预防兽医学

  • 猪伪狂犬病毒变异株(Fujian-LY)对免疫仔猪的致病性研究

    范克伟;戴爱玲;吴德峰;方来杉;黄元华;黄思琼;杨小燕;

    本实验室2014年从福建省龙岩市某规模化猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒变异株,命名为PRV Fujian-LY株。为了研究Fujian-LY株对免疫仔猪的致病性,将8头20龄的PRV抗原、gE抗体均为阴性,gB抗体均为阳性仔猪随机分为3组,其中2组(每组3头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种Fujian-LY株,第3组2头仔猪做阴性对照。试验仔猪接种病毒24h后体温均开始升高,随着病程发展,呼吸系统症状明显,滴鼻接种组仔猪发病明显快于肌肉注射组,所有攻毒仔猪虽均有发病但未出现死亡。通过病理剖检、PCR鉴定、病毒分离培养、易感动物感染试验及gE抗体ELISA检测证实Fujian-LY株人工攻毒试验成功。gE抗体检测结果表明所有攻毒仔猪攻毒后7dPRV gE抗体开始阳转。对发病仔猪剖检可见,脑积液明显增多,脑膜血管充血,并伴有出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片观察结果显示发病仔猪脑实质中小血管扩张充血,血管周围有淋巴细胞包围"血管套"现象,其他主要脏器也均有明显的病理变化。试验结果表明PRV Fujian-LY株为伪狂犬病毒强毒株。

    2015年11期 v.35;No.227 1727-1734页 [查看摘要][在线阅读][下载 4051K]
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  • 猪传染性胃肠炎病毒感染相关猪源miRNA的筛选及表达差异分析

    王龙涛;葛晨霞;王丹;陈立思;胡静涛;李公美;幺乃全;李月红;

    经生物信息学预测发现猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)3′UTR可能是ssc-miR-182的潜在作用位点,本研究以猪传染性胃肠炎病毒为研究对象,构建TGEV 3′UTR双荧光素酶报告基因载体,并将其与合成的ssc-miR-182模拟体瞬时共转染至猪小肠上皮细胞,通过荧光监测仪测定荧光素酶活性;同时通过荧光定量PCR方法检测TGEV感染猪小肠上皮细胞后在不同时间段ssc-miR-182的表达变化情况。研究结果显示,ssc-miR-182对TGEV 3′UTR有一定的抑制作用,并且TGEV在感染小肠上皮细胞以后ssc-miR-182的表达明显上调。结果表明,宿主ssc-miR-182与TGEV的感染和复制增殖相关。

    2015年11期 v.35;No.227 1735-1739页 [查看摘要][在线阅读][下载 1146K]
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  • 广西巴马小型猪PERV-A亚型毒株全基因cDNA克隆的构建与分析

    钟雅婷;黄红梅;钟华;欧阳康;马玲;廖艳娟;白安斌;吴健敏;

    参照GenBank已发表的猪内源性逆转录病毒(PERV-A亚型)全基因序列,用软件DNAman分析PERV-A亚型全基因序列单一酶切位点,设计3对特异性引物及1对套式引物,分4段从仅携带PERV-A亚型毒株的广西巴马小型猪外周血淋巴细胞中扩增巴马小型猪PERV(PERV-A-BM)全基因组序列,并将4个覆盖全基因组序列的重叠基因片段,通过pMD 18-T中间载体依次连接并克隆到pBluescript II SK(-)载体上,构建全基因cDNA克隆。同时通过定点突变和化学合成的方法成功恢复PERV-A-BM全基因cDNA克隆中存在的15个保守突变碱基,将突变后的PERV-A-BM全长序列上传GenBank,登录号为HM159246。为便于鉴定将PERV-A-BM全基因cDNA克隆第8408位碱基由A沉默突变为C,引入新的单一酶切位点Aat II,获得cDNA克隆的突变株。酶切鉴定及测序结果表明,PERV-A-BM前病毒基因组全长8 774bp,分为两端的5′、3′非编码区(UTR)及中间的开放阅读框(ORF),编码gag、pol和env基因。与不同亚型标准株gag和pol基因的氨基酸序列具有较高同源性,而env基因的同源性则较低。本研究为下一步拯救出该病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。

    2015年11期 v.35;No.227 1740-1747页 [查看摘要][在线阅读][下载 2109K]
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  • 用主成分分析法研究腹泻仔猪血清生化指标

    黄美州;刘永明;王慧;王胜义;崔东安;李胜坤;齐志明;

    为了研究腹泻对仔猪血清生化指标的影响,本试验采集了20头腹泻仔猪(7~8日龄)和10头健康仔猪(与腹泻仔猪同日龄、同性别)的粪便和血清。荧光定量PCR法对粪便进行病原学检测,对采集的血清用血生化分析仪进行检测,并利用主成分分析法对其结果进行分析。结果,(1)20头腹泻仔猪粪便的猪流行病腹泻病毒检测结果均为阳性。(2)十二项血清生化指标被转化成了综合性更强的4个主成分,根据这4个主成分进行的聚类分析的结果和临床采集样品的分类结果一致。(3)腹泻仔猪的血清球蛋白、尿素和肌酐水平显著升高(P<0.05)。结果表明,由猪流行性腹泻病毒引发的腹泻,可能导致仔猪体内的蛋白质代谢紊乱、肝脏和肾脏的机能受损。

    2015年11期 v.35;No.227 1748-1751+1758页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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  • 潜伏感染期猪伪狂犬病病毒基因组甲基化预测及图谱测定

    郑关民;陈文定;余秋颖;陈陆;张玉娟;杨利;李双双;常洪涛;李永涛;赵军;王川庆;

    为研究DNA甲基化在PRV潜伏感染中的作用,本研究首先对PRV全基因组甲基化状态进行预测,再采用亚硫酸氢盐PCR测序的方法检测急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域的甲基化状态。结果显示,急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域均存在散在的甲基化位点,并未发现广泛的甲基化区域,与预测结果一致。结果表明,潜伏感染期间PRV基因组发生甲基化的可能性很小,进而可知DNA甲基化在PRV潜伏感染过程中未起到关键的作用。

    2015年11期 v.35;No.227 1752-1758页 [查看摘要][在线阅读][下载 2516K]
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  • 重组鸡IFN-α-IL-18融合基因的酵母分泌表达及其抗IBDV活性研究

    杨惠;李银聚;刘一尘;程相朝;杨丹芳;韩海峰;金修哲;颜云飞;何雷;

    为探讨鸡IFN-α和IL-18及其融合蛋白抗IBDV活性,本研究将鸡IFN-α、IL-18及其融合基因分别置于酵母表达载体pPICZ-αA的AOX1启动子下游,构建重组质粒pPICZ-IFN-α、pPICZ-IL-18和pPICZ-IFN-α-IL-18。将重组质粒分别用PmeⅠ酶切线性化,电穿孔方法导入酵母Pichia Pastoris X-33感受态细胞,以1%甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白,淋巴细胞转化试验初步检测表达产物生物学活性,鸡胚接种试验对表达产物的抗IBDV效果进行评价。结果表明,在酵母培养上清液中存在相对分子质量分别为22 000、23 000和43 000的目的蛋白,表达的IL-18和IFN-α-IL-18对鸡淋巴细胞具有明显的诱导转化作用(P<0.05)。IFN-α-IL-18融合蛋白能够显著抑制IBDV在鸡胚中的增殖(P<0.01),IFN-α和IL-18酵母表达产物对IBDV也有明显的抑制作用(P<0.05)。这为进一步开展IFN-α-IL-18融合蛋白的功能研究及其在鸡病毒性疫病防控中作用的探索奠定了基础。

    2015年11期 v.35;No.227 1759-1764页 [查看摘要][在线阅读][下载 1176K]
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  • 施马伦贝格病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

    王建昌;王金凤;段永生;张永宁;李静;

    依据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因保守序列,设计了特异性引物和MGB荧光探针,建立了SBV实时荧光RT-PCR检测方法,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性等试验评价,并对绵羊和牛全血样品进行了检测。结果表明,所建立的SBV检测方法模板浓度与Ct值呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.998;特异性强,仅对SBV RNA出现特异性扩增曲线;灵敏度高,对SBV RNA的检测灵敏度为10copies;重复性好,重复检测灵敏度CV<3%;对临床样品的检测均为SBV阴性。所建立的SBV实时荧光RT-PCR方法可以为SBV的诊断和流行病学调查提供一种快速、特异、敏感的检测手段。

    2015年11期 v.35;No.227 1765-1769页 [查看摘要][在线阅读][下载 505K]
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  • 牛细小病毒的分离鉴定及在不同细胞中的复制动力学研究

    刘辉;杨红育;赵红丽;李野;赵虹;李婷婷;丁壮;

    本研究旨在获得牛细小病毒分离株,并对牛细小病毒(BPV)在不同细胞中的复制动力学进行探讨,为牛细小病毒疫苗的开发筛选出合适的病毒株及适宜病毒扩增的细胞株。将96批次牛血清样品分别接种于BT细胞中,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE),对出现典型细胞病变的样品采用直接免疫荧光法检测;分离得到1株牛细小病毒,并且对这株病毒的红细胞凝集特性进行分析。通过将牛细小病毒接种在Vero、BT和MDBK 3种细胞中,筛选出适合牛细小病毒培养用的细胞株。结果,通过对96批次牛血清样品接种于BT细胞进行病毒分离培养,获得4株病毒阳性株,使用直接免疫荧光法检测,获得1株牛细小病毒,进行红细胞凝集试验,这株牛细小病毒能凝集豚鼠、马、人的红细胞,但不能凝集家兔、山羊和鸡的红细胞。这株牛细小病毒在BT细胞中可稳定传代,在MDBK和Vero细胞中盲传3代仍未检测到牛细小病毒。结果表明,通过细胞体外培养法分离得到1株牛细小病毒,可以作为牛细小病毒疫苗制备的病毒株,对这株牛细小病毒在不同细胞中的复制动力学的研究结果表明,BT细胞是最适合培养这株牛细小病毒的细胞,候选细胞株MDBK和Vero细胞不适合这株牛细小病毒的扩大培养。本研究为牛细小病毒疫苗的开发奠定了基础。

    2015年11期 v.35;No.227 1770-1773页 [查看摘要][在线阅读][下载 1638K]
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  • 貂圆环病毒PCR检测方法的建立

    王玉莹;刘晔;连海;李楠;扈荣良;张乐萃;

    根据本实验室获得的貂圆环病毒Cap基因序列设计了1对特异性引物,建立了PCR检测方法。利用该方法对猪细小病毒、貂肠炎病毒、犬细小病毒、猪圆环病毒、貂阿留申病毒,大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性;敏感性实验表明,该方法最低能检测到病毒核酸量为10μg/L。利用所建立的PCR方法检测采自大连的72份样品,结果阳性率为59.7%,表明貂圆环病毒在大连水貂养殖场的感染率较高。

    2015年11期 v.35;No.227 1774-1776+1781页 [查看摘要][在线阅读][下载 306K]
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  • 肉牛上呼吸道肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药分析

    林雅;韩冠双;郭建华;黄攀;刀丽梅;单文杰;方志超;程方俊;

    为研究重庆地区规模化肉牛场肉牛上呼吸道中肺炎克雷菌的带菌状况及耐药性。本研究从重庆荣昌、丰都两地肉牛上呼吸道分离细菌,采用形态学观察、生化鉴定及16SrRNA分子方法鉴定,获得12株肺炎克雷伯菌,分离率为19.7%,表明肺炎克雷伯菌是肉牛上呼吸道中主要的一种条件致病菌;分离菌株对庆大霉素,丁胺卡那霉素,头孢他啶,妥布霉素等药物敏感,对乙酰螺旋霉素,氨苄西林,苯唑西林耐药率达到100%,分离株存在多重耐药,但两个地区的分离株在耐药性上存在一定差异。

    2015年11期 v.35;No.227 1777-1781页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K]
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  • 皖北地区仔猪源大肠杆菌毒力因子及HPI毒力岛的检测

    吕锦芳;闻爱友;宁康健;姜锦鹏;王璇;路振香;刘畅;应如海;孙浩楠;王稳;

    我国皖北地区哺乳仔猪腹泻频发,临床直肠棉拭子培养物有34例符合大肠杆菌特征,并进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)毒力因子(STa、STb、LT、SLT-2e)和HPI毒力岛的PCR快速检测。结果,仅有10例表达STa和STb(29.41%),其中3例表达STa基因(8.82%),2例表达STb基因(5.88%),2例表达STa和STb基因,1例表达STa和irp2基因(2.94%),2例表达STa和STb及irp2基因,揭示HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染共有3例(8.82%);未检测到LT和STL-2e毒力因子。有10例表达irp2基因(29.41%),其中7例独立表达irp2基因(20.59%)。STa、STb和Irp2的PCR产物测序结果分别与GenBank检索的目标序列比对,其同源性均达到100%。结果初步揭示了皖北地区致哺乳仔猪腹泻ETEC毒力因子及HPI毒力岛的分布情况。

    2015年11期 v.35;No.227 1782-1785+1791页 [查看摘要][在线阅读][下载 1271K]
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人兽共患病

  • 2013—2014年H7亚型禽流感病毒遗传进化分析

    王静静;刘华雷;郑东霞;赵云玲;戈胜强;左媛媛;于松梅;王英丽;吕艳;

    对2013—2014年15株不同来源的H7亚型禽流感病毒国内分离株进行了基因组测序与遗传进化分析。结果显示,15株H7亚型禽流感病毒具有遗传多样性,可分为2种亚型:13株为H7N9亚型,2株为H7N3亚型。HA蛋白裂解位点附近氨基酸分析显示所有H7亚型流感分离株均为低致病性毒株。基因组遗传进化分析显示,13株H7N9亚型禽流感病毒均与2013年人源分离株同源性较高,但具有2种遗传学特性,13株病毒的PB2、PA、HA、NP、NA、M和NS基因高度同源,而PB1基因来源于2个不同分支。2株H7N3亚型流感病毒与国内鸭源分离株同源性较高。15株H7亚型禽流感病毒PB2蛋白均未出现627K、701N等与哺乳动物适应性相关的氨基酸变异。13株H7N9亚型禽流感病毒HA裂解位点附近氨基酸(EIPKGR/GL)与人源H7N9病毒一致,且HA蛋白和M2蛋白分别具有与哺乳动物适应性和金刚烷胺耐药性相关的标志性变异,而2株H7N3亚型禽流感病毒未出现上述氨基酸变异。

    2015年11期 v.35;No.227 1786-1791页 [查看摘要][在线阅读][下载 1095K]
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  • 华支睾吸虫间接ELISA检测方法的建立及初步应用

    潘辰;杨怡;陈学秋;杜爱芳;

    RT-PCR扩增华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的Enolase基因后,进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物;以纯化后的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对工作条件进行优化。结果表明,ELISA最佳工作条件为:抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,37℃1h再4℃过夜;5%脱脂奶粉,37℃封闭1h;待检血清1∶100稀释37℃孵育1h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育45min;TMB显色作用时间10min;确定的阴阳性血清临界值为0.253。所建立的ELISA方法特异性较好,可检测犬华支睾吸虫病阳性血清,与犬卫氏并殖吸虫病阳性血清、犬蛔虫病阳性血清、犬弓形虫病阳性血清、犬新孢子虫病阳性血清均不发生反应。该方法敏感性为1∶3 200。批间批内重复性试验变异系数均小于10%。在临床应用中,对浙江地区353多份犬血清的检测表明,样品阳性率为1.13%。本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为华支睾吸虫的血清流行病学调查提供了有效手段。

    2015年11期 v.35;No.227 1792-1798页 [查看摘要][在线阅读][下载 498K]
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基础兽医学

  • 鸡SUMO1的HIS/GST双融合纯化标签载体的构建及表达分析

    于佩峰;郑海南;邓晨;张鑫;吴山力;王梦云;吕岩;艾永兴;

    SUMO(small ubiquitin-related modifier,小泛素样相关修饰物)是一种重要的蛋白翻译后修饰物,对调节蛋白质的活性、功能和细胞定位都起着至关重要的作用。虽然SUMO和泛素的空间结构很相似,但是发挥的功能却有很大的不同,SUMO不像泛素那样介导蛋白质的降解,反而可以增强蛋白质的稳定性。近年来,研究发现人的SUMO作为一种融合标签和分子伴侣来可以显著增加一些难溶解蛋白的可溶性表达。本研究以原核表达载体pET-28a为基础构建了鸡SUMO1重组质粒HIS-SUMO1-GST-pET28a,并在SUMO1和GST之间插入IL2得到重组质粒HIS-SUMO1-IL2-GST-pET28a,经IPTG诱导表达,并分别使用Ni-NTA及Glutathione-sepharose 2次亲和层析纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。活性分析发现去SUMO化酶人的SENP1可完全切开纯化融合的蛋白经。结果表明,此SUMO融合的HIS/GST双标签表达载体不但可以用于提高难溶蛋白的溶解度,而且表达产物也作为去SUMO化酶研究的底物。

    2015年11期 v.35;No.227 1799-1803页 [查看摘要][在线阅读][下载 820K]
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  • 蓖麻毒素A链在麦胚无细胞系统中的表达

    肖世峰;许娜;姚林芳;孙成彪;刘洋;黄燕霞;李松岩;万家余;王兴龙;刘文森;

    本试验利用麦胚无细胞系统表达蓖麻毒素A链(RTA):通过PCR方法扩增蓖麻毒素A链基因序列并连接至pMD18-T载体。将测序正确的RTA序列克隆到Flexi表达载体,获得Flexi-RTA重组质粒。将该重组质粒加入到麦胚无细胞表达系统中进行表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分析相对分子质量约为32 000,通过Western blot、ELISA实验鉴定为RTA。本方法表达的RTA在蓖麻毒素诊断、疫苗研发、抗癌药物研制等方面具有广阔应用前景。

    2015年11期 v.35;No.227 1804-1808页 [查看摘要][在线阅读][下载 991K]
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  • 黄芪-枯草芽孢杆菌泡腾颗粒的制备及在保育猪上的应用

    乔宏兴;何金环;史洪涛;赵圣振;姜亚乐;边传周;

    旨在将黄芪-枯草芽孢杆菌发酵原液浓缩后添加辅料制成泡腾颗粒并在保育猪上进行应用。本研究以泡腾颗粒的崩解Ⅲ时间和活菌数量为指标,采用L9(34)正交设计因素表筛选最佳原料配比;将240头断奶仔猪(杜×长×大)随机分为6组,每组40头,将制备的泡腾颗粒通过饮水给药应用于试验Ⅰ组(1∶2 000)、试验Ⅱ组(1∶1 500)、试验Ⅲ组(1∶1 000),对照Ⅰ组为空白对照,对照Ⅱ组添加1%黄芪、对照Ⅲ组添加0.05%枯草芽孢杆菌,试验30d。结果发现,1)泡腾颗粒最佳原料比例为碳酸氢钠和柠檬酸(质量比1.2/1)47g,葡萄糖43g,浓缩菌液12g;2)生产性能:试验Ⅱ组比对照Ⅰ组的平均日采食量提高18.73%(P<0.05),平均日增重提高29.22%(P<0.05),料肉比降低8.16%(P<0.05);3)血清学检验指标:泡腾颗粒试验组血清中总蛋白含量、IgG含量比各对照组差异显著(P<0.05),其中试验Ⅱ组总蛋白含量比对照Ⅰ组增加18.20%,IgG含量比对照Ⅰ组增加13.58%。结果表明,试验确定泡腾颗粒最佳添加量为1500倍稀释饮水给药,效果显著。该研究为微生态制剂的新剂型提供新思路。

    2015年11期 v.35;No.227 1809-1813页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K]
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临床兽医学

  • 葎草醇提物对小鼠细菌性腹泻的治疗作用

    赵凯科;韩军艳;郑立;刘太宇;

    探讨葎草醇提物对金黄色葡萄球菌所致小鼠腹泻的治疗作用。金黄色葡萄球菌灌胃法制作小鼠腹泻模型,通过观察小鼠精神变化、体质量变化、DAI评分以及小肠病理切片变化的情况,评价葎草醇提物对小鼠的抗腹泻作用。高剂量治疗组与模型组相比,对小鼠精神恢复、体质量变化以及小肠绒毛恢复等均有明显的作用,高剂量组的治疗效果接近阳性对照组;高剂量治疗组和阳性对照组相对模型组体质量下降趋势明显降低,差异显著(P<0.05);与空白组相比,模型组DAI评分明显增加,差异显著(P<0.05)相对于模型组,高剂量组DAI、阳性治疗组DAI的评分明显降低,与空白组相比差异不显著(P>0.05),治疗效果显著,而中、低剂组DAI评分结果与空白组相比差异显著(P<0.05),治疗效果不明显。病理组织学观察,空白组小鼠小肠绒毛排列整齐,各层次结构清晰,绒毛间质无水肿、无小血管扩张充血,而模型组小鼠小肠绒毛排列紊乱,大部分绒毛脱落,绒毛表面有炎性渗出,绒毛间质水肿,小血管扩张、充盈。高剂量组和阳性对照组与模型组相比症状明显改变,小肠绒毛排列整齐,绒毛表面炎性渗出大部分消失,绒毛间质无明显水肿、无小血管扩张、充血,小肠结构与正常组织大致相同,治疗效果明显。葎草醇提物对小鼠腹泻有明显的治疗效果,可为细菌性腹泻的治疗提供理论依据。

    2015年11期 v.35;No.227 1814-1818+1823页 [查看摘要][在线阅读][下载 1136K]
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  • 黄芪水煎剂对免疫应激鸡血清ACTH和CORT含量及下丘脑CRH mRNA表达的影响

    姜晓文;姜龙;于文会;

    研究了黄芪水煎剂对实验性免疫应激鸡下丘脑血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量及促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA表达水平的影响。试验分为空白组、对照组和黄芪低、中、高剂量组。黄芪组于30日龄开始早晚2次口服黄芪水煎剂,给药剂量为低、中、高3组每天剂量分别为0.5、1、1.5g生药/只,连续7d。对照组、黄芪组于32日龄胸肌注射接种10×剂量的新城疫Ⅰ系疫苗(NDVⅠ),造成实验性免疫应激;空白组注射等量生理盐水。分别于免疫接种后的1、3、5、7、14、21d每组随机取8只鸡,进行心脏采血,取下丘脑。ELISA检测免疫应激后血清中ACTH和CORT含量;RT-PCR测定下丘脑CRH mRNA表达水平。结果显示,对照组注射大剂量新城疫Ⅰ系疫苗后,可引起血清中ACTH和CORT的含量和CRH mRNA的表达水平都显著升高,造成了实验性免疫应激。黄芪低剂量组对免疫应激的缓解作用不明显,而黄芪中、高剂量组对免疫应激有显著的缓解作用。结果表明,注射大剂量新城疫Ⅰ系疫苗可引起鸡的免疫应激,一定剂量的黄芪水煎剂可以缓解新城疫Ⅰ系疫苗引起的免疫应激。

    2015年11期 v.35;No.227 1819-1823页 [查看摘要][在线阅读][下载 653K]
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  • 不同佐剂对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌多价毒力因子疫苗免疫效果的影响

    杨岚;郝永清;潘海婷;何焱;黄海碧;

    为评价佐剂对金黄色葡萄球菌(S.aureus)CP8-FnBPB-ClfA免疫效果的影响,用纯化的S.aureus血清8型荚膜多糖与FnBPB-ClfA蛋白偶联的偶联物配合不同佐剂对健康成年新西兰大耳白母兔进行免疫接种,第1、2、3、4组的佐剂分别为弗氏佐剂、铝盐佐剂、脂质体佐剂及大肠杆菌不耐热肠毒素B(LTB),第5组为对照组用PBS免疫。用间接ELISA法和Western blot对各组兔血清中的抗体进行监测,评价体液免疫效果;通过检测Th1/Th2类细胞因子含量变化评价机体免疫被激活的程度;T淋巴细胞增殖试验评价细胞免疫,并对三免后2周的白兔进行攻毒保护试验。结果显示,以脂质体为佐剂的组7d时开始产生抗体,为产生抗体最早组,14d后抗体水平就开始下降;以LTB为佐剂的组抗体水平最高,持续时间最长。细胞免疫水平检测结果显示,经ConA刺激后,各组T淋巴细胞普遍增殖,无显著差异,刺激指数都在1.0左右;用抗原刺激的组中,以LTB为佐剂的组T淋巴细胞增殖能力最强,刺激指数为2.23,对白兔的攻毒保护率为80%。

    2015年11期 v.35;No.227 1824-1829+1839页 [查看摘要][在线阅读][下载 950K]
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  • 牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞EP_2受体mRNA表达的影响

    张婷婷;李培锋;何秀玲;

    为探讨TCDCA对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)EP2受体mRNA表达的影响,采用Elisa法测定AA模型大鼠FLS内cAMP的含量,以确定TCDCA作用于FLS的最佳药物浓度;采用RT-PCR法测定最佳TCDCA药物浓度对FLS中EP2受体mRNA的表达量。结果表明,PGE2刺激FLS后,FLS内cAMP的浓度和EP2受体mRNA的表达量均显著升高(P<0.05),而TCDCA(10-4~10-7 mol/L)能够显著降低PGE2(10-6mol/L)刺激的FLS内cAMP浓度(P<0.05),且存在剂量依赖性;TCDCA(10-5~10-7 mol/L)还能够显著降低EP2受体mRNA的表达量(P<0.05)。这表明TCDCA对PGE2-EP受体-cAMP信号通路产生影响,是其发挥抗关节炎作用的重要分子机制之一。

    2015年11期 v.35;No.227 1830-1834页 [查看摘要][在线阅读][下载 1125K]
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  • 酵母硒对蛋鸡生产性能、血清生化指标及常规蛋品质的影响

    李晓丽;何万领;位治国;文凤云;董淑丽;

    本试验旨在研究玉米-豆粕饲粮下添加不同水平酵母硒对蛋鸡生产性能、血清生化指标及常规蛋品质的影响。试验选用1 000只280日龄的海兰褐壳蛋鸡,随机分为5组,每组5个重复,每个重复40只,分别为基础饲粮组、0.1、0.2、0.3和0.4mg/kg酵母硒添加水平组,试验期40d。结果发现,与对照组相比,饲粮添加0.3~0.4mg/kg酵母硒可显著提高产蛋率和平均蛋质量(P<0.05),并显著降低料蛋比和破蛋率(P<0.05);与对照组相比,饲粮添加0.3~0.4mg/kg酵母硒分别提高了血清总蛋白(P<0.05)和降低了血糖含量(P<0.05),各酵母硒添加组均显著提高了血清无机磷(P<0.05)和钙(P<0.05)水平,且以0.3mg/kg添加组钙、磷水平最高;与对照组相比,各试验组均可显著改善蛋壳强度、蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色(P<0.05),且以0.3mg/kg酵母硒添加组蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位最高,但各试验组蛋形指数和蛋壳厚度与对照组差异不显著(P>0.05)。结果表明,蛋鸡饲粮中添加0.3mg/kg酵母硒效果最佳。

    2015年11期 v.35;No.227 1835-1839页 [查看摘要][在线阅读][下载 125K]
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  • 成年牦牛与黄牛肺内肺动脉结构组织和形态学比较分析

    周金星;余四九;何俊峰;崔燕;

    运用组织学研究方法,比较成年牦牛和平原黄牛肺动脉的结构组织和形态学差异,初步探讨成年牦牛肺动脉对低氧的适应性结构。结果表明,成年牦牛肺动脉管壁直径小于200μm时,仍含有较多的弹性纤维,在直径为50μm的肺动脉管壁中,仍存在1~2层完整的平滑肌。而成年黄牛其肺动脉管壁直径小于100μm时,其管壁中含有的弹性纤维比成年牦牛直径大小相似的肺动脉管壁中的弹性纤维少,平滑肌消失或呈月牙状分布,但外弹性膜完整。成年平原黄牛肺动脉血管中膜的MT值随管径的增加逐渐减小,成年牦牛肺动脉血管中膜MT值在管径为100~200μm时最大,然后逐渐减小。至肺门部时,其肺动脉血管中膜MT值接近相等,且差异不显著。因此,成年牦牛肺动脉含有的弹性纤维比成年平原黄牛多,该结构特点是成年牦牛在高原低氧环境下维持肺动脉较好射血功能的结构基础,此外,与成年黄牛比较可见,成年牦牛50μm直径的肺微动脉仍具有完整的平滑肌层,这一现象可能是牦牛在高原低氧环境下维持较好血流的结构基础。

    2015年11期 v.35;No.227 1840-1844+1862页 [查看摘要][在线阅读][下载 2875K]
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动物科学

  • 鸡NLRC5基因启动子多态性分析

    郭晓敏;刘向萍;常国斌;徐璐;马腾;王洪志;李志腾;陈静;万方;徐琪;陈国宏;

    为了研究NLRC5基因启动子区的SNP及其对启动子功能元件的影响,采用目标捕获测序和PCR产物直接测序的方法对27个鸡品种和2种细胞的NLRC5基因启动子区进行SNP检测,总共检测到37个SNP位点,其中斗鸡未发现SNP存在,SNP9存在于除斗鸡以外的其他鸡种和细胞。生物信息学软件预测得到NLRC5基因启动子区转录因子结合位点和CpG岛,SNP位点对转录因子结合位点和CpG岛大小均有影响,表明NLRC5启动子区SNP可能通过不同方式影响基因表达调控。

    2015年11期 v.35;No.227 1845-1849页 [查看摘要][在线阅读][下载 572K]
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  • 荷斯坦奶牛妊娠早期血浆差异蛋白质组学研究

    刘姗姗;陶金忠;武小虎;赵国顺;杨永新;赵兴绪;

    采用二维凝胶电泳(2-DE)结合MADIL-TOF-TOF串联质谱法对荷斯坦奶牛妊娠早期血浆进行蛋白质组学分析鉴定,发现了6种差异蛋白在妊娠后表达量上调,分别是凝集素1前体、转甲状腺素蛋白前体、3,5-二碘水杨酸络合的牛血清白蛋白的晶体结构的A链、白蛋白、未命名蛋白产物及结合珠蛋白-25同源物1前体。对这6种蛋白在不同时期含量的变化趋势及可能引起每种蛋白含量变化的原因和在妊娠过程中的功能进行了分析。

    2015年11期 v.35;No.227 1850-1855页 [查看摘要][在线阅读][下载 1075K]
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  • miR-141-3P和miR-346在对靶基因FSHR的识别与验证

    许橙;韩东旭;袁宝;张国梁;吴健;陈健;戴立胜;姜昊;高妍;张嘉保;

    为探索miRNA-141-3P和miRNA-346在大鼠腺垂体中的靶基因,并对其进行识别与验证。本研究利用PCR方法,根据Fshr(Rattus)3′UTR野生型载体序列信息设计突变引物将靶序列CAGTGTT(78-85)突变为GTCACAA和GGCAGAC(127-133)突变为CCGTCTG,以野生型载体为模板PCR扩增Fshr基因的3′UTR突变序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORTTM双荧光素酶报告载体中。由于miRNA是通过3′UTR区作用于靶基因,因此将miRNA与构建好的报告基因载体共转,通过报告基因相对荧光值的下调来印证miRNA与靶基因的相互作用。双荧光素酶报告基因表达分析显示,rno-miR-141-3p mimic对Fshr野生型载体的报告荧光没有明显下调作用;rnomiR-346mimic对Fshr野生型载体的报告荧光有明显下调作用,相应结合位点突变后,突变型载体中的报告荧光与野生型相比有所恢复;rno-miR-141-3p mimic和rno-miR-346mimic同时处理,对野生型载体的报告荧光有一定的下调作用。在体外,rno-miR-141-3p可能不能通过Fshr上相应的3UTR位点调控报告基因的表达;rno-miR-346有可能通过Fshr上相应的3′UTR位点调控报告基因的表达。本试验为FSHR的转录后调控研究提供了理论依据。

    2015年11期 v.35;No.227 1856-1862页 [查看摘要][在线阅读][下载 932K]
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  • 水牛卵母细胞成熟前后的差异蛋白质组的分析

    付强;刘振方;李敏玲;黄渝淋;梁贤威;张明;

    本试验以水牛卵母细胞为研究对象,通过基于双向电泳-质谱技术的蛋白质组学研究手段,鉴定卵母细胞成熟前后表达量存在变化的蛋白质并进行验证。通过优化方法建立水牛卵母细胞蛋白质双向电泳分离的技术体系,通过双向电泳(2-DE)获得成熟前后的卵母细胞蛋白质电泳图谱,软件分析得到差异表达蛋白质,对差异蛋白质进行飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,部分差异蛋白质合成抗体进行Western blot验证。结果表明,2组卵母细胞样品均获得约300个蛋白质斑点的双向电泳图谱。经ImageMaster软件比对分析,共发现在水牛卵母细胞成熟前后有27个差异蛋白质,其中表达上调15个,表达下调12个。将差异蛋白质斑点胶内酶解后用于MALDITOF/TOF飞行时间质谱鉴定,成功鉴定了6个蛋白质,包括主要穹窿蛋白(MVP)、热激蛋白60(HSP60)、Ras应答结合原件蛋白1(RREB1)等。Western blot结果表明,HSP60蛋白表达与双向电泳结果一致。本试验发现一批在卵母细胞成熟前后的差异表达蛋白质并进行表达量验证,推测HSP60蛋白可能在体外成熟时起到保护卵母细胞和物质转运的作用。

    2015年11期 v.35;No.227 1863-1867+1874页 [查看摘要][在线阅读][下载 953K]
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综述

  • 奶牛乳腺乳脂肪形成相关基因的遗传多态性

    王建发;沈冰蕾;武瑞;柳巨雄;

    牛奶营养品质低下已成为我国奶业健康发展所面临的严峻挑战。乳脂肪是决定牛奶营养品质的主要物质之一。调控乳腺内脂肪酸转运、从头合成、酯化和脂滴形成的相关基因的遗传多态性对乳脂肪的成分及含量具有重要影响。本文综述了这些基因的遗传多态性及其对乳脂肪生成的影响,旨在为明确奶牛乳腺脂肪酸形成调控网络提供理论基础和研究思路。

    2015年11期 v.35;No.227 1868-1874页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K]
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  • 母马生殖损失综合征研究现状及其在中国流行的可能性

    孙凌霜;张树;林志雄;鱼海琼;罗长保;李守军;

    母马生殖损失综合征(MRLS)是指由天幕毛虫相关因素引起的孕马早期胎儿流产(EFL)、晚期胎儿流产(LFL)、纤维素性心包炎(FP)和单侧葡萄膜炎(UU)等综合症状的疾病。2001年,美国首次报道该病,该病的暴发对美国养马业造成了巨大的经济损失。流行病学调查研究表明,母马生殖损失综合征在牧场间的传播与东方天幕毛虫(ETC)有关。其原因可能为:天幕毛虫毒素中毒并发细菌二次感染或天幕毛虫通过胃肠道黏膜进入血液导致菌血症,从而引发母马生殖损失综合征。在中国,天幕毛虫分布广泛,尤其是每年的春夏季节是天幕毛虫大量繁殖的季节。据大量报道表明,中国母马流产多发生在4~6月份天幕毛虫活动频繁的季节,而这些马流产病例中是否存在由天幕毛虫引起的母马生殖损失综合征尚未知。因此,我们对母马生殖流产综合征的流行现状以及临床症状的研究现状做了首次中文综述,希望对国内马流产的临床诊断、流行病学研究有所借鉴。

    2015年11期 v.35;No.227 1875-1879页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K]
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  • 猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展

    张飞;曹三杰;文心田;文翼平;冯彩峰;

    综述了近年来国内外在猪传染性胸膜肺炎的灭活疫苗、亚单位疫苗和基因工程疫苗(重组亚单位疫苗、重组核酸疫苗、活载体疫苗、基因缺失疫苗等)方面取得的研究进展,论述了不同疫苗的优缺点,旨在为猪传染性胸膜肺炎的防控和疫苗的研制提供思路。

    2015年11期 v.35;No.227 1880-1886页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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