预防兽医学

  • 牛肠道病毒VP2基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

    朱彤;侯佩莉;刘晓;王洪梅;何洪彬;李杰;

    应用RT-PCR方法扩增牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)VP2基因,构建重组质粒pET32a(+)-VP2。转化大肠杆菌菌株BL21,IPTG诱导其表达VP2融合蛋白,Western-blot检测目的蛋白。将纯化的重组蛋白(pET32a(+)-VP2)免疫新西兰大白兔,制备VP2多克隆抗体,iELISA方法检测抗体效价,同时利用血清中和试验评估其诱导中和抗体的能力。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白的相对分子质量为50 000,与预期值大小相符;iELISA检测其抗体效价为1∶25 600;血清中和试验表明,原核表达的VP2蛋白诱导产生的中和抗体效价为1∶107.4。结果表明,成功克隆和表达了具有免疫原性的VP2蛋白,其可诱导产生较高效价的多克隆抗体,为BEV血清学诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。

    2015年07期 v.35;No.223 1037-1041页 [查看摘要][在线阅读][下载 474K]
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  • 猪细小病毒病弱毒疫苗免疫效力评价及临床免疫试验

    张婉华;朱永军;曹伟明;徐平;张春玲;何锡忠;彭丽英;

    为制定猪细小病毒病弱毒疫苗效力检验的标准,用3批猪细小病毒病弱毒疫苗进行接种猪与接种豚鼠的平行试验;同时进行临床免疫试验。3批疫苗接种豚鼠和猪后定期进行PPVHI抗体检测;猪于免疫后攻毒,并进行病毒分离。免疫母猪在怀孕早期进行强毒攻击,40d扑杀进行病毒分离。用3批疫苗免疫后备母猪统计产仔成绩。结果显示,豚鼠接种后21d、猪接种后7d全部产生抗体反应。免疫攻毒的猪均未从血浆和内脏中分离到病毒,而从对照猪分离到病毒;怀孕母猪强毒攻击后扑杀,胎儿病毒分离均为阴性,而对照猪胎儿病毒分离为阳性;统计数据表明免疫猪的产仔成绩比未免疫猪高,平均每窝多产活仔1.85头,少产死胎木乃伊胎0.65头。结果表明,当免疫豚鼠PPV HI≥64时,免疫猪能抵抗PPV强毒攻击,两者呈正相关;免疫母猪的攻毒试验表明免疫母猪能抵抗PPV经胎盘感染;临床免疫试验证明疫苗具有良好的免疫原性和安全性。

    2015年07期 v.35;No.223 1042-1045+1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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  • 靶向H、N基因siRNA对犬瘟热病毒在vero细胞中复制的抑制作用

    袁龙;艾纯旭;马云青;陈健;袁宝;高巍;胡进平;任文陟;

    以犬瘟热病毒(CDV)的核衣壳蛋白基因(N基因)和血凝素蛋白基因(H基因)作为靶基因,各设计并体外合成小干扰RNA,分别为N1、N2、N3和H1、H2、H3。将6对siRNA分别转染非洲绿猴肾细胞(Vero)并在转染后接种CDV,48h后通过细胞病变(CPE)、间接免疫荧光、TCID50、荧光定量PCR等方法对2组6个siRNA抑制CDV在Vero细胞中增殖的效果进行比较研究。结果显示,转染细胞感染CDV 48h后,6个siRNAs干扰组细胞出现的绿色荧光明显少于对照组,病毒感染滴度分别是对照组的1/293、1/11、1/29、1/83、1/302和1/90,6个干扰组的CDV基因拷贝数分别是对照组的12.96%、57.75%、23.47%、31.82%、12.82%、15.58%。结果表明,6对siRNAs均对CDV在Vero细胞中的复制具有不同程度的抑制作用,且以H2组抑制效率最高。

    2015年07期 v.35;No.223 1046-1050页 [查看摘要][在线阅读][下载 615K]
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  • 猫杯状病毒不同分离株致病性的比较

    王一鸣;应瑛;刘秋艳;陈小庆;马剑钢;赵艳丽;胡桂学;

    为确定猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)SH、JL-1、JL-2分离株毒力强弱,将其分别人工接种6~11周龄健康非免疫家猫,分成接种组和对照组。接种前后分别测定各组猫体温、体质量,观察发病情况及临床症状,按照欧洲药典对症状进行计分。于感染后14d麻醉处死,制备病料组织切片,观察组织器官的病理变化。结果显示,家猫感染FCV后总发病率为100%,死亡率为66.7%;SH、JL-1、JL-2组临床症状平均得分分别为8、4、9,对照组得分为1。病理解剖观察发现,猫感染FCV后,以鼻、眼分泌物增加,口腔溃疡为特征,消化道病变较轻微,肺部出现不同程度的变性、出血,呈明显病理性"肉样变";病理组织学观察发现,肺脏有数量不等的肺泡上皮细胞和巨噬细胞脱落,伴随少量纤维蛋白渗出和弥漫性肺泡损伤。结果表明,FCV SH、JL-1、JL-2分离株均有一定的致病性,其中以JL-2株的毒力最强。

    2015年07期 v.35;No.223 1051-1055页 [查看摘要][在线阅读][下载 1947K]
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  • 鉴别新城疫强、弱毒一步RT-PCR方法的建立及应用

    明文龙;尹仁福;谢光耀;薛聪;王珂;袁乾亮;丁壮;

    设计2对引物分别用于新城疫强、弱毒的检测。使用强毒引物F1、R1可从NDV强毒株中特异性扩增出349bp的目的片段,使用弱毒引物F2、R2可从NDV弱毒株中特异性扩增出255bp目的片段,该方法对H9亚型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)的检测结果均为阴性。灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强、弱毒株的最小检出量分别为1pg和10pg。利用该方法对7份临床样品进行检测,结果与测序结果一致,说明该方法可用于新城疫强、弱毒的快速鉴别诊断。

    2015年07期 v.35;No.223 1056-1059页 [查看摘要][在线阅读][下载 779K]
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  • 检测2种基因型鸭圆环病毒双重PCR方法的建立与应用

    李志国;王鑫;张瑞华;陈君豪;夏琳琳;林少莉;谢之景;姜世金;

    为了研究2种基因型鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的混合感染情况,根据鸭圆环Cap蛋白基因序列设计了4条特异性引物,建立了可以同时检测2种基因型DuCV的双重PCR检测方法。结果显示,该方法特异性强,灵敏度高,最低可检测到1拷贝的DuCV核酸。使用建立的双重PCR方法对收集的山东省6个鸭群150只病死雏鸭的组织DNA进行检测,结果显示有50.0%(3/6)的鸭群检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,33.33%(2/6)的鸭群检出DuCV-2的单独感染。19只雏鸭被检出感染DuCV,其中2.67%(4/150)的雏鸭检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,10.0%(15/150)的雏鸭只感染DuCV-1或DuCV-2。结果表明,山东省鸭群中存在较为严重的DuCV-1和DuCV-2混合感染的现象。

    2015年07期 v.35;No.223 1060-1063+1068页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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  • 番鸭小鹅瘟病毒PT分离株全长DNA克隆的构建

    王劭;程晓霞;陈少莺;林锋强;陈仕龙;王锦祥;崔国杰;

    为构建番鸭小鹅瘟病毒感染性克隆,进行水禽细小病毒基因组结构及功能研究,根据NCBI发表的GPV B株、MDPV FM株与MDGPV PT株核苷酸序列设计并合成了MDGPV特异性引物,进而应用PCR技术分4段扩增并克隆了覆盖MDGPV全长基因组的4个片段。经过拼接与测序,将MDGPV全长DNA定向克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了MDGPV PT株全长基因组DNA克隆pSK-PT1234。与MDGPV亲本PT株及NCBI登录的其他水禽细小病毒代表株序列比对发现,该克隆在NS与VP编码区间隔处存在人为引入Bsp1407Ⅰ酶切位点。番鸭小鹅瘟病毒PT株全长DNA克隆成功构建,为下一步病毒的拯救奠定坚实的基础。

    2015年07期 v.35;No.223 1064-1068页 [查看摘要][在线阅读][下载 662K]
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  • 金黄色葡萄球菌ClfA基因缺失株的生物学特性

    刘娟;孙志华;张华雷;许长萌;韩玉霞;李明奇;张辉;

    采用检测金黄色葡萄球菌Clf A缺失株在固、液体培养基中生长规律发现Clf A缺失株的生长繁殖力弱于强毒株;药敏试验结果表明Clf A缺失株和强毒株在对苯唑西林和新霉素的敏感性上有变化,缺失株对苯唑西林和新霉素更为敏感;通过小鼠腹腔、后腿注射细菌,观察小鼠生理状态变化,表明后腿注射缺失株的小鼠行走正常,触摸有肿胀结块,剖后肌肉有出血点,注射强毒株的小鼠有拖地行走现象,肌肉细胞发生溶解消失,注射Clf A缺失株对小鼠毒力弱于强毒株;建立细菌感染乳腺模型并制作组织切片观察组织病变,结果显示乳腺注射Clf A缺失株的母鼠乳腺有化脓灶,有的中性粒细胞坏死崩解,注射野毒株的小鼠乳腺与周围组织发生粘连,乳腺间质增宽,血管扩张充血,部分乳腺泡发生了溶解脱落;抗体水平检测中,Clf A缺失株攻毒后血清中IgG含量低于强毒株和对照组。结果表明,Clf A基因在细菌生长和致病中起了重要作用,金黄色葡萄球菌Clf A基因缺失株在生长繁殖力和致病力上比强毒株446株明显减弱。

    2015年07期 v.35;No.223 1069-1073+1078页 [查看摘要][在线阅读][下载 845K]
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  • 京海黄鸡杂交配套系亲本对柔嫩艾美耳球虫的敏感性

    林雨鑫;张菁菁;戴国俊;孙明明;张跟喜;王金玉;俞亚波;王永娟;

    为了有效评价京海黄鸡杂交配套系亲本BB、FF、WW对柔嫩艾美耳球虫的敏感性,本试验采用存活率、体增重、卵囊脱落数、盲肠记分、抗球虫指数(ACI)及一氧化氮(NO)、过氧化氢酶(CAT)、γ干扰素(IFN-γ)等10项血浆指标对其进行综合评价。结果显示,WW感染组ACI值最高为143.1,BB感染组ACI值为142.6,两者均为抗球虫低效,FF感染组ACI值最低为119.3,为抗球虫无效。ACI值与CAT、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素17(IL-17)、IFN-γ4个免疫指标相关显著(P<0.05)。在BB、FF、WW 3个感染组中,BB感染组NO、白介素12(IL-2)、IL-17、SOD含量显著高于FF感染组(P<0.05),BB、WW感染组差异不显著。结果表明,京海黄鸡杂交配套亲本BB鸡对柔嫩艾美耳球虫抗性显著高于FF鸡,略高于WW鸡。

    2015年07期 v.35;No.223 1074-1078页 [查看摘要][在线阅读][下载 140K]
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  • E.tenella河北株EtMIC-2基因克隆及生物信息分析

    丁咚;刘铮铸;张艳英;张香斋;李蕴玉;李佩国;张文香;贾青辉;

    利用RT-PCR技术扩增出柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2基因,将该基因克隆入pMD19-T载体,进行测序、序列分析与蛋白结构预测。测序显示该基因全长为1 029bp,含有1个1 029bp开放阅读框(ORF),编码342个氨基酸。该基因与E.tenella杂交株(ZJ)、北京株(BJ)、广东株(GD)、豪顿株(HD)、GenBank上发表的EtMIC-2基因以及布氏艾美耳球虫的MIC-2基因核苷酸序列同源性分别为99.1%、99.7%、99.6%、99.6%、99.8%和40.6%;与其基因编码的氨基酸序列同源性分别为97.7%、99.1%、98.8%、99.1%、99.4%和38.5%。蛋白结构预测显示该蛋白相对分子质量为35 000,理论等电点PI为4.47,包括4 893个原子,分子式C1500H2429N431-O528-S5,丝氨酸(Ser)在20种氨基酸中所占的比例最高,达12.0%,稳定系数为42.19,脂肪系数为77.05;信号肽的位置为前22个氨基酸;空间结构具有17个α螺旋,19个β折叠,15个转角,24处无规则卷曲;只有1个较强疏水位点(大约在第8~11氨基酸处),没有跨膜区域。

    2015年07期 v.35;No.223 1079-1083+1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 1680K]
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人兽共患病

  • 我国蝙蝠狂犬病病毒IRKV-THChina12株适应细胞培养后的分子生物学特性

    王玉莹;刘晔;袁颖烁;刘国强;扈荣良;张乐萃;

    通过对IRKV-THChina12适应细胞培养前后全基因组序列分析比对及与对不同种属狂犬病病毒氨基酸的比对,鉴定我国狂犬病病毒IRKV-THChina12株适应细胞培养后的分子生物学特性。结果显示,适应细胞培养后共发生11个核苷酸突变点和5个氨基酸突变点,其中1个氨基酸变异发生在P蛋白相互作用的LC8区域,2个氨基酸突变发生在M蛋白编码区,1个氨基酸突变发生在G(333位精氨酸未改变)蛋白编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变。结果表明,可能多个结构蛋白同时决定了病毒在Vero细胞的适应性,明确了本细胞适应毒株的分子生物学特性,为在细胞水平开展相关科学研究奠定了基础。

    2015年07期 v.35;No.223 1084-1087页 [查看摘要][在线阅读][下载 211K]
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  • 鼠伤寒沙门菌ATCC13311诱导耐药株的转录组测序和分析

    李琳;冯帅;汪莹;代兴杨;杨艳菲;曾明华;

    为研究鼠伤寒沙门菌ATCC13311和其诱导耐药株在转录组水平上的差异,使用环丙沙星为诱导药物,采用梯度浓度诱导法,诱导鼠伤寒沙门菌ATCC13311产生耐药性。构建ATCC13311和其诱导耐药株TW4的转录组测序文库并进行Illumina RNA-seq双向测序及数据分析。诱导获得ATCC13311对环丙沙星MIC值为4mg/L的耐药菌TW4。测序获得了4.46G有效数据,通过de novo拼接,获得了311条unigene,平均长度为15 587bp。拼接所得到的全序列长度为4 847 532bp,经预测4 998条基因中有4 902条得到GO注释。采用COG功能将注释基因划分为25类。初步确定TW4有3 434个基因表达量显著上升,32个基因表达量显著下降,7条代谢途径表达差异显著。利用转录组测序技术对鼠伤寒沙门菌ATCC13311和其诱导耐药株TW4进行研究,揭示了鼠伤寒沙门菌耐药性诱导前后差异表达的基因和显著变化的代谢途径,为深入研究细菌耐药分子机制及与细菌代谢途径之间的联系提供重要依据。

    2015年07期 v.35;No.223 1088-1094+1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 1280K]
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  • 肠炎沙门菌非编码小RNA isrC基因缺失株的致病性

    孟霞;孟宪臣;王金秋;王亨;朱春红;倪杰;王勇祥;朱国强;

    细菌非编码小RNA(sRNA)是一类可在转录后水平调控基因表达的调节子。IsrC是存在于鼠伤寒沙门菌毒力岛上的一种与毒力相关的sRNA,可调节巨噬细胞存活蛋白MsgA的表达。本研究克隆了肠炎沙门菌50336菌株isrC基因,通过λ-Red同源重组系统构建了isrC缺失突变株50336△isrC,并利用表达载体pBR322构建了回补株50336△isrC/pisrC。将野生株,isrC突变株和回补株分别接种1日龄清远麻鸡,比较三者之间的致病性差异。结果显示,肠炎沙门菌isrC基因与鼠伤寒沙门菌同源性为100%;成功构建了isrC缺失突变株和回补株;野生株,突变株和回补株对雏鸡的半数致死量(LD50)分别为2.81×108 CFU,2.02×108 CFU和3.10×108 CFU,相比野生株50336,突变株50336△isrC的LD50明显下降,表明isrC基因的缺失增强了肠炎沙门菌的毒力。

    2015年07期 v.35;No.223 1095-1098+1124页 [查看摘要][在线阅读][下载 547K]
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  • 镰形扇头蜱唾液腺、中肠和卵的菌群结构

    严芬;徐兴莉;杨亚;刘瑞昆;程天印;

    采用PCR-DGGE技术分析了镰形扇头蜱雌成蜱中肠内容物、唾液腺、虫卵的菌群结构。无菌条件下采集镰形扇头蜱雌成蜱中肠内容物、唾液腺、虫卵,提取细菌总DNA;以通用引物扩增细菌16SrDNA V3区;DGGE电泳,回收、克隆、测定DGGE优势条带。结果表明,饱血和半饱血雌蜱中肠菌群结构相同,中肠内容物、唾液腺和虫卵部分细菌相同;9条明显条带的序列分别与柯克斯体属(Coxiella sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、涅斯捷连科菌属(Nesterenkonia)、共生菌(Symbiotic bacteria)和未培养土壤细菌的16SrDNA V3区序列高度相似。分离到2株细菌,为模仿葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌。

    2015年07期 v.35;No.223 1099-1102页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K]
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  • 5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果

    张步彩;陶建平;蒋春茂;魏宁;王荣林;於敏;

    首先,测定感染小鼠最小致死量;然后,通过体内安全性试验确定各种药物治疗剂量;最后,评价5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果,即:各药物组每只小鼠经腹腔感染25个弓形虫速殖子后4h,小鼠逐只经胃灌服剂量为25g/kg的白牛胆、垂花香薷、黄皮叶或桦褐孔菌,或10.4mg/kg蟾酥、200mg/kg磺胺间甲氧嘧啶钠,每日2次,连用5d,同时设感染不用药组和空白对照组,以小鼠存活率与平均存活时间、腹腔液中虫体数、组织病变程度以及SOD活性等指标评价药物效果。结果显示,磺胺间甲氧嘧啶钠、蟾酥、桦褐孔菌、黄皮叶、白牛胆、垂花香薷组的小鼠存活率分别为66.67%、61.11%、50.00%、5.56%、0%和0%。蟾酥、桦褐孔菌与磺胺间甲氧嘧啶钠组的小鼠平均存活时间、腹腔液中虫体数和血清SOD活性相近,三者间无显著差异(P>0.05),均显著好于黄皮叶、白牛胆、垂花香薷和感染不用药组(P<0.05)。在磺胺间甲氧嘧啶钠组和蟾酥组在肺脏仅出现肺泡隔毛细血管轻微充血,在肝脏和脾脏无明显病变或病变不明显;桦褐孔菌组的肝脏也无明显病变;其他治疗组的脾脏均有不同程度坏死。结果表明,蟾酥与桦褐孔菌的抗弓形虫效果与磺胺间甲氧嘧啶钠相近,白牛胆、垂花香薷和黄皮叶的抗弓形虫效果不明显。

    2015年07期 v.35;No.223 1103-1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 4590K]
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  • 猪唾液素黏附素胞外区在PRRSV感染PAM细胞中的作用

    秦运杰;李娜娜;王冬梅;崔春晓;冯亚琼;杜东颖;张莹莹;杨青原;杨明凡;夏平安;张改平;

    采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础。本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域(第2~17结构域),并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达。通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原(SnE)免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体。无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150(第1结构域)、SnE和Sn150+SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200CID50PRRSV感染PAM,分别在感染24、48h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数。结果显示,PRRSV感染24h和48h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小(P>0.05);而鼠抗猪SnE抗体和Sn150+SnE混合抗体组的PRRSV mRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24h和48h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍(P<0.001)和0.74倍(P<0.001),Sn150+SnE混合抗体组24h和48h时的PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍(P<0.01)和0.76倍(P<0.001)。结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150+SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系。

    2015年07期 v.35;No.223 1112-1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1393K]
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基础兽医学

  • 日粮添加抗菌肽buforin Ⅱ对病毒性腹泻断奶仔猪小肠黏膜屏障和TLR-2信号途径的影响

    唐志如;徐玲;石宝石;张小龙;邓欢;赖星;孙志洪;

    将15头体质量为(5.42±0.72)kg的21d病毒性腹泻断奶仔猪随机分为3组,对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加100mg/kg新霉素和1.0mg/kg抗菌肽buforinⅡ,饲养期10d。每个处理5个重复,每个重复1头仔猪。结果显示,与对照组和新霉素组相比,日粮添加抗菌肽buforinⅡ能显著降低病毒性腹泻断奶仔猪腹泻指数,显著降低血清IgA、IgM和IgG的浓度、空肠黏膜sIgA的浓度(P<0.05);显著下调病毒性腹泻断奶仔猪空肠和回肠黏膜TLR-2、PKR和eIF-5A mRNA相对表达丰度(P<0.05);显著提高病毒性腹泻断奶仔猪空肠和回肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度、GSH-Px、NOS、SOD、GR和T-AOC浓度(P<0.05)以及空肠黏膜occludin蛋白水平(P<0.05)。结果表明,日粮抗菌肽buforinⅡ能减轻病毒对断奶仔猪空肠黏膜屏障功能的损伤作用。

    2015年07期 v.35;No.223 1119-1124页 [查看摘要][在线阅读][下载 455K]
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  • 牛胎儿神经干细胞的分离培养与鉴定

    郑月茂;殷松娜;齐英培;贺晓丽;冀艳华;张涌;

    分别采用机械分离法和酶消化分离法从胎龄为3个月的牛胎儿脑组织中分离培养牛神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),比较这2种方法对NSCs培养的影响。根据培养液中是否添加bFGF、EGF和FBS,选择不同的培养液培养NSCs,观察不同培养液对NSCs培养的影响,进而筛选出最适培养液。对NSCs及经诱导分化成的神经细胞进行生物学特性分析,包括细胞形态学观察和细胞免疫荧光检测。结果显示:组成成分为Neurobasal Medium+20μg/L bFGF+20μg/L EGF+20mL/L B27+100IU/mL青霉素+100IU/mL链霉素的神经干细胞培养液能够很好地支持牛胎儿NSCs的存活和增殖;机械分离法获得的牛胎儿NSCs的神经球数量和细胞活性要比酶消化分离法效果好;NSCs特异性标志物Nestin表达呈强阳性,Sox2、Nanog、Oct4和SSEA4等干细胞表面标志表达均呈阳性;经体外诱导的NSCs可分化为星形胶质细胞(表达GFAP)和神经元(表达βⅢ-tubulin)。结果表明,可从牛胎儿脑组织中分离培养出NSCs,NSCs可长期传代培养,具有分化功能。牛NSCs为克隆牛的供体细胞和转基因牛的受体细胞提供了细胞新来源。

    2015年07期 v.35;No.223 1125-1129+1135页 [查看摘要][在线阅读][下载 1180K]
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  • 江苏地区奶牛乳房炎凝固酶阴性葡萄球菌耐药基因分析

    林伟东;宰栩生;于恩琪;秦爱建;金文杰;梁祥焕;王锦荣;张军;

    对江苏地区多个奶牛场采样,并对奶牛乳房炎(Bovine mastitis,BMT)检测阳性奶样进行病原菌分离、鉴定。对分离出的凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negative Staphylococci,CNS)分别进行20种药物的敏感性试验和相关耐药基因检测。结果显示,BMT检测阳性的奶样有610份,528份检出细菌,共检出细菌802株,鉴定为CNS的217株;大部分CNS对万古霉素、左氟沙星、氯霉素、磷霉素、呋喃妥因敏感,对青霉素、大观霉素具有较强耐药性;CNS对β-内酰胺类(blaZ)、大环内酯类(ermC)和四环素类(tetK、tetM、tetL、tetO)耐药基因的检出率分别为29.95%、2.30%、24.88%、1.84%、1.84%和0.00%。

    2015年07期 v.35;No.223 1130-1135页 [查看摘要][在线阅读][下载 514K]
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  • 牛骨骼肌α-actin基因5′上游调控元件及内含子功能的初步分析

    胡倩;曹允考;佟慧丽;张伟伟;赵丹丹;王彬;高朋;严云勤;

    采用PCR定点突变分析法确定牛骨骼肌α-actin启动子-361~-462bp区域的调控元件Sp1/KLFs、ZF5F和Pax3结合位点的功能;利用基因重组技术,将内含子Ⅰ和内含子Ⅱ分别连在启动子缺失片段的上游和下游,构建双荧光素酶表达载体,使其转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,进行活性检测。结果显示,Sp1/KLFs降低牛骨骼肌α-actin基因启动子活性,ZF5F和Pax3均能增强启动子活性。内含子在启动子上游增强了启动子活性,在其下游降低了启动子活性,且顺式调控元件和内含子均具有肌肉特异性。结果表明,初步确定了参与牛骨骼肌α-actin基因转录调控的负顺式调控元件Sp1/KLFs,正顺式调控元件ZF5F和Pax3,发现了内含子插入启动子的位置很重要,为以后构建牛骨骼肌α-actin高活性的启动子奠定了基础。

    2015年07期 v.35;No.223 1136-1142页 [查看摘要][在线阅读][下载 1174K]
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  • 人参茎叶多糖对雏鸡小肠黏膜细胞因子和免疫介质的影响

    张芳毓;祁宏伟;武斌;郎洪彦;刘臣;闫晓刚;

    600只7日龄海兰褐蛋雏鸡随机分为10个处理,每个处理60只,分为3个重复,每个重复20只。其中5个处理为免疫抑制组,每天灌服环磷酰胺(CY)100mg/kg,其余为正常饲喂组,灌服等量生理盐水,连续7d。免疫抑制组和正常饲喂组基础饲粮中人参茎叶多糖(Ginseng stem and leaf polysaccharide,GSLP)添加干物质量同为0.2、0.4、0.8、1.6g/kg。雏鸡35日龄时,每个处理中随机选择9只雏鸡(每个重复3只),采集十二指肠、空肠和回肠样品,利用比色法、ELISA和real-time PCR方法分析一氧化氮(NO)、白细胞介素-2(IL-2)和分泌型免疫球蛋白A(slgA)含量以及干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达水平。结果显示,1.6g/kg GSLP显著提高了空肠IL-2含量(P<0.05),并且IL-2含量与GSLP呈正相关关系(P<0.10);环磷酰胺则显著降低了空肠IL-2含量(P<0.01);GSLP对其它指标无显著影响。结果表明,0.2~1.6g/kg添加范围内,不同免疫状态雏鸡空肠黏膜细胞免疫水平随GSLP添加量的增加而提高;灌服CY对肠道黏膜细胞免疫的抑制的后续影响可以持续到35日龄。

    2015年07期 v.35;No.223 1143-1147页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K]
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  • 枸杞多糖对己烯雌酚暴露成年仓鼠睾丸Caspase-8、Caspase-9及p53凋亡蛋白的影响

    刘玉姣;王安忠;张彩利;马爱团;

    66只成年雄性仓鼠随机分为空白对照组(A)、DES组(B)、1 mg/kg LBP组(C)、10 mg/kg LBP组(D)、50mg/kg LBP组(E)及VC+VE组(F)。除对照组外,其余5组均皮下注射1mg/kg己烯雌酚,对照组注射等剂量的橄榄油,连续用药7d,同时C、D、E组分别灌服1、10、50mg/kg的LBP,F组灌服100mg/kg的VC及200IU/kg的VE,A、B组灌服等剂量的生理盐水。于末次给药24h后,乙醚麻醉致死仓鼠,取睾丸进行免疫组化检测,确定Caspase-8、Caspase-9和p53的表达。结果显示,通过免疫组化法检测证实,DES引起成年仓鼠睾丸内生精细胞大量凋亡,显著提高Caspase-9的表达(P<0.01);给予不同剂量的LBP后,Caspase-9及p53的表达呈剂量依赖性降低,以LBP高剂量组(50mg/kg)表达最低(P<0.01),同时LBP高剂量组的Caspase-8阳性表达与对照组相比差异不显著。结果表明,枸杞多糖可以降低己烯雌酚所致成年仓鼠生精细胞中凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9和p53的表达,且以50mg/kg剂量作用最为显著。

    2015年07期 v.35;No.223 1148-1152页 [查看摘要][在线阅读][下载 2835K]
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  • 醋酸铅对雌性小鼠生长发育及主要内脏器官的影响

    贺秀媛;张淑芳;林峰;陈玉霞;李梦;李静;杨振;张君涛;韩雪蕾;郭林林;邓立新;刘宗平;

    将420只体质量为(20.23±1.88)g的雌性昆明系小鼠随机分成5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。染毒结束后,脱颈椎处死小鼠,取出心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,称湿重;观察形,制作石蜡切片,观察其病理组织学变化。结果显示,(1)铅可明显影响小鼠体质量增长,且体质量随着染毒剂量的增加和时间的延长而明显降低,与对照组相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);(2)与对照组相比,各染毒组小鼠脏器系数变化依次为肾、脾>肝、肺>心,且呈明显的剂量-时间效应关系;(3)铅暴露可引起小鼠心、肝、脾、肺、肾各脏器发生不同程度的损伤,小鼠肾脏、脾脏受损最为严重,其次为肝脏,再次为心脏,肺脏影响最轻,且损害的程度与铅染毒剂量和时间呈剂量-时间效应关系。结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,对小鼠生长发育具有明显抑制作用;长期低铅染毒即可导致机体各组织器官发生广泛性病理损伤,且损伤的程度与染毒剂量呈现明显的剂量-时间效应关系。

    2015年07期 v.35;No.223 1153-1158+1163页 [查看摘要][在线阅读][下载 1314K]
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  • 玉米赤霉烯酮对大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8表达的影响

    周宏超;赵煜;杨鸣琦;刘晓强;李引乾;

    探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对雌性大鼠子宫内膜细胞凋亡与Caspase-3和Caspase-8蛋白表达的关系,进而揭示其导致子宫损伤的作用机制。应用HE染色观察组织病理变化,免疫组化SP法检测注射玉米赤霉烯酮后6个时间点大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白的表达。病理组织学观察发现,试验组子宫组织出现不同程度损伤,子宫内膜细胞发生凋亡。免疫组化结果显示,试验组子宫内膜上皮细胞与间质细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05)。不同时间点相比,Caspase-3在内膜上皮细胞中12h表达量最高,而在内膜间质细胞中18h表达量最高;Caspase8在内膜上皮细胞中18h表达量达到峰值,而在内膜间质细胞中24h表达量最高,之后缓慢下降。结果表明,ZEA可能通过上调Casepase-3和Caspase-8的表达从而引起子宫内膜细胞凋亡。

    2015年07期 v.35;No.223 1159-1163页 [查看摘要][在线阅读][下载 3021K]
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临床兽医学

  • 内毒素血症大鼠小肠黏膜免疫相关指标的变化及CA的保护作用

    严玉霖;高洪;杨进成;卢琴;王修庚;赵汝;

    将72只试验用SD大鼠随机分为3组:对照组、内毒素(Endotoxin,ET)致病组和CA保护组。3组动物经相应处理后分别在第3、4、8、12h采集十二指肠、空肠组织作为检测样本,运用PAS染色和免疫组织化学技术进行分析。结果显示,大鼠在发生内毒素血症时,小肠黏膜组织的杯状细胞(GC)数量、分泌型IgA(sIgA)含量均不同程度地下降,表明小肠黏膜免疫系统遭到破坏,而CA则能明显降低ET所导致的损伤作用,对小肠黏膜免疫系统具有一定的保护作用。

    2015年07期 v.35;No.223 1164-1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 758K]
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  • 采用输血疗法治疗大熊猫贫血

    邓林华;魏荣平;张和民;王承东;汤纯香;黄炎;吴虹林;周应敏;李才武;张卫东;李德生;

    在2007-2012年期间,分别应用输血疗法治愈传染性疾病导致的贫血、营养性贫血及继发性贫血等3种类型(共6只)的大熊猫贫血病例,有的病例还进行了连续多次输血,输血后大熊猫没有出现严重的输血反应,且RBC、HGB、HCT、MCHC、PLT等均有明显升高,平均在第1次输血后32d其血常规值就恢复到正常范围。通过总结大熊猫的输血方法及输血过程中的注意事项及体会,认为输血疗法在大熊猫贫血性疾病的治疗上是安全、可行的,输血疗法作为纠正贫血的主要方法之一,为抢救各种重症贫血性疾病提供了一条有效途径,值得在临床中进行推广。

    2015年07期 v.35;No.223 1168-1171页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K]
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动物科学

  • 饲喂含无患子皂甙的精料对6~9月龄后备牛生产性能、营养物质消化率及血液生化指标的影响

    焦阳;张勇;郭海明;朱雯;叶均安;

    选取24头6月龄的健康中国荷斯坦后备奶牛,平均体质量(116.02±6.92)kg,采用配对设计分为2组,对照组和试验组分别饲喂含量为0、0.15%的无患子皂甙的精料,试验期101d,其中预饲期10d,试验末期进行消化代谢试验并采集血液。结果显示,饲喂含无患子皂甙的精料后,后备牛的日增重(P<0.01)、体高(P<0.01)、饲料转化效率(P<0.01)、粗蛋白(P<0.05)的表观消化率显著提高,每头牛的饲料成本下降2.3元,提高了企业的经济效益,同时血液中葡萄糖浓度和胆固醇浓度升高(P<0.05),谷丙转氨酶和总胆红素浓度降低(P<0.01)。结果表明,饲喂含无患子皂甙的精料能显著提高6~9月龄后备牛的生产性能,增加企业的经济效益,无患子皂甙可能是一种具有较大应用前景的环境友好型瘤胃调控剂。

    2015年07期 v.35;No.223 1172-1176页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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  • 不同微生态制剂对蛋鸡生产性能、血清生化指标及蛋品质的影响

    李晓丽;何万领;张才;位志国;文凤云;

    选用600只280日龄海兰褐蛋鸡,随机分为3组,每组5个重复,每个重复40只,对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ组分别在基础饲粮基础上添加0.15%的V1和V2型复合微生态制剂,研究不同微生态制剂对蛋鸡生产性能、血清生化指标和蛋品质的影响,试验期40d。结果显示,试验Ⅰ、Ⅱ组提高了蛋鸡产蛋率(P>0.05)和平均蛋重(P>0.05),降低了料蛋比(P<0.05)和破蛋率(P>0.05);试验Ⅰ组显著降低了血清总蛋白(P<0.05)、白蛋白(P<0.05)和血糖(P<0.05)含量,试验Ⅰ、Ⅱ组均显著提高了血清无机磷(P<0.05)和钙(P<0.05)水平;试验Ⅰ、Ⅱ组均提高了哈氏单位(P<0.05)和蛋黄颜色(P<0.05)。结果表明,蛋鸡饲粮中添加V2型微生态制剂效果更佳。

    2015年07期 v.35;No.223 1177-1180页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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  • 黄芪-枯草芽孢杆菌复合发酵制剂对肉鸡生产性能及免疫功能的影响

    乔宏兴;史洪涛;王永芬;边传周;张帅帅;赵胜振;姜亚乐;

    选择1日龄健康肉仔鸡480只,随机分为4组,在饮水中添加复合发酵制剂:试验Ⅰ组(1∶200倍稀释)、试验Ⅱ组(1∶400倍稀释)、试验Ⅲ组(1∶800倍稀释)、对照组。结果显示:(1)生产性能。与对照组相比,试验Ⅱ、Ⅲ组的平均日增重比对照组分别提高11.48%和6.72%(P<0.05),料肉比分别比对照组降低了6.88%和4.23%(P<0.05),平均日采食量高于对照组(P<0.05)。(2)免疫器官指数。21日龄时,Ⅱ、Ⅲ组脾脏指数、法氏囊指数均显著高于对照组,分别提高了4.22%和3.61%(P<0.05)、29.20%和14.16%(P<0.05)。(3)疫苗免疫效果。21日龄时,试验组ND抗体滴度均高于对照组(P<0.05),其中Ⅱ、Ⅲ组抗体滴度相同,比对照组高出13.04%(P>0.05);Ⅰ组AI抗体滴度低于对照组(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组抗体滴度均高于对照组,分别提高了11.34%和8.25%(P<0.05)。结果表明,黄芪-枯草芽孢杆菌复合发酵制剂能够提高肉鸡的生产性能和免疫功能,完全可以替代抗生素使用。

    2015年07期 v.35;No.223 1181-1186页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 日粮代谢能和粗纤维水平对0~4周龄肉鹅生产性能及血清生化指标的影响

    张玲;周根来;段修军;徐思炜;李芙蓉;卞友庆;

    本试验采用270只1日龄国家级水禽基因库(江苏泰州)的苏牧白鹅为研究对象,设9个处理组,每个处理5个重复,每个重复3公3母,分栏饲养28天,研究不同代谢能水平(10.8、11.8、12.8 MJ/kg)和粗纤维水平(3.5%、5.5%和7.5%)对0~4周龄肉鹅生产性能及血液生化指标的影响。结果表明:采食代谢能水平为11.8 MJ/kg和粗纤维水平为3.5%日粮的第4组试验鹅在育雏结束时日增重极显著地高于采食中高代谢能和粗纤维水平日粮的第3、5、6、8、9组(P<0.01),料重比则极显著的低于第5、6、8、9组(P<0.01),而日采食量差异不显著(P>0.05);日粮代谢能和粗纤维水平对试验鹅血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮、尿酸、甘油三酯和葡萄糖含量有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的影响,而对谷草转氨酶和总胆固醇含量影响不显著(P>0.05),代谢能对试验鹅血液中总蛋白、白蛋白、球蛋白和谷丙转氨酶含量的影响均大于互作和粗纤维的影响(P>0.05),3种因素对谷草转氨酶(P>0.05)、尿酸(P<0.05)、碱性磷酸酶和甘油三酯(P<0.01)的影响表现为互作>代谢能>粗纤维,对尿素氮(P<0.01)、总胆固醇和葡萄糖(P>0.05)的影响则表现为粗纤维>代谢能>互作,随着代谢能和粗纤维水平的升高,试验鹅血液中的甘油三酯和总胆固醇含量呈现出逐渐下降和上升的趋势,且尿酸、甘油三酯和总胆固醇都与葡萄糖间呈现出极显著的正相关关系(P<0.01)。

    2015年07期 v.35;No.223 1187-1192+1198页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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  • 水蛭素对冷冻前后猪精液中过氧化氢酶活性及mRNA表达的影响

    杨尚雪;李珣;王晓晔;石博妹;唐胤晟;许春荣;唐荣福;胡传活;

    用含不同浓度(0、0.04%、0.08%、0.12%)水蛭素的稀释液稀释美系长白公猪精液,0.5mL细管分装冷冻,分别检测平衡后及冻融后精液中过氧化氢酶的活性和mRNA表达量的变化。结果显示,不含水蛭素的冷冻稀释液显著降低新鲜猪精液过氧化氢酶活性(P<0.05),而含有0.08%水蛭素的冷冻稀释液显著提高冷冻保存猪精液过氧化氢酶活性(P<0.05);不含水蛭素的冷冻稀释液降低新鲜猪精液过氧化氢酶mRNA的表达,含有0.08%水蛭素的猪精液平衡及冻融后的过氧化氢酶mRNA表达量最高,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,添加0.08%水蛭素显著提高冷冻前后猪精液过氧化氢酶活性(P<0.05),但对过氧化氢酶mRNA表达的影响并不显著。

    2015年07期 v.35;No.223 1193-1198页 [查看摘要][在线阅读][下载 459K]
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  • 体细胞核移植生产转fat-1基因克隆Holstein牛

    王丙萍;刘羿羿;王峰;田栋;张东;李璐;杜威;刘彩云;王申元;闫涛;朱和平;张立;周欢敏;

    为培育含ω-3多聚不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids,PUFAs)丰富的转基因奶牛新材料,本试验将fat-1基因转染到Holstein奶牛胎儿成纤维细胞,筛选获得的转基因阳性克隆细胞株,通过核移植方法构建转基因重构胚胎,比较了非转基因与转基因重构胚体外发育情况,并移植到代孕母牛子宫角。妊娠足月产下犊牛后,对犊牛进行转基因的DNA以及mRNA的表达鉴定。结果显示,非转基因与转基因重构胚囊胚率分别为32.1%和28.1%,两者之间无显著差异(P>0.05)。受体母牛的妊娠率为66.7%(6/9),其中3头母牛妊娠足月(50%)。自然分娩3头克隆牛,体细胞克隆牛的效率为20%(出生小牛头数/移植胚胎数)。经PCR鉴定,这3头小牛中有1头为转fat-1基因阳性,其余2头均为阴性,转基因阳性率为33.3%。

    2015年07期 v.35;No.223 1199-1204页 [查看摘要][在线阅读][下载 927K]
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