- 高继业;杨致邦;黄伟;黎容红;黄静;杨利;
为探讨鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer)致病的分子机制,检测了血清Ⅰ、Ⅱ型分离菌株CZ2、AF菌体细胞表面蛋白及分泌蛋白的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性,对gap基因进行PCR检测、克隆测序和生物信息学分析,并以抗重组GAPDH小鼠Ig G为一抗对GAPDH的分布进行免疫印迹分析。结果显示,R.anatipestifer CZ2、AF株菌体细胞表面及细胞上清液蛋白能将3-磷酸甘油醛转化为1,3-二磷酸甘油酸,具有GAPDH活性;编码基因开放阅读框大小为1 002 bp,编码334个氨基酸,理论相对分子质量36 700;R.anatipestifer的GAPDH含有NAD+结合区和活性催化区2个结构域,不含信号肽序列或疏水区,与肠溶血性大肠杆菌等病原微生物的GAPDH处于同一分支,属Ⅰ类GAPDH。结果证明,R.anatipestifer CZ2、AF株具有胞外分泌的GAPDH,可能在其致病过程中发挥重要作用。
2015年02期 v.35;No.218 177-183页 [查看摘要][在线阅读][下载 469K] [下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 吴村;崔国林;金文杰;张鑫宇;路明华;陈小玲;王宏俊;朱瑞良;徐福洲;
为弄清某规模化养猪场感染和流行的副猪嗜血杆菌(HPS)菌株的耐药性、血清型及基因型,本试验自该猪场发生浆膜炎和关节炎病猪的不同组织样品中分离到6株HPS菌株,通过细菌培养特性、生化试验和PCR扩增细菌16S rRNA基因片段并测序对分离株进行鉴定;进而鉴定分离株对不同类别抗生素的耐药性;最后对分离株进行血清分型和RAPD基因分型并分析两者的相关性。结果显示,自病猪不同组织脏器中分离鉴定了6株HPS菌株,体外培养具有典型"卫星生长"现象;生化试验结果符合HPS反应特性;PCR均可扩增出821 bp的HPS 16S rRNA基因片段,且序列与HPS一致。药敏试验结果显示分离株对头孢菌素类、青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类抗生素敏感,而对喹诺酮类、磺胺类、林可霉素类和氯霉素类抗生素产生耐药性。琼脂扩散试验结果显示HPS分离株均为血清5型;RAPD分析显示HPS分离株与15个血清型参考菌株可分为4个基因型。本试验结果为HPS的流行病学调查及防控具有一定的借鉴价值。
2015年02期 v.35;No.218 184-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K] [下载次数：273 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 王黎;李碧;周远成;朱玲;徐志文;郭万柱;
根据Gen Bank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N基因,针对其保守序列,设计并合成1对引物,可特异性扩增长度为590 bp目的条带,成功建立了检测TGEV的RT-PCR方法。以等量同一浓度的同一TGEV阳性病毒液进行重复性试验,其3次扩增特异性条带大小均为590 bp。以猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV),猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)进行特异性试验,其结果显示仅TGEV扩增得到预期特异性目的条带。以TGEV阳性病毒液提取的c DNA用紫外分析仪确定核酸质量浓度为1 g/L后,用dd H2O按10倍稀释,稀释度为10-1~10-5,其均能扩增出590 bp特异性条带。在猪传染性胃肠炎高发季节的2013年9月至2014年1月对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场送检的疑似猪传染性胃肠炎感染病猪的临床样品15份,进行检测,其猪传染性胃肠炎阳性率为100%。并且对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场保育舍随机采集的1~10周龄仔猪临床样品500份,进行检测,其1~2周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为17%,病死率为100%,3~4周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为14%,病死率为78.6%,5~6周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为9%,病死率为44.4%,7~8周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为4%,病死率为25%,9~10周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为1%,病死率为0%。从地区来看,在这500份样品中,成都、德阳、绵阳、遂宁、南充地区此病的阳性率分别为15%,6%,10%,6%,8%。以上结果显示所建立的TGEV RT-PCR检测方法,重复性好,特异性强,敏感性高,可用于该病的临床诊断。
2015年02期 v.35;No.218 190-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：578 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：34 ] |[阅读次数：0 ] - 蔡雨函;杨雪;徐志文;郭万柱;周远成;吴云飞;杨文宇;朱玲;
为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。
2015年02期 v.35;No.218 195-200页 [查看摘要][在线阅读][下载 219K] [下载次数：248 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 刘鑫;刁有祥;陈浩;王蛟;孙晓艳;葛平萍;郝东敏;
从山东地区某发病鸭场周围的麻雀体内分离到1株坦布苏病毒,命名为SDS株,并对分离毒株进行毒力测定。应用RT-PCR技术对分离株全基因组进行扩增并测序,将获得的SDS株坦布苏病毒全基因组序列与已在Gen Bank发表的24株坦布苏病毒和6株其他黄病毒属病毒全基因组序列进行遗传进化分析。结果表明,该株坦布苏病毒的基因组全长为10 990 nt,包含94 nt的5'端非编码区、618 nt的3'端非编码区和一个开放阅读框(3 425个氨基酸),编码11种病毒蛋白;与Gen Bank已发表的坦布苏病毒的核苷酸序列同源性为98.2%~99.5%,氨基酸序列同源性为98.1%~99.4%,其中与鸭源WFZ株(KC990545.1)的核苷酸序列同源性最高为99.5%,与鹅源坦布苏病毒(duck eggdrop syndrome virus strain goose,JQ920424.1)和鸡源坦布苏病毒(CJD50,JF926699)的核苷酸序列同源性较低为98.9%。用Net NGlyc 1.0 Server在线软件对病毒蛋白潜在糖基化位点进行预测,结果表明在SDS株病毒多聚蛋白中共有13个潜在的糖基化位点,分别位于5个不同病毒蛋白中。
2015年02期 v.35;No.218 201-206页 [查看摘要][在线阅读][下载 273K] [下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：0 ] - 谭刘刚;鲁梅;朱凤株;张秀美;杨少华;黄庆华;霍亚飞;赵孝民;许传田;
2010年,从山东省水禽市场健康鸭体内分离鉴定了1株H4N6禽流感病毒,命名为A/duck/Shandong/1/2010(DK/SD/1/2010)。对该病毒进行全基因组测序,并与Gen Bank中相关序列进行遗传和进化分析。结果表明,DK/SD/1/2010的7个基因(PB2,PB1,PA,HA,NP,M和NS)来源于欧亚系,NA基因来自于欧亚系和北美系。DK/SD/1/2010 HA裂解位点氨基酸序列(PKKASR↓GLF)和低致病性禽流感的特征一致。动物接种试验表明该病毒不能在鸡和小鼠中复制。推测DK/SD/1/2010可能是不同来源的流感病毒在鸭体内重组和演变形成的重组病毒,该病毒对鸡和鸭无明显致病性。
2015年02期 v.35;No.218 207-212页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 金明兰;霍晓伟;南文龙;鲁会军;任静强;刘春霞;金宁一;侯继波;
为筛选兔出血症病毒T细胞表位,应用纯化的病毒与佐剂联合免疫6周龄豚鼠,三免后10 d采集血液和淋巴细胞,通过T淋巴细胞增殖试验(WST)、酶联免疫斑点(ELISPOT)、ELISA方法检测淋巴细胞增值、IFN-γ和IL-2变化,评价多肽的抗原性。结果显示,多肽P2、P7、P10、P16、P21和P22能刺激动物产生细胞免疫应答,淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌和IL-2水平显著高于其他多肽和对照组。这表明,筛选的多肽P2、P7、P10、P16、P21和P22具有抗原特性,为多表位疫苗的构建和应用提供科学的依据。
2015年02期 v.35;No.218 213-217页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 潘德芹;朱瑞良;李奕芙;黄璇;姜晓东;迟珊珊;
对2012年8月至2013年12月接诊的山东地区的241份病死貂进行病原学鉴定,主要包括生物学特性分析和16S rRNA序列或特定序列的同源性分析,并对多重感染进行统计分析。结果表明,山东地区引起水貂发病的主要病原有:犬瘟热病毒(25.3%)、细小病毒(25.3%)、阿留申病毒(19.1%)、绿脓杆菌(49.0%)、克雷伯氏菌(19.9%)、大肠杆菌(11.2%)、奇异变形杆菌(8.3%)以及巴氏杆菌(5.0%)和肺炎双球菌(2.5%)等。而且主要以单独感染(46.0%)和二重感染(44.4%)为主,三重感染(7.9%)次之,四重感染(1.24%)和五重感染(0.41%)较少。通过本研究掌握了山东地区水貂多重感染的主要病原及其特性,摸清了其感染发病规律,为山东地区规模化养貂场多重感染的诊断与防制提供理论依据。
2015年02期 v.35;No.218 218-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 212K] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 闫宝龙;杨怡;郭筱璐;陈学秋;杜爱芳;
为进一步研究寄生性线虫的滞育机制,参照Adams(1986)的方法,通过瘤胃灌注,将捻转血矛线虫感染性三期幼虫攻入绵羊体内,对绵羊进行处理后,获得捻转血矛线虫滞育虫体。滞育虫体发育程度一致,虫体长(1 067±97)μm(n=18),肠道细胞中含有大量棒状结晶块;性腺开始发育,出现雌驱器原基;颈部出现颈乳突。通过温度检测分析,温度可能不是滞育现象的主要刺激因素。棒状结晶块可以被DAPI特异性着色,其成分可能含有核酸。本试验将为进一步研究捻转血矛线虫的滞育机制及其防治奠定基础。
2015年02期 v.35;No.218 225-228页 [查看摘要][在线阅读][下载 408K] [下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 张晶;刘义伟;张月;吉星煜;赵月兰;包永占;秦建华;
参考Gen Bank中收录的E.acervulina ADF基因序列设计1对特异性引物,以河北保定株堆型艾美耳球虫子孢子DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)法扩增ADF基因。将扩增的ADF基因克隆至p MD18-T载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白斑法筛选出阳性重组子,提取阳性质粒进行PCR、酶切鉴定及对序列确证。将扩增产物与原核表达载体p ET32a(+)连接,构建重组质粒p ET32a-ADF,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。用E.acervulina重组质粒p ET32a-ADF免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响。结果显示,ADF基因扩增产物为729 bp,与预期结果相符。序列分析结果表明,该株的ADF基因序列与参考序列同源性达99.6%。表达出的ADF重组蛋白相对分子质量大小约为46 000。与健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P<0.05),外周血中Ig G及IL-2含量均显著升高(P<0.01),表明p ET32a-ADF质粒DNA能有效提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平。
2015年02期 v.35;No.218 229-234页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] [下载次数：92 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 薛雪;阳毅敏;陈学秋;杜爱芳;
将Gen Bank中发表的C.parvum、C.hominis和C.muris的菱形体蛋白(Rhomboid,ROM)基因序列进行比对分析,设计合成该基因保守片段的1对特异性引物,以贝氏隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增出CbROM基因保守片段,采用染色体步移技术获得基因片段3'端和5'端核苷酸序列,并对所得序列进行测序、拼接与生物信息学分析。结果显示,CbROM基因ORF长度为1 422 bp,编码473个氨基酸,蛋白质理论相对分子质量为52 700,等电点为8.65,是疏水性蛋白质,含有7个串连的跨膜螺旋区,无信号肽;该基因含有典型的菱形体蛋白相关保守结构域,属于菱形体蛋白酶家族;功能位点分析结果显示,CbROM蛋白序列包含6个N-糖基化位点,2个c AMP、c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,8个蛋白激酶C磷酸化位点,7个酪蛋白激酶II磷酸化位点和10个N-豆蔻酰化位点;二级结构中包含α-螺旋38.27%,β-折叠16.7%和无规则卷曲45.03%。本试验获得的贝氏隐孢子虫的Rhomboid基因序列,为该基因功能的进一步研究及其基因工程疫苗的研制奠定基础。
2015年02期 v.35;No.218 235-241页 [查看摘要][在线阅读][下载 511K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蒋康富;白娟;李玉峰;王先炜;姜平;
采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P<0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P>0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。
2015年02期 v.35;No.218 242-246页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K] [下载次数：263 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 苟强;王莹;关佳宁;林嘉明;姜海燕;李欣然;申凤鸽;冯嘉轩;王新辉;曲海娥;江倩;张巧灵;刘波;姜秀云;
选取18只BALB/c小鼠进行旋毛虫灌胃,随机分为3组。以12只同种小鼠作为对照,也随机分为3组。于灌胃后7,14,28 d将小鼠处死并收集十二指肠与空肠组织。提取肠道组织总RNA并反转录为c DNA,运用Real-time PCR技术探讨小鼠感染旋毛虫后肠道炎症的变化和恢复过程中,内质网应激IRE1信号通路中GRP78、IRE1、XBP1分子表达的变化。结果显示,与对照组相比,小鼠感染旋毛虫后7 d,空肠中IRE、GRP78以及XBP1基因的mRNA表达均显著升高(P<0.05),并在14 d时达到峰值,尤其以GRP78的表达量升高最为显著(P<0.01),而在28 d时回落,但仍然略高于对照组。然而,感染组小鼠十二指肠的IRE1、GRP78以及XBP1基因的mRNA表达没有明显变化,无统计学意义(P>0.05)。结果表明,旋毛虫经肠道感染小鼠后,参与UPR的标志性分子GRP78、IRE1和XBP1在空肠组织的表达有明显变化,它们的上调和回落与旋毛虫感染后肠道炎症的变化和恢复过程一致,提示内质网应激反应可能参与了旋毛虫肠道感染的致病过程。
2015年02期 v.35;No.218 247-251页 [查看摘要][在线阅读][下载 372K] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 李傲楠;杨润军;田静;于海滨;芦春艳;张晓军;姜平;赵志辉;
肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN),又称GDF-8,是TGF-β超家族中GDF亚族的成员之一,其对肌肉的生长发育具有负调控作用,该基因的缺失或突变可以造成肌纤维数目的增多或直径的增大。本试验根据Gen Bank已发表的牛的MSTN基因序列,设计特异性引物,利用巢式PCR方法,扩增MSTN基因的编码区。为构建具有高免疫原性的免疫载体,将MSTN基因插入到HBs Ag基因S区的3'末端,得到HBs Ag与MSTN基因相连接的融合表达质粒。经酶切和测序鉴定表明,重组质粒p EF1α-DsRed-S-MSTN构建成功,为后续的细胞和动物实验奠定基础。
2015年02期 v.35;No.218 252-256页 [查看摘要][在线阅读][下载 394K] [下载次数：171 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 穆春宇;黄正洋;陈阳;孙志明;俞钦明;苏雁辉;富丽;徐琪;赵文明;陈国宏;
根据斑嘴鸭(Anas poecilorhyncha)同属近缘物种绿头鸭(Anas platyrhynchos)线粒体基因组(mt DNA)序列设计引物,采用直接测序技术对斑嘴鸭mt DNA全序列进行综合分析。结果显示,斑嘴鸭mt DNA序列全长16 606 bp,包含22个tRNA、2个rRNA基因、13种蛋白质编码基因和1个D-loop区。碱基组成T为22.2%,C为32.8%,A为29.2%,G为15.8%,无明显的AT偏好性,22种tRNA都为典型的三叶草结构。参照棕头鸦(Larus brunnicephalus)、黑尾地鸦(Podoces hendersoni)的12S rRNA,对斑嘴鸭12S rRNA的二级结构进行预测,结果其含有4个结构域,37个茎环。对D-loop控制区序列分析发现含有goose hairpin,E-box,F-box,D-box,Bird similarity-box及CSB1-box。并以原鸡作为外群,采用N-J算法和ML算法,基于mt DNA全序列及D-loop区分别构建系统进化树,发现3个家鸭品种与绿头鸭亲源关系较近。
2015年02期 v.35;No.218 257-263页 [查看摘要][在线阅读][下载 336K] [下载次数：240 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 苑方重;耿梅英;赵德明;
利用PrP106-126多肽的神经毒性,结合Fe3+对细胞氧化应激可能的诱导作用,建立N2a细胞的氧化应激模型,以研究氧化应激在Prion疾病过程中的作用,及其诱导神经细胞退行性损伤的机制。试验表明,通过毒性多肽PrP106-126与Fe3+共同作用,模拟神经细胞的氧化应激状态是可行的。效果较佳的攻毒浓度和攻毒时间分别是不高于50μmol/L的毒性PrP106-126多肽,不高于500μmol/L的Fe3+,最佳攻毒时间为12h。
2015年02期 v.35;No.218 264-267页 [查看摘要][在线阅读][下载 157K] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 赫荣贺;甄莉;郭景茹;张伟宏;王江璐;杨焕民;
将30只清洁级Wistar大鼠随机分为试验组、普通对照组及应激对照组。试验组用自拟抗应激复合添加剂(维生素C+维生素E+碳酸氢钾+γ-氨基丁酸,羧甲基纤维素钠助悬)进行灌胃,2对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液。1周后利用摇床模拟运输应激,检测大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(GLU)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖皮质激素(GC)以及部分细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α)等应激血清标志物水平。结果显示,大鼠经2 h模拟运输应激后,各项指标均有不同程度升高,而自拟抗应激添加剂对运输应激引起的CK、ACTH、GC、IL-2、IL-4和IL-6水平升高有明显的抑制作用;表明自拟的抗应激复合添加剂对抵抗大鼠运输应激具有较好的效果。
2015年02期 v.35;No.218 268-272页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K] [下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 李刚诗;王晓艳;袁听;周紫峣;唐天亮;石先鹏;谷武阳;解冰冰;王方园;李魏;刘长松;彭广能;钟志军;
为探讨围产期奶牛血清和初乳中免疫球蛋白含量的变化,采用免疫抑制法测定血清和初乳中Ig G、Ig A、Ig M的含量,并分析其与产奶量之间的关系。结果显示,奶牛围产期血清中Ig G、Ig A、Ig M含量均先降低后升高,与分娩当天相比,产前21 d时三者含量分别减少62.1%,65.2%,62.6%,而产后21 d时其含量仍未恢复到产前21 d时的水平;初乳中Ig G、Ig A、Ig M含量随泌乳时间的延长逐渐降低。此外,产前血清中免疫球蛋白含量的减少量和初乳中免疫球蛋白含量与产奶量呈负相关性。试验表明,奶牛在围产期阶段处于免疫抑制状态,表现为产前免疫球蛋白的减少和分娩前后低水平的免疫球蛋白水平,这些变化可能是导致围产期奶牛较高发病率的原因之一。
2015年02期 v.35;No.218 273-277页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [下载次数：375 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：29 ] |[阅读次数：0 ] - 路丽芹;孙立云;徐丽娜;汲如芬;李鹏飞;秦建华;钟秀会;马玉忠;
为探讨丹参对脂肪变性奶牛肝细胞的作用机制,采用胶原酶两步灌流法分离培养奶牛肝细胞,不同浓度DL-乙硫氨酸处理,油红染色观察其脂滴数量,MTT法测定肝细胞的活性,生化法检测TG含量。用不同浓度的丹参处理变性肝细胞后,生化法检测ALT、AST、TG、SOD、MDA的含量或活性,ELISA法测定TNF-α的含量,Western blot法检测NF-κB和CYP450的蛋白表达水平。结果显示,筛选出2 mmol/L的DL-乙硫氨酸作用24 h作为体外造模的最佳条件。用丹参处理后,能降低ALT、AST、TG和MDA的活性或含量,抑制TNF-α的释放,增加SOD活性。随丹参浓度增加和处理时间的延长,CYP450的表达呈逐渐降低的趋势。24 h时,丹参对NF-κB的表达无明显影响;48 h时,随丹参浓度的增加,NF-κB的表达呈逐渐降低的趋势。这表明丹参对奶牛脂肪肝有一定的治疗作用,其作用机制与促进脂质代谢、抑制肿瘤细胞坏死因子、抗脂质过氧化及降低NF-κB和CYP450的表达密切相关。
2015年02期 v.35;No.218 278-282页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：153 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 邹慧;劳雪芬;王程凯;徐筱萌;李丹丹;陈静;曹铮;许小琴;
从富硒女贞子及女贞子中提取粗多糖,探讨其对小鼠免疫功能的影响。将90只小鼠随机均分为3组:对照组、富硒女贞子粗多糖组、普通女贞子粗多糖组。对照组灌服生理盐水,试验组小鼠灌服粗多糖液,灌服2次,每次连续5 d。2次灌胃的第3天注射卵清蛋白,二免后测定胸腺脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平;ELISA试剂盒检测血清中IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平及相应抗体生成水平。结果显示:与对照组相比,试验组脾脏和胸腺指数明显升高,脾淋巴细胞增殖作用显著提高;IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平明显提高,其中IFN-γ与对照组存在显著差异;而对特异性卵清抗体生成影响不大。这表明富硒女贞子粗多糖较普通女贞子粗多糖能更好地促进机体非特异性免疫及细胞免疫,从而增强机体免疫功能,在特异性体液免疫的作用方面则没有表现出明显的规律性,还需进一步研究。
2015年02期 v.35;No.218 283-286页 [查看摘要][在线阅读][下载 108K] [下载次数：327 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：40 ] |[阅读次数：0 ] - 李美霞;杨军;夏新萌;马广峰;谷长勤;张万坡;程国富;胡薛英;
用已鉴定的解没食子酸链球菌巴氏亚种AL101002感染7日龄雏鸭,分别采用颈部皮下、腹腔、脚蹼和脑内不同途径感染,分析比较不同途径感染解没食子酸链球菌巴氏亚种雏鸭的病理变化。结果表明,不同途径感染均可引起雏鸭与自然感染鸭相似的病理变化。各组病理变化比较:皮下组和脚蹼组的临床症状最典型,眼观病变数量统计,分别占到3/6以上,脑膜炎组织病变严重于脑内组(P≤0.01),且皮下组肝细胞和脾细胞坏死较严重(P≤0.01);腹腔组和脑内组病理变化较其次。由此可见不同途径感染解没食子酸链球菌巴氏亚种雏鸭的病变最严重的是皮下感染,与自然感染病例症状相似,从而确认病理感染模型复制的最佳途径为皮下感染。
2015年02期 v.35;No.218 287-291页 [查看摘要][在线阅读][下载 496K] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 王姗姗;路浩;周宏超;达能太;王文龙;赵宝玉;
变异黄芪是一种疯草类有毒植物,其毒性成分为苦马豆素,本试验以内蒙古阿拉善左旗吉兰泰镇的2只变异黄芪自然中毒山羊为对象,通过HE染色观察脑、心、肝、脾、肾等组织病理学变化,透射电镜观察脑、心、肝组织超微结构变化。结果发现,中毒羊脑、心、肝、肾等组织细胞发生广泛空泡变性,超微结构观察发现大小脑、心、肝细胞中有多量膜包裹的空泡样结构,血管中有炎性细胞浸润,线粒体嵴断裂,排列紊乱、变性。中毒羊的病理变化与超微结构变化与之前报道的疯草中毒动物的基本一致,但线粒体变性则报道的较少。
2015年02期 v.35;No.218 292-296页 [查看摘要][在线阅读][下载 780K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ]
- 徐丽娜;孙立云;路丽芹;钟秀会;秦建华;马玉忠;
为建立Aroclor 1254致孕鼠子宫内膜细胞损伤模型,通过分离、培养怀孕大鼠的原代子宫内膜细胞,用不同浓度的Aroclor 1254处理子宫内膜细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞中CYP450的表达,并通过ELISA法检测细胞培养基中TNF-α、IL-6、雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)的含量,来确定Aroclor 1254是否对细胞造成损伤。结果表明,随着Aroclor 1254浓度的升高,子宫内膜细胞的损伤及抑制率也随之增高,CYP450的表达随Aroclor 1254浓度的升高而升高。TNF-α和IL-6的水平比对照组显著升高(P<0.05),E2和P4的水平则比对照组显著降低(P<0.05)。这表明Aroclor 1254对体外培养子宫内膜细胞损伤程度呈浓度依赖性,10 mg/L的质量浓度作用48 h可建立可靠的子宫内膜细胞损伤模型。
2015年02期 v.35;No.218 297-300页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K] [下载次数：70 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张菲菲;杨自军;宋超;张鹏;尚泽松;赵红先;杜伯强;田丽萍;
为探究钼对小鼠脑组织CO、ACh、AChE和AChR-Ab的影响,选用30日龄昆明小鼠160只,随机平均分成4组(Ⅰ~Ⅳ组),分别在饮水中添加0,100,200,400mg/L剂量的钼酸钠(以钼离子计),建立钼中毒动物模型,定期剖杀取样,检测小鼠脑组织内CO、ACh、AChE和AChR-Ab含量动态变化,试验期11周。结果显示:1Ⅲ、Ⅳ组小鼠脑组织中CO含量随时间延长呈下降趋势且差异显著(P<0.05),但Ⅱ~Ⅳ组CO含量显著高于对照组(Ⅰ组)(P<0.05)。2Ⅱ~Ⅳ组小鼠脑组织中ACh含量随着时间延长均呈下降趋势,不同时间的检测值之间有显著性差异(P<0.01或P<0.05);第7周开始,Ⅱ~Ⅳ组小鼠脑组织中ACh的含量显著低于Ⅰ组,且钼剂量越高、作用时间越长ACh含量越低。3试验周期内,Ⅱ~Ⅳ组AChE含量与Ⅰ组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),第7周开始,Ⅱ~Ⅳ组AChE含量随着试验时间延长呈上升趋势,且均高于Ⅰ组。4Ⅱ~Ⅳ组AChR-Ab含量先下降(5~7周)后上升(9~11周),不同检测时间的数值有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明,200mg/L以上剂量的钼作用7周能造成小鼠脑组织内源性CO升高,ACh含量降低、AChE以及AChR-Ab含量上升。
2015年02期 v.35;No.218 301-304+309页 [查看摘要][在线阅读][下载 110K] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 刘海侠;刘晓强;李引乾;蒿采菊;
应用微量稀释法和E-test,测定磷霉素对不同耐药类型的犬尿道致病性大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),同时测定磷霉素对大肠杆菌的时间杀菌曲线。结果表明,磷霉素对大肠杆菌,包括对其他类抗菌药物耐药的多重耐药菌(MDR)具有良好的抗菌活性,其MIC和MBC分别为0.25~4.00 mg/L和0.50~32.00 mg/L。时间-杀菌曲线法试验结果显示,随着磷霉素浓度的增加,杀菌效应也明显增加,呈现明显的浓度依赖的特性。本研究为磷霉素临床控制动物致病性大肠杆菌感染及防控耐药性的产生提供了实验依据。
2015年02期 v.35;No.218 305-309页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：129 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 赵慧慧;韩伟;田园园;刘环秋;李新白;
通过刺激前应用盐酸羟考酮观察福尔马林致痛模型大鼠的镇痛效果和血液中NO及P物质浓度的变化,探讨盐酸羟考酮超前镇痛的作用机制。选取健康成年Wistar大鼠32只,雌雄各半,体质量250~300 g,随机分为4组(每组8只),正常空白对照组(A组)腹腔注射0.9%氯化钠溶液2 m L;福尔马林模型组(B组)用微量注射器抽取5%福尔马林100μL注入大鼠右侧后爪掌心皮下致痛;盐酸羟考酮致痛前给药组(C组),福尔马林致痛前30 min腹腔注射盐酸羟考酮0.2 mg·kg-1;盐酸羟考酮致痛后给药组(D组),福尔马林致痛后30 min腹腔注射盐酸羟考酮0.2 mg·kg-1。致痛后1,10,20,30,45,60,90 min观察动物疼痛行为改变,以累积疼痛评分评定疼痛行为。致痛后90 min用水合氯醛麻醉大鼠,心脏采血3 m L测定其NO及P物质浓度的变化。根据大鼠行为学改变及疼痛评分的结果显示,本试验造模成功。疼痛评分值:致痛后10 min,C组比B组明显减小(P<0.05);60~90 min,C、D组与B组比较明显减小(P<0.05)。血液标本中NO浓度C、D组与B组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),C组和D组比较,差异也有统计学意义(P<0.05);血液中P物质浓度C、D组与B组比较明显降低,差异也有统计学意义(P<0.001),C组和D组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结果表明,大鼠福尔马林致痛模型致痛前和致痛后30 min腹腔注射盐酸羟考酮均有明显的镇痛作用,镇痛效果与降低血液中NO及P物质的浓度相关,二者比较,致痛前30min给药即超前镇痛作用更显著。
2015年02期 v.35;No.218 310-313页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K] [下载次数：250 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 曹立亭;彭代国;马跃;周晏丞;牛晓艺;仲崇华;
32只健康本地犬饲养1周后按体质量灌胃番泻叶水煎剂6 m L/kg人工复制脾虚泄泻证病理模型,造模成功后随机分为4组:黄芪多糖治疗组后海穴注射黄芪多糖注射液0.25 m L/kg,2次/d;硫酸庆大霉素治疗组后海穴注射硫酸庆大霉素注射液0.2 m L/kg,2次/d;后海穴针刺组后海穴注射生理盐水0.25 m L/kg,2次/d;病理对照组不作任何处理;同时设立4头健康犬作为空白对照,造模期间灌胃生理盐水。用药后治疗期间测定试验犬只的体质量、三大临床指标、部分血液指标和脾脏指数,并统计分析。结果表明,黄芪多糖治疗组血红蛋白、红细胞水平在较短时间内恢复正常,脾脏指数显著(P<0.05)高于硫酸庆大霉素治疗组;硫酸庆大霉素治疗组白细胞降低速度极显著(P<0.01)快于黄芪多糖治疗组。这表明后海穴注射黄芪多糖注射液可以用于治疗犬脾虚泄泻证。
2015年02期 v.35;No.218 314-318页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K] [下载次数：250 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 索朗扎西;范云鹏;麻武仁;崔恩慧;智晓燕;许营营;冯伟;宋晓平;
为探讨锦珠草颗粒对鸡大肠杆菌病的防治效果及作用机理,将350羽12日龄海兰褐鸡随机均分7组:锦珠草颗粒预防组,低、中、高剂量治疗组,药物对照组,模型对照组和健康对照组。除健康对照组外,其余各组均胸肌接种鸡大肠杆菌O78,预防组于攻毒前3 d灌服锦珠草颗粒,各药物治疗组于攻毒后6 h给药,连用5 d。结果表明,锦珠草颗粒预防组保护率极显著高于模型组(P<0.01),低、中、高剂量组有效率、治愈率极显著高于模型组(P<0.01),与药物对照组相当(P>0.05);锦珠草颗粒预防组体增质量极显著高于模型组和药物对照组,中、高剂量组与健康对照组相当(P>0.05);中剂量组在试验第11天时血清TNF-α和IL-1β含量显著低于模型组(P<0.05);中、高剂量组在第3,7,11天时ALT、AST、ALB和TBIL的水平与模型组比较差异极显著(P<0.01),与健康对照组相当(P>0.05),其中TBIL水平极显著低于药物对照组(P<0.01)。说明锦珠草颗粒能有效抑制促炎因子,调节或控制血清生化指标,有效防治鸡大肠杆菌病。
2015年02期 v.35;No.218 319-324页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K] [下载次数：272 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ]
- 徐芳芳;翟博;李常红;徐嘉君;吴心慧;柳思源;付瑶;任书强;周乾;姜昊;陈承祯;戴立胜;张嘉保;
KDM3家族成员中KDM3A、KDM3B能够特异性去除H3K9me1与H3K9me2的甲基化修饰,而JMJD1C作为KDM3家族成员之一,与KDM3A、KDM3B即JMJD1A、JMJD1B含有相似的Jmj C结构域,但JMJD1C是否也具有对H3K9的催化作用或活性一直不明确。本研究利用RNAi方法抑制JMJD1C的mRNA表达水平,随后通过免疫荧光方法检测H3K9me1与H3K9me2的甲基化程度。结果表明,3T3-L1细胞和卵丘细胞中均存在JMJD1C的表达,并且存在H3K9me1与H3K9me2的甲基化修饰。通过siRNA对牛卵丘细胞中JMJD1C mRNA的表达进行成功抑制后,转染组JMJD1C的表达量明显下降,但免疫荧光结果显示H3K9me1、H3K9me2表达量无明显变化,即JMJD1C在mRNA水平上对去除H3K9me1与H3K9me2的甲基化修饰并无明显作用。
2015年02期 v.35;No.218 325-329页 [查看摘要][在线阅读][下载 357K] [下载次数：273 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 赵雪丹;王慧;康丽;宋倩;温杰锋;贾美婷;张秀梅;唐辉;
用直接测序法检测了434只寿光鸡MTNR1B 5'调控区的SNPs,并与寿光鸡的产蛋性状进行关联分析。结果发现,在5'调控区有13个SNPs位点,9个位点中度多态,4个位点低度多态,所有位点处于哈代温伯格平衡状态。-836位点(C→T),-778位点(G→A)和-629位点(G→A)完全连锁,群体中有CGA和TAG两种单倍型。CGA使产蛋数增加,在前期、中期、后期和总产蛋数上,加性效应值分别为1.0,2.5,1.4,4.9枚。在中期、后期和总产蛋数上2种单倍型存在正向互作效应,显性效应分别达到了2.7,2.3,5.6枚。构建的包含TAG、CGA和TGG 3种单倍型启动活性试验表明,-778位点突变是单倍型效应差异的关键。综上所述,MTNR1B的5'调控区有丰富的SNPs位点,-836、-778和-629位点SNPs及单倍型对寿光鸡的产蛋量有显著影响,可作为寿光鸡产蛋量辅助选择的具有潜在应用价值的分子遗传标记。
2015年02期 v.35;No.218 330-334+339页 [查看摘要][在线阅读][下载 147K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 赵静;王二旦;柴梦龙;贺明;刘畅;杨世宝;
通过检测牛早期胚胎分裂速率的时间分布,并将体外受精后0~34 h与26~30 h时间段内采集的2细胞期胚胎分别作为电融合对照组与电融合试验组。将对照组与试验组的2细胞期胚胎分别用于电融合,并将电融合后的胚胎继续体外培养至囊胚期,检测并对比分析2组胚胎的融合率、分裂率、囊胚率和四倍体制备率。结果显示,牛2细胞期胚胎在体外受精后28~30 h其内分裂速率达到最高峰(18.9%)。电融合对照组的融合率、分裂率略高于试验组胚胎(85.2%vs.84.2%,82.2%vs.80.9%),试验组的囊胚率略高于电融合对照组(45.4%vs.44.8%),但差异均不显著。而电融合试验组的四倍体制备率显著高于电融合对照组(28.3%vs.14.5%)。结果表明,牛2细胞期胚胎的采集时间对电融合方法体外制备牛四倍体胚胎的效率有显著影响。
2015年02期 v.35;No.218 335-339页 [查看摘要][在线阅读][下载 289K] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ]