预防兽医学

  • PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌的影响

    孔惟博;孙宏伟;梁志选;任少敏;刘芳宁;张玉珠;徐鹏;舒馨;赵建增;高英杰;

    本试验探讨PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌量的影响。选择已免疫CSFV弱毒疫苗的猪为实验动物,提取四肢长骨骨髓,进行T淋巴细胞的分离培养。分别在培养后的24、72 h,用PRRSV特异性肽N1、N2对所培养细胞进行刺激,再进行培养12 h,经离心方法得到细胞上清液,最终检测上清液中细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌含量变化。结果显示,PRRSV特异性肽-N对于免疫猪骨髓中IFN-γ的分泌影响较小,能够抑制IL-12的分泌,不利于机体免疫反应,对IL-10的分泌影响复杂,需进一步研究。

    2016年04期 v.36;No.232 549-552页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K]
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  • 猪伪狂犬病毒感染PK15细胞对细胞凋亡及相关凋亡因子的影响

    肖熹玉;邱先帅;张浩;任常宝;黄红亮;唐兆新;

    为研究PRV感染PK-15细胞对其细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,本试验采用体外细胞培养技术在不同时间点收集细胞、应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪测定细胞凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因caspase-3,Bcl-2,Bax和Bcl-xl的表达情况。结果显示,PRV感染24 h后可明显抑制细胞的增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著差异。流式细胞仪检测也显示PRV能明显提高其凋亡率,PT-PCR显示PRV感染后caspase-3,Bax表达量明显上调,Bcl-xl,Bcl-2表达量明显下调。结果表明,PRV在感染过程中对细胞的生长的影响与时间紧密联系,能够诱发细胞凋亡,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,caspase-3,起着重要的调控作用。

    2016年04期 v.36;No.232 553-557页 [查看摘要][在线阅读][下载 552K]
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  • 猪圆环病毒2型细胞毒(MNS株)的驯化及全基因组序列分析

    张伟;贺笋;潘晓梅;师小潇;李延涛;

    为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)与参考毒株之间在分子生物学水平上的差异以及病毒驯化过程中的遗传变异情况,将分离的猪圆环病毒2型MNS株在PK-15细胞上盲传35代,并对4个代次病毒全基因组进行测序与分析。间接免疫荧光试验结果表明,感染细胞的细胞核中可以观察到特异性绿色荧光。病毒传代驯化到第35代后,病毒对细胞的适应性显著提高,病毒含量最高可达107TCID50/m L。对4个代次接种病毒Z0、Z3、Z19、Z35进行全基因组测序,结果表明,4代次细胞毒与PCV2参考毒株之间的全基因组序列同源性为93.9%~96.3%,与参考株af55394(PCV2b)核苷酸同源性较高。4代次细胞毒之间全基因组序列同源性为99.7%~99.9%,通过分析PCV2全基因组中碱基突变结果,发现各代次细胞毒与参考毒株之间存在19处点突变,16处点突变发生在ORF1中,3处发生在ORF2中。其中,ORF1 751~753 nt处发生基因颠换(TACGC→TTTTG)现象。本研究结果对今后进行PCV2复制机制、遗传变异以及开发高效价的病毒灭活疫苗等方面的研究奠定了基础。

    2016年04期 v.36;No.232 558-562+578页 [查看摘要][在线阅读][下载 2324K]
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  • 秦岭大熊猫槽盘吸虫的鉴定与遗传进化分析

    宋军科;王正皓;王会宝;彭先启;王雪婷;任冠静;赵光辉;

    本研究旨在对采自大熊猫秦岭亚种(ailuropoda melanoleuca qinlingensis)小肠内的槽盘吸虫进行种类鉴定及遗传进化分析。通过形态学和分子生物学方法,对虫体样本分别进行染色显微镜观察和核糖体DNA内转录间隔区Ⅱ(ITS2)部分序列的PCR扩增和序列分析。经不同染色方法比较后,发现孔雀绿染色法处理后的虫体外部形态以及内部结构清晰,形态上符合印度槽盘吸虫(Ogmocotyle indica)的典型特征;序列及遗传进化分析表明,10个样本ITS2序列完全一致,其系统发生树显示10个样本与O.indica位于同一分枝。研究结果表明,分离的虫株从形态学和进化分析上均与印度槽盘吸虫具有高度一致性,提示该槽盘吸虫为印度槽盘吸虫。

    2016年04期 v.36;No.232 563-566页 [查看摘要][在线阅读][下载 528K]
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  • 双抗体夹心ELISA检测牛肠道病毒抗原方法的建立及流行病学调查

    邢泽黎;王新平;朱利塞;鲁海冰;郭昌明;盖小春;王明月;

    应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最佳包被量为0.75 g/100 L,酶标抗体的最佳稀释度为1∶3 600。对大量阴性粪便样品进行了检测及其统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测BEV的判定标准,样品D_(490)值≥0.143判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,所建立的检测BEV抗原方法具有特异、敏感和快速等特点。与RT-PCR方法相比,该方法操作简单快速,易在基层推广应用。对吉林省不同地区牛群粪便样品进行了检测,发现不同地区牛群的BEV感染率为8.16%~58.7%。本研究首次建立了检测BEV的双抗体夹心ELISA方法,为BEV感染的诊断、流行病学调查及本病防治提供了方法和理论依据。

    2016年04期 v.36;No.232 567-571页 [查看摘要][在线阅读][下载 583K]
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  • 羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

    安维雪;庞方圆;王艳杰;李旭东;苏日娜;李浩;张七斤;

    山羊痘和绵羊痘是由羊痘病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病。为了更快、更准确的诊断该病,本研究根据Gen Bank已经发表的GTPV和SPPV参考毒株(登录号分别为AY077836和AY077832)A29L基因序列,设计合成了1对特异性引物和2条Taq Man探针,同时制备重组质粒标准品。经过反应条件的优化,建立了羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法,对所建立的实时荧光定量PCR方法反应体系的特异性、灵敏性和重复性进行了评价,并用此方法对19份临床样品进行了检测。结果显示:该诊断方法与4种非羊痘病毒不发生交叉反应,并且山羊痘病毒和绵羊痘病毒之间也不发生交叉反应。该方法的重复性试验变异系数均低于2%,并且双重实时荧光定量PCR最低浓度检测限分别为470和440 fg。对标准阳性模板进行定量检测,生成的标准曲线相关系数分别为0.995和0.997。在检测的临床样品中,GTPV和SPPV阳性分别有14和4份,混合感染有1份。结果表明所建立的方法具有良好的特异性,灵敏性、稳定性,可以对GTPV和SPPV进行准确的定量检测。

    2016年04期 v.36;No.232 572-578页 [查看摘要][在线阅读][下载 1412K]
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  • 适应H_9亚型禽流感病毒增殖的重组R-MDCK细胞系的建立

    吴亚丽;宋玉慧;徐倩;潘梦梦;张剑;武志丹;李新生;

    克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒p IRES中,构建重组质粒p IRES-ST3GalⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染MDCK细胞,用G418抗性筛选稳定表达的重组细胞R-MDCK。PCR及RT-PCR鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将不同H_9亚型禽流感病毒毒株按相同滴度接种R-MDCK细胞和空白MDCK细胞,通过HA试验和TCID_(50)试验,检测不同H_9亚型禽流感病毒毒株在R-MDCK细胞上的增殖效果。结果发现,所有H_9亚型禽流感病毒毒株在RMDCK细胞HA和TCID_(50)结果均显著高于空白MDCK细胞。ST3GalⅠ基因在第12代R-MDCK细胞中仍能稳定表达,R-MDCK细胞可显著提升H_9亚型低致病性禽流感病毒培养的滴度,可以替代鸡胚用于H_9亚型低致病性禽流感病毒的生产。

    2016年04期 v.36;No.232 579-584页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K]
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  • 鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒免疫原性研究

    王炜;李芹;张平仄;刘新鑫;谢光耀;钱晶;薛聪;尹仁福;丁壮;

    对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLPs)的免疫原性进行了探讨,并将其与鸡传染性法氏囊病活疫苗进行比较。分别用VLPs及VLPs+Poly IC对14日龄非免鸡进行免疫,并用IBDV B87株弱毒商品疫苗作为阳性对照,同时设置空杆粒蛋白组作阴性对照及PBS对照。免疫前进行颈静脉采血,首免后每隔1周进行3次采血,通过间接ELISA抗体水平检测、中和试验和淋巴细胞增殖试验来进行分析比较。抗体水平检测结果显示,首免后第7天,在鸡的体内可检测到IBDV特异性抗体的组别为:VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组,且在加强免疫后,抗体水平明显增高(P<0.05)。首免后第14天,在3组鸡的体内均检测到高水平的抗IBDV中和抗体,且呈快速增长趋势。淋巴细胞增殖试验结果显示,VLPs组、VLPs+Poly IC组和B87株组鸡体内淋巴细胞增殖动态明显高于接种PBS和空杆粒蛋白组的鸡(P<0.01),并且在加强免疫后明显提高(P<0.05)。动物攻毒保护试验结果显示,攻毒后第2天PBS组和空杆粒蛋白组的鸡均表现出IBD的典型临床症状和病理变化且在攻毒后第6天全部死亡,VLPs组鸡的存活率为88.7%;VLPs+Poly IC组鸡存活率为80%;B87疫苗组鸡存活率为88.7%。器官指数分析结果显示,3组与空白组相比差异不显著(P>0.05)。本试验制备的鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗能够诱导机体产生较高水平的体液和细胞免疫应答,具有良好的应用前景。

    2016年04期 v.36;No.232 585-588+599页 [查看摘要][在线阅读][下载 491K]
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  • 表达NDV HN蛋白重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13的构建及生物学特性

    尚珂;程相朝;郁川;余祖华;张俊峰;毛福超;韩璐;韩于佩;刘文慧;陈桂华;

    利用平衡致死系统构建表达鸡新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)的减毒鸡白痢沙门菌活载体疫苗株。以p MD18-T-HN为模板,经PCR扩增出HN基因,定向插入原核表达载体p YA3493,构建重组质粒p YA-HN,再将其电转入减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasd C79-13中,获得重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasd C79-13(p YA-HN)。对重组菌的生化特性、生长特性、稳定性及安全性进行测定;并对重组菌表达的HN蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析。结果显示,该重组菌保留了在DAP阴性环境中的生存能力;不能利用麦芽糖、蔗糖及乳糖等碳源,但保留了利用葡萄糖的能力;其生长速度明显低于强毒株C79-13,而与ΔcrpΔasd C79-13相比变化不明显;在体外连续传代能稳定遗传HN基因片段;经SDS-PAGE出现1条蛋白质量约为63 000的蛋白条带;Western blot证明重组菌表达的HN蛋白能与NDV阳性血清特异性结合;雏鸡口服接种试验表明ΔcrpΔasd C79-13(p YA-HN)的毒力较强毒株C79-13下降183倍。上述结果表明,成功构建了能稳定表达NDV HN蛋白的口服重组减毒鸡白痢沙门菌,为开发鸡白痢—新城疫的基因工程口服疫苗奠定了初步基础。

    2016年04期 v.36;No.232 589-594页 [查看摘要][在线阅读][下载 567K]
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  • 半滑舌鳎皮肤溃疡病的病原分离鉴定与药物敏感性分析

    高桂生;张艳英;张召兴;吉志新;史秋梅;陈娟;高光平;赵欣欣;韩红升;宋青春;

    半滑舌鳎皮肤溃疡病是在半滑舌鳎养殖过程中经常出现的疾病。为确定该疾病的病原和筛选出有效地治疗药物,本研究从患皮肤溃疡病的半滑舌鳎病灶中分离到1株细菌。细菌形态观察、生化特性鉴定等试验结果表明,该菌为革兰阴性,呈弧形,单鞭毛;能产生接触酶、精氨酸双水解酶和氧化酶,V-P反应阳性,不产生吲哚,不能分解山梨醇和甘露醇;不能在42℃环境下生长。16s rRNA基因序列和系统发育树分析发现,该菌株序列与创伤弧菌同源性为100%。因此,证明该菌为创伤弧菌。同时,动物回归试验证明该菌有较强致病能力。药敏试验结果显示,该菌对痢特灵、氧氟沙星、氨曲南等敏感,对左氧氟沙星、卡那霉素、新霉素等耐药。

    2016年04期 v.36;No.232 595-599页 [查看摘要][在线阅读][下载 1335K]
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  • 重组α1-giardin减毒沙门菌口服DNA疫苗的构建与鉴定

    李瑶;张宏梅;时文艳;唐文琴;相明;冯宪敏;

    以贾第虫的c DNA作为模板,进行PCR扩增得到目的片段,克隆入p VAX1载体,构建重组质粒p VAX1-α1-giardin;以电击转化的方式转入减毒沙门菌株SL7207,构建重组沙门菌SL7207/p VAX1-α1-giardin;通过体外连续培养测定重组菌株的载体携带稳定性;30只清洁级雌性BALB/c小鼠,随机分为3组,每组10只,分别以1×106的SL7207/p VAX1-α-giardin、SL7207/p VAX1和无菌1×PBS(p H 7.0)口服免疫小鼠,8周后处死,检测各组小鼠肠系膜淋巴结中α1-giardin的表达及血清中和小肠灌洗液中特异性Ig G和SIg A的水平。结果表明,重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-α1-giardin连续培养168 h后,质粒携带率为90%;口服免疫小鼠8周后,SL7207/p VAX1-α1-Giardin免疫组,肠系膜淋巴结可见α1-Giardin的高表达,血清中特异性Ig G抗体水平和小肠灌洗液中特异性SIg A水平均明显增高,分别为PBS组的3.6(P<0.01)和5.7倍(P<0.01)。本研究尝试了以减毒沙门菌为载体携带α1-giardin DNA的抗贾第虫口服疫苗的构建及免疫试验,为进一步的疫苗保护性试验和制剂研究奠定了基础。

    2016年04期 v.36;No.232 600-603+612页 [查看摘要][在线阅读][下载 686K]
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  • 乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的表达

    范燕茹;王佩;金鑫;杨银凤;

    为了解不同乳酸杆菌的刺激对绵羊瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)的可能调节作用,本研究选用了2株具有益生作用的乳酸杆菌,即干酪乳杆菌Zhang(L.casei Zhang)和植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8),首先,运用实时荧光定量PCR技术(RT-q PCR)检测与乳酸杆菌共培养后的绵羊瘤胃上皮细胞中SBD-1mRNA的相对表达量;其次,探讨了2株乳酸杆菌诱导SBD-1 mRNA表达的差异性,选取优势菌株;最后,运用RTq PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法,检测优势菌株活菌、灭活菌及其培养上清液对SBD-1基因及蛋白水平表达的影响。结果表明:2株乳酸杆菌均能促进SBD-1 mRNA的相对表达量,乳酸杆菌的浓度为107CFU/m L、刺激细胞8 h时能极显著促进SBD-1 mRNA的相对表达量(P<0.01),而L.plantarum P-8强于L.casei Zhang;进一步的研究表明L.plantarum P-8的灭活菌亦可显著诱导SBD-1的基因及蛋白表达(P<0.05),但弱于活菌。本研究结果表明L.plantarum P-8和L.casei Zhang均可诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的差异性表达。

    2016年04期 v.36;No.232 604-612页 [查看摘要][在线阅读][下载 1609K]
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  • 柔嫩艾美耳球虫HMGB1基因的克隆与原核表达

    顾有方;李文超;靳二辉;胡倩倩;李升和;陈会良;

    高迁移率族蛋白是细胞"警报素"的一员,具有多样的生物学效应。本研究利用生物信息学技术从柔嫩艾美耳球虫转录组中鉴定到Et HMGB1基因序列,根据获得的基因序列设计引物,以柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊总RNA为模板,通过RT-PCR技术获得Et HMGB1基因,并构建p ET28a-Et HMGB1重组表达载体,进行原核表达。结果显示,Et HMGB1基因全长为432 bp,编码1段全长为143个氨基酸的多肽,该融合蛋白分子质量约为16 000,与预期分子质量一致。Et HMGB1基因的成功克隆和表达为该蛋白的功能研究奠定了基础。

    2016年04期 v.36;No.232 613-616页 [查看摘要][在线阅读][下载 974K]
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人兽共患病

  • H9N2亚型AIV福建分离株血凝素蛋白的特征

    万春和;黄瑜;

    H9N2亚型禽流感病毒(AIV)已在多个国家多种禽类中检测到,由于H9N2亚型AIV的低致病力特征,导致其在疫病防控中不被重视,目前该病在全世界范围内不断进化和流行。为明确H9N2亚型禽流感病毒(AIV)福建分离株血凝素基因编码蛋白的特征,丰富福建省H9N2亚型AIV分子流行病学信息。本研究通过选取NCBI数据库流感病毒资源库(influenza virus resource)中所有28株H9N2亚型AIV血凝素基因编码蛋白(仅选择有完整ORF毒株),其中鸡源22株和鸭源6株,通过分析其左侧结合域、右侧结合域和血凝素蛋白裂解位点的氨基酸特征,并通过和H9N2亚型AIV代表株来绘制相互之间遗传进化树。分析发现,28株H9N2亚型AIV福建株相互之间氨基酸同源性在90.5%~99.5%之间。从血凝素蛋白切割位点的氨基酸序列特征来看,所有H9N2亚型AIV血凝素裂解位点氨基酸序列均为非连续碱性氨基酸。血凝素蛋白切割位点为PARSSR↓GLF的毒株均处于H9N2亚型AIV的H9.4分支上H9 Y280分支的下部(H9.4.0分支、H9.4.1分支和H9.4.2分支),而血凝素蛋白切割位点为PSRSSR↓GLF的毒株均处于H9N2亚型AIV的H9.4分支上H9 Y280分支的上部(H9.4.3分支、H9.4.4分支、H9.4.5分支和H9.4.6分支),提示我们可根据H9N2亚型AIV血凝素裂解位点氨基酸序列特征,将我国H9N2亚型AIV分为2个大的基因亚群。对226位氨基酸位点研究发现,除5株鸭源H9N2亚型AIV早期分离株(A/Muscovy duck/Fujian/CL/1997、A/duck/Fujian/MH/2003、A/duck/Fujian/FQ107/2007、A/duck/Fujian/T7/2007和A/duck/Fujian/T14/2007)此处为Q,其他所有毒株均为L。该结果说明,鸡源H9N2亚型AIV在进化的过程中也可直接获得和人源受体结合位点能力,具有直接跨种感染的潜力。通过分析研究发现,福建地区H9N2亚型AIV基因亚群复杂,应加强对该区域H9N2亚型AIV的分子流行病学调查和生物学特性研究。

    2016年04期 v.36;No.232 617-622页 [查看摘要][在线阅读][下载 571K]
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  • 新疆油鸡H9N2亚型禽流感病毒分离株HA和NA基因的克隆及进化生物信息分析

    武军元;康强;

    为了从分子水平上掌握新疆油鸡H9亚型禽流感病毒的遗传进化情况,本研究采用RT-PCR技术克隆并测序分离毒株的HA和NA基因,并对其分子特征及全基因序列进行遗传进化分析。结果显示,新疆油鸡分离株的HA和NA基因均属于欧亚分支中的A/CK/BJ/94谱系,HA基因与A/CK/BJ/94在核苷酸和氨基酸水平的同源性依次为90.2%和91.9%,NA基因与A/CK/BJ/94在核苷酸和氨基酸水平的同源性依次为89.3%和90%。分离毒株HA基因的裂解位点为-PSRSSR/G-,符合低致病性AIV的序列特征,HA基因具有人样受体结合的特征(Leu~(234))。HA基因在313位发生突变,比同一谱系的BJ/1/94多1个糖基化位点,NA基因在44位发生突变,比同一谱系的BJ/1/94在该位点多1个糖基化位点,NA基因在3个红细胞吸附区域发生多处突变。试验结果为从分子水平上研究H9N2亚型禽流感病毒跨种传播的机制提供了理论依据。

    2016年04期 v.36;No.232 623-629页 [查看摘要][在线阅读][下载 1180K]
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基础兽医学

  • 猪补体C5a蛋白表达、纯化和生物学活性检测

    陈漫;李志萍;王习文;王园园;董晓琳;高玮村;李博;李乾学;夏志平;

    参照NCBI中公布的猪补体C5a蛋白氨基酸序列及猪C5蛋白的全基因序列,通过生物信息学分析获得猪C5a蛋白基因全长,为222 bp,该序列定向插入原核表达载体p ET-28a中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE和Western-blotting检测分析表明,C5a基因获得表达,重组蛋白大小为10 000。利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化后,体外细胞试验测定重组C5a蛋白生物学活性。结果显示,成功构建了p ET-28a-C5a重组质粒,纯化获得目的蛋白纯度达到90%以上,质量浓度为2.5 g/L。细胞试验检测到C5a具有趋化和诱导中性粒细胞的活性。本研究为揭示猪C5a参与炎症过程的作用机制及制备C5a拮抗剂奠定了基础。

    2016年04期 v.36;No.232 630-634页 [查看摘要][在线阅读][下载 676K]
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  • 缝隙连接蛋白43对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响

    于海帆;郭传辉;李当当;成文革;杨占清;郭斌;岳占碰;

    缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)是缝隙连接蛋白家族成员之一,广泛存在于哺乳动物器官和组织中,参与细胞增殖、分化、凋亡等生理过程。本试验参照Gen Bank中已发表的Cx43基因序列,设计特异性引物,进行PCR扩增。为了提高构建过表达重组质粒的效率,PCR产物先与p GEM-T载体进行连接,经双酶切后与pc DNA3.1载体融合得到过表达重组质粒,经双酶切和测序鉴定后将其转染到体外分离培养的小鼠子宫基质细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)方法检测Cx43 mRNA表达变化及Cx43过表达对蜕膜化标志性分子表达的影响。结果表明,与空载体转染组相比,重组质粒pc DNA3.1-Cx43转染子宫基质细胞后可使小鼠子宫基质细胞Cx43 mRNA的表达量显著升高,同时Cx43过表达可使子宫基质细胞蜕膜化标志性分子Prl8a2和Prl3c1 mRNA的表达量均显著升高,表明Cx43可促进小鼠子宫基质细胞发生蜕膜化。

    2016年04期 v.36;No.232 635-639页 [查看摘要][在线阅读][下载 587K]
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  • NPY对LPS诱导的BV-2细胞系iNOS和COX-2表达的影响

    黄炳旭;杨东雪;曾亚龙;李苏楠;王玮;付守鹏;柳巨雄;

    通过观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞促炎酶类表达的影响,以期探讨NPY在神经系统炎症的发生发展中的作用。首先利用MTT法检测NPY对BV-2细胞活性的影响,从而确定作用浓度。然后,利用荧光定量PCR和蛋白质印迹法,分别检测NPY对LPS诱导的BV-2细胞中一氧化氮合酶(i NOS)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。其次,添加NPY受体阻断剂后,观测对NPY效应的影响。结果显示1~1 000 nmol/L的NPY对BV-2无细胞毒作用;NPY预处理1 h后LPS刺激6 h,NPY+LPS组BV-2细胞中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量显著低于LPS组;BV-2细胞系上检测到Y1受体、Y2受体、Y4受体和Y5受体的存在;加入Y1受体阻断剂后,对样品中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量进行检测,发现NPY的抑炎作用消失。结果表明,NPY通过作用于Y1受体抑制LPS诱导的促炎酶类表达。

    2016年04期 v.36;No.232 640-645页 [查看摘要][在线阅读][下载 1080K]
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临床兽医学

  • 雁门关地区奶牛子宫内膜炎病原菌分离鉴定及其致病性

    戴浩楠;石慧;郑明学;王仲兵;马海利;韩克光;古少鹏;白瑞;

    为给黄土高原舍饲养殖场科学防治奶牛子宫内膜炎提供理论依据,对该地区2市4县13个规模奶牛场和5个自然村,共77头患子宫内膜炎的奶牛子宫分泌物进行细菌分离鉴定,并对致病性不明的主要分离菌进行了大鼠子宫致病性试验。结果分离鉴定出12个菌属、23个菌种、108株细菌,主要细菌为芽孢杆菌(30.56%)、大肠埃希菌(14.81%)、肠球菌(12.96%)、葡萄球菌(9.26%)、乏养球菌(9.26%)、链球菌(6.48%)等;对主要分离菌的致病性研究发现除缺陷乏养球菌外,凝结芽孢杆菌、大肠杆菌(O20)、屎肠球菌等均可引起子宫内膜炎。表明引起该地区奶牛子宫内膜炎的致病菌主要为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、化脓链球菌、不动杆菌、凝结芽孢杆菌、大肠杆菌(O20)、屎肠球菌,可为有效治疗本地区奶牛子宫内膜炎提供可靠的理论基础。

    2016年04期 v.36;No.232 646-649+660页 [查看摘要][在线阅读][下载 133K]
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  • 钼镉联合诱导对麻鸭白细胞免疫功能及脾脏MT基因mRNA表达的影响

    夏冰;熊金;张彩英;曹华斌;胡国良;罗军荣;郭小权;宗益波;

    探讨钼镉联合诱导对麻鸭白细胞免疫功能及脾脏MT基因mRNA表达的影响。挑选360只11日龄健康"江南2号"麻鸭随机分为对照组、低钼组、高钼组、镉组、低钼镉组和高钼镉组。对照组喂基础日粮,试验组在每公斤基础日粮中添加钼、镉分别为:低钼15 mg、高钼100 mg、镉4 mg、低钼15 mg+镉4 mg和高钼100 mg+镉4 mg,以(NH_4)_6Mo_7O_(24)·4H_2O和3Cd SO_4·8H_2O作为钼源和镉源,试验期120 d。结果表明,与对照组比较,第120天脾脏指数和白细胞数高钼镉组显著降低(P<0.05);粒细胞比率:第90、120天,除低钼组外,其余各组显著升高(P<0.05或P<0.01);淋巴细胞比率:第90、120天钼镉联合组极显著降低(P<0.01);中间细胞比率先显著升高后显著降低;并且这些变化趋势,钼镉联合组比钼镉单独组更加明显。MT mRNA表达量:第60,120天,除低钼组外,其余各组显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结果显示:钼镉联合诱导可影响麻鸭脾脏的生长发育和白细胞免疫功能,上调脾脏MT mRNA表达量,钼镉呈协同关系。

    2016年04期 v.36;No.232 650-654页 [查看摘要][在线阅读][下载 165K]
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  • 日粮添加不同水平谷氨酰胺对幼龄獭兔免疫性能及回肠黏蛋白基因表达的影响

    高玉琪;任战军;胡志刚;建子龙;陈慧玲;宋冰;

    旨在探究日粮添加不同水平的谷氨酰胺对断奶后2个阶段幼龄獭兔免疫器官指数、血清免疫球蛋白(Ig G,Ig A,Ig M)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量及回肠黏蛋白基因表达量的影响。选取35日龄断奶獭兔240只,随机分成6组,每组40个重复,每个重复1只獭兔,分别饲喂添加谷氨酰胺0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%和2.0%的日粮。在正式试验第30天(第I阶段末)和第60天(第II阶段末)时每组随机抽取6只进行采样分析。结果显示日粮添加谷氨酰胺可显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高I、II 2个阶段幼龄獭兔免疫器官指数、血清Ig A及GSH含量,且具有一定剂量依赖性。对血清Ig M含量影响不显著(P>0.05),Ig G含量极显著降低(P<0.01)。第I阶段对照组回肠黏膜MUC1和MUC2表达量异常高于各试验组,第II阶段MUC1基因的表达量随谷氨酰胺添加量在一定范围内极显著上升(P<0.01),对MUC2无显著影响(P>0.05)。结果表明,日粮添加谷氨酰胺可明显提高幼龄獭兔的免疫性能,增强回肠黏膜免疫力,且不同阶段的幼龄獭兔对谷氨酰胺的需求量有所差异,以应激较强的第I阶段需求较高,为1.6%,第II阶段降至0.8%。

    2016年04期 v.36;No.232 655-660页 [查看摘要][在线阅读][下载 402K]
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动物科学

  • BMP2和BMP4基因在草原红牛睾丸组织中的表达量分析

    秦立红;张国梁;吴健;李旭;刘基伟;王蕾;赵玉民;赵志辉;

    采用实时荧光定量PCR技术检测BMP2和BMP4基因在草原红牛1,12,18,30月龄4个发育阶段睾丸组织中的mRNA表达水平。旨在探讨该基因在草原红牛睾丸不同发育阶段的表达情况。结果表明:BMP2和BMP4基因在所检测的肉牛4个发育阶段睾丸组织中均有表达。BMP4基因1月龄表达量显著低于12,18,30月龄(P<0.05),12月龄表达量最高,随着月龄增加,表达量减少。而BMP2基因在出生阶段表达量最低,但是与其他3个阶段差异不显著(P>0.05),基因表达趋势也是12月龄表达量最高,然后随着月龄增加,表达量减少。

    2016年04期 v.36;No.232 661-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • IGLL1基因在奶牛乳腺组织中的表达量差异分析

    赵尧璐;王瑜;崔志倩;刘鑫;于海滨;于仙忠;郭鹏程;赵志辉;芦春艳;

    免疫球蛋白λ多肽1(immunoglobulin lambda-like polypeptide 1,IGLL1)是一种具有编码蛋白质特性的基因,位于17号染色体上。通过本实验室前期的奶牛乳腺组织转录组测序研究表明,IGLL1基因可能对奶牛乳脂的合成代谢产生影响。本试验以中国荷斯坦奶牛乳腺组织为研究对象,选取3头高脂中国荷斯坦奶牛,3头低脂中国荷斯坦奶牛的乳腺组织提取RNA并反转录为c DNA,进行RT-PCR,并对数据进行统计分析,研究IGLL1基因在奶牛乳腺组织中的表达差异。结果显示,该基因在高脂奶牛及低脂奶牛的乳腺组织中均有表达,且高脂奶牛的乳腺组织中的表达量显著高于低脂奶牛的表达量(P=0.037<0.05)。研究表明,IGLL1基因可能对中国荷斯坦奶牛的乳脂的合成或代谢产生影响。该研究为奶牛的优良品种选育提供了试验基础。

    2016年04期 v.36;No.232 665-668页 [查看摘要][在线阅读][下载 561K]
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  • 高原牦牛睾丸组织VEGF及其受体的增龄性分布特点

    陈国娟;袁莉刚;李聪;闫振龙;

    探索VEGF及其受体(VEGFR2)在不同年龄牦牛睾丸的分布特点。应用免疫组织化学SP法检测VEGF及其受体(VEGFR2)分布特征并通过IPP图像分析软件进行定量统计。免疫组织化学显示,不同年龄段牦牛睾丸中,VEGF表达于各级生精细胞以及Sertoli细胞和Leydig细胞,强表达于长形精子,小血管内皮细胞见强阳性表达,肌样细胞未见表达;其受体VEGFR2表达于各级生精细胞及Sertoli细胞,且Leydig细胞内强表达,小血管弱表达;牦牛幼龄期至性成熟期,睾丸中VEGF表达量呈明显上升趋势(P<0.05),性成熟期达到最高水平,进入老龄期后表达量明显下降(P<0.05);其受体VEGFR2表达量性成熟前期最高,进入老龄期下降不明显。因此,牦牛睾丸中VEGF及其受体随年龄增加存在差异性表达,幼龄期随增加明显,性成熟期趋于稳定,老龄后下降显著,提示其可能参与调节牦牛生后睾丸发育的各个阶段,且与高原牦牛睾丸血管发育,生精及其低氧适应具有一定的关系。

    2016年04期 v.36;No.232 669-674页 [查看摘要][在线阅读][下载 5273K]
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  • 东北民猪线粒体DNA D-loop遗传多样性与母系起源研究

    陆超;郝林琳;程云云;吴庆燕;李思明;付昊雨;刘娣;于浩;

    为了保护东北民猪的遗传资源,对东北地区民猪群体进行线粒体DNA D-loop遗传多样性进行了调查,本研究对30头东北民猪的线粒体D-loop区部分序列(697 bp)进行扩增和测序,共检测到7个变异位点,界定了8种单倍型,核苷酸多样度(Pi)及单倍型多样度(H)分别为:0.217和0.789。结合已收录的30个亚欧猪种的线粒体D-loop序列,采用最大似然法构建的分子进化树明显分为欧洲与亚洲2个主要类群,民猪的8个单倍型都聚在亚洲分支上,并与莱芜黑猪及沂蒙黑猪较为接近,表明民猪是多母系起源群体,主要来自山东地区的华北型黑猪种群。

    2016年04期 v.36;No.232 675-678页 [查看摘要][在线阅读][下载 610K]
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  • PRDM14基因在猪早期胚胎和主要器官中的表达

    王雨田;侯蟏逍;张学明;李子义;唐博;

    PRDM14是一种具有调控基因表达功能的转录因子,在早期胚胎发育过程中可以促进多能性基因或抑制分化基因的表达,从而影响到整个生命体的发育进程。为了研究转录因子PRDM家族中PRDM14基因在猪早期胚胎过程中的表达变化以及在新生仔猪主要器官中的表达差异,本试验以猪为研究对象,首先利用预测序列设计引物,通过序列比确定基因,然后利用荧光定量PCR等技术,对PRDM14基因在猪早期胚胎各时期及新生仔猪主要器官中的表达进行了研究。结果表明:PRDM14基因在卵母细胞MⅡ期表达较高,经过孤雌活化后,在2细胞阶段有所下降,之后随发育表达逐渐升高,而在囊胚阶段又有所降低。在新生仔猪主要器官,睾丸和卵巢中表达较高,在其他器官表达较低。结果表明,PRDM14基因在猪早期胚胎及生殖器官发育方面发挥重要作用。

    2016年04期 v.36;No.232 679-683页 [查看摘要][在线阅读][下载 2447K]
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  • 叶酸对猪卵母细胞体外成熟的影响

    张华智;王彩玲;李孟琪;魏巍;陆阳清;杨小淦;许惠艳;卢晟盛;卢克焕;

    将体外收集的猪卵母细胞随机分成对照组和试验组(0、1、10、50μg/L),研究叶酸对猪卵母细胞GVBD率、成熟率和孤雌激活发育潜能的影响。结果表明,10μg/L叶酸能有效的促进GVBD发生、成熟率和激活胚的发育能力,与对照组相比具有上升趋势,其中成熟率显著提高(P<0.05)。当叶酸质量浓度为50μg/L时,GVBD率、成熟率和激活胚的发育能力呈下降趋势,其中GVBD率(P<0.05)和成熟率(P<0.01)显著低于其他处理组。综上所述,叶酸能提高猪卵母细胞体外成熟效果,在本研究中以添加10μg/L叶酸效果最明显。

    2016年04期 v.36;No.232 684-686+693页 [查看摘要][在线阅读][下载 127K]
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综述

  • 2007—2014年国内外小反刍兽疫流行现状及分析

    吴锦艳;尚佑军;田宏;陈妍;王光祥;栾志舫;张志东;

    小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起山羊、绵羊、野生反刍动物及骆驼的一种急性、亚急性高度接触性传染病。自2007年小反刍兽疫作为外来动物疫病传入我国以来,在国务院、农业部和国家有关部委的密切关注和大力支持下,使疫情的流行蔓延趋势得到有效控制。但是到了2013年年底,小反刍兽疫风波再次掀起,而且波及面积也逐步扩大,截至2014年6月,疫情已蔓延近20多个省份,严重影响我国国际贸易和经济发展。本文就近几年以及目前国内外小反刍兽疫流行现状进行整理并加以分析,以期为我国小反刍兽疫防控提供参考。

    2016年04期 v.36;No.232 687-693页 [查看摘要][在线阅读][下载 867K]
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  • Hobi样病毒研究进展

    王建昌;王金凤;刘立兵;

    Hobi样病毒(Hobi-like virus)是一种可感染牛的新病毒,2004年其遗传学和抗原特征被首次确认,将之归入黄病毒科,瘟病毒属。该病毒主要在胎牛血清、牛源细胞系中检测到,同时在临床自然发病动物中也不断被检测并分离到。目前研究表明Hobi样病毒主要分布于南美、欧洲和亚洲,并且在南美和亚洲某些地区呈地方流行性分布。Hobi样病毒的宿主范围目前尚不明确,牛、绵羊等反刍动物感染后出现明显的临床症状并向外排毒;猪感染后仅表现轻微的抗体滴度上升,没有任何临床症状。牛感染Hobi样病毒后的症状同牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染相似,主要表现为腹泻,部分出现呼吸系统症状、繁殖障碍和出血性综合征等。BVDV疫苗能够诱导产生针对Hobi样病毒的免疫抗体,但是不足以提供有效的保护力。目前检测BVDV的方法不能有效检测Hobi样病毒或者无法区分BVDV和Hobi样病毒。当前已经建立了针对Hobi样病毒的特异性荧光RT-PCR检测方法,将为该病毒的流行病学调查奠定坚实的基础,进而对反刍动物瘟病毒的防控和清除,以及疫苗等生物制品的生物安全的保障具有十分重要的意义。

    2016年04期 v.36;No.232 694-700页 [查看摘要][在线阅读][下载 1090K]
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