织IGF-I和IGF-1R基因表达的影响

    张磊;王燕燕;周占琴;付明哲;李广;张锁良;尹海科;张胜刚;任宝华;

    为了研究卵巢摘除对布尔山羊杂种母羊类胰岛素样生长因子1(ginsulin-like growth factor 1,IGF-1)和类胰岛素样生长因子1受体(ginsulin-like growth factor 1receptor,IGF-1R)基因表达的影响。本试验将体质量相近的5月龄布尔山羊杂种母羊作为研究对象,随机分为处理组和对照组,每组20只。试验开始时摘除处理组母羊的卵巢,对照组不摘除。饲养50d后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)相对定量方法检测肝脏、背最长肌、股二头肌和肾周脂肪中IGF-1和IGF-1R基因mRNA的相对表达量。卵巢摘除后母羊背最长肌和肝脏组织中IGF-1基因mRNA的相对表达量分别是对照组的6.19倍和6.01倍(P<0.01);IGF-1R基因表达量分别是对照组的11.86倍和9.96倍(P<0.01)。处理组母羊股二头肌中IGF-1基因mRNA的相对表达量与对照组差异不显著(P>0.05);IGF-1R基因是对照组的4.86倍,且差异显著(P<0.05)。在肾周脂肪组织中,处理组母羊IGF-1基因和IGF-1R基因mRNA的相对表达量较对照组增加,但差异均不显著(P>0.05)。由此可见,卵巢摘除可以上调背最长肌和肝脏中IGF-I和IGF-IR基因的表达以及股二头肌中IGF-IR基因的表达。

    2014年06期 v.34;No.210 1005-1011页 [查看摘要][在线阅读][下载 2232K]
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  • 奶牛日粮及牛奶中2,4-滴丁酯、乙草胺、莠去津残留对牛奶安全影响的研究

    刘红羽;王军;陈洋;孙城涛;李向楠;吕文发;

    采用气相色谱法,建立2,4-滴丁酯、乙草胺、莠去津在奶牛日粮及牛奶中残留对牛奶安全影响的分析方法。利用丙酮提取,三氯甲烷萃取,配合气象色谱图,进行定量检测。研究结果表明:2,4-滴丁酯最小检出量为2.0×10-12 g,最低检测质量浓度为4.0×10-4 mg/kg,平均回收率是89.6%;乙草胺最小检出量为1.5×10-12 g,最低检测质量浓度为3.0×10-4 mg/kg,平均回收率是87.8%;莠去津最小检出量为1.5×10-11 g,最低检测质量浓度均为3.0×10-3 mg/kg,平均回收率是102.4%。本试验结果表明2,4-滴丁酯、乙草胺、莠去津残留量在奶牛日粮及牛奶中残留符合最低残留限量标准。

    2014年06期 v.34;No.210 1012-1016页 [查看摘要][在线阅读][下载 1452K]
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  • 饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡产蛋高峰期养分利用率、氮代谢和血清生化指标的影响

    陈冠军;杨维仁;杨在宾;高翔;张相伦;

    为了研究饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡产蛋高峰期养分代谢率、氮代谢和血清生化指标的影响。本试验选用35周龄体型基本一致(2.046±0.101)kg、健康的鲁西斗鸡60只,随机分为5组,每个组6个重复,每个重复2只。试验采取单因素试验设计,4个处理饲粮粗蛋白质水平依次为:14.0%、15.5%、17.0%和18.5%,剩余1组作为绝食代谢组。结果表明:鲁西斗鸡产蛋高峰期饲粮粗蛋白质水平对干物质、有机物、粗灰分和总能的表观和真实代谢率均无显著影响(P>0.05)。17.0%饲粮粗蛋白质水平组较14.0%组和15.5%组,可显著提高粗蛋白质代谢率(P<0.05),但是与18.5%组无显著差异(P>0.05)。各组间粗蛋白质的真实代谢率无显著差异(P>0.05);随饲粮粗蛋白质水平提高,氮排出量显著提高(P<0.05)。17.0%饲粮粗蛋白质水平组氮沉积率显著高于其他组(P<0.05)。将氮沉积量(Nr)与氮食入量(Ni)进行回归,得到回归公式如下:Nr=0.649Ni-0.258(R2=0.923),可得每天的氮维持需要量为0.216 4g/kgBW0.75;17.0%饲粮粗蛋白质水平组,BUN水平显著低于14.0%组(P<0.05),但是与15.5%组和18.5%水平组差异不显著(P>0.05)。饲粮粗蛋白质水平对血清TP、GLOB和A/G均无显著影响。综合以上结果:鲁西斗鸡产蛋高峰期,适宜的饲粮粗蛋白质水平为17.0%,粗蛋白质利用率最高,氮沉积率最高,血清生化指标最优。

    2014年06期 v.34;No.210 1017-1022+1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 770K]
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  • 日粮能量对育成柴鸡卵巢促卵泡素受体、促黄体素受体表达的影响

    刘立文;张立永;穆秀明;高志华;刘海滨;周虚;

    本研究旨在探究日粮能量对育成柴鸡卵巢促性腺激素受体的影响及其机理。选用育成柴鸡14周龄36只采用单因素方差随机试验,随机分成3个处理,每个处理3个重复,每个重复4只鸡,分别饲喂低能、高能、对照的日粮,试验时间为28d,采用荧光定量反转录-聚合酶链反应,研究日粮能量水平对柴鸡性成熟过程中卵巢促卵泡受体和促黄体受体mRNA表达的影响。结果显示:育成柴鸡FSHR、LHR的表达低能组与对照组差异不显著,但是与高能组差异极显著。结果说明,日粮能量通过下丘脑-垂体-性腺轴影响育成柴鸡生殖机能。

    2014年06期 v.34;No.210 1023-1027页 [查看摘要][在线阅读][下载 881K]
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综述

  • DON、ZEA对免疫的影响及互作效应研究进展

    周锐;邓俊良;任志华;王亚超;左之才;崔恒敏;

    玉米赤霉烯酮(ZEA)和呕吐毒素(DON)是镰刀菌的有毒次生代谢产物,过量能抑制动物机体的免疫功能,造成动物生长速度减缓、繁殖性能降低、抗病能力下降,疫苗免疫效果不理想或免疫失败,造成严重的经济损失。同时这两种毒素间可能产生协同作用增加对免疫功能的抑制作用。本文综述了近几年国内外学者对ZEA和DON造成动物免疫系统抑制及其互作效应的研究进展。

    2014年06期 v.34;No.210 1028-1032页 [查看摘要][在线阅读][下载 748K]
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