- 张昆丽;谢芝勋;黄莉;谢丽基;邓显文;谢志勤;刘家波;范晴;罗思思;
为了分析禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)S1133株感染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)后,对其细胞因子IL-17、IL-18和IFN-γmRNA转录水平的影响,探讨禽呼肠孤病毒感染机制和宿主之间的作用关系。本试验将ARV-S1133感染CEF细胞后,运用荧光定量PCR技术,测定和分析ARV结构蛋白σC和CEF细胞的IL-17、IL-18及IFN-γ的mRNA动态转录水平。结果表明,ARV-S1133感染CEF细胞10h后病毒结构蛋白σC mRNA的相对表达量开始迅速上升,在48h达到最高峰(13 162.73倍);ARV-S1133感染后引起CEF细胞中的IL-17、IL-18和IFN-γmRNA表达量发生变化,IL-17和IFN-γmRNA转录水平在感染早期迅速上调,感染后6h达到第一个峰值,分别上调8.77倍和11.17倍,随后下降,在感染36、48、60h后大幅度上升,且在48h达到峰值,表达量分别为97.19倍和111.58倍。IL-18mRNA转录水平在整个感染过程中表达量较低,在感染6h后微量上调(1.39倍),在感染中后期,其表达量呈下调趋势,感染48h时,IL-18mRNA表达量最低,与对照组相比下调0.19倍;5个不同滴度的ARV病毒感染CEF细胞24h后,3个细胞因子mRNA的表达量与病毒滴度线性相关,IL-17和IFN-γmRNA转录水平与病毒滴度正相关,IL-18mRNA转录水平与病毒滴度负相关。结果表明,ARV感染后可诱导CEF分泌IL-17、IL-18、IFN-γ的mRNA转录水平上调,说明IL-17、IL-18、IFN-γ可能与禽呼肠孤病毒的复制和致病机制相关。
2015年03期 v.35;No.219 345-349页 [查看摘要][在线阅读][下载 657K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 张颖;刁有祥;高明;葛平萍;孙晓艳;鲁爱玲;
30只10日龄樱桃谷肉鸭随机平均分为试验组和对照组,试验组静脉接种分离的鸭源呼肠孤病毒(DRV)SDWF株,每只0.2mL(ELD50=10-2.36/0.2mL),对照组每只静脉接种0.2mL生理盐水。于感染后3、6、9、12、15d每组随机抽取3只采血,利用流式细胞术分析外周血CD4+/CD8+比值变化,并测定血清中IL-6及INF-γ含量以及免疫器官指数,同时观察试验组鸭临床症状、剖检变化及病理组织学变化。结果显示,攻毒后3d,试验组雏鸭表现精神沉郁,食欲不振,生长发育缓慢,体质量下降。剖检变化表现为脾脏出血、肿大、坏死,肝脏坏死。病理组织学变化表现为脾脏、法氏囊淋巴细胞流失严重,网状纤维显现;脾脏坏死,形成肉芽肿,血管动脉管壁疏松、增厚。攻毒后3d,外周血CD4+/CD8+比值升高,随后于攻毒后6、9d开始迅速下降,显著低于对照组(P<0.05),后期虽有所回升,但是CD4+/CD8+比值仍然低于对照组;血清中IL-6及IFN-γ含量变化规律与外周血CD4+/CD8+比值变化规律相似,在攻毒后9d均显著低于对照组(P<0.05);胸腺、法氏囊指数均在攻毒后6d显著低于对照组(P<0.05),脾脏指数在整个试验观察期间高于对照组。结果表明,脾脏、法氏囊是雏鸭感染DRV的主要靶器官,免疫器官淋巴细胞流失严重,T细胞数量减少,IL-6、IFN-γ分泌量降低,从而导致机体免疫抑制。
2015年03期 v.35;No.219 350-354页 [查看摘要][在线阅读][下载 1363K] [下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 金元昌;李玉峰;张艳;
本试验致力于评价鸡白细胞介素-18(IL-18)基因的表达模式与马立克氏病抗性遗传性状的相关性。MDV-1分别感染7日龄普通品系和抗性品系的霞烟鸡,攻毒后第4、7、10、14、21、28、35天采集外周血并分离外周血淋巴细胞,利用实时定量PCR技术对外周血淋巴细胞中IL-18转录水平进行相对定量分析。结果表明,普通霞烟鸡外周血淋巴细胞中具有相对高水平的IL-18mRNA,而马立克氏病抗性霞烟鸡外周血淋巴细胞中则具有相对低水平的IL-18mRNA。结果显示,鸡IL-18基因的表达模式与马立克氏病(MD)抗性遗传性状可能相关。
2015年03期 v.35;No.219 355-358+366页 [查看摘要][在线阅读][下载 533K] [下载次数：107 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 杨柳;翟少钦;杨睿;张素辉;郑华;张邑帆;付利芝;
从猪流感疑似病例中分离鉴定猪流感病毒,并对病毒进行全基因组测序及其序列的分析。采用鼻棉拭子法从猪流感疑似病猪的鼻中收集病样,制成病毒悬液,经SPF鸡胚增殖培养和纯化。采用红细胞凝集、血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验进行病毒亚型的判定,并作电镜观察。运用RT-PCR法扩增病毒的8个基因片段,分别克隆到pMD18-T载体,进行全基因组测序及序列分析。结果表明,获得1株猪流感病毒,经血凝、血凝抑制和神经氨酸酶抑制试验,判定为H3N2亚型,命名为A/swine/Chongqing/CQ/3/2011(H3N2),简称SIV CQ3。基因组序列比较分析显示,SIV CQ3 8个节段与不同时间的猪流感广东分离株(H3N2亚型)相应基因的核苷酸相似性最高,可能来源于H3N2亚型SIV。然而NP、HA和NA基因编码氨基酸序列与参考毒株A/New York/392/2004(H3N2)的相似性比较低,分别达95%、89%和90%;而血凝素(HA)裂解位点处的氨基酸序列为P-E-K-Q-T-R↓G,与参考毒株的一致,不具有高致病分子特征。此外,HA和NA的糖基化位点、受体结合位点处氨基酸存在一定程度的差异。最后,系统进化树分析显示NP、HA基因位于SIV群,与A/swine/Guangdong/2006/(H3N2)处于同一分支;而NA基因与禽流感(A/duck/Ontario/2000/AJ697881)和猪流感位于同一个进化单元,表明这株H3N2亚型流感病毒在不断的发生演变。
2015年03期 v.35;No.219 359-366页 [查看摘要][在线阅读][下载 2529K] [下载次数：277 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 章金涛;张明昊;朱奎成;王君敏;杜春燕;王纯耀;
参考大鼠Krt71基因序列,用PCR方法对SD大鼠Krt71基因DNA和cDNA序列进行克隆,获得SD大鼠Krt71基因的8 206bp的DNA序列(GenBank登录号:KF311105)和1 575bp的cDNA序列(GenBank登录号:KF303589),编码524个氨基酸。SD大鼠与国外报道的BN大鼠、小家鼠、家猫、家绵羊、家牛、苏门答腊猩猩和人等7个物种的Krt71基因cDNA序列的同源性分别为99.9%,95.2%,88.5%,87.5%,88.0%,88.1%,88.1%;其编码蛋白的氨基酸序列同源性分别为100.0%,98.9%,92.5%,91.5%,91.3%,91.5%,92.1%。这一结果表明Krt71基因在进化过程中具有较高的保守性,但不同物种之间也具有功能上的特异性。通过比较SD大鼠Krt71基因与GenBank数据库中发布的Krt71基因的序列,本试验发现了6个SNP位点,这些位点位于该基因的内含子序列,没有改变氨基酸的性质,这一研究结果为Krt71基因的SNPs数据库提供了新的内容。
2015年03期 v.35;No.219 367-370页 [查看摘要][在线阅读][下载 372K] [下载次数：114 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 谭鹏;杜寿文;辛舒;朱羿龙;王茂鹏;叶飞;邢彬;李昌;金宁一;
参照GenBank中牛干扰素诱导跨膜蛋白(bIFITMs)编码序列设计上、下游引物,通过RT-PCR技术扩增目的序列。将扩增产物连接至pMD18-T载体上,测序,使用DNAStar、DNA MAN、MEGA6.0等生物信息学软件对其进行核苷酸、氨基酸序列同源性分析以及关键位点氨基酸比对,并完成进化树的绘制。同时,将测序正确的目的序列进一步亚克隆至真核表达载体pLV-EGFP,转染HEK293T、BHK-21细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)验证外源基因在细胞内的表达情况。结果表明,获得bIFITMs编码序列,完成其相关生物信息学分析,同时,成功构建含有bIFITMs编码序列的重组真核表达质粒pLV-bIFITM1、pLV-bIFITM2、pLV-bIFITM3,且在HEK293T、BHK-21细胞中有效表达,为进一步探讨bIFITMs的抗病毒作用以及动物转基因抗病毒育种提供了试验基础。
2015年03期 v.35;No.219 371-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 1978K] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 金琨琪;施晓晨;张巧丽;安雅男;王超;程威;杨志强;于录;
探索出一套分枝杆菌基因敲除的可靠方案,并研究耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因对其生物被膜产量的影响,结核分枝杆菌相关基因的敲除对其致病机理的深入研究有重要意义。利用融合PCR方法将MSMEG_6935基因的上、下游基因以及替代目的基因的kan基因融合,并将产物克隆到温敏型穿梭质粒pPR27,再电转入耻垢分枝杆菌mc2155中,筛选获得MSMEG_6935基因缺失株mc2155-6935。进一步研究MSMEG_6935基因的敲除对细菌生长曲线和生物被膜产量的研究。成功构建了MSMEG_6935基因的缺失株,并研究证明耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因的缺失对耻垢分枝杆菌的生长曲线没有影响,但会对其生物被膜的产量产生较大影响。
2015年03期 v.35;No.219 378-382页 [查看摘要][在线阅读][下载 557K] [下载次数：197 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 候书宝;阚威;武小虎;张晶晶;张勇;赵兴绪;董翔宸;王华;
为探究牛源性肠球菌中6种毒力因子基因(ccf、asa1、ace、esp、cylA、gelE)的分布情况,采集了不同地区382份疑似隐形乳腺炎的奶样,常规分离纯化细菌,采用16SrRNA和16S~23SrRNA方法相结合的方法,共鉴定出了68株肠球菌并检测了其溶血特性和上述6种毒力基因的存在情况。结果显示,40株(58.82%)表现为α-溶血,10株(14.71%)为β-溶血,18株(26.47%)为γ-不溶血。68株(100%)携带asa1基因,49株(72.06%)携带gelE基因,43株(63.24%)携带ccf基因,12株(17.65%)携带ace基因,10株(14.71%)携带esp基因,6株(8.82%)携带cylA基因。54.41%的分离菌株同时携带gelE、ccf、asa1毒力基因,而青海民和分离株的esp与ace,gelE与ccf同时出现,有一定规律性;但溶血性基因cylA与14株溶血性肠球菌没有相关性。研究牛源肠球菌的溶血特性与毒力基因携带情况,对肠球菌性奶牛乳腺炎的防控具有指导意义,同时也为动物与人之间病原互相传播的研究提供试验依据。
2015年03期 v.35;No.219 383-387+393页 [查看摘要][在线阅读][下载 344K] [下载次数：277 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 车巧林;余姗姗;刘茂军;甘源;孔猛;邵国青;
采用气管结扎、链霉蛋白酶灌注冷消化法分离猪气管上皮细胞,并以对数生长期的猪肺炎支原体(Mhp)感染猪气管上皮细胞,通过间接免疫荧光技术定性定量研究不同滴度的猪肺炎支原体对猪气管上皮细胞的黏附及相同滴度的猪肺炎支原体随时间变化对猪气管上皮细胞的黏附。结果表明,分离的猪气管上皮细胞存活率为95%以上,广谱角蛋白染色阳性;Mhp野毒株XLW-1与猪气管上皮细胞37℃作用30min就能看到少量的支原体黏附,作用4h以上时黏附更明显,并且,二者作用1、2、4、6、10h,XLW-1对猪气管上皮细胞的黏附与阴性对照相比差异极显著(P<0.01);1×107、2.5×106 CCU/mL的XLW-1与猪气管上皮细胞37℃作用6h,能看到支原体黏附于细胞表面,并且与阴性对照相比差异极显著(P<0.01),而其他低滴度的XLW-1则看不到黏附。
2015年03期 v.35;No.219 388-393页 [查看摘要][在线阅读][下载 1398K] [下载次数：306 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 邓梦玲;韩帅;耿毅;刘丹;汪开毓;陈成;黄小丽;陈德芳;
南方鲇的溃疡病是近年来发生的一种严重危害南方鲇的病原不清楚的传染病,2013年7月与9月从四川南方鲇养殖区自然感染发病的南方鲇体内分离到2株G-弧形,极生单鞭毛短杆菌(SCCF05与PYD)。其在TSA平板上28℃培养48h,形成表面光滑,边缘整齐,微隆起,乳白色圆形菌落,在TCBS平板上形成绿色菌落。根据分离菌株的形态学和生理生化特性初步判定其为弧菌(Vibrio sp)。16SrDNA与gyrB序列分析表明,2分离株16SrDNA序列(KJ001822、KF907127)与GenBank中V.cholerae 16SrDNA序列同源性最高;而gyrB序列(KC503054、KF998569)与V.mimicus gyrB序列同源性最高。在以分离菌16SrDNA序列及其GenBank中同源性较高的相关序列构建的系统发育树上,2分离菌与V.cholerae和V.mimicus聚为一族;在以gyrB基因序及其GenBank中同源性较高的相关序列构建的系统发育树上,2分离株与V.mimicus聚为一族。在基于弧菌系统发育标志性鉴别基因dnaJ的双重PCR检测中,2分离株基因组DNA中均特异性扩增出约为177bp条带,与预期V.mimicus扩增片段一致,进而鉴定2株分离菌为V.mimicus。2株V.mimicus对链霉素、罗红霉素、丁胺卡那、氟哌酸、氟苯尼考和氧氟沙星等抗菌药物敏感,对头孢曲松与强力霉素耐药。病理学观察发现,V.mimicus感染南方鲇对多组织器官都造成明显的病理损伤,尤其是肌肉、肝、脾、肾的损伤较为严重,表现为明显的出血、变性和坏死以及炎症细胞浸润等。
2015年03期 v.35;No.219 394-400+405页 [查看摘要][在线阅读][下载 1948K] [下载次数：320 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 马羽洁;陈学秋;闫宝龙;杨怡;郭筱璐;杜爱芳;
为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析干燥相关表达基因,本试验利用mRNA差异显示技术得到了捻转血矛线虫干燥相关基因,通过相对荧光定量PCR验证所获基因的表达情况,并在秀丽隐杆线虫中通过RNA干扰抑制相关同源基因的表达检测干燥后复苏虫体生存率以研究基因抗干燥功能。结果显示,差异表达序列GH-U02A与已知捻转血矛线虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)氨基酸同源性为94%。对秀丽隐杆线虫Ce-gst-7基因进行RNA干扰后,虫体在干燥后的生存率降低,证明gst基因在线虫中有抗干燥功能。
2015年03期 v.35;No.219 401-405页 [查看摘要][在线阅读][下载 553K] [下载次数：147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 王琳;张聪敏;刘思远;杜乐妍;赵宝华;
利用本实验室已诱导并纯化后的重组毒素蛋白制成类毒素免疫BALB/c小鼠,提取小鼠脾脏mRNA。通过RT-PCR和SOE-PCR获得由抗体重链可变区(VH)-Linker-轻链可变区(VL)构成的750bp左右单链抗体(ScFv)基因片段。随后利用噬菌体展示技术成功构建了抗产气荚膜梭菌ε毒素噬菌体单链抗体(Phage-ScFv)库。并通过"吸附-洗脱-扩增",5轮高效的淘洗筛选系统,最终筛选出特异性强的噬菌体抗体。最后,对强阳性的单链抗体侵染E.coli HB2151进行表达,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量为30 000左右,与预期结果一致,并且能以分泌形式表达。本试验为抗产气荚膜梭菌ε毒素中毒治疗及其分子致病机制的研究奠定了基础。
2015年03期 v.35;No.219 406-412页 [查看摘要][在线阅读][下载 1160K] [下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王斐;龚悦;王巍;张文龙;曹永国;丁壮;
构建问号钩端螺旋体LigA基因保守区和可变区的重组原核表达质粒,了解重组表达的LigAcon蛋白和LigAvar蛋白对金黄地鼠的免疫保护作用。采用高保真PCR扩增LigAcon和LigAvar基因并测序,构建LigAcon和LigAvar基因原核表达系统。SDS-PAGE和Western-blotting鉴定蛋白表达及其纯化情况。测定金黄地鼠的存活率来观察免疫LigAcon和LigAvar蛋白的金黄地鼠对感染问号钩端螺旋体56606株后的保护率。测序结果显示所得片段分别为LigAcon和LigAvar的编码序列,酶切及PCR分析证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE和Westernblotting分析重组质粒可高效表达蛋白LigAcon和LigAvar。LigAcon免疫组,LigAvar免疫组,及LigAcon+LigAvar免疫组对金黄地鼠的免疫保护率均为100%。LigA蛋白是问号钩端螺旋体属特异性保护性抗原,未来可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。
2015年03期 v.35;No.219 413-417+424页 [查看摘要][在线阅读][下载 2101K] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 马思思;王佳莹;刘翠翠;丁红星;吴云燕;赵明秋;陈金顶;
通过等位基因交换,分别敲除牛流产型布鲁菌减毒活疫苗S19株和缺失株S19-Δbp26的znuA基因,构建了布鲁菌znuA基因单缺失株S19-ΔznuA和bp26、znuA基因双缺失株S19-Δbp26-ΔznuA,对获得的2种缺失株进行形态学、生长特性、稳定性和基因测序验证。结果表明,S19株和S19-Δbp26株的znuA基因均成功缺失,生长特性表示2种缺失株与亲本株生长基本无差异;体外连续传至20代,菌落PCR鉴定及基因测序结果显示2种缺失株均遗传稳定。牛流产型布鲁菌单缺失株S19-ΔznuA和双缺失株S19-ΔznuA-Δbp26的成功构建为布鲁菌新型疫苗的研发、布鲁菌感染动物过程中ZnuA蛋白的作用机理及其与Bp26蛋白之间关系的研究奠定了基础。
2015年03期 v.35;No.219 418-424页 [查看摘要][在线阅读][下载 855K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 李筱鑫;王泽东;刘全;葛巍;王巍;魏峰;
为建立牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法,根据弓形虫MIC10基因序列设计合成引物,应用PCR技术扩增MIC10基因,将其克隆至pET-22b载体,构建重组质粒pET-22b-MIC10,将其转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE及Western-blot分析表明,该重组蛋白能与弓形虫阳性血清发生特异性反应。重组蛋白经NiNTA纯化,应用牛弓形虫阳性、阴性血清建立了ELISA检测方法,抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,二抗稀释倍数为1∶20 000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法重复性好、特异性强、敏感性高,为牛弓形虫流行病学调查奠定基础。
2015年03期 v.35;No.219 425-428页 [查看摘要][在线阅读][下载 360K] [下载次数：154 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 姜晓东;邵明旭;刘丽萍;王传文;于翠莲;迟珊珊;朱瑞良;
近年,山东省规模化羊场羊患慢性化脓性肺炎病例频繁出现,为了探明其病原及特点,本试验在流行病学调查基础上,对山东省6个地区10个规模化羊场的病、死羊进行临床症状观察、病理学检查,对所分离的菌株进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16SrRNA基因的分子鉴定。结果显示,从剖检病死羊的肺、肝、气管等组织中分离出6株细菌(分别命名为PA1~PA6),分离菌株镜检均为革兰阴性、短杆菌,对庆大霉素高度敏感,对小鼠具有较强致病作用。综合流行病学和生化试验结果等判定,该6株分离菌均为绿脓杆菌。对6株绿脓杆菌16SrRNA序列分析表明,该6株分离菌与已知的绿脓杆菌16SrRNA序列的同源性为99.9%~100%,与报道的绿脓杆菌菌株B136-33、YMD-4以及LCQ-4的序列位于一个分支上,属于一个亚群,其中与北京株B136-33的进化关系更近,核苷酸同源性为100%。
2015年03期 v.35;No.219 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 539K] [下载次数：225 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ]
- 赵静;杨世宝;王军;刘红羽;尹云厚;
为明确kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达和功能,本试验首先利用免疫荧光技术研究了kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达,随后利用MTT和ELISA技术研究了不同浓度的kisspeptin-10(Kp10)对牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌的影响。结果表明,kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞有表达,10、100、1 000nmol/L的Kp10处理24h,均可以极显著提高牛卵巢颗粒细胞活力(P<0.01);100nmol/L的Kp10处理24、72h,可极显著提高牛卵巢颗粒细胞的活力(P<0.01),但处理48h未能显著提高细胞活力(P>0.05)。100nmol/L的Kp10处理24h,可显著提高牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌水平(P<0.05),而10、1 000nmol/L的Kp10对孕酮分泌无显著影响(P>0.05)。研究结果提示kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌。
2015年03期 v.35;No.219 434-437页 [查看摘要][在线阅读][下载 697K] [下载次数：292 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 周作红;彭沙沙;钟圣伟;戈婷婷;张晖;
运用HE染色和3种组织化学方法—改良甲苯胺蓝、阿利新蓝-PAS和多巴氧化酶法染色对牛蛙皮肤显微结构和特性进行了研究。结果表明,牛蛙皮肤由表皮和真皮组成,表皮由角质层、颗粒层和生发层组成,表皮内无黑色素分布,微血管较少。真皮比表皮厚,分为疏松层和致密层。真皮疏松层内有大量团块状、致密的黑色素,微血管较多。真皮疏松层中分布着黏液腺和颗粒腺,黏液腺多于颗粒腺。牛蛙皮肤肥大细胞主要分布于真皮疏松层和皮下层,且多为长条形。真皮致密层呈阿利新蓝-PAS染色强阳性,表皮与真皮交界处以及真皮疏松层和致密层交界处也有强阳性带。多巴氧化酶法染色结果表明,无黑色素分布的表皮层有许多弥散、细小的阳性棕黑色颗粒状色素,而有大块天然黑色素分布的真皮疏松层阳性颗粒色素较少。结果提示,牛蛙皮肤可通过腺体、肥大细胞和黑色素发挥重要的免疫防御和保护作用。
2015年03期 v.35;No.219 438-443页 [查看摘要][在线阅读][下载 2003K] [下载次数：362 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 徐丽娜;孙立云;路丽芹;秦建华;钟秀会;马玉忠;
为了研究槲皮素对Aroclor 1254损伤的孕鼠子宫内膜细胞是否具有保护作用,试验通过分离、培养怀孕大鼠的子宫内膜细胞,以Aroclor 1254诱导子宫内膜细胞损伤模型,用不同剂量的槲皮素分别处理损伤的子宫内膜细胞24~72h,MTT法测细胞的活力,RT-PCR及Western blot法检测细胞中CYP450的表达,并通过ELISA法检测细胞培养基中TNF-α、IL-6、雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)的含量,来确定槲皮素是否对损伤的细胞具有保护作用。结果显示,处理24h后,随着槲皮素浓度的升高,子宫内膜细胞的成活率也随之增高,其中50μmol/L槲皮素时成活率最高。CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1在子宫内膜细胞mRNA中的表达随槲皮素浓度的升高呈上升的趋势。CYP1A1和CYP2E1在细胞的蛋白中不表达,CYP2B1的表达随槲皮素浓度的增加而呈升高的趋势。50μmol/L槲皮素作用24h对损伤的怀孕大鼠子宫内膜细胞CYP1A1、CYP2B1和CYP2E1的表达效果最明显。Aroclor 1254损伤的子宫内膜细胞中TNF-α和IL-6的含量比对照组显著升高(P<0.05),E2和P4的含量则比对照组显著降低(P<0.05)。50μmol/L槲皮素处理后TNF-α和IL-6的含量比Aroclor 1254损伤组显著降低(P<0.05),E2和P4则显著升高(P<0.05)。这表明槲皮素对损伤的怀孕大鼠子宫内膜细胞具有保护作用。
2015年03期 v.35;No.219 444-449+455页 [查看摘要][在线阅读][下载 1147K] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 孙晓雨;崔子寅;张明亮;孙长江;佟春玉;冯新;顾敬敏;雷连成;韩文瑜;
研究比较枸杞多糖和茯苓多糖对免疫抑制小鼠的系统免疫功能的影响及2种多糖对肠道黏膜免疫系统的调节作用,通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,观察小鼠脾脏器官指数变化、腹腔巨噬细胞吞噬功能、流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+比例及肠派氏结CD3+、CD19+细胞比例、ELISA检测血清及小肠组织中IL-12、IL-4、IFN-γ细胞因子水平变化评价2种多糖对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道黏膜的影响。结果显示,2种多糖可提高免疫抑制小鼠脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,影响免疫抑制小鼠CD4+/CD8+细胞亚群比例及肠派氏结T、B淋巴细胞比例和细胞因子水平。结果表明,枸杞和茯苓多糖均对免疫抑制小鼠具有免疫增强作用,茯苓多糖的免疫调节效应显著优于枸杞多糖,且2种多糖均对肠道黏膜免疫系统具有调节作用。
2015年03期 v.35;No.219 450-455页 [查看摘要][在线阅读][下载 1002K] [下载次数：2430 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：135 ] |[阅读次数：2 ] - 劳雪芬;邹慧;李丹丹;陈静;曹铮;许小琴;
通过提取富硒女贞子多糖、蛋白质和齐墩果酸,采用MTT法测定三大类物质体外对山羊外周血淋巴细胞增殖活性的影响。方差分析的多重比较结果显示富硒女贞子多糖、蛋白质和齐墩果酸体外均具有促进ConA刺激山羊外周血淋巴细胞分裂增殖的作用,且富硒女贞子蛋白质组分、齐墩果酸组分的作用效果明显优于普通女贞子组,各相应浓度比较差异显著比例分别达到63.64%、40.00%。说明富硒女贞子能进一步提高山羊外周血淋巴细胞的增殖活性。
2015年03期 v.35;No.219 456-460页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 贺秀媛;林峰;李梦;张淑芳;袁慧;刘宗平;邓立新;
将420只体质量为(15.32±2.01)g的雌性昆明系小鼠随机分为5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。当小鼠体质量达到25g以上时,分批对各试验组和对照组进行超排处理,腹腔注射10IU马绒毛膜促性腺激素(PMSG),47h后注射10IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),并与公鼠合笼。合笼后87~96h内颈椎脱臼处死小鼠,观察卵巢、子宫形态,并统计胚胎数,同时制作卵巢、子宫石蜡切片,观察其病理组织学变化,研究醋酸铅对雌性小鼠卵巢、子宫组织结构及早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,可明显抑制小鼠体质量的增长,随着染毒剂量的增加,作用时间的延长,小鼠体质量增加明显趋缓,与对照组相比,差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01);(2)染铅组母鼠早期胚胎发育受到显著影响,主要表现为回收胚胎总数以及受精卵发育到桑椹胚和囊胚的总数均显著低于对照组(P<0.05),而各染铅组退化胚、延迟胚数和未受精卵总数显著高于对照组(P<0.05);(3)染铅组卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡数量明显低于对照组,而原始卵泡、闭锁卵泡数量明显高于对照组。(4)染铅组小鼠卵巢和子宫形态发生明显畸形,当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,与对照组相比,差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。且上述变化均呈明显的剂量一时间效应。研究结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,可对小鼠生长发育具有明显抑制作用,同时使母鼠生殖器官卵巢和子宫的结构造成严重损害,并影响其生殖功能与早期胚胎发育。
2015年03期 v.35;No.219 461-466页 [查看摘要][在线阅读][下载 1533K] [下载次数：231 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 王宜安;黄沁怡;徐辉;周婷婷;黄攀;袁燕;顾建红;刘学忠;刘宗平;卞建春;
为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性及其机制,本试验以TM3细胞为材料,加入不同浓度的ZEA,设对照组,5、10、20μg/L ZEA染毒组,培养72h后,应用噻唑蓝比色法(MTT)检测TM3细胞活力,免疫印迹法检测原癌基因c-myc、c-fos、c-jun及连接蛋白Cx43、P-Cx43蛋白的表达情况,应用划痕标记染料示踪(SLDT)技术观察GJIC功能的变化,同时通过免疫荧光观察Cx43在细胞内的分布情况。结果显示,各ZEA染毒组对TM3细胞生长有一定的促进作用;免疫印迹检测发现,与对照组相比,10、20μg/L染毒组c-fos的表达量明显升高(P<0.05),5、10、20μg/L染毒组c-myc、c-jun表达量极显著增加(P<0.01),而连接蛋白Cx43表达量在10μg/L染毒组中显著下降(P<0.05),在20μg/L染毒组中极显著下降(P<0.01),其磷酸化水平在20μg/L染毒组显著下降(P<0.05);荧光显微镜观察到10、20μg/L染毒组荧光黄(LY)在细胞间的扩散距离较对照组有极显著下降(P<0.01);ZEA染毒后,分布于细胞膜上的Cx43逐渐减少,出现在细胞质和细胞核上。结果表明,低浓度的ZEA即可诱发Cx43及其磷酸化水平的下调,Cx43在细胞内的异常分布,导致GJIC的功能受到抑制,同时引起原癌基因c-myc、cfos、c-jun异常的表达,低浓度的ZEA对TM3细胞的增殖产生了明显的促进作用。
2015年03期 v.35;No.219 467-471页 [查看摘要][在线阅读][下载 787K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 王帅;贾琦珍;陈根元;张玲;马春晖;
探讨苦马豆素对家兔脑组织一氧化氮(NO)、环磷鸟苷(cGMP)和游离谷氨酸(Glu)的影响,进一步揭示苦马豆素的毒性作用机理。将24只家兔随机分为4组,即对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%(含苦马豆素30mg/kg)、Ⅱ组添加30%(含苦马豆素60mg/kg)、Ⅲ组添加45%(含苦马豆素90mg/kg)的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后14、35、70d每次每组随机采集2只家兔的全脑,检测家兔不同脑区NO、cGMP和Glu含量的变化。结果显示,从35d起,试验Ⅰ组家兔大脑、小脑、丘脑及海马的NO、cGMP及Glu含量均显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组家兔大脑、小脑、丘脑及海马的NO、cGMP及Glu含量均极显著高于对照组(P<0.01),但3个试验组脑干中3种物质含量与对照差异均不显著(P>0.05)。同一试验组中小脑3种物质的含量变化较海马、大脑和丘脑明显。结果表明,不同浓度苦马豆素对家兔脑组织NO、cGMP及Glu含量有显著影响,且具有一定的时间-剂量效应关系,小脑、海马、大脑和丘脑是苦马豆素作用的靶区,通过影响这几个脑区信号转导而产生毒性作用。
2015年03期 v.35;No.219 472-476页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ]
- 杨尚雪;汪彦玲;黄明光;唐荣福;唐胤晟;李美珍;刘德玉;胡传活;
试验用含不同浓度(0、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.10%、0.12%)水蛭素的稀释液稀释美系公猪精液,并以0.25mL细管分装冷冻。结果显示:(1)水蛭素浓度为0、0.02%时在冻后精子畸形率或水蛭素浓度为0、0.12%时冻后精子顶体完整率上存在明显的品种效应(P<0.05);(2)3种公猪各浓度组(除大约克和杜洛克公猪0.02%浓度组外)冻后精子活力均显著高于对照组(P<0.05),且均在浓度为0.08%时最高;除了长白公猪0.02%浓度组冻后精子畸形率显著低于对照组(P<0.05)外,3种公猪各浓度组与对照组差异均不显著(P>0.05);大约克公猪各试验组、杜洛克公猪0.08%浓度组及长白公猪0.02%、0.06%及0.08%浓度组冻后精子顶体完整率显著高于对照组(P<0.05),且均在浓度为0.08%时最高,长白及杜洛克公猪其他试验组与对照组差异均不显著(P>0.05)。结果表明,适宜浓度的水蛭素可以显著提高猪精液冻后质量,效果最好的浓度为0.08%。
2015年03期 v.35;No.219 489-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K] [下载次数：108 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 姜颖;闫守庆;杨润军;卢春燕;张永宏;赵志辉;
选用134头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对PPP1CB基因的第一内含子进行检测,利用SPSS软件对该基因内含子1的多态性与肉质性状进行相关性分析。分析结果表明:PPP1CB基因的第一内含子第14 434bp碱基处存在C/T基因突变,该基因多态性与屠宰率呈显著相关,对其他性状的影响差异不显著。本文首次揭示了PPP1CB基因与牛肉质性状的相关性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。
2015年03期 v.35;No.219 493-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 306K] [下载次数：180 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王雪飞;班慧;王炼;邸静;杨斌;杨英;
将420只1日龄肉仔鸡随机分为6组,每组2个重复,每个重复35只,试验期为42d,试验将苦豆籽粕-双歧杆菌合生元混于肉仔鸡饲料中,每周龄末清晨7:00空腹称量体质量,计算平均日增重;结算饲料消耗量,计算平均日采食量;根据试验期增重量和耗料量,计算料肉比;分别于7、14、21、28、35、42日龄每组随机抽取10只剖杀,制作小肠各肠段组织切片,测量肠黏膜绒毛高度、隐窝深度和黏膜厚度。结果显示:苦豆籽粕-双歧杆菌合生元能显著提高肠黏膜绒毛高度、黏膜厚度和V/C值(绒毛高度/隐窝深度)、降低隐窝深度(P<0.05)。结果表明:肉鸡饲料中添加苦豆籽粕-双歧杆菌合生元可以改善肉仔鸡的肠道组织结构的形态发育,从而提高肉鸡的生产性能。
2015年03期 v.35;No.219 497-506页 [查看摘要][在线阅读][下载 6282K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 耿芳芳;许伟;郭利伟;樊海新;吴金节;李治忠;王希春;
本试验旨在通过复合吸附剂(CA)对禽体内黄曲霉毒素B1(AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的吸附作用,根据血清生化指标变化,研究其对霉菌毒素污染的脱毒效果。选取120羽7日龄体质量接近的健康雏鸡,随机分成4组,分别为对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,其中对照组饲喂正常饲料,试验Ⅰ组饲喂霉变饲料,试验Ⅱ组饲喂正常饲料+0.5%CA,试验Ⅲ组饲喂霉变饲料+0.5%CA。试验期为21d。所有鸡只分别在7、28日龄进行称重,试验结束时,经鸡翅静脉采血,测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱基磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性;同时,每组选取5只鸡剖检,观察脏器病变,取肝脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊,计算脏器系数。结果显示,与对照组相比,试验Ⅰ组雏鸡肝脏、肾脏、脾脏脏器系数显著升高(P<0.05),胸腺和法氏囊脏器系数显著降低(P<0.05),血清TP和ALB含量显著下降(P<0.05),ALT、ALP、LDH和MDA活性显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05);试验Ⅲ组肝脏、肾脏和脾脏的脏器系数显著降低(P<0.05),TP和ALB的含量显著提高(P<0.05),ALT、ALP和MDA的活性显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);试验Ⅱ组的脏器系数及生化指标与对照组相比差异均不显著(P>0.05)。结果表明,CA对AFB1和DON有良好的吸附作用,可用于饲料中霉菌毒素的脱毒。
2015年03期 v.35;No.219 507-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 136K] [下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ]