预防兽医学

  • 欧洲型PRRSV N蛋白特异性抗原表位基因串联表达及其产物的纯化

    李冰;唐峰;卢赫;冯方周;丁壮;

    采用SOE-PCR方法将编码欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的aa2~12和aa40~46核苷酸片段进行重复串联,获得编码双表位重复串联基因NE,构建表达载体pGEX-4T-1-NE,将其转入BL21(DE3)pLysS菌中,获得融合蛋白。Western-blot检测结果表明,该融合蛋白可被欧洲型PRRSV阳性血清识别,而不能被美洲型PRRSV阳性血清、猪瘟病毒阳性血清和伪狂犬病病毒阳性血清识别。纯化所得的融合蛋白,为建立检测欧洲型PRRSV提供了抗原基础。

    2015年01期 v.35;No.217 1-4+35页 [查看摘要][在线阅读][下载 282K]
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  • 猪传染性胃肠炎病毒M、N基因重组杆状病毒的构建及其口服免疫小鼠诱导抗体水平测定

    宋振辉;卿家超;冷勇;买买提·艾孜子;齐晓娟;叶翠芳;

    利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)M和N结构蛋白基因,将其分别克隆入载体FastBacTM Dual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M和pFastBacTM Dual-N,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-N;在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-N。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明,杆状病毒表达的M蛋白和N蛋白能够被特异性阳性血清识别,重组蛋白具有较好的反应原性。将重组杆状病毒rBac-M和rBac-N口服免疫小鼠,收集小鼠粪便检测抗TGEV sIgA抗体水平,采集血液检测血清中抗TGEV IgG。结果显示,重组杆状病毒(rBac-M和rBac-N)可诱导小鼠产生粘膜免疫和体液免疫应答。试验结果初步预示了杆状病毒经口服途径作为抗原递呈载体的可行性,也为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。

    2015年01期 v.35;No.217 5-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 275K]
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  • 猪巨细胞病毒环介导等温扩增方法的建立

    廖春燕;徐志文;周远成;朱玲;郭万柱;

    根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的DNA序列设计合成4对特异性引物,通过优化反应条件,以及敏感性、特异性检测,建立了猪巨细胞病毒的环介导等温扩增检测方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP);用建立的检测方法对2013年来自四川省雅安、成都、绵阳、眉山、乐山、德阳、遂宁、资阳等市的136份病料进行猪巨细胞病毒检测,将检测结果与常规PCR方法检测结果进行比对。结果显示,本试验建立的方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;136份病料用LAMP检测,其中有89份样品为猪巨细胞病毒阳性,其阳性率与常规PCR方法检测的阳性相符率为100%。结果表明,本试验成功建立了PCMV的LAMP检测方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊,对PCMV的快速诊断、综合防控等具有重要意义。

    2015年01期 v.35;No.217 11-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 214K]
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  • 2011—2012年四川省猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析

    孙贤刚;唐蕊涵;蔡雨函;周远成;徐志文;朱玲;

    为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本试验从四川省11个市19个不同地区发生仔猪腹泻疾病的猪场采集的病料中分别扩增到8个PEDV(SC-8)ORF3和部分S基因序列,将其进行比对和遗传演化分析。结果显示,SC-8的ORF3基因包含674~676个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的国内外地方流行株的核苷酸序列同源性为95.7%~99.9%,氨基酸序列同源性为98.2%~100%,与标准毒株CV777相比,核苷酸序列和氨基酸序列除存在点突变现象外,部分序列还存在核苷酸的插入和缺失性突变;部分S基因扩增长度为981bp,编码327个氨基酸,与国内外参考毒株的核苷酸序列同源性为93.2%~99.5%,氨基酸序列同源性为93.5%~100%,与标准毒株CV777相比,四川-绵阳(SCMY)分离株在92~93nt之间存在1个核苷酸插入,在2~29aa之间也有18个氨基酸发生了突变;系统进化树分析表明,8株PEDV ORF3基因均与野毒株亲缘关系较近,而与弱毒疫苗株亲缘关系较远;SC-8的部分S基因均与国内地方流行毒株亲缘关系较近,而与国外分离株的亲缘关系较远。

    2015年01期 v.35;No.217 16-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 369K]
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  • 猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征免疫程序设计

    呼显生;李雪;

    选择猪繁殖与呼吸综合征病毒和抗体阴性、猪伪狂犬病抗体阴性、猪瘟抗原阴性的20头仔猪,随机分成4组,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,分别设计3种猪瘟、猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征免疫程序,首免后第2周开始每隔2周分别采血检测抗体。试验结果表明只有试验Ⅰ组的免疫程序可行,即:21日龄进行猪瘟疫苗首免,60日龄加强免疫1次,母猪分娩前10日龄进行猪伪狂犬疫苗首免,35日龄加强免疫1次,35日龄进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗首免,60日龄加强免疫1次。

    2015年01期 v.35;No.217 22-24+30页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K]
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  • 纳米铝胶佐剂增强猪细小病毒灭活疫苗猪体免疫的效果

    寇亚楠;刘石;王瑞宁;耿静微;徐卫松;陈红英;崔保安;杨国宇;魏战勇;

    将20头35日龄断奶仔猪随机分为4组,将制备的纳米铝胶佐剂猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)灭活疫苗肌肉注射免疫接种,并以常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗组、市售PPV油乳剂灭活疫苗组为疫苗对照,生理盐水组做阴性对照,应用HI和ELISA检测接种猪的体液免疫水平,流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。体液免疫检测结果显示,PPV纳米铝胶佐剂疫苗组能显著提高机体产生抗体的速度,在首免后第2周产生有效保护抗体水平显著高于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗组(P<0.05),在第3周其抗体水平达到峰值;细胞免疫检测结果显示,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,以纳米铝胶为佐剂制备的猪细小病毒灭活疫苗,能显著提高机体的免疫水平,并较早刺激机体产生抗体,具有较好的免疫保护效果。

    2015年01期 v.35;No.217 25-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K]
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  • 鸭新城疫病毒山东分离株的生物学特性与F基因遗传进化分析

    杨少华;许传田;胡北侠;张琳;黄庆华;张秀美;

    从山东规模化鸭场采集棉拭子样品并接种SPF鸡胚分离鉴定NDV,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致死指数(ICPI)来确定分离株的毒力,采用RT-PCR方法对分离株F基因进行测序并进行遗传进化分析。结果显示,从正常鸭群棉拭子中分离到4株NDV,F蛋白裂解位点的氨基酸序列表明4个分离株中2株氨基酸序列为112 ERQERL117,1株为112 GKQGRL117,符合弱毒株序列特征;1个分离株为112 RRQKRL117,符合强毒株序列特征。系统进化分析表明,其中2株属于ClassⅠ分支、2株属于ClassⅡ分支,ClassⅡ分支中的2个分离株1个为基因Ⅶ型强毒株,1个属于基因Ⅰ型弱毒株,与Queensland V4等毒株的同源性较高。

    2015年01期 v.35;No.217 31-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K]
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  • 泰山松花粉多糖对超强毒IBDV克隆化毒株的免疫增强效果

    李奕芙;赵昌亮;朱瑞良;黄璇;潘德芹;李兵;

    筛选了4株氨基酸序列差异显著的超强毒力传染性法氏囊病毒(vvIBDV)的细胞弱化毒株GXCL1-25、GXCL2-30、GXCL4-25、GXCL5-30制备活疫苗(加入泰山松花粉多糖为免疫佐剂,蜂胶佐剂作为对照),并分别对这些疫苗的免疫效果进行分析。分别测定4株病毒克隆株的TCID50,并分别制备相应的佐剂活疫苗进行接种试验。对4株病毒克隆分别设置无免疫佐剂疫苗接种组(A1、B1、C1、D1)、松花粉多糖佐剂疫苗接种组(A2、B2、C2、D2)、蜂胶佐剂疫苗接种组(A3、B3、C3、D3)及空白对照组(E)。每组接种SPF鸡50只,于14日龄首免,25日龄二免。分别于一免后0、3、7d和二免后3、10、17、24d采血,用ELISA方法检测血清抗体效价和IL-2分泌水平;28日龄与42日龄测定外周血淋巴细胞比率,28日龄每组剖杀5只测免疫器官指数;35日龄进行攻毒试验。结果显示,各试验组的抗体效价和IL-2水平均在35日龄时(二免后第10天)达到最高峰,但佐剂疫苗组与无佐剂疫苗组相比具有更高的IBDV抗体水平、更长的抗体维持时间长、更轻的法氏囊损伤,并且攻毒保护率均在90%以上;尤其松花粉多糖佐剂疫苗组的抗体效价、IL-2水平和淋巴细胞比率比其他组更高,且松花粉多糖为佐剂的GXCL4-25组免疫效果最好。结果表明,以泰山松花粉多糖为佐剂的IBDV细胞弱化活疫苗表现出良好的免疫原性和保护力。

    2015年01期 v.35;No.217 36-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K]
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  • 四川省部分地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及espp2基因序列分析

    魏兴良;董敏;张禄滑;丁玲强;赖陆叶;闫雪锋;余敏;文翼平;文心田;黄小波;伍锐;曹三杰;

    为了解四川省副猪嗜血杆菌病的流行情况及分析分离株espp2基因,本试验从2013年8月到12月分离该菌并扩增其espp2基因进行序列分析。结果显示,分离到12株副猪嗜血杆菌,镜检发现为革兰阴性短杆菌;卫星试验表明分离株在金黄色葡萄球菌周围产生卫星现象;生化试验显示分离株发酵葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、果糖、木糖、甘露醇、山梨醇、尿素、D-核糖和精氨酸水解酶;PCR鉴定发现均扩增到约821bp的目的片段。药敏试验显示分离株对氟苯尼考、先锋霉素V、阿莫西林、强力霉素和环丙氟哌酸敏感。扩增SC-1和12株分离株的espp2基因并测序,测序结果与GenBank公布的副猪嗜血杆菌SH0165、ZJ0906和Nagasaki的espp2基因共计16条序列进行比对发现相似性大于98%,这16条序列编码的氨基酸序列相似性大于97%,表明副猪嗜血杆菌espp2基因变异度低,较保守。

    2015年01期 v.35;No.217 42-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 590K]
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  • 鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用

    李欢;杨霞;赵军;魏亚鹏;陈陆;王新卫;常洪涛;李永涛;刘红英;王川庆;

    扩增鸡杆菌毒力基因gtxA全长序列,对GtxA蛋白的抗原性进行预测。将gtxA基因的部分抗原表位区所处片段克隆至pGEX-6P-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内表达。重组菌在37℃条件下经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果表明该蛋白高效表达,表达蛋白相对分子质量约为50 000,以可溶性蛋白和包涵体蛋白2种形式存在。Western blotting分析表明,获得的蛋白具有良好的反应原性和特异性。以纯化的GtxA蛋白为包被抗原建立了抗GtxA间接ELISA方法:抗原最佳包被质量为0.403μg/孔,一抗血清的最佳稀释度为1∶160,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2 000,阳性判定标准为血清D450≥0.28。应用建立的检测方法对680份临诊鸡血清进行检测,结果显示河南省不同地区鸡群鸡杆菌感染阳性率为19.06%(129/680)。结果表明,该方法可有效检测鸡杆菌血清抗体。

    2015年01期 v.35;No.217 50-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 309K]
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  • 副鸡禽杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

    苗立中;王艳;付强;孟霞;孙翠平;谢金文;

    根据GenBank公布的副鸡禽杆菌hagA基因序列设计特异性引物,经PCR扩增出了123bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果显示,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2=0.999 8;溶解曲线特异,产物Tm在81.3~81.5℃之间;最低检测限为0.18拷贝/μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;该方法不与其细菌发生交叉反应,呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于1%,说明该方法重复性很好;临床副鸡禽杆菌样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR方法的检测率明显高于常规PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析副鸡禽杆菌感染程度奠定了基础。

    2015年01期 v.35;No.217 57-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 349K]
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  • 枯草芽孢杆菌酸性内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质

    马丽;孟凡旭;杨伟平;姬生跃;辛海云;曹斌云;

    将来源于藏猪粪便的枯草芽孢杆菌BY-4菌株接种于含4%麸皮的产酶培养基中,37℃、220r/min培养48h,发酵上清液经HiTrap Phenyl HP疏水作用层析、HiPrep 16/60Sephacryl S-100凝胶过滤层析分离纯化得到一个内切葡聚糖酶组分,纯化倍数为15.5,回收率为25.0%。经SDS-PAGE、酶谱分析鉴定,两步分离纯化后为电泳纯的纤维素酶,相对分子量约为55 000。酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH为4.5,最适反应温度为60℃。Mg2+、Zn2+对该酶有一定的激活作用,而Mn2+、Co2+、Ag+对该酶产生了抑制作用。

    2015年01期 v.35;No.217 63-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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  • 沙门菌感染后鸡不同组织中Nod1基因表达量的变化分析

    陶志云;施祖灏;朱春红;徐文娟;宋卫涛;宋迟;秦爱建;

    采用Real-time PCR的方法检测了AA肉鸡感染沙门菌后6h和1、2、3、5、7d的胸腺、脾、法氏囊和小肠中Nod1基因的表达量,分析Nod1基因在沙门菌感染过程中的表达量变化情况,在转录水平探讨沙门菌感染对Nod1基因表达量的影响。试验分为3组,鸡白痢沙门菌组,肠炎沙门菌组和对照组。结果显示,感染组与对照组相比,在4个器官中Nod1基因的表达量在2种沙门菌感染后的一定时间内均出现了上升,表达量达到高峰的时间分别为2d(胸腺)、5d(脾脏)、2d和3d(法氏囊)及5d和7d(小肠)。结果表明,2种沙门菌感染均可激活Nod1基因表达,提示Nod1基因可能与鸡的抗感染免疫作用有关。

    2015年01期 v.35;No.217 68-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 306K]
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人兽共患病

  • 毛皮动物肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛A基因克隆测序与生物信息分析

    钟世勋;迟珊珊;王振;姜晓东;刘丽萍;邵明旭;王传文;于翠莲;朱瑞良;

    根据GenBank中肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因A(MrkA)JF759921的序列设计1对引物,对8株毛皮动物肺炎克雷伯菌进行克隆测序,并应用生物信息学相关软件和方法,预测MrkA蛋白二级结构和B细胞抗原表位。PCR扩增出了609bp的目的基因片段,生物信息分析结果显示其开放阅读框架为609bp,编码202个氨基酸;二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角,推测MrkA蛋白有8个B细胞优势抗原表位区域。结果表明,MrkA基因较稳定,其在进化过程中并未发生明显变异,为进一步分析肺炎克雷伯菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。

    2015年01期 v.35;No.217 74-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 565K]
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  • Ras-GRF1蛋白对小鼠学习和记忆能力的影响

    薄乐;白换力;张海雷;鞠传静;孟轲音;李忠义;王雄;徐静;刘文森;万家余;陈志宝;

    通过避暗穿梭试验、跳台试验、水迷宫试验和自主活动试验观察Ras-GRF10/0鼠和野生鼠2种小鼠行为学变化,来研究Ras-GRF1蛋白对学习和记忆能力的影响。结果显示,在避暗试验中Ras-GRF10/0鼠被电击的次数多于野生鼠,且在第1天有显著差异(P<0.05);在跳台试验中,野生鼠表现出的学习记忆能力也强于基因敲除鼠;在水迷宫定位航行试验中,基因敲除鼠的潜伏期均长于野生鼠,且在第2天有显著差异(P<0.05),第3、4、5、6、7天都有极显著的差异(P<0.01);在空间探索试验中,基因敲除鼠和野生鼠第1次穿越平台的时间和穿越平台的次数均无显著差异;在自主活动试验中,基因敲除鼠和野生鼠的活动次数没有显著性的差异,但是野生鼠的活动次数都多于敲除鼠。结果表明,野生鼠的学习和记忆能力均强于Ras-GRF10/0鼠,且野生鼠的中枢神经兴奋性高于基因敲除鼠,反映出Ras-GRF1蛋白缺失,对小鼠学习和记忆能力有一定程度的损伤。

    2015年01期 v.35;No.217 81-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 258K]
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基础兽医学

  • 重组猪IFN-λ3原核表达及其活性分析

    周恒;沈海燕;郭鹏举;张春红;张建峰;刘志成;孙俊颖;李玉谷;

    应用RT-PCR技术从多聚肌苷酸多聚胞苷酸(poly(I∶C))刺激的ST细胞中扩增猪干扰素-λ3(PoIFN-λ3)基因。基因序列分析表明,PoIFN-λ3基因全长为588bp,与绵羊IFN-λ3基因(XM_004015683)的同源性最高(87.6%);分子遗传进化树分析表明猪IFN-λ3与牛、绵羊亲缘关系最近,与马、人、黑猩猩和鸡的亲缘关系次之。将PoIFN-λ3成熟肽序列定向插入pET-32a载体,转化宿主菌Rosetta gami B,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测分析表明,PoIFN-λ3基因获得表达,重组蛋白大小为32 000,以包涵体形式存在。重组蛋白经变性、纯化、复性后,用细胞病变抑制法在MDBK/VSV系统上进行抗病毒活性的测定。结果显示,复性后重组蛋白的含量约为1g/L,抗水泡性口炎病毒(VSV)活性达到2×103 U/mg,表明重组poIFN-λ3具有较高的抗病毒作用。

    2015年01期 v.35;No.217 86-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K]
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  • 猪骨髓间充质干细胞分离培养和诱导分化脂肪细胞

    张庆美;李方正;蒋忠玲;孙东兴;李东建;宋学雄;

    采用全骨髓培养法分离猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)并传代培养;取第4代纯化的MSCs在成脂诱导培养基中诱导分化;分化的成脂细胞用形态学和油红O染色法进行鉴定;用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测成脂分化标志基因PPARγ2和LPL mRNA的表达情况。结果显示,分离培养的猪MSCs细胞经连续传代形态上无明显改变;MSCs在成脂分化培养液中诱导分化2d开始有少量脂滴出现,油红O染色成阳性,诱导18d成脂转化率可达59.8%;在诱导分化第5、10、15天时,PPARγ2mRNA相对表达量分别是(5.065±0.159)、(6.268±0.340)、(9.277±0.261),LPL mRNA的相对表达量分别是(10.995±1.473)、(13.130±0.712)、(15.762±0.934)。结果表明,用本诱导条件诱导猪MSCs向脂肪细胞分化,经形态学和油红O染色鉴定,成脂细胞分化率可达60%,且随分化时间的延长,脂肪细胞标志基因表达增加。

    2015年01期 v.35;No.217 91-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 496K]
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  • DMSO对兔骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的影响

    许晓婷;翟明胜;蒋金航;陈晓佩;丁丹丹;于文浩;刘远哲;王新庄;

    红细胞裂解法分离获得兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),传代纯化培养并进行生物特性的鉴定。不同浓度二甲基亚砜(DMSO)(0、0.5%、1%、2%、4%)作用于贴壁前、贴壁后的兔BM-MSCs,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察细胞的形态、生长情况。DMSO体外诱导P3代兔BM-MSCs分化为胰岛细胞,观察诱导前后细胞形态学变化;双硫腙染色法初步鉴定胰岛细胞;免疫细胞化学检测胰岛素的表达;ELISA检测胰岛素的分泌。结果显示,原代、传代细胞呈成纤维细胞样,生长良好。DMSO对细胞的生长有抑制作用,细胞贴壁前、后的2种处理方法相比,DMSO对细胞生长抑制作用差异不显著(P>0.05)。相对而言,DMSO浓度<1%对细胞的生长损害作用较小。诱导分化过程中,细胞变圆,逐渐聚集,6d出现细胞聚集,随着诱导的继续,形成细胞团样结构,细胞团数逐渐增多;终末阶段试验组双硫腙染色呈明显的猩红色、免疫细胞化学法鉴定胰岛素表达显示阳性,ELISA检测细胞分泌胰岛素,诱导组7d和12d的胰岛素含量分别为(31.32±0.14)mU/L和(32.85±0.21)mU/L,与对照组的(25.02±0.55)mU/L和(25.06±2.46)mU/L比较,差异极显著。结果表明,DMSO可以用于诱导BM-MSCs分化,终末阶段形成分泌胰岛素的功能细胞,未来可以针对其诱导的高效性进一步进行研究。

    2015年01期 v.35;No.217 97-102+126页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K]
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  • BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达

    王勃;贺晓丽;王勇胜;王雪娇;张涌;郑月茂;

    体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P<0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。

    2015年01期 v.35;No.217 103-108页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K]
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  • 咪达唑仑对山羊不同脑区NO/cGMP信号转导系统的影响

    师铭咸;刘子睿;张宇;魏成威;吴越;于东旭;刘沫;姜仁礼;李欣然;王冠颖;高利;

    将20只山羊随机分成5组,分别为对照期组、诱导期组、镇静期组、恢复Ⅰ期组和恢复Ⅱ期组,连续观察镇静状态下山羊的行为学变化,采取不同镇静时期山羊脑组织,测定山羊大脑、海马、丘脑、小脑和脑干内一氧化氮合成酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)和环鸟苷酸(cGMP)浓度。结果显示,NOS活性和NO、cGMP含量在镇静期明显下降,恢复期恢复至正常水平,上述指标的变化趋势与山羊行为学变化基本一致。结果表明,咪达唑仑的作用与抑制山羊各个脑区内NO/cGMP信号转导系统有关。

    2015年01期 v.35;No.217 109-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K]
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  • 玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其联合染毒对小鼠空肠消化酶的影响

    张超;孟锐;邓俊良;任志华;邓惠丹;邓又天;左之才;王娅;彭西;崔恒敏;胡延春;

    腹腔单独或联合注射不同质量浓度的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)1.5、2.5mg/kg和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)20、30mg/kg),在第0、3、5、8、12天测定小鼠空肠脂肪酶、淀粉酶活力和二胺氧化酶(DAO)活力。结果显示,在各个时间点上,与对照组相比较,各染毒组脂肪酶、淀粉酶、DAO活力显著下降(P<0.05或P<0.01);随着时间的推移,各染毒组脂肪酶、淀粉酶、DOA活力显著下降(P<0.05或P<0.01)。ZEA和DON单独和联合染毒均能降低小鼠空肠消化酶活性,表现出剂量效应和相互作用时的互作效应;同时,在测定时间范围内表现出毒素作用的累积效应。

    2015年01期 v.35;No.217 112-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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临床兽医学

  • 健康水牛与患子宫内膜炎水牛子宫内细菌组成的比较分析

    刘超逊;梁辛;杨承剑;覃广胜;韦升菊;邹彩霞;梁贤威;杨炳壮;

    应用16SrDNA克隆文库的方法,分别建立健康和患子宫内膜炎水牛子宫内细菌的16SrDNA克隆文库,并通过序列分析和同源性比对确定细菌的系统发育学地位。结果显示,产后14d水牛子宫内的细菌主要属于梭杆菌门(Fusobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)。患子宫内膜炎组(M组)中有38.89%克隆的属于梭杆菌门(Fusobacteria),序列比对分析表明,这些序列和Fusobacterium necrophorum subsp有最高的的相似度(99%)。另外46.67%的克隆属于拟杆菌门(Bacteroidetes),其中Bacteroides heparinolyticus和Porphyromonas levii在这个门中所占比例最大,分别为55.95%和42.86%,属于厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteri)的克隆较少,所占比例分别为7.22%和6.67%,但是这2个门中的细菌种类相对丰富。仅仅只有0.56%属于放线菌门(Actinobacteria)。健康组(H组)中,26.56%的克隆属于梭杆菌门(Fusobacteria),并且和Fusobacterium necrophorum subsp的相似度最高(99%),32.81%的克隆属于Firmicutes,这些克隆中的61.9%与Clostridium cadaveris的相似性最高(≧97%),35.94%的克隆属于Bacteroidetes,其中56.52%的序列与Bacteroides heparinolyticus相似性最高(99%)。克隆中属于Proteobacteria的比例较低(4.69%)。结果表明,Fusobacterium necrophorum subsp、Bacteroides heparinolyticus和Porphyromonas levii可能是引起水牛产后子宫内膜炎的主要致病菌。厚壁菌门细菌Clostridium cadaveris,拟杆菌门细菌Porphyromonas somerae、Bacteroides pyogenes可能有利于子宫内膜的恢复。

    2015年01期 v.35;No.217 116-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 285K]
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  • 坏死细胞对脓毒症小鼠体内Th1/Th2细胞失衡的影响

    顾冬生;熊露;顾为望;孙尔维;

    将34只C57BL/6小鼠随机分成4组:正常对照组(PBS组,n=5)、假手术对照组(Sham组,n=5)、脓毒症组(CLP组,n=12)以及坏死细胞处理组(Nec组,n=12)。PBS组为正常小鼠,腹腔注射200μL的PBS 1次,Sham组小鼠手术分离盲肠末端后,不进行结扎穿孔;CLP组小鼠用盲肠结扎穿孔法(Cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症模型;Nec组小鼠预先腹腔注射2×107个坏死细胞,第0天再行盲肠结扎穿孔。所有小鼠于制备CLP模型后2周处死,流式细胞仪检测外周血、脾脏和胸腺中CD4+IFN-γ+Th1细胞以及CD4+IL-4+Th2细胞比例。结果显示,CLP组小鼠外周血Th1/Th2比例显著高于Sham组及PBS组(P<0.05),同时脾脏中Th1/Th2比例则低于Sham组(P<0.01)。Nec组小鼠外周血Th1/CD4+T细胞比例及Th1/Th2比例显著低于CLP组(P<0.05),但脾脏中Th1/Th2比例则显著高于CLP组(P<0.01)。结果表明,预先输注坏死细胞可以逆转脓毒症小鼠体内Th1/Th2比例失衡。

    2015年01期 v.35;No.217 122-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K]
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  • 孕鼠补硒对新生乳鼠十二指肠抗氧化能力的影响

    王亨;张军;王艳;赵慧娟;顾铭杰;于惠;余光涛;李建基;

    为探讨孕鼠补硒对新生乳鼠十二指肠抗氧化能力的影响,将9只健康Wistar孕鼠随机分为低剂量补硒组(0.4mg/L,n=3)、高剂量补硒组(0.6mg/L,n=3)和对照组(0.0mg/L,n=3)。母鼠分娩后取新生乳鼠,测体质量,计算新生乳鼠的脾脏和胸腺指数,并测定十二指肠内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(TSOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)。结果显示,与对照组相比,试验组新生乳鼠的初生体质量没有显著变化(P>0.05),胸腺指数和脾脏指数均显著升高(P<0.01),十二指肠内GSH-Px、T-SOD和T-AOC均显著降低(P<0.01)。结果表明,孕鼠补硒降低了新生乳鼠十二指肠的抗氧化能力。

    2015年01期 v.35;No.217 127-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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  • 高钼对小尾寒羊肾脏蛋白含量和代谢酶活性及微核率的影响

    宋超;杨自军;张菲菲;尚泽松;张鹏;王亚垒;郭书周;程才才;

    采用透射电镜、比色法、姬姆萨染色和流式细胞术来探讨高钼对小尾寒羊肾脏蛋白含量、代谢酶活性、微核率及凋亡等的影响。试验采用雄性健康小尾寒羊12只,随机分成3组,分别饲喂含有5.61mg/kg Mo(对照组)、30mg/kg Mo(高钼Ⅰ组)和60mg/kg Mo(高MoⅡ组)的日粮120d(以Na2Mo4·2H2O形式)。随着钼剂量的增加,血清肌酐、血尿素氮、尿酸、肾脏细胞钼含量、微核率以及凋亡率都呈增加的趋势,且显著高于对照组(P<0.01);高钼组小尾寒羊肾脏细胞铜含量、蛋白含量与代谢酶的活性与对照组相比极显著显著降低(P<0.01);透射电镜的结果表明,高钼组肾脏细胞出现不同程度的空泡变性和线粒体肿胀,与肾脏生化指标的观察变化结果相符。结果表明,高钼引起的蛋白含量和代谢酶活性的降低能够影响肾脏细胞的正常功能。

    2015年01期 v.35;No.217 130-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • 钼对鸡免疫功能及抗氧化能力的影响

    王宏伟;周变华;张才;刘梅;赵静;郑关民;李亚丽;杨自军;

    通过向饮水中添加不同剂量钼,建立试验动物模型:对照组(0 mg/L)、钼Ⅰ组(12.5 mg/L)、钼Ⅱ组(25.0mg/L)、钼Ⅲ组(50mg/L)和钼Ⅳ组(100mg/L)。在试验处理第2周和第5周,给鸡接种新城疫疫苗;在试验处理第7周和第10周,采集血液制备血清,测定血清HI抗体效价和抗氧化指标。结果显示,添加50mg钼显著提高了鸡末期体质量(P<0.05)和平均增质量(P<0.05);钼处理组血清HI抗体效价均高于对照组,其中Ⅲ组和钼Ⅳ组与对照组相比差异极显著(P<0.01);添加不同剂量钼提高了鸡血清TPr和Alb含量,XOD和ACP活性;添加不同剂量钼显著提高了鸡血清SOD、GSH-PX、GSH、NO及T-NOS等酶的活性,且呈剂量依赖关系。结果表明,添加钼能促进鸡生长、提高鸡的免疫功能及抗氧化能力。

    2015年01期 v.35;No.217 135-139页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 钼镉联合胁迫对山羊组织和器官中微量元素含量的影响

    彭梦华;王琦;曹华斌;张彩英;胡国良;郭小权;庄煜;庄智明;顾小龙;彭成诚;

    36头波尔山羊随机分成4组,选用钼酸铵、氯化镉作为试验钼源、镉源。对照组口服相应剂量去离子水,试验组分为低镉低钼组(Cd 0.5mg/kg+Mo 15mg/kg)、低镉中钼组(Cd 0.5mg/kg+Mo 30mg/kg)、低镉高钼组(Cd0.5mg/kg+Mo 45mg/kg)。试验期为50d,并于第0、25、50天每组3头山羊采血并剖杀取组织样品,测定其钼、镉和铜的含量。结果显示:(1)随着试验攻毒时间的增加,心肌中的钼、镉含量与对照组相比显著升高(P<0.05),且有随灌服钼的增加而升高的趋势。而铜的含量表现为部分显著下降(P<0.05);(2)随着试验攻毒时间和灌服钼质量浓度的增加,肝脏、肾脏、肺脏中的钼、镉含量与对照组相比均显著升高(P<0.05),而铜的含量也显著升高(P<0.05);(3)随着试验攻毒时间和灌服钼浓度的增加,血清中的钼、镉含量与对照组相比均显著升高(P<0.05),而铜的含量表现为部分显著升高(P<0.05);(4)随着试验攻毒时间和灌服钼浓度的增加,脾脏中的钼含量与对照组相比均显著升高(P<0.05),镉、铜含量部分显著上升(P<0.05)。由此可见,羊长期摄入过量钼、镉可使组织器官中钼、镉蓄积量增加,同时限制了机体对铜的利用。

    2015年01期 v.35;No.217 140-145+176页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 酵母铬对围产前期奶牛免疫功能的影响

    刘琳珊;周玉龙;张旭;李淑静;王恒根;孙斌;范春玲;

    选用20头体况和预产期相近的中国荷斯坦奶牛,随机分为4组,对照组喂基础日粮,3个处理组在基础日粮中分别添加2.4、4.8、7.2g/d的酵母铬。结果显示,与对照组相比,添加酵母铬可以提高外周血淋巴细胞转化能力,提高了IgM、IgG和IgA的含量(P<0.01)。结果表明,基础日粮添加2.4g/d的酵母铬,使DM铬添加水平为0.4mg/kg时,效果较好。

    2015年01期 v.35;No.217 146-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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动物科学

  • 黄芪多糖对猪精液低温保存的影响

    胡传活;许春荣;陆媚;韦干显;刘德玉;王英群;彭夏云;韦永强;

    通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同质量浓度的黄芪多糖(0、0.10、0.20、0.30、0.40g/L),对比7d内、4℃低温保存下猪精子的活率、活力、精子畸形率、精子质膜和顶体的完整性等参数,探讨黄芪多糖在猪精液低温保存应用的效果。结果显示,在猪精液低温保存后的质量上,0.10g/L质量浓度组与对照组差异不显著(P>0.05),0.40g/L质量浓度组显著差于对照组(P<0.05),0.20、0.30g/L质量浓度组显著好于对照组(P<0.05),所有各组中0.30g/L质量浓度组效果最好。结果表明,在本试验条件下,适宜质量浓度的黄芪多糖可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存效果,其中最佳添加质量浓度是0.30g/L。

    2015年01期 v.35;No.217 150-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K]
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  • 大豆异黄酮对种公兔睾丸指数和某些激素含量的影响

    张立永;官丽辉;

    选择体质量一致、性欲旺盛的健康公兔45只,随机分成5组。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ~Ⅳ组饲喂基础日粮+大豆异黄酮(3、4、5、6mg/kg)。将试验公兔递进饲养在温度为19~22℃、26~29℃和30~33℃环境中各10d,在各自试验期末称空腹质量;左、右睾丸质量,并计算其睾丸指数;测定血清中TSH、T、T3、T4的含量。结果显示,在30~33℃高温环境下,添加6mg/kg大豆异黄酮空腹质量比对照组增加28.44%;左、右睾丸指数分别增加38.75%和38.96%;血清TSH含量提高58.52%;T含量提高78.13%;T3含量降低9.52%;T4含量降低27.28%。结果表明,大豆异黄酮能改善高温环境中种公兔生殖机能,提高公兔利用率,大豆异黄酮在日粮中的添加量以6mg/kg为好。

    2015年01期 v.35;No.217 155-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K]
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综述

  • 新城疫流行病学新特点及鹅新城疫防控策略

    丁壮;尹仁福;薛聪;王建忠;钱晶;

    <正>新城疫(Newcastal disease,ND)是危害我国养禽业最严重的疫病之一,与高致病性禽流感并列为世界公认的最重要的2个禽类疫病。该病为OIE规定的必须报告的疾病,也是我国规定的一类动物疫病,世界各国对新城疫的防制和研究一直十分重视。由于对该病采取的严格防控措施,包括扑杀、强制性免疫等,新城疫的暴发流行得到了一定的控制。据中华人民共和国农业部兽医局《兽医公报》公布的

    2015年01期 v.35;No.217 159-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K]
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  • 先天免疫受体在流产布鲁菌感染中的作用的研究进展

    徐晓阳;陈琛;于爽;曹雪峰;杨洋;郑芸芸;马晓平;耿毅;刘其积;任志华;彭广能;钟志军;

    <正>1绪论传统意义上的免疫系统在体内的有效免疫分先天和后天免疫应答。后天免疫同先天免疫应答相比,对病原菌作出的反应速度较慢,且只对特殊抗原作出反应并具有免疫记忆性。相反,先天免疫反应则迅速,且肩负着抵抗病原菌第一道防线的功能。先天免疫包括机体表面的物理屏障,可溶性因子如补体蛋白,还包括多种细胞如巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞(嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细

    2015年01期 v.35;No.217 169-176页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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