预防兽医学

  • 猪瘟病毒诱导细胞自噬有利于病毒复制

    张立冬;郭慧琛;陈红英;孙世琪;

    首先采用蛋白印迹以及激光共聚焦显微观察的方法,研究猪瘟病毒感染对细胞内自噬相关蛋白LC3表达及定位的影响;然后用自噬诱导剂雷帕霉素或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤处理猪肾细胞,通过病毒滴度测定研究细胞自噬对病毒复制的影响。发现在病毒感染24h后自噬相关蛋白LC3由LC3-Ⅰ酯化为LC3-Ⅱ,并观察到病毒感染的细胞中出现了LC3蛋白聚点;细胞自噬体的诱导能显著增加病毒滴度。本研究表明猪瘟病毒在感染细胞后能诱导细胞自噬,该细胞自噬过程有利于病毒的增殖。

    2015年04期 v.35;No.220 525-529页 [查看摘要][在线阅读][下载 455K]
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  • 表达猪圆环病毒2型CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒的构建

    郭晓庆;王子馨;王淑娟;朱前磊;付朋飞;崔保安;陈红英;

    为了构建共表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒,本研究将CAP基因和猪IL-18基因分别置于pSY538的痘病毒启动子LP2EP2下,然后插入到含有痘苗病毒启动子P11启动的LacZ基因的禽痘病毒转移载体pSY681/lacZ中,获得重组转移质粒pSY681/CAP/IL18。将重组质粒pSY681/CAP/IL18转染入鸡胚成纤维细胞内,使CAP基因、猪IL-18基因和LacZ基因同源重组到禽痘病毒S-FPV-017中,产生重组禽痘病毒,经多次蓝斑克隆筛选纯化后,最终得到共表达CAP蛋白和猪IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-CAP/IL18)。以rFPVCAP/IL18感染CEF,通过RT-PCR检测,CEF细胞中含CAP基因和猪IL-18基因的mRNA,间接免疫荧光试验证实感染rFPV-CAP/IL18的CEF能表达CAP蛋白。重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的CAP和猪IL-18,为进一步的免疫效力研究奠定了基础。

    2015年04期 v.35;No.220 530-535页 [查看摘要][在线阅读][下载 456K]
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  • 猪流行伪狂犬病毒gE基因检测及生物信息学分析

    刘曜综;芮萍;王秋悦;马芮;杨彩然;刘谢荣;吴建华;马增军;

    为了解当前伪狂犬病毒(PrV)地方流行毒株gE基因的变异特点,根据Guizhou DY株设计引物序列扩增gE基因,并对扩增产物进行序列分析和蛋白特性预测。成功获得1 654bp目的片段,提交GenBank获得登录号KM079613。核酸序列分析在142~144和1 480~1 482位发现2处特征性CGA插入,并导致氨基酸序列在48和494位天冬氨酸插入。相对Ea株编码蛋白O-GlcNAc糖基化位点在563和571位出现偏移,抗原倾向性在420~460位区域明显下降。进化分析显示与2012年以来国内流行毒株WY、ZM、HuXT2012、HBBD、HBLF、XiangA和ZJNB2012同源性较高,达99.8%,而与欧洲、美洲毒株及2012年以前国内毒株同源性较低。表明所感染的伪狂犬病病毒已发生一定的变异,并且gE基因编码蛋白与国内早期分离的Ea株相比在O-GlcNAc糖基化位点和抗原倾向性上也发生了改变。

    2015年04期 v.35;No.220 536-539+544页 [查看摘要][在线阅读][下载 1082K]
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  • 猪血凝性脑脊髓炎病毒感染可激活脑内的小胶质细胞

    唐志文;赵家宽;张竞;兰云刚;高丰;贺文琦;靳朝;

    以猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,以小胶质细胞表面特异性标记物Iba1蛋白为检测对象,利用荧光定量PCR、Western-blot、免疫组化等方法,分别从基因转录水平、蛋白水平和组织学水平对PHEV感染后不同时间点小鼠脑内小胶质细胞的增殖、活化情况进行了检测分析。结果表明,与对照组相比,试验组小鼠脑组织内的Iba1基因转录水平、蛋白表达量均有升高,且都随着感染时间延长而增大。将采集的小鼠脑组织制作石蜡切片,免疫组化结果证实PHEV的感染激活了小胶质细胞,表现为细胞数量增多,呈聚集样分布;同时细胞形态变化也很明显,胞体变大并呈阿米巴状。上述试验证实PHEV感染小鼠后小胶质细胞发生了明显增殖、活化现象,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制研究奠定了基础。

    2015年04期 v.35;No.220 540-544页 [查看摘要][在线阅读][下载 544K]
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  • 宿主细胞CyPB基因的克隆及表达分析

    毕经影;宋德光;张頔;黄后双;王春霞;王改丽;田忠华;高丰;赵魁;

    CyPB作为亲环蛋白(cyclophilins,CyPs)家族成员之一,是环孢菌素A、K506、雷帕霉素等免疫抑制药物在细胞内的主要结合蛋白。本课题组前期利用抑制性消减杂交技术对羊传染性脓疱病病毒(orf virus,ORFV)感染MDBK前后宿主细胞差异基因进行筛选时发现,正向文库中CyPB显著上调表达,但其在ORFV侵染过程中的作用尚不清楚。为了进一步明确CyPB对ORFV侵染复制的影响,根据从GenBank中获取的牛源CyPB基因编码区全长651bp基因序列,设计1对针对牛源CyPB基因的特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得CyPB基因全长基因序列。将获得的CyPB基因连接至PET-32a载体,转化到BL21菌株中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析可见在25 000处有与预期大小一致的蛋白条带。上述结果表明,本研究成功诱导表达纯化出His-CyPB融合蛋白,该结果将为针对牛源CyPB蛋白功能的研究提供重要的物质基础。

    2015年04期 v.35;No.220 545-548+574页 [查看摘要][在线阅读][下载 509K]
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  • 免疫鸡毒支原体F弱毒株对SPF鸡Bu-1a~+ B、TCRγδ~+ CD3~+T细胞及血清IgM、IgG、IgA的影响

    林伯全;廖惠珍;杜海江;徐磊;杨慧;林秋敏;

    分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的(MG)F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及ELISA方法对免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)中Bu-1a+B、TCRγδ+CD3+T细胞比例及血清IgM、IgG、IgA的动态变化规律进行研究。结果显示各组Bu-1a+B/PBL于免疫后5、7d由高至低依次为A、B和C组,且各组差异显著(P<0.05);A、B组TCRγδ+CD3+T/PBL于免疫后3d略有升高且比值较接近,都高于C组,但差异不显著(P>0.05);各组IgM于免疫后7、14和21d差异显著(P<0.05),IgG于免疫后14、21和28d差异显著(P<0.05),IgA于免疫后28d差异显著(P<0.05),由高至低依次为A、B、C组。研究结果表明,免疫(MG)F株可较好的提高Bu-1a+B、血清IgM、IgG、IgA介导的体液免疫作用,且(MG)F株活菌浓度与Bu-1a+B/PBL比值、血清IgM、IgG、IgA浓度呈正相关;但免疫(MG)F株不能显著提高鸡外周血TCRγδ+CD3+T/PBL比值,且(MG)F株活菌浓度与TCRγδ+CD3+T/PBL比值无明显相关性。

    2015年04期 v.35;No.220 549-552页 [查看摘要][在线阅读][下载 556K]
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  • 鸭混合感染病例中鸭坦布苏病毒的分离鉴定与E基因序列分析

    祖立闯;苗立中;王艳;王文秀;毕研丽;沈志强;

    对山东省滨州某鸭场2013年送检的疑似鸭瘟或鸭坦布苏病毒感染的临床病料,通过PCR检测进一步确诊为鸭瘟与鸭坦布苏病毒混合感染,并分离到了鸭瘟与鸭坦布苏病毒混合感染毒,为获得单一的鸭坦布苏病毒,利用鸭瘟阳性血清对分离病毒连续进行2次中和试验,接种10日龄SPF胚并连续传3代,收获尿囊液,通过PCR鉴定获得了单一的鸭坦布苏病毒。对分离毒进行ELD50及血凝性等相关测定,并RT-PCR扩增全长E基因,进行序列分析。研究成功得从鸭瘟与鸭坦布苏病毒混合感染的病料中分离到鸭坦布苏病毒,为鸭坦布苏病毒的致病机理等基础性研究以及相关疫苗与诊断试剂的研制奠定了基础。

    2015年04期 v.35;No.220 553-557页 [查看摘要][在线阅读][下载 678K]
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  • 大鲵蛙病毒LAMP检测方法的建立

    刘星星;耿毅;汪开毓;周燕;陈德芳;黄小丽;刘丹;陈成;

    根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CGSRV的最低检测限,并与巢式PCR和普通PCR进行比较。结果表明,该LAMP方法最佳反应温度为62℃,反应时间为40min,对CGSRV最低检测限5copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50和5×103copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR;且与淋巴囊肿病毒、鲫鱼出血病疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性。因此,该方法对CGSRV的检测较巢氏PCR和常规PCR更为简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,更适合养殖现场检测,为CGSRV早期感染的快速检测提供了新方法。

    2015年04期 v.35;No.220 558-564页 [查看摘要][在线阅读][下载 775K]
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  • 副猪嗜血杆菌病疫苗新制苗菌株FS0307的毒力和OMP P5基因研究

    王占伟;周勇岐;王丽;刘茂军;邵国青;

    为了进一步研究副猪嗜血杆菌FS0307株的特性,本研究对该菌株的外膜蛋白P5基因进行测序分析,并进行其对豚鼠的致病力研究。结果显示,Hps FS0307株的序列与相同血清型的国际标准株SW124的同源性为98.3%,与多数国内分离株的同源性在98%以上,与美国分离株2170B的同源性为95.6%,而与3株其他血清型国际标准株的同源性在89.5%~95.1%之间;遗传系统进化树显示与4型国内分离株SC085(HM747106)在同一分支上。且能引起豚鼠100%发病,100%死亡。说明Hps FS0307株与国内流行菌株更相似,是1株优良的副猪嗜血杆菌病疫苗的制苗菌株。

    2015年04期 v.35;No.220 565-568页 [查看摘要][在线阅读][下载 619K]
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  • 金黄色葡萄球菌对体外培养的奶牛乳腺成纤维细胞PDGF-BB及其受体PDGFRβ表达的影响

    吴建美;丁玉林;毕艳楠;王一;王金玲;莫内;赵占宽;王凤龙;

    为研究不同浓度的金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)血小板源性细胞生长因子(PDGF-BB)及其受体PDGFRβ表达的影响,采用不同浓度的热灭活金黄色葡萄球菌(0、105、106和108 CFU/mL)作用于BMFB细胞,分别于不同的时间点(6、12、24和48h)采用RT-PCR法检测PDGF-BB及PDGFRβmRNA表达,Western-blot法检测PDGF-BB及PDGFRβ蛋白的表达。结果显示,金黄色葡萄球菌作用于BMFB后,PDGF-BB mRNA表达量的升高呈明显的时效关系和量效关系(P<0.05);PDGF-BB蛋白表达升高呈明显的时效关系(P<0.05)。PDGFRβmRNA的表达量较对照组升高,呈正量效关系和正时效关系,在12h达到峰值后下降,同时mRNA表达量呈负量效关系(P<0.05);PDGFRβ蛋白表达量呈正时效关系(P<0.05)。本研究证实了金黄色葡萄球菌可以上调BMFB PDGF-BB及PDGFRβmRNA和蛋白的表达。

    2015年04期 v.35;No.220 569-574页 [查看摘要][在线阅读][下载 882K]
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  • BALB/c小鼠肝螺杆菌感染模型的建立及其病理特征

    张泉;朱剑波;冯洁;谭海明;李翎瑜;薛整风;

    建立BALB/c小鼠肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,Hh)感染模型,旨在研究Hh在小鼠感染不同时期的病理特征。以Hh灌饲SPF级BALB/c雄性小鼠,于最后1次接种后第2、4、6、8周收集小鼠粪便提取DNA,PCR扩增Hh16SrRNA基因检测小鼠感染率;结果表明随时间延长,小鼠的Hh感染率逐步增加,获得了稳定的BALB/c小鼠Hh感染试验模型。接种后2、3、4和5个月,分别取小鼠肝脏、胃、盲肠和结肠,进行Hh16SrRNA基因扩增和病理组织学检查。结果显示,小鼠的肝脏、胃、盲肠和结肠组织均检测到了Hh的定植;小鼠肝细胞发生脂肪变性、肝小叶局灶性坏死、坏死灶周围有不同程度的炎性细胞浸润等病变,随时间延长,病变严重程度增加;少量小鼠胃黏膜下层有炎性细胞浸润、胃黏膜上皮坏死脱落;盲肠表现不同程度的炎性细胞浸润。该研究结果表明,Hh可引起小鼠肝炎、胃炎和盲肠炎。

    2015年04期 v.35;No.220 575-579页 [查看摘要][在线阅读][下载 1068K]
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人兽共患病

  • 巨噬细胞通过产生胞外陷阱捕获并杀伤单增性李斯特菌

    程威;施晓晨;王超;安雅男;张巧丽;金琨琪;杨志强;于录;

    为了研究产单核细胞增生性李斯特菌(Lm)能否引起巨噬细胞产生胞外陷阱,并初步探讨巨噬细胞胞外陷阱(METs)对其杀伤作用。本文通过荧光显微镜、菌落计数和免疫印记等技术分析单增李斯特菌侵袭的2种巨噬细胞胞外陷阱形态、产量及抑菌效果。结果显示,小鼠巨噬细胞系RAW 264.7以及人巨噬细胞系Thp-1均可在单增李斯特菌的诱导下产生胞外陷阱;Lm在侵袭巨噬细胞15min后已有METs产生,1~3h产量明显增大,然后随时间的推移逐渐减弱;METs可以有效抑制Lm的生长。另外,本试验还发现Lm诱导胞外陷阱的产生与细胞外信号调节激酶相关。

    2015年04期 v.35;No.220 580-584页 [查看摘要][在线阅读][下载 947K]
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  • 多黏菌素E对鸡源性大肠杆菌和沙门菌的PAE及其机制初探

    张玲;李继昌;许薇;孙媛;王金莉;

    从发病鸡的粪便中分离出具有多重耐药性的大肠杆菌O18和鸡白痢沙门菌O2,检测多黏菌素E的最小抑菌浓度(MIC)和抗生素后效应(PAE),测定多黏菌素E接触过的细菌各组乳酸脱氢酶(LDH)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)活性变化、电镜观察细胞膜形态、巨噬细胞吞噬细菌数量和细菌对Caco-2的黏附力。多黏菌素E作用后,菌液中LDH和γ-GT活性显著性增高(P<0.01),细菌胞膜出现破损或缺失,细菌形态改变,被巨噬细胞吞噬的菌量明显增多(P<0.01),细菌对Caco-2的黏附力显著下降(P<0.01)。多黏菌素E对鸡源性多重耐药菌株存在PAE,推测其产生机制为破坏细菌细胞膜,改变细菌形态,促进巨噬细胞对细菌的吞噬能力增强,降低细菌对细胞黏附力。

    2015年04期 v.35;No.220 585-591页 [查看摘要][在线阅读][下载 1123K]
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基础兽医学

  • 组蛋白去乙酰基酶活性对猪睾丸细胞增殖及凋亡的影响

    褚美然;唐博;张学明;李子义;

    以体外培养的猪睾丸细胞系(ST)为试验材料,加入不同浓度(0~1 000nmol/L)的组蛋白去乙酰基酶抑制剂(scriptaid)处理培养,分别在处理24、48、72h时采用MTT法检测细胞的增殖。干预24h后,采用流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。结果表明:与对照组相比,不同剂量scriptaid作用24h后,猪睾丸细胞的增殖活性均受到抑制;不同浓度的scriptaid作用24h后,与对照组相比,各剂量组猪睾丸细胞凋亡率显著升高,且存在着剂量—效应关系;组蛋白去乙酰酶抑制剂scriptaid显著下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,并且对于促凋亡基因Bax有上调趋势,从而抑制ST细胞的增殖,并促进ST细胞的凋亡。本研究表明组蛋白去乙酰酶抑制剂通过抑制组蛋白去乙酰基酶(HDACs)活性从而使睾丸细胞增殖受到抑制,诱导睾丸细胞发生凋亡。

    2015年04期 v.35;No.220 592-596页 [查看摘要][在线阅读][下载 953K]
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  • 槲皮素和乙酸龙脑酯对小鼠的保胎作用及IL-10和CD80~+/CD86~+细胞的影响

    王晓丹;杨柳;李牧;钟秀会;

    本文旨在研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠流产的保护作用及其对小鼠子宫IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+细胞数量的影响。试验选用LPS尾静脉注射(0.10μg/鼠),制造小鼠流产模型,于怀孕第4~7d分别口服不同保胎药物,检测各组(n=10)小鼠的流产率、胚胎吸收率、子宫组织IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+表达的变化。发现LPS诱导流产的小鼠IL-10含量降低,CD80+/CD86+比值升高,预先口服不同保胎药物后,不同程度的抑制了LPS的作用,其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显,并且IL-10含量显著升高,CD80+/CD86+比值显著降低,与LPS流产组比较均差异显著(P<0.05)。这些结果表明,LPS诱导流产与机体IL-10和共刺激分子CD80+/CD86+有关。保胎中药成分槲皮素和乙酸龙脑酯有降低小鼠脾脏CD80+/CD86+比值,促进母胎界面Th2细胞因子IL-10分泌的作用。

    2015年04期 v.35;No.220 597-600页 [查看摘要][在线阅读][下载 621K]
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  • 含鸡源启动子的真核表达载体的构建及IBV S1蛋白抗原表位的表达

    牛婷;余松城;邹年莉;吴瑞婷;杨晓林;夏静;黄勇;

    利用PCR方法扩增出鸡β-肌动蛋白(β-actin)启动子基因序列,克隆至pcDNA3.1和pCIneo载体中以替代CMV启动子,获得含鸡源启动子的真核表达载体pcDNA-act和pCIneo-act。将IBV ZY3S1蛋白抗原表位基因亚克隆到启动子替换前后的质粒中,然后将重组质粒转染至鸡胚成纤维细胞(CEF)中,采用间接免疫荧光试验检测转染细胞对S1蛋白抗原表位的表达。将重组质粒以150μg/只的剂量肌注免疫SPF雏鸡,同时设立IBV灭活疫苗组及PBS空白对照组,经间接ELISA检测免疫前后血清中IBV特异性抗体,最后使用ZY3强毒株给各组实验动物攻毒,观察鸡群的发病死亡情况,计算攻毒保护率。结果显示,替换启动子后的表达载体在CEF中对S1蛋白抗原表位的表达量以及实验动物的抗IBV抗体水平均高于未更换启动子的相应载体,攻毒后鸡群的发病率和死亡率均比替换前降低,说明外源基因的表达和启动子的来源有密切的关系。

    2015年04期 v.35;No.220 601-607页 [查看摘要][在线阅读][下载 919K]
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  • 电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在仔猪肌肉中表达对生产性能的影响

    汪飞;尹云厚;习欠云;董涛;蒋勇;赵帅;朱晓彤;束刚;江青艳;张永亮;

    采用pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒,对断奶仔猪肌肉单次注射后电穿孔处理,观察对猪生产性能的影响。采用碱变性法提取pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒并定量。选取32日龄仔猪60头,公母各半,分别注射0(生理盐水)、1.0mg GHRH表达质粒,然后用电穿孔仪电击处理。结果表明,与对照组相比,试验组猪32日龄初始平均体质量无差异(P>0.05),公猪67和98日龄平均体质量分别显著增加26.71%(P<0.05)和21.31%(P<0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显著(P>0.05);公猪32~67日龄日增重显著增加47.93%(P<0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显著(P>0.05);试验组淘汰率降低20.04%,其中公猪淘汰率降低33.50%;试验组猪80、150和180日龄血清GHRH浓度分别显著增加13.64%(P<0.05)、15.82%(P<0.05)和11.36%(P<0.05),血清中IGF-1浓度分别增加26.70%(P<0.05)、4.31%(P>0.05)和6.04%(P>0.05),且母猪血清浓度增幅高于公猪;血清中其余激素(T3、T4、IL-2、IL-6)和IgG浓度也呈上升趋势等。本试验表明GHRH(1-32)表达质粒可提高猪生产性能。

    2015年04期 v.35;No.220 608-613页 [查看摘要][在线阅读][下载 1065K]
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  • 吡啶羧酸铬对罗斯肉鸡脂肪沉积及相关血清生化指标的影响

    陈广信;高振华;曹赞;张少成;孙建男;陈彩文;钱汝俊;吴志文;

    选取240只1日龄健康、体质量接近的罗斯肉仔鸡,随机分为Ⅰ~Ⅴ5个组,每组设4个重复,每个重复12只鸡。试验Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮,Ⅱ~Ⅴ组为试验组,在基础饲粮中分别添加吡啶羧酸铬0.1、0.2、0.4和0.8mg/kg(以铬计),试验期为42d。结果表明,21日龄各试验组腹脂沉积有降低趋势,试验Ⅳ组降低44.64%(P<0.05),其余各组差异不显著(P>0.05);皮下脂肪厚度分别降低0.49%(P>0.05)、0.99%(P>0.05)、6.40%(P>0.05)和3.45%(P>0.05);肌间脂肪宽度没有规律性变化;试验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组血清TG分别降低17.14%(P<0.05)、14.29%(P<0.05)和15.71%(P<0.05);试验Ⅴ组血清HDL-C水平升高11.59%(P<0.05);血清TC和TG变化不显著。42日龄试验各组腹脂率分别降低23.90%(P>0.05)、24.88%(P>0.05)、34.15%(P<0.05)和29.76%(P<0.05);试验Ⅳ组皮下脂肪厚度降低11.76%(P>0.05);试验Ⅲ、Ⅳ组血清TC分别降低26.26%(P<0.05)和25.32%(P<0.05),试验Ⅱ和Ⅴ组有降低趋势,但差异不显著(P>0.05);试验Ⅲ和Ⅳ组血清TG分别降低23.26%(P<0.05)和22.48%(P<0.05);吡啶羧酸铬能显著降低血清LDL-C的含量(P<0.05),提高Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ组血清HDL-C含量(P>0.05),Ⅲ组提高达18.36%(P<0.05)。因此,吡啶羧酸铬能有效降低罗斯肉鸡腹脂率,显著影响腹脂沉积;降低皮下脂肪厚度;对肌间脂肪宽度没有规律性的影响;对血清TC、TG、LDL-C和HDL-C有显著影响。罗斯肉鸡饲粮中降低腹脂率的吡啶羧酸铬最佳添加量为0.4mg/kg。

    2015年04期 v.35;No.220 614-619页 [查看摘要][在线阅读][下载 657K]
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  • 黄芪3种成分对H_2O_2诱导Chang liver细胞凋亡的抑制作用

    韩林;李健;姜慧慧;马玉芳;黄一帆;

    以H2O2建立Chang liver细胞损伤模型,设空白对照组、损伤模型组、黄芪甲苷保护组、毛蕊异黄酮葡糖苷保护组、芒柄花素保护组和阳性对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、微板法、流式细胞术、DNA Ladder检测等方法测定细胞存活率、细胞外液转氨酶活性、周期分布及凋亡情况。结果显示H2O2的诱导使Chang liver细胞存活率降低、活性升高、发生G0/G1期阻滞及细胞外液转氨酶、细胞凋亡率的升高,3种成分对细胞的预处理均可显著或极显著的升高细胞存活率、缓解G0/G1期的阻滞现象、并降低细胞外液转氨酶活性及细胞凋亡率(P<0.05或P<0.01)。表明黄芪主要成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷和芒柄花素)对H2O2诱导的Chang liver细胞凋亡均有一定的抑制作用。

    2015年04期 v.35;No.220 620-625页 [查看摘要][在线阅读][下载 1233K]
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临床兽医学

  • NEFA对体外培养奶牛中性粒细胞TLR2/4介导的炎症信号通路的影响

    张玉明;雷林;蒋兴华;杜希良;高文文;邓清华;王哲;李心慰;刘国文;

    分离培养奶牛中性粒细胞(PMN),添加不同浓度的非酯化脂肪酸(NFEA),作用浓度分别为0.125、0.25、0.5、1和2mmol/L。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性通路相关分子基因表达水平,采用ELISA检测炎性因子含量。结果显示,与对照组相比,Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子NF-κBp65的mRNA表达水平逐渐增加,且0.5、1和2mmol/L NEFA处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量也随着NEFA作用浓度的增加而增加,并且0.5、1和2mmol/L NEFA处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。这些结果表明高浓度NEFA(≥0.5mmol/L)可以激活中性粒细胞TLR2/4介导的炎症信号通路,显著增加IL-1β、IL-6和TNF-α的合成和释放,造成中性粒细胞的炎性损伤,进而影响奶牛免疫机能。

    2015年04期 v.35;No.220 626-630页 [查看摘要][在线阅读][下载 853K]
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  • 西藏林芝地区羊心电图和瘤胃肌电图特征分析

    梁桂荣;田发益;巴平;

    通过对正常藏系绵羊心电图和瘤胃肌电图的分析,掌握反刍动物的循环和消化代谢的特点。固定试验绵羊,利用心电图仪和胃肠电图仪进行描记,发现心电轴普遍右偏,偏移角度>130°以上(P>0.05);T波显著增高,在V1、V2、V3和V4 4个胸导联中,T值均值为(0.44±0.16)、(0.73±0.35)、(0.53±0.17)、(0.43±0.47)mV;ST段等电位的时间>0.12s,QT间期水平延长。瘤胃肌电的描记发现VPP电位随年龄增加而降低,主波时间随年龄增加而变短。结果表明:心电轴的右偏与右心室肥大或品种有关,T波电位的增加与缺钙、高血钾或品种相关;瘤胃收缩的强度与收缩时间随年龄增加而变弱变短,此结果可为高原藏系绵羊内科疾病提供诊断方法和基础依据。

    2015年04期 v.35;No.220 631-635页 [查看摘要][在线阅读][下载 1018K]
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  • 苦豆子及其复方药对奶牛子宫内膜炎5种致病菌的体外抑菌活性研究

    辛任升;刘宇;郝宝成;尚若峰;张超;梁剑平;

    采用酸法提取苦豆子(Sophoraalopecuroides L.)的有效成分,并用96孔板微量肉汤稀释法测定苦豆子生物总碱的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。采用(K-B)纸片扩散法,以盐酸小檗碱为对照,考察苦豆子提取物及其复方灌注剂对致病菌的抑菌效果。结果表明,苦豆子总生物碱对表皮葡萄球菌抑制效果最佳,MIC为16g/L,MBC为32g/L。苦豆子总生物碱、复方灌注剂及硫酸小檗碱的抑菌环平均直径分别为14.28,18.61和18.02mm。由此得出苦豆子总生物碱及其复方灌注剂有明显的抗菌作用。

    2015年04期 v.35;No.220 636-639页 [查看摘要][在线阅读][下载 670K]
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  • 小花棘豆中毒对家兔睾丸α-甘露糖苷酶的影响

    王帅;陈根元;贾琦珍;张玲;马春晖;

    将24只家兔随机分为4组,即对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%(含苦马豆素30mg/kg)、Ⅱ组添加30%(含苦马豆素60mg/kg)、Ⅲ组添加45%(含苦马豆素90mg/kg)的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后第14、35、70d每次每组随机采集2只家兔的睾丸,检测家兔睾丸AMA活性及其表达变化。结果显示,试验组及对照组家兔睾丸高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平与对照组差异显著,试验Ⅰ组家兔AMA1和AMA2的表达与对照组差异不显著(P>0.05),但试验Ⅱ组和试验Ⅲ组家兔AMA1和AMA2的表达均显著低于对照组(P<0.05),随着试验的进行抑制效果愈加明显。结果表明,小花棘豆中毒可影响家兔睾丸AMA的活性及其基因的转录表达。

    2015年04期 v.35;No.220 640-644页 [查看摘要][在线阅读][下载 817K]
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动物科学

  • 全反式视黄酸对3T3-L1前脂肪细胞分化及PPARγ和C/EBPα mRNA表达的影响

    王大鹏;金永成;单安山;程宝晶;房恒通;赵云;韩昱;吴国超;沈景林;张晶;

    本研究旨在探讨全反式视黄酸(all trans retinoic acid,ATRA)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其机制。培养3T3-L1前脂肪细胞,分别设置对照组以及10-9、10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L ATRA的处理组,油红O染色观察3T3-L1前脂肪细胞分化的形态变化;油红O染色提取法分析不同浓度ATRA对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响;Real-time PCR技术检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor,PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA水平的表达。结果表明:10-7、10-6和10-5 mol/L的ATRA抑制3T3-L1前体脂肪细胞的分化(P<0.01),而10-9和10-8 mol/L的ATRA对3T3-L1前体脂肪细胞分化没有显著影响(P>0.05)。10-5 mol/L的ATRA处理的前脂肪细胞,分化相关基因PPARγ和C/EBPαmRNA的表达减少,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结果显示,高浓度的ATRA可以抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,机制可能与其抑制脂肪细胞分化相关基因PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关。

    2015年04期 v.35;No.220 645-648+654页 [查看摘要][在线阅读][下载 920K]
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  • 中国西门塔尔牛GPAM基因外显子多态性及对经济性状和脂肪酸组成的影响

    于海滨;肖航;魏天;赵尧璐;于仙忠;张路培;赵志辉;

    线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶(mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAM)基因的主要作用是通过催化三酰基甘油和磷脂生物合成过程,从而促进动物机体甘油三酯(TAG)的生成,并通过中心和外周调节作用,对哺乳动物脂肪沉积,能量消耗,胴体质量以及整体的代谢进行调控。为揭示GPAM基因外显子多态性与西门塔尔牛胴体组成和肉质性状的相关性,本研究采用DNA池测序及PCR-RFLP的方法检测了131头34月龄中国西门塔牛群体该基因外显子中SNP位点的多态性,并与西门塔尔牛胴体组成、肉质性状及脂肪酸组成进行了关联分析。结果表明,在GPAM基因外显子区第20外显子2 823bp处检测到1个突变位点C>T,该SNP与中国西门塔牛的胴体组成性状(毛质量、胴体质量、净肉率、后部排酸后酸度、胴体长、胴体深、胴体胸深、牛鞭质量、头质量、前蹄质量、心脏质量)显著相关(P<0.05),与脂肪酸组成性状(花生酸、二十碳一烯酸)显著相关(P<0.05),但对肌间脂肪沉积无影响。本研究结果可为中国西门塔尔牛分子选育、进一步提高肉用性能提供依据。

    2015年04期 v.35;No.220 649-654页 [查看摘要][在线阅读][下载 757K]
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  • IGFBP-5基因在不同猪种间的表达差异及5′端序列特征分析

    吴庆燕;贾泓瑶;石惠;陆超;郝林琳;于浩;张昊龙;刘松财;卢可;

    通过实时荧光定量PCR比较了IGFBP-5基因在西藏小型猪、巴马香猪和军牧1号白猪出生、断奶、成年各不同生长发育时期的肝脏、肾脏、脾脏和肌肉组织之间的表达差异,并比较分析了3个猪种IGFBP-5基因5′调控区的突变位点及所引起的转录因子结合位点的改变。从出生到成年阶段,3个猪种中IGFBP-5基因的表达量没有明显的变化规律;在不同生长发育时期3个猪种IGFBP-5均在肾脏和肝脏中高表达;序列同源性比对分析发现,3个猪种中存在多处突变,转录因子结合位点分析发现军牧1号白猪在序列-1 505和-1 497bp的2处突变分别增加了1个GATA-x转录因子结合位点和1个E2F转录因子结合位点。IGFBP-5基因5′调控区在不同猪种间存在的差异可能对IGFBP-5基因在大、小型猪种间的表达差异有影响。

    2015年04期 v.35;No.220 655-660页 [查看摘要][在线阅读][下载 943K]
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  • 猪SOCS1基因的克隆、生物信息分析及热应激条件下的表达

    马铭龙;巨向红;雍艳红;贾汝敏;赵云涛;王萍;廖明;

    本试验克隆了土杂猪SOCS1基因cDNA序列,发现SOCS1基因cDNA编码220个氨基酸的前体蛋白。该蛋白相对分子质量24 370,等电点(PI)10.98,与GenBank中登录的普通猪、人、牛、羊和小鼠SOCS1序列同源性分别为99.9%、97.1%、96.1%、94.3%和93.7%。具有1个中央SH2域(Scr-homology 2)、1个长度可变的N端结构域和1个位于C端包含40个氨基酸残基的保守序列(SOCS盒)。荧光定量PCR结果显示,脾脏、小肠和胸腺中SOCS1mRNA的表达在热应激条件下显著上调(P≤0.05),且呈时间依赖性。但在肠系膜淋巴结中,热应激第3、6、9天显著下调(P≤0.05)。结果表明,SOCS1表达量在热应激条件下的土杂猪发生明显改变,并呈组织和时间依赖性。

    2015年04期 v.35;No.220 661-668页 [查看摘要][在线阅读][下载 1855K]
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