预防兽医学

  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7特异性抗体体外抑制病毒复制

    刘荣昌;张桂红;崔进;谢杰雄;宁章勇;王衡;

    为进一步探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(Nsp7)在病毒复制过程中发挥的生物学作用,本研究在获得Nsp7可溶性重组蛋白的基础上,首先制备了抗Nsp7蛋白兔源多克隆抗体。确定抗体的免疫活性后,将其与PRRSV共同接种Marc-145细胞。孵育1h后弃掉混合物,加细胞维持液继续培养48h,应用TaqMan探针Real Time PCR方法对培养物中病毒拷贝数进行检查。结果显示,本研究制备的多克隆抗体可以和大肠杆菌表达的Nsp7α、Nsp7β重组蛋白发生特异性结合,并有效用于病毒感染Marc-145细胞后其Nsp7蛋白分布情况的原位检测;更为重要的是,与正常家兔血清相比,不同稀释倍数的抗Nsp7多克隆抗体均可对病毒的复制产生抑制作用,其中10-3倍稀释血清的抑制率可达88.4%。结果表明,Nsp7特异性抗体可有效用于PRRSV抑制试验的研究;Nsp7作为PRRSV复制酶多聚蛋白成员之一,在病毒复制过程中发挥着重要作用。

    2015年05期 v.35;No.221 669-674页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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  • 猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性/经典毒株多重RT-PCR方法的建立及应用

    王晓波;李丽敏;袁万哲;宋勤叶;孙泰然;逯继成;

    为了建立鉴别猪瘟病毒(Classical swine virus,CSFV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)及经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)的快速检测方法,根据GenBank中公布的已知序列,设计合成了针对CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV特异性引物。经过引物筛选及对退火温度、引物比例等扩增条件的优化,建立了用2对引物同时检测CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法可同时扩增出287bp的CSFV、374bp的HP-PRRSV和464bp的C-PRRSV目的核苷酸片段,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等无交叉反应,最低可以检测到11.3pg的CSFV、4.7pg的HP-PRRSV和2.8pg的C-PRRSV总RNA。分别用多重和单项RT-PCR检测了从河北省采集的31份血清或组织样品,其中CSFV、HP-PRRSV、C-PRRSV以及CSFV与HP-PRRSV混合感染的检出率分别为19.4%、22.6%、0%与9.7%,多重与单项RT-PCR的符合率为100%。本试验建立的多重RT-PCR方法可同时鉴别CSFV、HP-PRRSV与C-PRRSV,适于猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测与流行病学调查。

    2015年05期 v.35;No.221 675-679+691页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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  • 猪血凝性脑脊髓病毒在J774A.1细胞中的增殖特性及炎性因子表达

    唐博;张竞;兰云刚;潘伟;田忠华;贺文琦;高丰;

    为了探讨宿主巨噬细胞(J774A.1细胞)在猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinatin encephalomyelitis virus,PHEV)感染过程中的作用及其参与炎性反应的应答特征,本研究通过CPE观察、TCID50、免疫荧光(IFA)、ELISA和PT-PCR等方法,对PHEV感染J774A.1细胞的增殖特性及炎性因子IL-6、TNF-a、IL-1β等mRNA转录水平和蛋白水平的表达情况进行检测分析。IFA的检测结果显示,感染后8h后仅有少量的被荧光抗体标记细胞出现绿色荧光,随着感染时间的延长,荧光标记的细胞逐渐增加,直至感染后32~40h出现大量细胞出现荧光。TCID50结果显示,PHEV感染滴度的增值趋势与mRNA含量的变化基本一致,在感染后24~32h增殖速度最快,至32h病毒感染滴度达到最高。荧光定量RT-PCR结果显示,PHEV感染可诱导J774A.1细胞分泌的TNF-a、IL-6、IL-1βmRNA转录水平均显著升高,尤其IL-6mRNA的表达量显著增加,在48h达到对照组的25倍;TNF-αmRNA的表达量在感染后8h内增加为对照组的4倍,随后一直维持较高水平。ELISA结果显示,TNF-a、IL-6、IL-1β蛋白水平表达也显著增加。上述研究结果表明,PHEV不仅可以感染J774A.1细胞,而且能诱导其分泌多种细胞因子参与免疫应答,为进一步阐明机体重要免疫细胞在PHEV过程中的作用奠定了基础。

    2015年05期 v.35;No.221 680-685页 [查看摘要][在线阅读][下载 332K]
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  • 猪圆环病毒2型ORF1、ORF2和ORF3原核表达和多克隆抗体的制备

    陈禹;杜谦;霍瑞超;王莉莉;童德文;黄勇;

    猪圆环病毒2型(porcine Circovirus type 2,PCV2)感染给养猪业造成巨大的经济损失,而PCV2ORF1、ORF2和ORF3与PCV2的复制、免疫原性及致病机理密切相关。本研究制备PCV2ORF1、ORF2和ORF3多克隆抗体,为进一步研究PCV2ORF1、ORF2和ORF3的功能提供材料。依据PCV2全基因组序列,分别设计针对PCV2ORF1、ORF2和ORF3编码基因的特异性引物,PCR扩增后,克隆入原核表达载体pET-32a的BamHⅠ/NcoⅠ和HindⅢ位点之间,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组原核表达载体分别命名为pET-ORF1、pET-ORF2和pET-ORF3。重组质粒分别转化E.coli BL21菌株,1 mmol/L IPTG诱导表达ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白,SDS-PAGE测定结果表明其相对分子质量分别约为52 000、39 000和29 000。大量诱导重组蛋白表达后,回收目的蛋白条带、匀浆后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PCV2ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白血清。兔抗血清纯化后,Western blot检测抗血清与重组蛋白的特异性结合情况及其效价,证明所制备多克隆抗体均具有较强的特异性,效价均高于1∶10 000。

    2015年05期 v.35;No.221 686-691页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K]
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  • 猪血凝性脑脊髓病毒刺激小鼠树突状细胞成熟及炎性因子分泌

    赵家宽;岳慧青;张竞;兰云刚;田忠华;高丰;贺文琦;

    为了了解猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染机体后对树突状细胞(Dendritic cell,DC)的激活状况,以及DC在PHEV感染过程中参与免疫应答的能力,本试验分离了BALB\c小鼠骨髓细胞,并通过条件培养基诱导培养8d,获得纯度约77.69%的DC。将PHEV接种DC后,分别对其表面成熟标志分子CD40、CD80、MHCⅡ类分子以及分泌炎症因子的能力进行检测分析。结果显示,PHEV感染DC后T细胞共刺激分子CD40、CD80及MHCⅡ均有一定程度的上调,同时DC分泌细胞因子和趋化因子的能力显著增强,尤其IL-1β的mRNA表达量增高近10倍。经荧光定量PCR方法检测病毒刺激后DC模式识别受体的表达情况结果显示,TLR4和TLR9表达量变化不明显,TLR7的表达受到抑制;但Rig-I的表达量显著增加。结果表明,PHEV在体外能有效的活化DC并促使其成熟为有效的抗原提呈细胞,具有潜在的激活T、B淋巴细胞的能力。

    2015年05期 v.35;No.221 692-697页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K]
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  • 猪圆环病毒2型标记毒株的构建与iDNA疫苗的初步研究

    王伟丞;梁海英;曾智勇;汤德元;刘钊;代振江;

    为实现携带分子标记的猪圆环病毒2型标记毒株的构建,对其进行感染性DNA(iDNA)疫苗的初步研究,即构建的感染性克隆质粒既能发挥DNA疫苗的作用,同时又能在动物机体内拯救出活病毒,发挥病毒活疫苗的作用,本研究以PCV2Cap蛋白末端具有赖氨酸延伸特征的GZ-RH1株为材料,构建该毒株的感染性克隆质粒pcDNA3.1(+)-PCV2,并在病毒基因组中引入1个SalⅠ酶切位点作为鉴别拯救病毒的分子标记。将该感染性克隆质粒转染PK-15传代细胞进行病毒拯救后,通过IPMA、PCR-RFLP以及全基因组测序等试验对拯救病毒进行检测和鉴定,并初步测定了拯救病毒在体外细胞培养的增殖能力。结果表明,利用构建的感染性克隆质粒拯救获得的PCV2标记毒株,经盲传10代后毒价可到105.3 TCID50/mL,分子标记能够稳定存在,该感染性克隆质粒可以应用到PCV2iDNA疫苗的初步研究中。昆明小鼠接毒试验结果表明,构建的感染性克隆质粒在小鼠体内也具有感染性,能够拯救出PCV2标记毒株,且可以诱导产生抗PCV2的抗体,与体外拯救的标记毒株免疫小鼠具有类似的体内生物学特性,表明PCV2iDNA新型疫苗构建策略是可行的。本研究为进一步研究PCV2iDNA疫苗奠定了基础。

    2015年05期 v.35;No.221 698-703页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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  • 四川部分地区猪流行性腹泻的分子流行病学调查

    阳酉萍;黄小波;曹三杰;文心田;梁恩涛;张丹;张小会;段素芬;朱书全;文翼平;伍锐;

    本研究对四川猪流行性腹泻病毒(PEDV)开展了分子流行病学调查。参照毒株CV777的M基因序列,设计1对特异性引物(预期扩增大小为392bp),建立了快速检测PEDV的RT-PCR技术,对四川9个地区规模化猪场的75份仔猪腹泻病料进行检测与分析。再根据S基因的变异区域设计1对引物(扩增大小为947bp),选择扩增了四川9个地区的代表样品的S基因序列,并进行了进化与变异分析。结果显示,建立了检测PEDV的M基因的RT-PCR技术,并确定了最佳反应条件和反应体系,用该方法检测了四川75份腹泻病料,检出64份PEDV阳性,PEDV阳性检出率为86.67%,结果显示PEDV在四川地区发病季节除冬春季外,近年夏季也呈高发趋势。四川9株PEDV的S基因的核苷酸同源性为95.9%~100%,氨基酸同源性为95.1%~100%,四川毒株与14个国内外参考毒株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为84.6%~99.5%和84.2%~99.5%;四川流行毒株的S基因(S蛋白)存在碱基(氨基酸)缺失和插入现象。结果表明,本研究从分子流行病学角度证实了四川部分地区PEDV的流行与变异情况,为指导该地区PEDV科学防控提供了依据。

    2015年05期 v.35;No.221 704-710页 [查看摘要][在线阅读][下载 475K]
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  • 貉源犬瘟热病毒CDV-ZC株分离鉴定、全基因测序与分析

    戴秀美;常维山;张永兵;王敏;王蕾;郭树源;

    应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。

    2015年05期 v.35;No.221 711-717页 [查看摘要][在线阅读][下载 437K]
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  • 1株重组的H5N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析

    申翰钦;吴波良;陈一珉;谢青梅;

    本研究对1株H5N2亚型禽流感病毒(CK/GD02/14)进行全基因测序及遗传进化分析,结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点含有多个连续的碱性氨基酸(321PQIEGRRRKR*GLF333),为高致病性禽流感病毒特征。遗传进化分析结果显示,CK/GD02/14与A/chicken/Jiangsu/1001/2013(H5N2)各基因片段都有较高的同源性(97.6%~98.9%)。HA基因位于H5N1亚型遗传进化树的7.2分支,NA基因属于H9N2亚型遗传进化树的BJ/1/94-like分支。其内部基因与1株H9N2亚型病毒的内部基因有较高的同源性,但其M基因属于类H5N1病毒分支,表明该H5N2亚型禽流感病毒为H9N2和H5N1亚型禽流感病毒的重组毒株。结果表明,CK/GD02/14与A/chicken/Jiangsu/1001/2013(H5N2)为同源毒株,可能由江苏传到广东地区。

    2015年05期 v.35;No.221 718-721+734页 [查看摘要][在线阅读][下载 342K]
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  • 产IMP酶4种病原细菌的检测及其耐药性

    冯娇;殷喆;邱业峰;杨慧盈;杨文慧;王洁;周冬生;高英杰;

    采用16SrRNA和种特异基因的聚合酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)鉴定菌株;用VITEK-AMS 60全自动微生物分析仪测定最小抑菌浓度(minimum inhibition concentration,MIC);PCR测序检测已知的超广谱β-内酰胺酶基因(extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)和碳青霉烯酶基因;改良型Carba NP法检测碳青霉烯酶类型。对来自4家医院的6株高水平耐碳青霉烯类抗生素临床分离菌株的检测和耐药性研究。结果显示,6株分别为阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、产酸克雷伯菌各1株,肺炎克雷伯菌3株,且均为blaIMP扩增阳性,并携带1个或多个blaTEM、blaCTX-M-1group、blaSHV、blaVIM、blaOXA-1基因。6株菌均产B型碳青霉烯酶,且对头孢菌素类和碳青霉烯类抗菌药物高水平耐药。结果表明,6株菌对头孢菌素类和碳青霉烯类抗菌药物多重耐药的主要决定因子是产B型碳青霉烯酶IMP,且和携带ESBLs基因也相关。

    2015年05期 v.35;No.221 722-726页 [查看摘要][在线阅读][下载 155K]
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  • 表达鼠源GLP-2重组嗜酸乳杆菌的构建

    白云;韩博;栗楠;严轩;谢姗姗;刘殿峰;姜云垒;

    嗜酸乳杆菌是一种常见的肠道益生菌。嗜酸乳杆菌及其代谢产物可以调节肠道菌群的比例,增强肠道屏障功能,调节相关免疫反应,从而维护肠道内环境稳态,在一定程度上达到了治疗IBD的作用。胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)作为一种肠道营养因子,可促进肠粘膜增殖、抑制其凋亡,从而改善肠屏障功能,促进肠吸收功能恢复。本研究将GLP-2与嗜酸乳杆菌信号肽重组连接pMG36e质粒上,通过电转化转入感受态嗜酸乳杆菌中,构成重组嗜酸乳杆菌。结果表明,重组pMG36e质粒中扩增GLP-2基因与基因库公布的一致,通过Western blot检测到重组嗜酸乳杆菌上清液中有GLP-2蛋白表达。重组嗜酸乳杆菌的成功构建,使GLP-2与嗜酸乳杆菌对IBD发挥了双重疗效,为后续研究重组益生菌应用于临床治疗IBD奠定了基础。

    2015年05期 v.35;No.221 727-730页 [查看摘要][在线阅读][下载 142K]
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人兽共患病

  • 粗糙型布鲁菌M111菌壳的安全性和免疫原性

    张瑞安;刘军;孙洋;祝令伟;纪雪;周伟;郭学军;冯书章;

    以粗糙型布鲁菌M111株和重组裂解质粒制备出布鲁菌菌壳,利用小鼠模型对布鲁菌菌壳、布鲁菌M111活菌和福尔马林灭活菌的安全性和免疫原性进行比较研究。结果显示,与布鲁菌弱毒菌株M111比较而言,布鲁菌菌壳具有更好的安全性,免疫小鼠后能产生与弱毒菌株相似的血清抗体水平、脾CD3+和CD4+T淋巴细胞反应,甚至产生更高水平的IFN-γ。这些结果表明,布鲁菌菌壳具有与弱毒菌株相似的体液免疫和细胞免疫能力,将来可能作为预防布鲁菌感染的新型候选疫苗,但布鲁菌菌壳疫苗的有效性和特异性免疫机制还有待深入研究。

    2015年05期 v.35;No.221 731-734页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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基础兽医学

  • NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响

    刘红梅;黄炳旭;吕庆康;曾亚龙;王玮;柳巨雄;

    为了研究神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)对肠道上皮细胞完整性及通透性的影响,本试验采取不同浓度和不同处理时间的TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡为模型,研究了不同浓度NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响。选择处于对数生长期的Caco-2细胞,将试验组分为对照组、TNF-α组、NPY组、NPY+TNF-α组。采用MTT法检测NPY、TNF-α的细胞毒作用,利用流式细胞技术检测NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响。结果显示,10nmol/L的NPY对Caco-2无细胞毒作用;与NT组相比,30μg/L TNF-α刺激24h后显著引起Caco-2的凋亡;与TNF-α组相比,NPY显著抑制TNF-α诱导的Caco-2的凋亡。结果表明,10nmol/L的NPY对TNF-α诱导的Caco-2凋亡有保护作用。

    2015年05期 v.35;No.221 735-738页 [查看摘要][在线阅读][下载 283K]
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  • 鹅多个组织GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化

    李青竹;李润航;郑艳秋;娄玉杰;

    为研究鹅不同组织生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因发育性变化,本试验选择0日龄杂交鹅(吉林白鹅×农安籽鹅)78只作为试验动物,应用荧光定量技术分别对0、14、28、42、56日龄鹅心脏、肝脏、腺胃、腿肌GHR以及IGF-I mRNA进行测定。结果显示,0~56日龄期间杂交鹅GHR以及IGF-I mRNA在肝脏中表达量最高,其次为腿肌和腺胃,心脏GHR以及IGF-I mRNA表达量最低。鹅心脏、肝脏、腺胃和腿肌GHR mRNA表达量随日龄增加有极显著的发育性变化(P<0.01)。鹅心脏、肝脏、腿肌GHR mRNA表达量均于14日龄达到峰值,鹅腺胃GHR mRNA表达量于28日龄达到峰值。鹅肝脏、腺胃和腿肌IGF-I mRNA表达随日龄增加有极显著的发育性变化(P<0.01)。鹅心脏、腿肌IGF-I mRNA表达量于28日龄出现峰值,但肝脏、腺胃IGF-I mRNA表达量在0~56日龄不断升高。总体上看,公鹅与母鹅各组织GHR以及IGF-I mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。结果表明,日龄对于GHR和IGF-I基因在鹅各组织表达具有重要影响;性别对鹅组织GHR和IGF-I基因表达影响较小;鹅各组织GHR和IGF-I基因发育性变化具有组织特异性,各基因表达量在鹅不同组织出现峰值的时间并不一致。

    2015年05期 v.35;No.221 739-744页 [查看摘要][在线阅读][下载 247K]
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  • 鸡chUSP1 His594Ala突变使其去泛素化酶活性丧失

    赵程程;邓晨;于佩峰;王梦云;吴山力;吕岩;艾永兴;

    泛素特异性蛋白酶1(ubiquitin-specific proteases 1,USP1)是一种去泛素化酶,它在DNA损伤修复应答过程中发挥重要功能。已证明USP1与UAF1(USP1-associated factor 1)形成复合物后,其酶活性会得到极大的提升。chUSP1为在鸡细胞中发现的一种去泛素化酶,生物信息学分析发现它与人USP1同源性高达72%。本研究以本室扩增的chUSP1基因和chUAF1基因,使用bac-to-bac系统表达了chUSP1GG680,681AA单体及chUSP1GG680,681AA/chUAF1复合体。并根据人USP1预测将chUSP1一个可能的活性中心位点第594位组氨酸突变为丙氨酸,并纯化了此突变型的单体和复合体。应用底物Di-Ub/Ub2 WT Chains(K63-linked)及Di-Ub/Ub2 WT Chains(K48-linked)对chUSP1GG680,681AA和突变型chUSP1HGG594,680,681AA进行酶活性分析。试验结果表明chUSP1具有切割Ub链底物的酶活性,且第594位组氨酸残基突变影响chUSP1的去泛素化酶活性。而chUAF1可以与chUSP1相互作用形成复合体,并且明显提高chUSP1酶活性。

    2015年05期 v.35;No.221 745-750页 [查看摘要][在线阅读][下载 361K]
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  • LH受体在山羊结状神经节中的分布

    董伟;苗耀天;徐永平;黄双;孙曼;孙萍;

    为了检测山羊迷走神经结状神经节中是否有促黄体生成素受体(LHR)的存在,探讨促黄体生成素(LH)是否能够影响结状神经节内脏感觉神经元的功能活动。本试验采用免疫组织化学SP法观察LHR在结状神经节中的分布特征,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析LHR在结状神经节中阳性神经元和阳性非神经元上的表达量差异。结果显示,LHR主要分布在神经元细胞膜和细胞质中,呈棕黄色为强阳性。在带核的神经元中,神经元细胞核呈圆形空泡状,LHR为阴性反应。神经元群间的神经纤维呈淡黄色,LHR为弱阳性。LHR在神经元胞体上的相对表达量极显著高于节内其他阳性非神经元结构(P<0.01)。结果表明,山羊结状神经节内脏感觉神经元是LH作用的主要靶细胞,提示LH有可能通过作用于结状神经节内脏感觉神经元胞体上的LHR参与调节内脏器官感觉信息的传导。

    2015年05期 v.35;No.221 751-754+766页 [查看摘要][在线阅读][下载 286K]
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  • 小鼠脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞的诱导分化研究

    赵天闯;安星兰;刘阳;唐博;张学明;李子义;

    为了通过特定转录因子将小鼠脂肪间充质干细胞(mADSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。本研究分别构建Pdx1(胰十二指肠同源盒基因1)、MafA(V-maf肌肉腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A)、NeuroD1(神经分化因子1)3种基因的慢病毒过表达载体,使用293T细胞对3种因子进行慢病毒包装,将3种慢病毒过表达载体以单因子侵染、双因子侵染、三因子联合侵染的方式对mADSCs进行定向分化诱导,于诱导分化第15天对不同方式诱导的IPCs进行检测鉴定,并对不同方式诱导组的IPCs进行高糖刺激,刺激后30~120min检测培养基中含糖量的变化。结果显示,构建的慢病毒过表达载体pHBLV-CMV-IRES-ZsGreen-Pdx1、pHBLV-CMV-PGK-RFPMafA、pHBLV-CMV-PGK-RFP-NeuroD1所含目的片段基因序列与小鼠全基因编码序列完全一致,三种基因慢病毒过表达载体构建成功;诱导分化第15天,三因子联合诱导组所形成的IPCs克隆双硫腙(DTZ)染色呈阳性,并可表达胰岛素生物合成及分泌相关基因;在高糖刺激条件下,三因子联合诱导组糖分解速度、分解量远优于单因子或双因子诱导组。结果表明,Pdx1、MafA、NeuroD1 3种因子联合作用,可以将小鼠脂肪间充质干细胞定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,并可在高糖刺激下,有效发挥降糖作用。

    2015年05期 v.35;No.221 755-764页 [查看摘要][在线阅读][下载 973K]
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  • 阿莫西林在鸡组织中的残留消除规律

    孙礼瑞;谢星;张金玲;谢恺舟;张小杰;王剑锋;刘建宇;崔璐璐;张跟喜;戴国俊;王金玉;

    本试验旨在研究阿莫西林在鸡组织中残留消除规律。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化后,在激发波长358nm、发射波长440nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。该方法测定鸡组织中阿莫西林的检测限为5μg/kg、定量限为13μg/kg。阿莫西林在鸡组织样品中平均回收率为73.64%~88.82%,相对标准差为6.21%~9.63%。各试验组京海黄鸡分别按体质量以30、60mg/kg剂量内服阿莫西林,每天1次,连续给药7d,休药4h后(零休药期)各组织中阿莫西林残留量最高,休药第3天各组织中阿莫西林残留量均迅速降低;休药后第5天阿莫西林残留量低于最高残留限量(50μg/kg);休药第9天所有组织中阿莫西林残留量均低于检测限;休药后相同时间点鸡肌肉中药物残留量最低,肝脏中的药物残留量最高;阿莫西林在鸡肾脏中残留比鸡肌肉、肝脏消除缓慢且消除时间长;阿莫西林在鸡组织中的残留量与给药剂量呈正相关。根据WT1.4软件计算所得,建议黄羽肉鸡按体质量以30、60mg/kg剂量给药,每天1次,连续7d后,其休药期(WT)分别为3、4d。

    2015年05期 v.35;No.221 767-773页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K]
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  • 过氧化氢诱导BRL细胞凋亡损伤模型的建立

    王慧;计红;薛琳琳;耿仁德;郭静茹;王建发;孔凡志;杨焕民;郭丽;

    动物冷应激过程中肝脏因发生氧化应激而受损。本试验采用过氧化氢(H2O2)诱导buffalo大鼠肝细胞(BRL)凋亡,建立体外氧化应激的凋亡损伤模型,为深入研究冷应激对肝脏损伤的机理奠定基础。试验采用不同浓度H2O2刺激BRL细胞2h,运用WST-1法检测细胞生长活力、Annexin-V/FITC-PI双染技术检测细胞凋亡率及Western blot方法检测Caspase-3的表达量来筛选BRL细胞凋亡的H2O2作用浓度。结果显示,与空白对照组相比,150μmol/L H2O2作用后,细胞增殖率明显下降,Caspase-3的蛋白表达量增加,流式细胞仪检测的凋亡率升高,同时细胞坏死较其他H2O2处理组低。结果表明,150μmol/L H2O2作用BRL细胞2h可模拟氧化应激造成的凋亡损伤。

    2015年05期 v.35;No.221 774-778+788页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K]
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  • 陕西富硒与非富硒地区山羊组织硒含量和GPX-7基因表达的比较

    张磊;周占琴;付明哲;李广;

    为了探讨陕西紫阳县(富硒地区)山羊各组织中微量元素硒的含量和谷胱甘肽过氧化酶7(Glutathione Peroxidase 7,GPX-7)基因的表达情况,以及组织中的硒沉积量对GPX-7基因表达的影响。利用原子荧光光谱法对年龄相仿、体质量相近的紫阳县双安镇(n=7)和广成镇(n=7)和宝鸡市陈仓区白山羊体内硒含量进行了测定;同时运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)相对定量技术测定GPX-7基因mRNA的相对表达量。紫阳双安镇山羊硒含量显著高于紫阳广成镇(P<0.05),同时紫阳县均显著高于宝鸡陈仓区(P<0.05);但是紫阳双安镇与紫阳广成镇山羊肺脏中硒含量差异不显著(P>0.05)。GPX-7基因在各组织器官中广泛表达,但是不同地区的山羊表现出不同的组织差异性。紫阳双安镇山羊心脏、脾脏、肾周脂肪和背最长肌组织中mRNA水平与紫阳广成镇差异不显著(P>0.05),但是紫阳地区均显著高于宝鸡陈仓区(P<0.05)。在肺脏、肾脏、股二头肌和淋巴组织中,来自不同地区的山羊GPX-7基因mRNA的表达量地差异均两两显著(P<0.05),其中紫阳广成镇山羊肺脏的表达量显著高于其他两个地区(P<0.05)。由此可见,山羊各组织器官中微量元素硒的沉积量和GPX-7基因mRNA的表达量表现出较为一致的地域趋势,即紫阳双安镇>紫阳广成镇>宝鸡陈仓区,这表明微量元素硒上调GPX-7基因的表达,但是具有组织差异性。

    2015年05期 v.35;No.221 779-784页 [查看摘要][在线阅读][下载 172K]
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  • 地塞米松促进伪狂犬病毒SA738株诱导牛肾细胞凋亡

    魏凤;郭广君;吕素芳;王金良;管宇;张文通;肖跃强;沈志强;

    为研究地塞米松能否促进PRVSA738株诱导牛肾细胞的凋亡,本试验以牛肾细胞为模型,PRVSA738做为诱导剂,并添加地塞米松,病毒增殖后,采用荧光染色、DNA梯谱的方法,观察细胞发生凋亡时的形态学和生化特征,以此确定地塞米松能否促进伪狂犬病毒SA738株诱导牛肾细胞的凋亡。结果显示,PRVSA738能诱导牛肾细胞发生凋亡,同时100μmol/L的地塞米松能促进PRVSA738株诱导牛肾细胞的凋亡。为研究PRV潜伏感染的机理提供参考。

    2015年05期 v.35;No.221 785-788页 [查看摘要][在线阅读][下载 263K]
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  • 体外法研究生石膏对瘤胃发酵、甲烷生成及微生态的影响

    汪水平;

    通过体外产气法研究了生石膏对瘤胃发酵、甲烷生成及微生态的影响。按单因子试验设计,在底物中分别按其干物质的0(对照组)、1.25%(低水平组)、2.5%(高水平组)添加生石膏,每个组设4个重复,进行24h体外发酵培养。结果显示,随生石膏添加水平升高,乙酸与总挥发性脂肪酸浓度、乙酸与丙酸的浓度比、12和24h产气量、氢的生成量及甲烷菌数量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,而丙酸占总挥发性脂肪酸的比例与原虫数量极显著(P<0.01)升高;生石膏添加会显著(P<0.05)或显著(P<0.01)降低12和24h甲烷产量,而高水平添加会显著(P<0.05)降低丙酸浓度与乙酸占总挥发性脂肪酸的比例。结果表明,生石膏可通过减少氢的供应量和抑制甲烷菌生长而降低体外甲烷产量,同时会促进原虫增殖,致使2种添加水平的相对甲烷抑制潜势没有显著(P>0.05)差异。

    2015年05期 v.35;No.221 789-794+803页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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简报

  • 槲皮苷对金黄色葡萄球菌肾脓肿治疗作用的研究

    柳秉润;王大成;

    <正>金黄色葡萄球菌(金葡菌)是一种革兰阳性机会致病菌,可引起多种致死性感染[1]。目前耐药性金葡菌的出现及流行迫切需要新的抗感染策略和抗感染药物。与传统抗生素不同,抗毒力策略给予病原菌选择压力较小,并且有利于宿主免疫系统清除病原菌[2]。金葡菌Sortase A是一种参与表面蛋白锚定的转肽酶,对细菌粘附定殖起着决定性作用[3]。已有研究表明,与野生型菌株相比,Sortase A缺失

    2015年05期 v.35;No.221 765-766页 [查看摘要][在线阅读][下载 151K]
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临床兽医学

  • 复合抗菌肽“态康利保”对断奶仔猪红细胞免疫功能的影响

    田春雷;袁威;任志华;邓俊良;但启雄;金海涛;梁珍;高爽;李刚;李超;

    为研究复合抗菌肽"态康利保"对断奶仔猪红细胞免疫功能的影响,试验选用26日龄、体质量相近(8.28±0.23)kg的健康杜长大三元杂交仔猪90头随机分成5组。Ⅰ组(对照组)饲喂基础日粮;Ⅱ组在基础日粮中添加400mg/kg黄芪多糖,Ⅲ~Ⅴ组在基础日粮中分别添加250、500和1 000mg/kg的复合抗菌肽"态康利保"。分别于32、39、46和53日龄时每组随机选取6头仔猪前腔静脉采血,进行红细胞受体C3b花环试验、免疫复合物IC花环试验,观察复合抗菌肽"态康利保"对断奶仔猪红细胞免疫功能、红细胞数量的动态变化。结果表明,在基础日粮中添加黄芪多糖和"态康利保"均能明显提高断奶仔猪红细胞C3b受体花环率(P<0.01或P<0.05),降低红细胞免疫复合物花环率(P<0.01或P<0.05),"态康利保"提高红细胞免疫功能的作用更明显,且有剂量依赖效应。

    2015年05期 v.35;No.221 795-798页 [查看摘要][在线阅读][下载 111K]
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  • 9种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒体外增殖的抑制作用

    张为民;胡蓉;郭抗抗;宁蓬勃;张彦明;卿素珠;

    运用MTT法结合细胞病变方法测定黄芩苷、穿心莲内酯、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、苦参碱、氧化苦参碱和苦马豆素9种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在ST细胞上增殖的抑制作用,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)进一步检测黄芩苷对TGEV在ST细胞上增殖的抑制作用。结果显示,9种中药成分在体外对TGEV在ST细胞上的增殖均有一定的抑制作用,其中黄芩苷对TGEV的生物合成、吸附保护和直接灭活作用的抑制率分别为58.23%、88.12%和100.00%;Real-time PCR检测黄芩苷3种给药方式均能在转录水平显著降低TGEV mRNA的相对表达量,与病毒对照组相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,9种中药成分在体外对TGEV在ST细胞上的增殖均有一定的抑制作用,以黄芩苷作用最好。

    2015年05期 v.35;No.221 799-803页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 复合抗菌肽对断奶仔猪血清抗氧化功能的影响

    但启雄;袁威;李刚;胡洋;邓惠丹;任志华;田春雷;金海涛;邓又天;邓俊良;

    为了探讨复合抗菌肽对断奶仔猪血清抗氧化功能的影响,选取90头26日龄、体质量相近(8.24±0.67)kg的杜长大三元杂交断奶仔猪,随机分成5组。对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,Ⅱ组在基础日粮中添加黄芪多糖400mg/kg,Ⅲ~Ⅴ组在基础日粮中分别添加复合抗菌肽250、500、1 000mg/kg,分别检测第32、39、46和53日龄仔猪血清SOD、GSH-Px、T-AOC活力、抑制OH·能力和MDA含量。结果显示,各日龄点,Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组血清SOD活力显著高组组(P<0.01或0.05)(除Ⅱ组第32天),Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组血清MDA含量显著低于Ⅰ组(P<0.01或0.05)(除Ⅱ组第32天,Ⅳ组第39天),Ⅱ~Ⅴ组血清T-AOC和抑制OH·能力均显著高于Ⅰ组(P<0.01或0.05)。各试验指标随抗菌肽添加剂量的增加,效果更明显,以抗菌肽1 000mg/kg添加剂量最佳,优于黄芪多糖400mg/kg添加量(P<0.01或0.05)。由此表明,复合抗菌肽能够有效提高断奶仔猪血清抗氧化功能,增强仔猪抗断奶应激能力。

    2015年05期 v.35;No.221 804-808页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K]
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  • 催乳素对奶牛脂肪细胞脂代谢关键基因的作用

    殷立恒;杜希良;雷林;邓清华;张玉明;王婷婷;郭立辉;张仁和;李心慰;刘国文;

    催乳素(prolactin,PRL)是启动和维持泌乳的重要激素,在泌乳期间能调节机体将营养物质和能量优先流向乳腺,用于乳脂和乳蛋白的合成。本试验采用体外分离培养奶牛前脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞,加入PRL探讨其对脂肪细胞脂代谢相关基因的作用。结果显示,奶牛白色脂肪细胞存在催乳素受体(prolactin receptor,PRLR),且在PRL质量浓度为75μg/L,作用时间为9h时,PRLR表达量达到最高,此时调节脂合成的核转录因子SREBPE-1c及下游控制脂合成的基因FAS和LPL均显著降低,75μg/L组与对照组相比差异极显著(P<0.01);控制脂分解的基因HSL显著升高,75μg/L组与对照组相比差异显著(P<0.05);细胞培养上清液中的甘油含量显著升高,75μg/L组与对照组相比差异显著(P<0.05)。结果表明,PRL能直接作用于奶牛白色脂肪细胞,降低脂合成作用并促进脂分解作用。

    2015年05期 v.35;No.221 809-814页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 3例犬尿结石化学成分分析

    任志华;吴奇扬;邓又天;沈留红;马晓平;邓俊良;左之才;王娅;彭广能;钟志军;余树民;

    用化学分析法和X射线衍射仪分析收集的3份犬尿结石样品成分。结果表明样品1膀胱和尿道结石成分为一水草酸钙;样品2尿道结石和样品3膀胱结石成分均为六水磷酸铵镁。

    2015年05期 v.35;No.221 815-818页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 犬尿石症的病因调查及结构成分的分析

    王亨;张胜文;张信军;孟霞;朱家桥;刘宗平;李建基;

    本试验旨在应用尿沉渣镜检、扫描电镜观察、X-射线能谱分析和傅立叶变换红外光谱分析等方法研究结石成分及特点,并结合饲养管理进行致石原因分析。本试验选取39例经手术获得的尿结石样本,其中1例为肾结石,33例为膀胱结石,2例为尿道结石,3例为膀胱与尿道结石。检查显示,临床采集的39例尿石样品:草酸钙结石4例(约占10.3%),尿酸盐结石9例(约占23.1%),磷酸铵镁与磷酸钙混合结石26例(约占66.6%)。并对3种结石的形态学、能谱及红外光谱特点进行观察,分析发病与其生活饮食的关系。为临床犬结石的诊断、治疗和预防提供理论依据。

    2015年05期 v.35;No.221 819-823页 [查看摘要][在线阅读][下载 362K]
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  • 仔猪腹泻的大肠杆菌生物膜的筛选和致病力观察

    喻华英;陈绪松;贾桂珍;陈英;

    采用96孔微量板法,对临床分离鉴定的24株大肠杆菌进行生物膜筛选,得到11株生物膜阳性大肠杆菌,并绘制出4株生物膜强阳性菌株的生长曲线。同时对小鼠进行攻毒试验,结果表明,生物膜阳性菌株的致病力强于生物膜阴性菌株,这为临床预防仔猪腹泻病提供了理论依据。

    2015年05期 v.35;No.221 824-827页 [查看摘要][在线阅读][下载 186K]
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动物科学

  • 肌间脂肪沉积能力相关基因在前脂肪细胞分化前后的差异表达

    周乾;周佰刚;岳媛;李青莹;任书强;吴心慧;徐嘉君;徐芳芳;姜昊;张嘉保;陈承祯;

    研究表明,HBA、HBB、MB、HSPB1、MSRA、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1等基因在具有不同脂肪沉积程度的牛肉中存在差异表达,并对肌肉中脂肪的沉积情况具有潜在的影响。本研究以牛前体脂肪细胞为研究对象,诱导其分化为成熟脂肪细胞,通过实时荧光定量PCR检测上述基因在前体脂肪细胞分化前后的表达情况,通过油红O检测脂类沉积情况。结果表明,PSMA1、HBB、COX6B1、TCAP、MB、HBA、TXN、GSTM1、MSRA、HSPB1在前体脂肪细胞分化后表达量上升,而VDAC1表达量下降,前体脂肪细胞分化后脂质沉积明显加大,说明这些基因可能在调节前体脂肪细胞分化、脂质沉积中具有潜在作用。

    2015年05期 v.35;No.221 828-831页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K]
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  • NIH稀毛小鼠繁殖性能及部分器官组织学研究

    朱拓;蔡岩;杨淑萍;陈健;袁宝;高巍;胡进平;任文陟;

    将5对2月龄NIH稀毛小鼠合笼,同时将5对2月龄正常小鼠合笼。记录窝产仔数与仔鼠离乳期存活率。使用统计学方法对1月龄与2月龄NIH稀毛小鼠与正常小鼠(雄性5只,雌性5只)的心、肝、脾、肺、肾的脏器系数进行分析。取1月龄的NIH稀毛小鼠与正常小鼠心、肝、肺、肾、背部皮肤石蜡切片后光镜观察,取1周龄与2周龄的NIH稀毛小鼠与正常小鼠的背部皮肤进行电镜扫描观察。研究发现NIH稀毛小鼠幼鼠的窝产仔数与仔鼠离乳期存活率均低于NIH正常小鼠,部分脏器系数差异显著(P<0.05),心、肝、肺、肾组织学并未发现明显差异。NIH稀毛小鼠的背部皮肤表现为皮下组织及真皮层内毛囊数量较少且毛囊出现角化现象,未见观察到明显的毛干结构。

    2015年05期 v.35;No.221 832-837页 [查看摘要][在线阅读][下载 700K]
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  • MC3R基因对京海黄鸡屠体性状的遗传效应分析

    薛倩;王金玉;张跟喜;张涛;王亚男;王文浩;李婷婷;王永娟;

    本研究以MC3R基因为鸡屠体性状的候选基因,旨在探讨其对京海黄鸡屠体性状的影响。运用PCR-SSCP方法结合测序技术,检测了MC3R基因在京海黄鸡群体中的多态性,并采用一般线性模型(GLM)分析基因型与屠体性状的遗传效应。结果显示,MC3R基因CDS序列检测区内,引物MR2、MR3和MR8扩增的片段具有多态性,其中引物MR2和MR3扩增片段均存在2个SNP位点,分别形成AA、AB、AC 3种基因型和EE、EF、FF、EH 4种基因型,引物MR8扩增片段只存在1个SNP位点,形成了KK、KL和LL 3种基因型;检测到的5个SNPs位点分别为CDS区C160A、G192T、C273T、G310A、G762A突变。关联分析结果显示,MR2位点对京海黄鸡各屠体性状(除腹脂质量)均有极显著影响(P<0.01);MR3位点各基因型(排除个体数少于3的基因型)屠体性状间差异均不显著(P<0.05),推断MR3位点对京海黄鸡屠体性状影响不显著(P>0.05);MR8位点对京海黄鸡屠体质量、胸肌质量、腿肌质量、全净膛质量、半净膛质量有极显著影响(P<0.01),对活体质量和腹脂质量有显著影响(P<0.05)。对MR2和MR8 2个位点的效应进行联合分析,结果显示,2个位点组合基因型对所有屠体性状均有显著或极显著影响(P<0.05或P<0.01),其中AB/KK基因型组合为有利基因型组合,AA/LL基因型组合为不利基因型组合。因此,本研究可为京海黄鸡分子标记辅助育种提供依据,有利于加快对京海黄鸡屠体性状选择的育种进程,同时通过本研究可推测MC3R基因对家禽的屠体性状具有很大的遗传效应,为家禽育种工作提供理论依据。

    2015年05期 v.35;No.221 838-844页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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