- 苏乾莲;李斌;赵武;秦毅斌;梁家幸;卢冰霞;何颖;段群棚;卢敬专;蒋冬福;周英宁;梁保忠;
将构建的猪戊型肝炎病毒广西株3个连续ORF2基因片段重组真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3转染人肾上皮细胞系293T,应用实时荧光定量RT-PCR检测目的基因LB1、LB2、LB3。经ABI7500系统建立的标准曲线相关系数(R2)范围为0.994 209~0.999 130,斜率范围-3.469 403~-3.579 107,扩增效率范围为90.28%~94.19%。经对转染细胞、空白对照细胞的目的基因、内参基因的扩增曲线和融解曲线分析,表明该实时荧光定量PCR扩增体系的特异性良好,通过2-ΔΔCt相对定量法计算,可得出转染细胞293T-a、293T-b、293Tc目的基因LB1、LB2、LB3的基因表达量分别为6 226 830.88±826 430.14、9 449 238.68±926 057.13、35 177 915.63±3 949 173.42。本实验室建立的3个重组真核表达质粒在293T细胞中的转染成功为深入研究猪戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。
2014年11期 v.34;No.215 1709-1715页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K] [下载次数：179 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 董林;王艳萍;沈志强;柳增善;
为了获得体外诱导表达的具有良好免疫原性的PCV2多表位串联体。本试验筛选PCV2主要抗原表位,顺序组成多表位串联体,人工合成其cDNA序列,通过BamHⅠ和SalⅠ定向克隆至原核表达载体pEGX-4T-1多克隆位点,转化BL21感受态细胞,筛选阳性克隆,进行IPTG诱导表达。使用SDS-PAGE对目的基因表达情况进行分析,提取与纯化融合蛋白多肽,Western blot鉴定表达多表位串联蛋白免疫活性。融合蛋白多肽免疫BALB/c小鼠,ELISA测定其抗体,评价其免疫原性。结果显示,成功构建了含7个PCV2抗原表位串联体的表达重组质粒pEGX-4T-1-ep,SDS-PAGE分析显示,融合蛋白多肽在大肠杆菌中获得了有效表达,其分子量约35ku,主要以可溶性形式存在。Western blot结果显示,提取与纯化融合蛋白多肽与PCV2阳性血清具有良好的反应原性。ELISA检测结果显示,纯化的融合蛋白多肽可有效刺激机体产生PCV2特异性抗体,具有良好的免疫原性。结果表明,构建的PCV2多表位串联体表达重组体具有良好的体外表达特性,表达蛋白具有良好的免疫原性。该研究为PCV2表位筛选,功能鉴定及多表位疫苗研究奠定了一定基础。
2014年11期 v.34;No.215 1716-1720页 [查看摘要][在线阅读][下载 255K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 杨睿;付利芝;杨柳;周雪;沈克飞;王孝友;郑华;徐登峰;
根据GenBank公布的PCV2与PRRSV的核苷酸序列选定2个主要的抗原表位,2个抗原表位通过1个柔性的Linker相连,最后对目标片段的核苷酸序列进行修饰,使它们适合在DE3宿主菌中表达,合成目的片段729bp;将融合的核酸序列通过酶切位点BamhⅠ和XholⅠ插入pGEX-4T-1原核表达载体;用BL21(DE3)作为宿主菌,37℃下0.5mmol/L IPTG诱导表达,表达量为0.2g/L;重组蛋白免疫按80mg/头免疫仔猪,免疫后2周可使仔猪同时产生PVC2与PRRSV抗体。
2014年11期 v.34;No.215 1721-1724+1747页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K] [下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 李芹;王建忠;黄楚荻;穆昱;周玉龙;高超;杨闽楠;赛度;丁壮;
为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.coli感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。
2014年11期 v.34;No.215 1725-1731页 [查看摘要][在线阅读][下载 370K] [下载次数：283 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 王蛟;刁有祥;孙晓艳;郝东敏;刘鑫;葛平萍;鲁爱玲;
为了研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对樱桃谷肉鸭的致病性。本试验利用1株鸭源H9N2亚型AIV分别通过静脉注射和鼻内接种途径感染2周龄健康樱桃谷肉鸭,观察感染鸭的症状、排毒规律及组织学变化,流式细胞术分析外周血CD4+和CD8+T细胞变化规律,实时荧光定量(RT-qPCR)检测脾脏中细胞因子的表达水平,并测定血清HI抗体效价。结果显示,攻毒后,静脉注射组鸭出现体质量增长显著缓慢、呼吸道症状以及全身性感染,而鼻内接种组鸭无明显临床症状,仅发生局部感染;两攻毒组鸭泄殖腔较气管排毒量高且排毒时间长;外周血CD8+T细胞显著升高,并且脾脏IFNA、IFNB、IFNG和IL2表达水平上调,IL1B和IL6表达水平仅在静脉注射组上调;血清HI抗体水平低且维持时间短。结果表明,在实验室条件下,H9N2亚型AIV对樱桃谷肉鸭致病力较弱,仅静脉接种组引起鸭体质量增长缓慢及呼吸系统出血、淋巴细胞浸润。
2014年11期 v.34;No.215 1732-1737页 [查看摘要][在线阅读][下载 619K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 徐娇;胡志强;殷中琼;程安春;贾仁勇;李丹丹;
建立以TaqMan荧光探针为特点的PCR,检测白藜芦醇体外抗鸭瘟病毒活性。本研究针对鸭瘟病毒UL30基因序列设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立鸭瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证方法的特异度、敏感度和稳定性及对临床样品进行检测;运用该方法检测白藜芦醇对鸭胚成纤维细胞接种鸭瘟病毒后细胞中病毒增殖情况的影响,用以评价该药物体外抗鸭瘟病毒效果。结果显示,该方法建立的定量标准曲线阈值循环数(Threshold cycle,Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(R2=0.997),斜率为-3.328,扩增效率(E)为99.7%,具有良好的特异度、敏感度和稳定性并能对临床样本进行准确的检测。运用该方法检测白藜芦醇体外抗鸭瘟病毒结果显示:经白藜芦醇处理后,染毒细胞中病毒拷贝数为(7.71±0.37)×104,与病毒对照组比较(5.63±0.26)×106明显减少(P<0.01)。结果表明,TaqMan探针实时荧光定量PCR方法建立并成功用于体外药物抗鸭瘟病毒的检测;白藜芦醇具有良好的体外抗鸭瘟病毒活性。
2014年11期 v.34;No.215 1738-1742页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 蒋禄峰;赵月兰;李苏楠;吉星煜;张晶;张月;王建永;包永占;秦建华;
利用SacⅠ、HindⅢ限制性内切酶分别对pMG36e与pMD19-T-E0进行双酶切,将目的基因E0整合入穿梭表达载体pMG36e,构建牛病毒性腹泻病毒E0基因重组表达质粒pMG36e-E0。提取重组质粒pMG36e-E0,进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒pMG36e-E0转化到大肠杆菌DH5α中进行表达,对表达产物进行SDSPAGE和Western-blotting鉴定。用表达的E0蛋白二次免疫家兔,间接ELISA法检测其血清抗体水平。结果,重组质粒经双酶切得到大小分别约为3 600、691bp的2个片段,PCR扩增出691bp的片段,双酶切与PCR鉴定结果表明目的基因E0正确插入到载体pMG36e中。SDS-PAGE电泳结果表明E0基因在大肠杆菌获得了表达,表达产物相对分子质量大小约为27 000。Western-blotting分析结果证明表达产物能被BVDV阳性血清所识别。ELISA检测结果证明表达的E0融合蛋白能刺激动物产生抗体,具有天然蛋白的免疫原性。
2014年11期 v.34;No.215 1743-1747页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] [下载次数：315 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 王乐;赵战勤;薛云;刘会胜;邓雯;
对我国最为流行的血清4、5、12、13和14型副猪嗜血杆菌进行了豚鼠和仔猪毒力试验的比较研究。豚鼠毒力试验结果表明,对豚鼠毒力最强的是12和14型菌株,其LD50均低于3.5×108 CFU;其次是5型,其LD50介于1.0×109~1.9×109 CFU之间;毒力最弱的是13型,其LD50介于4.0×109~4.1×109 CFU之间。4型的毒力差异较大,强毒菌株与5型接近,弱毒菌株与13型接近。与我们前期报道的小鼠毒力试验结果相比,豚鼠接种副猪嗜血杆菌后具有更长的发病死亡周期,且具有纤维素性渗出和败血症等副猪嗜血杆菌病的病变特征,表明豚鼠较小鼠更适合作为该病的替代实验动物。进一步的仔猪毒力试验结果与豚鼠毒力试验结果相一致。剖检发现,所有5、12和14型菌株以及4型强毒菌株均能导致严重的败血症性病理变化,表明副猪嗜血杆菌强毒菌株能导致猪的系统感染和全身性疾病;而所有13型菌株和4型弱毒株则不能。这表明国内流行的5、12和14型副猪嗜血杆菌的毒力与国外已有报道一致,均为强毒菌株;而4和13型则不同,具有明显的地域特征。
2014年11期 v.34;No.215 1748-1752页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K] [下载次数：291 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：0 ] - 郑新添;黄其春;黄翠琴;何世成;方冬;
参考GenBank发表的胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)基因组16SrDNA序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,以L.intracellularis疫苗核酸为模板,建立L.intracellularis TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。对该检测法制作了标准曲线,并进行了特异性、敏感性和重复性试验,并将其应用于猪增生性肠炎诊断。结果表明,所建立的TaqMan实时荧光定量方法特异性强,仅对含有L.intracellularis扩增出S型荧光曲线,而对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌等均无扩增;该方法在1.2×102~1.2×108 copies/μL有良好的线性关系,相关系数为0.972;最低检测浓度为10copies/μL,重复性良好。对79份临床样品检测表明,该方法灵敏度高于普通PCR方法,可用于猪增生性肠炎的临床诊断。
2014年11期 v.34;No.215 1753-1757页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 胡宁;郁川;程相朝;张春杰;李银聚;赵战勤;尚珂;
为构建能稳定携带外源基因的减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344,本研究在减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaSL1344基础上,以χ7213(pREΔasd)为供体菌,ΔcrpΔcyaSL1344为受体菌,利用自杀性质粒介导的等位交换技术成功筛选出缺失编码天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶基因(aspartic semialdehyde dehydrogenase,asd)的ΔcrpΔcyaΔasdSL1344菌株,进一步对其生物学特性进行初步研究。结果显示,其血清型和亲本株ΔcrpΔcyaSL1344及强毒株SL1344相同且该缺失菌株能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344相比有很大差异,与亲本株ΔcrpΔcyaSL1344基本一致,ΔcrpΔcyaΔasdSL1344失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力,其生长速度比强毒株更加缓慢。1日龄雏鸡攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasdSL1344互补携带asd基因的pYA3493质粒后,ΔcrpΔcyaΔasdSL1344(pYA3493)毒力较强毒株SL1344降低了至少105倍,与亲本株ΔcrpΔcyaSL1344相比毒力仅相差10倍。结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344菌株构建成功,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。
2014年11期 v.34;No.215 1758-1763+1769页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K] [下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 罗永久;钟志军;彭广能;唐天亮;解冰冰;王承东;吴江兰;刘俊卿;孙鸿雁;石锦江;
为了探讨不同食性动物肠道菌群的多样性与相似性。本试验采用ERIC-PCR方法对成年马、梅花鹿、老虎、豹、非洲狮、黑熊、小熊猫及成年大熊猫的新鲜粪便细菌总DNA进行了指纹图谱分析。结果显示,肠道菌群的多样性指数为草食动物(1.27)>肉食动物(1.23)>杂食动物(1.04),而它们的优势度指数则相反,草食动物(0.32)﹤肉食动物(0.41)=杂食动物(0.41)。同一种动物的肠道菌群多样性指数差异不明显。结果表明,动物肠道菌群的多样性在一定程度上与食物有关。
2014年11期 v.34;No.215 1764-1769页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K] [下载次数：472 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：32 ] |[阅读次数：0 ] - 钟世勋;迟珊珊;王振;姜晓东;朱福杰;王迪;张永兵;朱瑞良;
2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物(狐狸、貉子、水貂)出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。
2014年11期 v.34;No.215 1770-1777页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K] [下载次数：247 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：32 ] |[阅读次数：0 ] - 林伯全;徐磊;杨慧;林秋敏;赖宝色;
为了解鸡毒支原体(Mycoplasma Gallisepticum,MG)F弱毒疫苗株感染SPF鸡对IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10共4种细胞因子产生的影响,本研究分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)CCU/mL的MG F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用ELISA方法对免疫前后外周血4种细胞因子的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的4种细胞因子浓度明显升高;其中IFN-γ质量浓度A组于第7、14天显著高于其他组(P<0.05),B组于第7天显著高于C组(P<0.05);IL-2质量浓度各组于第3、5、7天差异显著(P<0.05),由高至低以此为:A、B和C组;A组与B组IL-4和IL-10质量浓度差异不显著(P>0.05),但两组IL-4质量浓度于第5、7、14天显著高于C组(P<0.05);且2组IL-10质量浓度于第5、7、14、21天显著高于C组(P<0.05)。免疫MG F株可较好的提高IFN-γ、IL-2介导的细胞免疫作用和IL-4、IL-10介导的体液免疫作用,且MG F株活菌浓度与接种鸡的细胞免疫作用呈正相关性。
2014年11期 v.34;No.215 1778-1780页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]
- 许越;王凤阳;刘贤英;魏峰;刘全;
本研究是在Dubey J P所建改良凝集试验基础上,采用小鼠肉瘤S180细胞培养弓形虫速殖子,甲醛固定抗原后悬浮于碱性缓冲液,用2-巯基乙醇处理待测血清,用该法对610份鸡血清进行弓形虫抗体检测,并用间接血凝试验(IHA)作对照。结果显示,MAT、IHA对鸡血清的弓形虫抗体检测阳性率分别为9.02%(55/610)、1.64%(10/610),二者差异极显著(P<0.01)。MAT对鸡的弓形虫抗体检测结果,鸡血清阳性率为9.02%(55/610),其中散养鸡阳性率为18.75%(30/160),笼养鸡阳性率为5.56%(25/450),二者差异极显著(P<0.01);蛋鸡和种鸡阳性率分别为7.89%(15/190)和8.00%(8/100)、肉鸡阳性率1.25%(2/160),与肉鸡相比差异显著(P<0.05)。
2014年11期 v.34;No.215 1781-1782+1789页 [查看摘要][在线阅读][下载 103K] [下载次数：237 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 郝俊伟;时坤;曾范利;李健明;王文玉;杨宇航;刘红娜;张云;张秀丽;杜锐;
鹿布鲁菌病主要是由牛型、羊型和猪型布鲁菌引起的,其他感染型少见,本研究依据布鲁菌的特异性基因BruAB20168、BMEII0466、BR0952上的部分高度保守片段设计猪型、牛型、羊型引物和探针,用于检测并区分鹿源布鲁菌的种型,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到pUC57载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布氏菌各分型荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线敏感性可知该方法的最低检测浓度分别可达到12、9、8copies/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
2014年11期 v.34;No.215 1783-1789页 [查看摘要][在线阅读][下载 616K] [下载次数：114 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 谢懋英;赖婧;马立才;吴聪明;左之才;
为了了解食源性病原沙门菌在肉鸡产业链中的流行情况及其耐药性现状。本研究从上海某肉鸡屠宰加工企业分别采集待宰肉鸡、屠宰胴体和市售鸡肉样品388、200、127份,并参照GB/T4789.4-2010和PCR法进行沙门菌的分离鉴定。结果显示,共获得沙门菌73株。待宰肉鸡、屠宰胴体和市售鸡肉分别获得沙门菌9、48和16株,分离率依次为2.32%、17.5%和8.66%。采用微量肉汤稀释法测定分离菌株对12种抗菌药物的敏感性。药敏结果显示,所有菌株至少耐两种药物。其中对复方新诺明和多西环素的耐药率最高,分别为100%和95.89%;头孢唑啉、阿莫西林/克拉维酸、氯霉素、氨苄西林、萘啶酸的耐药率也均超过了40%,而对头孢噻呋、头孢曲松、庆大霉素、美罗培南的耐药率相对较低。结果表明,该地区肉鸡源沙门菌的耐药情况较严重,亟需加强养禽业抗菌药物的合理应用;同时沙门菌流行情况也对改进肉鸡屠宰加工工艺,降低沙门菌的污染提出了要求。
2014年11期 v.34;No.215 1790-1794页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K] [下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ] - 韩明明;刘旭平;赵静;母连志;李芹;刘晓飞;刘慧;范永鑫;陈建国;周丽光;
为了掌握山东地区水貂出血性肺炎流行情况,从2012年山东省内多个养貂社区进行水貂出血性肺炎流行病学调查。从病貂中分离获得48株绿脓杆菌,分别测定了分离株的生化特性、血清型以及部分菌株对小鼠与水貂的半数致死量(LD50),同时运用Eric-PCR方法对分离进行了进行分型。结果显示,48株分离菌株与标准菌株生化特性基本一致,血清型G型为36株,血清型Ⅰ型为7株,血清型C型为4株;48株分离株大多数对恩诺沙星最敏感;动物试验显示,48株分离株对小鼠与水貂均能致病,所选4株分离株对小鼠与水貂的LD50有差异,且水貂对所选菌株显著敏感于小鼠;分子分型分为13个基因型。结果表明,该地区水貂出血性肺炎病原呈现遗传多样性。本试验为水貂出血性肺炎的防治提供了理论依据。
2014年11期 v.34;No.215 1795-1799页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 吴庆燕;贾泓瑶;程云云;张昊龙;郭炜彤;石惠;李思明;郝林琳;刘松财;卢可;
以军牧1号白猪、大白猪、东北野猪、巴马香猪和西藏小型猪为研究对象,通过PCR扩增5个品种猪IGFBP-3基因5′调控区序列(约2 000bp)并进行测序分析,来研究不同品种猪IGFBP-3基因启动子区序列的差异。同源性比对分析发现5个品种猪IGFBP-3基因5′调控区存在约50处突变;启动子预测发现在-185bp附近为核心启动子区的几率最大;突变共导致9处转录因子结合位点发生改变,其或可造成不同品种猪IGFBP-3表达量的差异,进而影响不同品种猪的体型大小。
2014年11期 v.34;No.215 1800-1804页 [查看摘要][在线阅读][下载 728K] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 甄霆;俞钦明;王彬;朱振;徐琪;陈国宏;
促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因,但FSH在生物体内的半衰期非常短,本试验将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因各亚基的C末端进行基因融合,以期获得pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α重组蛋白。设计去除目的基因信号肽和含有酶切位点的特异性引物,经融合PCR扩增获得了目的基因FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α,通过构建原核表达载体pET32a-FSHα-CTP、pET32a-FSHβ-CTP和pET32a-FSHβ-CTP-α,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,蛋白纯化。结果显示,3个融合蛋白FSHα-CTP、FSHβ-CTP和FSHβ-CTP-α的IPTG最佳诱导时间分别为4、5和5h,最佳诱导浓度分别为0.2、0.8和1.5mmol/L,且都是以包涵体形式存在,相对分子质量分别为32 000、35 000和46 000,与预期大小一致。结果表明,本试验成功构建了鹅pET-32a-FSHα-CTP、pET-32a-FSHβ-CTP和pET-32a-FSHβ-CTP-α的原核表达载体,并对它们的重组蛋白进行了纯化,为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础。
2014年11期 v.34;No.215 1805-1812页 [查看摘要][在线阅读][下载 503K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 邓阳;赵世明;唐华侨;靳茹文;李英伦;
本试验利用证治药动学的方法,研究了伊维菌素在樱桃谷鸭体内药物动力学变化,旨在验证黄曲霉毒素B1中毒后中药制剂"保肝护肾脱霉素"的药理作用。将117只健康1日龄的樱桃谷鸭随机平均分成3组,Ⅰ组(正常组)饲喂健康饲料,饲喂28d。Ⅱ组(病理组)前7d饲喂健康饲料,8~21d饲喂含有黄曲霉毒素B1的霉变饲料,22~28d饲喂健康饲料。Ⅲ组(中药反证组)前7d饲喂健康饲料,8~22d饲喂含黄曲霉毒素B1的霉变饲料,22~28d饲喂健康饲料,与此同时对每只鸭子每天口服保肝护肾脱毒素液5mL,口服7d,第29天,给上述3组试验鸭口服伊维菌素溶液,分别在给药前(0h)和给药后时间点从鸭的颈静脉采血,采用高效液相荧光色谱法进行检测。结果显示,黄曲霉毒素B1造成的病理损伤,能改变伊维菌素内服在鸭体内的药动学特征,表现出吸收减慢,吸收程度减弱,消除速率减弱的药动学特征。经过中药制剂"保肝护肾脱霉素"反证后,伊维菌素的吸收及消除速度都有不同程度地增加。试验结果表明,从药动学角度说明中药制剂"保肝护肾脱霉素"对黄曲霉毒素B1造成的病理损伤有修复作用。
2014年11期 v.34;No.215 1813-1817+1823页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 郭慧;钟友宝;胡小芬;李勇;
本研究旨在了解宁都黄鸡泌尿系统的组织学特征,观察PAS阳性物质和肥大细胞在宁都黄鸡泌尿系统中的分布。通过石蜡切片,采用H.E染色,观察宁都黄鸡泌尿系统的显微结构;采用PAS反应法及甲苯胺蓝染色鉴定阳性细胞分布情况。结果显示,宁都黄鸡泌尿系统由一对长条豆荚状的肾脏组成,每侧肾脏有一支输尿管,无膀胱和脂肪囊。肾实质由若干肾小叶构成,有皮质和髓质之分。肾小体体积较小,肾小球结构简单,数量众多。肾脏内有较多PAS阳性细胞,主要分布于肾小管间的结缔组织、肾小球基底膜以及连接小管上皮细胞的顶部。肥大细胞体积较大,呈紫红色,多为圆形和梭形,主要分布于肾小管间的结缔组织和肾小体内。结果表明,宁都黄鸡泌尿系统与常见家禽的泌尿系统显微结构相似,PAS反应法对鉴定宁都黄鸡肾小球基底膜的病理变化及研究预防尿结石的发生有重要意义,肥大细胞对宁都黄鸡泌尿系统疾病的防御具有积极的作用。
2014年11期 v.34;No.215 1818-1823页 [查看摘要][在线阅读][下载 730K] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 刘姗姗;陶金忠;武小虎;魏玉兵;童建伟;胡俊杰;张勇;赵国顺;赵兴绪;
根据不同环境温度条件下双峰驼血浆中蛋白表达的差异,探讨环境高温对双峰驼的差异蛋白在环境适应性中的作用机制。采用二维凝胶电泳(2-DE)结合MADIL-TOF-TOF串联质谱的方法对环境高温双峰驼的血浆进行蛋白质组分析鉴定。结果显示,4种蛋白的表达上调,分别是免疫球蛋白重链的恒定区,结合珠蛋白,载脂蛋白AIV,纤维蛋白原β链前体。1种蛋白的表达下调即血清白蛋白。结果表明,环境高温引起内分泌系统变化,从而使一些蛋白的表达发生变化。这些蛋白主要与机体急性期应答、免疫反应、物质运输及物质代谢等相关。
2014年11期 v.34;No.215 1824-1828页 [查看摘要][在线阅读][下载 158K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 陶淑霞;黄海龙;贾宇;孟祥明;钱爱东;
为探讨抗菌肽高表达量黄粉虫对肉鸡生长性能、肠道菌群和小肠绒毛形态的影响。试验以玉米和豆粕为主要原料配制饲粮,试验采用单因子随机区组设计,选择1日龄雌雄各半、体质量相近、健康的爱拔益加(AA)肉鸡300只,测体质量后随机分为3个组,分别为对照组、黄粉虫未诱导组和黄粉虫诱导组,每组5个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂基础日粮,未诱导组和诱导组分别用未诱导和诱导的2%黄粉虫粉等量替代基础日粮中的鱼粉。试验期42d。结果显示,各组肉鸡的日采食量差异均不显著(P=0.559),黄粉虫诱导组日增重极显著高于对照组和黄粉虫未诱导组(P=0.005),而料肉比极显著低于对照组和黄粉虫未诱导组(P<0.000 1)。黄粉虫诱导组大肠杆菌数量极显著低于对照组和黄粉虫未诱导组(P<0.000 1),各组肉鸡乳酸杆菌数量在21目龄差异不显著(P=0.191),42日龄差异显著(P=0.034)。添加抗菌肽高表达量的黄粉虫极显著提高十二指肠、空肠和回肠小肠绒毛的长度(P<0.000 1)和绒毛长度与隐窝深度的比值(P<0.000 1),各组肉鸡的隐窝深度差异不显著,但呈诱导组<未诱导组<对照组的趋势。结果表明,抗菌肽高表达量黄粉虫能够提高肉鸡的生长性能,降低肠道中大肠杆菌数量,促进肠道中乳酸杆菌繁殖,改善小肠绒毛形态。
2014年11期 v.34;No.215 1829-1833页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：405 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：1 ]
- 张晓军;李传民;赵伟;于海滨;赵志辉;孙博兴;
生物信息学方法预测出miRNA-375可能的靶基因为DIAPH2和QKI,实时荧光定量法检测了靶基因在1日龄、1~7月龄军牧1号白猪睾丸组织中的表达量。结果表明,3月龄前猪睾丸组织中miRNA-375表达量极低,4~7月龄表达水平逐渐上调,差异显著。预测靶基因DIAPH2在1~7月龄呈显著下调趋势,OKI基因在1~7月龄睾丸组织中表达水平呈显著上调趋势。经SPSS13.0分析可知,不同时期睾丸组织中miRNA-375与2个预测靶基因DIAPH2和QKI的相关系数r分别是-0.396(P<0.05),0.411(P<0.05),2个预测靶基因DIAPH2和QKI之间的相关系数是0.151(P>0.05),靶基因DIAPH2和QKI无明显联系,初步证明DIAPH2可能是miRNA-375的靶基因,为探索猪睾丸组织发育提供了一定的研究基础。
2014年11期 v.34;No.215 1846-1849页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 林心宇;翁丽蓉;章文;黄小红;
以长白猪精液为材料,采用经典的纯化方法获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.3.1.52,NAGase)的2种同工酶,命名为:NAGaseⅠ和NAGaseⅡ。其中NAGaseⅡ的比活力为358.21U/mg,纯化倍数为6.37倍。以海藻糖、D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖为效应物,研究其对该酶活性的影响。结果表明:在特定浓度范围内,海藻糖对酶活力基本没有影响;D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖对该酶均有一定的抑制作用;D-甘露糖对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI为11.94mmo/L;蔗糖对酶的抑制作用表现为竞争型,抑制常数KI为0.56mmol/L;葡萄糖对酶的抑制作用表现为混合型,抑制常数KI和KIS分别为0.35mol/L和64.29mmol/L。
2014年11期 v.34;No.215 1850-1854页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 赵雪丹;王慧;康丽;宋倩;温杰锋;贾美婷;张秀梅;唐辉;
为研究褪黑激素受体基因MTNR1B对鸡产蛋性状的影响,本试验用直接测序法检测了434只寿光鸡MTNR1B5′调控区的SNPs,并与寿光鸡的产蛋性状进行关联分析。结果发现,在5′调控区有13个SNPs位点,9个位点中度多态,4个位点低度多态,所有位点处于哈代温伯格平衡状态。-836位点(C→T),-778位点(G→A)和-629位点(G→A)完全连锁,群体中有CGA和TAG 2种单倍型。CGA使产蛋数增加,在前、中、后期和总产蛋数上,加性效应值分别为1.0、2.5、1.4和4.9枚。在中期、后期和总产蛋数上2种单倍型存在正向互作效应,显性效应分别达到了2.7、2.3和5.6枚。构建的包含TAG、CGA和TGG 3种单倍型启动活性试验表明,-778位点突变是单倍型效应差异的关键。综上所述,MTNR1B的5′调控区有丰富的SNPs位点,-836、-778和-629位点SNPs及单倍型对寿光鸡的产蛋量有显著影响,可作为寿光鸡产蛋量辅助选择的具有潜在应用价值的分子遗传标记。
2014年11期 v.34;No.215 1855-1860页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]