- 呼高伟;余婉婷;朱哲;王占锋;邹亚文;王乃东;王爱兵;邓治邦;杨毅;
以pFastBac I为载体骨架,通过PCR从pcDNA3.3-TOPO载体引入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV3.3)强启动子及不同功能调控元件,构建成含有双启动子,能在PK15细胞(porcine kidney cell)中表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的昆虫杆状病毒转移(穿梭)载体pFastBac I-CMV3.3-eGFP。收获重组杆状病毒,侵染PK15细胞。倒置荧光显微镜下验证该重组转移载体构建成功,根据荧光水平筛选出重组杆状病毒侵染PK15细胞的最佳MOI(multiplicity of infection)和最佳表达强度时间。另将PRRSV(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)GP5蛋白基因克隆到pFastBac I-CMV3.3载体。获得的重组杆状病毒以MOI=100侵染PK15细胞48h后收获细胞产物。Western blot鉴定目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了重组杆状病毒介导PRRSV GP5蛋白在PK15细胞表达系统。因此,建立的重组杆状病毒在PK15细胞中高效表达GP5蛋白的方法,将为研究PRRSV吸附机制,GP5蛋白与宿主细胞互作蛋白的筛选和针对PRRSV基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。
2016年05期 v.36;No.233 701-706页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 郭晓庆;郑兰兰;付朋飞;杨兴武;乔涵;朱前磊;王淑娟;陈红英;
为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒PGO18株与亲本株猪伪狂犬病病毒HB98具有相似的培养特性和生长特性,在ST、VERO和IBRS-2细胞上的增殖滴度TCID50与亲本株(107.75/0.1mL)相当,遗传稳定性良好,安全性试验表明对小鼠是安全的;理化特性试验说明该病毒具有猪伪狂犬病病毒的通性。
2016年05期 v.36;No.233 707-711+717页 [查看摘要][在线阅读][下载 271K] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 孔娜;
为了制备禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)基因工程亚单位疫苗,将其HA1基因和鸡IL-18成熟蛋白基因(mChIL-18)分别或先后插入到双表达载体pFastBacTM Dual中,表达单表达或双表达蛋白pHA1、pIL18和pHA1-IL18。将表达蛋白和/或禽流感二价(H5+H7)灭活疫苗通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄SPF鸡,2周后加强免疫1次。结果显示,pHA1-IL18、pHA1+pIL18、pIL18+禽流感疫苗、禽流感疫苗和pHA1免疫雏鸡后均能促进CD4+T、CD8+T细胞的增殖和抗体水平的增加,且pHA1-IL18免疫组要优于pHA1+pIL18混合免疫组及其他免疫组和对照组,差异显著(P<0.05)。结果表明,pHA1-IL18可以产生比pIL18+pHA1更强的免疫原性,为新型疫苗的研制奠定基础。
2016年05期 v.36;No.233 712-717页 [查看摘要][在线阅读][下载 336K] [下载次数：57 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 赵立媛;李秀丽;刁有祥;路云建;窦砚国;冯柳柳;
为研究樱桃谷雏鸭感染坦布苏病毒后的潜伏期、排毒规律及病毒在血液、组织中载量的变化,本试验将110只10日龄健康樱桃谷雏鸭分为3组,其中,静脉接种组70只,点眼滴鼻组及自然感染组各20只。经静脉、点眼滴鼻分别接种坦布苏病毒SDLY株,每只3.5mL病毒尿囊液(3.11×10~(-3) EID_(50)/只),自然感染组不接种病毒,与静脉接种组混养。接种后,每隔2d采集泄殖腔棉试子和血液,并随机剖杀3只,应用建立的荧光定量PCR检测病毒的排毒规律及在血液、组织中载量的变化。结果显示,3个组的樱桃谷雏鸭感染坦布苏病毒的潜伏期均一致,平均为24h;樱桃谷雏鸭在接种病毒后的1~25d均可排毒,感染后5d出现排毒高峰,其次为11、17d出现2个小排毒高峰,自然感染组出现高峰的时间比静脉及点眼滴鼻组晚2d;静脉接种组病毒在血液内的载量较其他2组明显低,高峰出现在感染后7、19d,点眼滴鼻组高峰同静脉接种组一致,出现在感染后7、19d,自然感染组血液中的病毒载量高峰出现在感染后9、21d;组织中病毒载量较高的器官有脑、胸腺、法氏囊、胰腺、心脏,其均在感染后5d出现先升高后又降低,并在13d左右升至高峰。研究表明,坦布苏病毒对樱桃谷雏鸭的感染能力较强,潜伏期短,病毒可通过泄殖腔向外界排毒,排毒时间较长,病毒随血液循环迅速侵入各组织器官。
2016年05期 v.36;No.233 718-722页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：230 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：1 ] - 林少莉;杨蕾;张瑞华;陈君豪;王鑫;夏琳琳;谢之景;姜世金;
为研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)在雏鸭体内的动态分布情况,本研究建立了检测DHAV-3的Taqman荧光定量PCR方法,该方法在107~102范围内有良好的线性关系,相关系数0.997,检测下限为22copies/PCR。将200只2日龄雏鸭随机分为4组,依次对每组雏鸭肌肉注射0.2ELD_(50)、2ELD_(50)、20ELD50的DHAV-3(SD1201株)和生理盐水,并于感染后1、2、6、12、18、24、36、48、72、96h从各组分别随机取3只雏鸭,应用荧光定量PCR方法对其心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、法氏囊的病毒含量进行检测。结果表明,DHAV-3于感染后1h即可在3个试验组雏鸭肝脏中检测到,病毒含量为102~103 copies/g,2h后在心脏、脾脏、肾脏、胸腺和法氏囊中均检测到该病毒。各器官中的病毒含量于感染后36~48h达到高峰期,至72h病毒含量仍维持稳定。此外,在整个感染过程中,被检器官中的病毒含量与初始感染剂量呈正相关。本研究结果有助于阐明DHAV-3的致病机理。
2016年05期 v.36;No.233 723-727+733页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 盖小春;王新平;邢泽黎;朱利塞;鲁海冰;王明月;张群;刘丹;
应用表达纯化的E种肠道病毒HY12VP2重组蛋白作为包被抗原,建立了检测E种肠道病毒抗体的间接ELISA方法,并对实验感染小鼠抗体消长规律进行了研究。结果表明,VP2抗原最适包被浓度为300ng/孔,抗原包被最佳条件为37℃60min;封闭条件为5%脱脂奶粉37℃封闭60min;HRP酶标二抗最适稀释度为3 000×,最佳感作条件37℃90min。通过测定阴性小鼠血清样品,确定阴性和阳性血清临界值判定标准为0.091 2。与病毒中和试验相比,间接ELISA方法敏感性高,特异性强。统计学分析显示,阳性血清和阴性血清样品板内变异系数分别为3.8%和5.2%;板间阳性和阴性样品检测百分率变异系数分别为4%和4.3%,具有良好的重复性。小鼠感染病毒1周后开始产生抗体,随后抗体滴度逐渐增加,至感染6周时,抗体滴度达到峰值,之后逐渐下降。小鼠实验感染病毒抗体消长规律为本病的免疫机理和疫苗研制打下基础。
2016年05期 v.36;No.233 728-733页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 王建科;刘辉哲;林鹏;赵航;程悦宁;张淼;郭利;朱洪伟;武华;程世鹏;
为了更好的了解我国东北地区犬细小病毒的流行情况,采用F81细胞从来自长春某宠物医院疑似患有肠炎的犬粪便样品中分离出1株病毒,经形态学、血清学、动物回归试验和分子生物学鉴定,分离的病毒为犬细小病毒new CPV-2b型,命名为CPV JL13-1。对该病毒主要结构蛋白VP2基因进行克隆测序和基因进化分析表明,CPV JL13-1分离株VP2基因与GenBank上提交的其他41株犬细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为98.6%~99.5%和97.6%~99.5%,其中核苷酸和氨基酸同源性最高的均为B-2004株。本研究为犬细小病毒分子流行病学调查和疫苗的研究奠定基础。
2016年05期 v.36;No.233 734-738页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K] [下载次数：334 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：1 ] - 龙雨清;李萌;张东超;弓建芳;李小慧;高珂珂;金天明;
选择新城疫病毒(NDV)的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因作为黑色素瘤的治疗基因。将小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)启动子、小鼠黑色素瘤酪氨酸酶(Tyr)特异性启动子核心片段以及HN基因分别插入到腺病毒载体穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-2的多克隆位点处,将克隆成功的穿梭载体经Pme I线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183感受态细胞中进行同源重组,成功构建了肿瘤特异性和组织特异性双启动子调控的HN基因的重组腺病毒载体pAd-mTERTp-mTyrp-HN。将重组腺病毒通过脂质体法转染HEK 293细胞,经RT-PCR鉴定及Western-blotting对HN蛋白的表达水平分析后,大量扩增病毒,经CSCl密度梯度超速离心法纯化病毒颗粒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒Ad-HN、Ad-mTERTp-HN、Ad-Tyrp-HN、Ad-mTERTp-TyrpHN和Ad-GFP的最终滴度分别为108.7、109.5、109.25、109.625和109.125,将为下一步利用该重组腺病毒在体内外诱导小鼠黑色素瘤细胞系B16的凋亡及研制动物肿瘤性疾病的基因疫苗提供了理论依据。
2016年05期 v.36;No.233 739-745页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 宫鹏娟;张蕾;夏翡翡;程梦珺;胡丽媛;孙长江;冯新;顾敬敏;韩文瑜;
噬菌体疗法在对杭多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。以耐万古霉素的屎肠球菌4P-SA为宿主菌分离筛选到一株烈性噬菌体,命名为m5。该噬菌体对不同的温度和pH值表现出稳定性,氯仿和乙醚不影响m5的感染能力。根据电镜观察到的形态特征表明m5属于有尾病毒目、长尾病毒科。噬菌体m5在体外对4P-SA具有强裂解作用;在体内,腹腔注射噬菌体m5 2.0×107 PFU即可有效保护菌血症状态的小鼠模型。本研究为利用噬菌体治疗多重耐药屎肠球菌感染奠定了基础。
2016年05期 v.36;No.233 746-749+762页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K] [下载次数：294 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 童桂香;吴建坤;吴祥庆;黎小正;黄国秋;陈静;周靓婧;韦信贤;
从患病山瑞鳖的肝脏和肺脏分离纯化到1株革兰阴性杆菌GX120222,经细菌培养特性观察和VITEK 2compact全自动微生物鉴定系统对理化特性进行鉴定,结果与肺炎克雷伯菌肺炎亚种(Klebsiella pneumoniae ss pneumonia)特征相符;将该菌16SrRNA基因序列(KP091888)与GenBank中的序列进行BLAST比对并构建系统发育树,结果表明其与肺炎克雷伯菌的16SrRNA基因序列同源性最高(100%),在系统发育树上与肺炎克雷伯菌肺炎亚种的菌株聚为一簇,且与肺炎克雷伯菌肺炎亚种标准菌株ATCC43816KPPR1(CP009208)的亲缘关系最近,进一步确定菌株GX120222为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。人工感染试验结果显示,该菌对供试的山瑞鳖有较强致病性,半数致死量(LD50)为3.8×10~7 CFU/mL;药敏试验显示,GX120222对头孢西叮、舒普深和阿米卡星敏感,对特治星中度敏感,对所测的其他26种抗菌素耐药。上述结果表明,肺炎克雷伯菌GX120222是导致此次山瑞鳖发病死亡的病原菌,且具有多重耐药性。
2016年05期 v.36;No.233 750-755页 [查看摘要][在线阅读][下载 187K] [下载次数：166 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：2 ] - 吴燕;王琦;周碧君;文明;王开功;袁海文;程振涛;
为探讨绵羊肺炎支原体贵州流行株P113蛋白基因分子特征,对Mo Y98标准株和Mo贵州流行株(GZ-CS1株、GZ-QX1株)P113基因进行克隆与测序,应用生物信息学软件对测序序列进行变异性、同源性及系统进化关系分析。结果显示,Mo贵州株(GZ-QX1、GZ-CS1)与Y98标准株P113基因全长分别为3 240、3 141和3 240bp;推导氨基酸序列比较显示Mo GZ-QX1株与Y98株高度相似,仅存在2个位点差异;GZ-CS1株与Y98株相比,P113蛋白存在27个点突变,缺失41个氨基酸;GZ-QX1株和GZ-CS1株相对Y98标准株存在第111位点突变和共同缺失19个氨基酸;Mo贵州流行株(GZ-CS1株、GZ-QX1株)与Y98标准株核苷酸同源性分别为98.4%和99.9%,贵州流行株间核苷酸同源性为98.3%;其与四川SC01株的核苷酸同源性分别为90.2%和89.1%。此外,种间比较显示Mo P113基因与猪肺炎支原体P97基因的相似性较高,同源性均大于61.7%,亲缘关系亦较近;而其与丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种之间的同源性较低,都在39.4%以下,其亲缘性也较远。该研究结果为深入探讨绵羊肺炎支原体的遗传变异及其生物学特性关系奠定基础。
2016年05期 v.36;No.233 756-762页 [查看摘要][在线阅读][下载 549K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1 ] - 程海卫;陈一飞;丁豪杰;杨怡;卓洵辉;郭筱璐;陈学秋;杜爱芳;
为了构建大容量、天然鼠源核糖体展示(ribosome display,RD)单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库。通过提取SPF级小鼠脾脏总RNA,反转录为cDNA,利用引物分别扩增鼠抗体的VH、VL和Cκ基因,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,通过Linker((Gly4Ser)3)相互拼接,构建单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经连接转化,对所构建基因文库进行菌落PCR鉴定和序列测定分析。所构建核糖体展示基因文库库容量约为5.6×1013,基因片段全长大小约为1 100bp,基因文库序列具有较好的完整性和多样性。本试验成功构建了一个大容量、天然鼠源核糖体展示单链抗体文库,为进一步筛选单链抗体奠定基础。
2016年05期 v.36;No.233 763-767+777页 [查看摘要][在线阅读][下载 433K] [下载次数：200 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ]
- 李莹莹;王新宇;陈云云;Waqas Ahmad;曹国燊;段铭;关振宏;张茂林;
狂犬病病毒(rabies virus,RABV)作为一种高度嗜神经性的病毒,通过网格蛋白介导和pH依赖的内吞途径侵入神经细胞,然后经胞内体途径进行传输。已有研究表明,Rab5和Rab7是介导胞内体分选、成熟及定向运输的关键蛋白,而RABV胞内运输是否也受到这两者的调控尚不清楚。本试验通过免疫荧光、Western blot及TCID50等技术,检测了N2a中RABV核蛋白(N)和Rab5与Rab7的胞内共定位及RNAi下调Rab5与Rab7表达时,N蛋白表达水平、病毒滴度等的变化。结果发现,Rab5和Rab7与RABV N蛋白存在共定位;当Rab5和Rab7表达下调,RABV感染初期N蛋白表达显著下降,且病毒TCID50也随之降低。结果表明,RABV感染受Rab5和Rab7调节。为进一步解析狂犬病病毒逆轴浆传输机制提供了新的数据。
2016年05期 v.36;No.233 768-771页 [查看摘要][在线阅读][下载 174K] [下载次数：249 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：2 ] - 夏振红;兰云刚;贺文琦;潘伟;同娟珍;赵魁;高丰;宋德光;
为制备水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)重组M蛋白的鼠源多克隆抗体,本研究将扩增的VSV-M基因插入到pET-28a载体中,构建了pET-28a-VSV-M原核表达载体,将其转化至大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达;SDS-PAGE和Western blot检测结果发现重组蛋白主要以包涵体形式存在,相对分子质量约为31 000。之后应用His GraviTrap 10prepacked gravity flow columns纯化重组M蛋白,并将其免疫小鼠,制备VSV重组M蛋白的多克隆抗体;间接ELISA方法检测其抗体效价为1∶12 800。将该抗体应用于VSV的检测,在稀释倍数为1∶800时仍可检测到清晰的条带,且大小与预期的一致,证实了其与病毒的特异性结合。结果表明,本研究成功构建了VSV-M蛋白的原核表达载体,将表达纯化后的VSV-M蛋白免疫小鼠成功制备了VSV-M蛋白的多克隆抗体,这为后期检测VSV-M基因的表达分布、功能特性及开发诊断试剂和疫苗的研制奠定了基础。
2016年05期 v.36;No.233 772-777页 [查看摘要][在线阅读][下载 275K] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 邓义贞;顾一心;何利华;张艾煜;梁昊;张建中;张茂俊;邓俊良;
为了了解规模化养殖肉鸡弯曲菌的带菌现状,比较2种基础培养基对于粪便标本弯曲菌检出差异,获得菌株菌型特征。本研究选择规模化肉鸡养殖场共300份肉鸡泄殖腔拭子,分别应用Columbia、Karmali 2种基础培养基,采用滤膜过滤法进行弯曲菌的分离培养。结合革兰染色、生化鉴定以及PCR方法对疑似菌落进行弯曲菌菌种鉴定;选择60株空肠弯曲菌进行脉冲场凝胶电泳分析并用BioNumerics软件对脉冲场凝胶电泳结果进行聚类分析。结果显示,300份泄殖腔拭子样品中,弯曲菌的检出率为51.33%(154/300)。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检出率分别为40%(120/300)和14.67%(44/300),空、结肠弯曲菌混合感染的感染率为3.33%(10/300)。检测标本中空肠弯曲菌的感染率显著大于结肠弯曲菌(P<0.01)。应用Columbia、Karmali培养基对弯曲菌的检出率分别为41.67%(125/300)、42.67%(128/300),2种基础培养基检出率无显著性差异(P>0.05),2种培养基的补充使用样本的检出率增加了15%(45/300)。本次滤膜过滤法同时获得相同培养条件下标本中其他细菌3种,分别为:Cellulosimicrobiumsp.、Microbacteriumsp.、Helicobacter brante,共45株。60株空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳共分为39个带型。结果表明,本研究发现规模化养殖肉鸡中弯曲菌的携带情况较为严重,相同鸡场及不同鸡场分离菌株脉冲场凝胶电泳带型呈多样性特征。滤膜过滤法能够有效检测家禽肛拭子标本中弯曲菌,缩减了因使用选择性抗生素添加剂的成本。本研究没有检出除空肠弯曲菌和结肠弯曲菌外的其他弯曲菌菌种。
2016年05期 v.36;No.233 778-783+789页 [查看摘要][在线阅读][下载 447K] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：1 ] - 贾元元;杨易;孙颖飞;任奇杰;李勇;刘晓明;
研究人SOX基因家族在结核分枝杆菌感染其靶细胞-人巨噬细胞和肺泡上皮细胞中的表达差异。采用结核分枝杆菌强毒株H37Rv感染人U937单核细胞分化的巨噬细胞和A549肺泡上皮细胞,qRT-PCR检测感染后2种细胞内人SOX基因家族的表达变化,并对变化明显的SOX亚族成员进行免疫印迹验证。H37Rv感染诱导人U937巨噬细胞中SOX2和SOX10基因表达上调,但除SOX3和SOX30基因表达不变外,其他SOX基因表达均下调。免疫印迹进一步验证SOX B1和SOX F亚族基因在蛋白质水平全部下调。与H37Rv感染人U937巨噬细胞后SOX基因家族的表达变化不同,H37Rv感染人A549肺泡上皮细胞后,SOX基因家族在转录水平全部上调,尽管免疫印迹显示SOX3和SOX17在蛋白质水平有所下调。本研究最大发现是结核分枝杆菌感染人巨噬细胞后,SOX基因家族表达倾向下调;而感染人肺泡上皮细胞后,SOX基因家族表达普遍上调。这一结果提示人SOX基因家族可能在肺泡巨噬细胞和上皮细胞相互作用于对抗结核分枝杆菌感染中发挥调控作用。
2016年05期 v.36;No.233 784-789页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K] [下载次数：178 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 杜帅之;潘广林;邵俊峰;田格如;王会宝;张敏;赵光辉;于三科;
为了评估秦岭地区珍稀野生动物的毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)的人兽共患风险,本研究采用PCR技术和多位点序列分型技术对秦岭地区5种珍稀动物毕氏肠微孢子虫的感染情况及基因型/亚型进行了分析。在采集的22份新鲜粪便中检测到7个阳性分离株,其中斑羚源5个,长颈鹿源1个,麂子源1个。基于ITS位点基因分型发现所有分离株均为人兽共患基因型,包括6个已报道的基因型D和1个尚未报道的D-new。多位点序列分型技术发现秦岭地区珍稀野生动物的毕氏肠微孢子虫存在遗传多样性,7个分离株在MS1、MS3、MS4和MS7位点分别有3、1、2、2个亚型。
2016年05期 v.36;No.233 790-794页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K] [下载次数：214 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ]
- 郑乃珍;郑小香;潘晓丽;李萍;秦韬;李健;马玉芳;黄一帆;
研究了猴头菇多糖协同ConA对小鼠体外脾淋巴细胞分泌Th1、Th2细胞因子的量及mRNA表达量的影响,旨在探讨其协同免疫调节机制。用ELISA法检测HEP协同ConA刺激脾淋巴细胞细胞上清液中Th1、Th2细胞因子的量;RT-PCR法检测Th1、Th2细胞因子和转录因子mRNA的表达。结果显示,HEP在25~400mg/L质量浓度范围内能显著协同ConA刺激T细胞亚群Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6)的分泌及mRNA的表达(P<0.05),并显著促进转录因子(T-bet、Gata-3)mRNA的表达(P<0.05)。结果表明,HEP能协同ConA促进小鼠脾淋巴细胞Th1、Th2细胞因子的分泌及基因的表达,通过调节Th1/Th2平衡,发挥双重免疫调节作用。
2016年05期 v.36;No.233 795-800页 [查看摘要][在线阅读][下载 328K] [下载次数：327 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：1 ] - 李桦;杨梅梅;屈倩;张超;张义;郭世宁;石达友;
10日龄80只肉鸡,随机分成4组,每组20只,试验1~3组饮水中分别添加0.02%绿茶多酚、0.1%绿茶多酚、0.2%绿茶多酚,试验4组为空白对照组。试验14d测定肉鸡血清生化指标,14、28d测定血清SOD、MDA、GSH-Px、T-AOC抗氧化指标。结果显示,14d试验1、2、3组ALT水平显著降低(P<0.05),且AST水平降低(P>0.05);试验1、2、3组TP和ALB水平高于对照组(P>0.05);GLU显著升高(P<0.05)。试验28d,空白对照组SOD极显著升高(P<0.01),且GSH-PX显著高于绿茶多酚组(P<0.05);14、28d,绿茶多酚组T-AOC降低;试验28d,绿茶多酚组MDA含量极显著低于空白组(P<0.01),表明在饮水中添加绿茶多酚能不同程度改善热应激对肉鸡血液相关生化指标与抗氧化的不良影响。
2016年05期 v.36;No.233 801-803+813页 [查看摘要][在线阅读][下载 116K] [下载次数：407 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：1 ] - 鲍光明;王立琦;王小莺;万根;袁厚群;宋高远;乐冠男;
虽然氧氟沙星抗菌谱广,抗菌作用强,在人医及兽医临床上被广泛地应用,但是其生物半衰期短,给临床用药带来不便。为了开发长效氧氟沙星制剂,本研究以高比表面积、比孔容的MCM-41型介孔二氧化硅纳米材料为载体,制得氧氟沙星纳米药物OFX@MSN。并分别通过扫描电镜、透射电镜,氮气吸附-脱附、傅里叶红外等手段对载药前后的纳米粒结构进行了结构确证,证明氧氟沙星载入到介孔二氧化硅的孔洞中形成平均直径约为100nm的分散球状粒子。体外试验显示氧氟沙星的释放时间可以持续3d之久,从而有效维持平稳的血药治疗浓度,减小注射次数。
2016年05期 v.36;No.233 804-808页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K] [下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 周梦娇;李传民;李建伟;张晓军;孙博兴;邢沈阳;
干扰素γ诱导蛋白30基因(IFI30)能够在特异抗原递呈细胞中组成性表达,在其他细胞中能被IFN-γ诱导表达,IFI30在MHC-Ⅱ限制性抗原加工递呈过程中起关键性作用。为了构建猪IFI30表达载体并验证其在体外细胞表达情况。本试验从猪肺脏组织中扩增出IFI30中长度741bp的CDS区,将其克隆到带有红色荧光的真核表达pEF1a-IRES-DsRed-Express2上,用脂质体转染法转染到Marc145细胞中,用RT-PCR以及Western blot检测其mRNA表达量和蛋白表达量。结果表明,成功构建出猪IFI30表达载体并在Marc145细胞中高效表达。
2016年05期 v.36;No.233 809-813页 [查看摘要][在线阅读][下载 279K] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 陶波;孙宝;方梅;黄志浩;贾宁;
为了揭示成年牦牛扁桃体组织结构和黏膜免疫相关细胞的分布规律,本研究采用组织化学法、图像分析法与透射电镜技术,对牦牛扁桃体的形态特征及免疫相关组织与细胞的分布特征进行了详细的研究。结果显示,牦牛共有6个扁桃体,其基本结构主要由上皮层和固有层构成。口咽部扁桃体上皮主要由复层扁平上皮细胞组成,上皮组织结构紧密;鼻咽部扁桃体上皮主要由假复层纤毛柱状上皮细胞组成,在柱状细胞之间分布有大量的杯状细胞;二者上皮层细胞组成差异较大,厚度及上皮内淋巴细胞的数量差异极显著(P<0.01)。并且,两者上皮下肥大细胞与淋巴小结的数量也差异极显著(P<0.01)。电镜下,腭扁桃体与咽鼓管扁桃体上皮细胞间有大量的连接复合体,且咽鼓管扁桃体上皮细胞游离面有大量排列整齐的微绒毛。肥大细胞的胞质内聚集有许多高电子密度的颗粒。浆细胞核的周围有丰富的粗面内质网和核糖体,胞质中有黏液颗粒。结果表明,牦牛扁桃体组织结构和其他家畜基本相似,但扁桃体分布位置有所不同,且牦牛扁桃体免疫相关组织与细胞分布较丰富,其中腭扁桃体隐窝中分布有较多的杯状细胞,显示牦牛扁桃体具有更发达的黏膜免疫活性。
2016年05期 v.36;No.233 814-818页 [查看摘要][在线阅读][下载 339K] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 彭梦玲;刘艳芝;何晶;尹云厚;马莉;沈欢欢;连帅;杨焕民;
通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、CORT、ACTH的含量;采用Western blot和qRT-PCR方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞中HSP70及mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,急性冷刺激组大鼠血清中IL-2和ACTH的含量显著升高(P<0.05),IL-4、IL-6、TNF-α和CORT的含量极显著升高(P<0.01),IL-10无显著变化(P>0.05);外周血淋巴细胞内HSP70及其mRNA表达量呈显著升高水平(P<0.05)。成功构建大鼠急性冷应激模型。
2016年05期 v.36;No.233 819-822+832页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K] [下载次数：301 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：1 ]
- 廖远军;崔玉梅;胡汐柔;郑雨薇;吕红明;黄丹;邓彦宏;邓旭明;
为了研究黄芩注射液对人工感染猪水肿病的治疗作用,本试验以28~35日龄断奶仔猪作为实验动物,腹腔注射一定剂量的O139菌悬液,建立人工感染猪水肿病模型,通过给予不同剂量黄芩注射液进行治疗试验,测定了增重率、治愈率、有效率等指标。结果显示,给予0.2、0.4mL/kg剂量的黄芩注射液,显著增加了动物模型的增重率,其增重率和总有效率分别为96.13%和90%。结果表明,黄芩注射液能有效治疗人工感染猪水肿病,为临床应用黄芩注射液治疗猪水肿病提供了理论依据。
2016年05期 v.36;No.233 823-826页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 孔涛;丁轲;张淑慧;
为检测纳米氧化锌对小鼠的亚慢性损伤作用,以不同剂量经口连续染毒纳米氧化锌,90d后摘眼球取血,对血常规、肝功、肾功、抗氧化指标进行检测。并扑杀各组小鼠,取肝脏、肾脏等组织,切片后经HE染色观察染毒小鼠的病理损伤。结果发现,40、160及320mg/kg剂量组小鼠红细胞数显著低于对照组(P<0.05);40mg/kg剂量组小鼠血红蛋白含量极显著低于对照组(P<0.01)。40mg/kg剂量组小鼠谷丙转氨酶(ALT)活性显著高于对照组(P<0.05)。80、320mg/kg剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)活性显著高于对照组(P<0.05)。80、160mg/kg剂量组小鼠血清肌酐含量极显著高于对照组(P<0.01)。各染毒组小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著高于对照组(P<0.01)。40、80及320 mg/kg剂量组小鼠血清抑制羟自由基能力极显著低于对照组(P<0.01)。40mg/kg剂量组丙二醛(MDA)含量极显著高于对照组(P<0.01)。80mg/kg剂量组小鼠血清过氧化氢酶(CAT)活性极显著高于40、160及320mg/kg剂量组(P<0.01)。病理学检查结果显示,小肠黏膜结构不完整,绒毛出现断裂,黏膜上皮脱落。心肌纤维断裂,心肌细胞肿大,细胞核溶解、形状不规则。肝细胞排列不规则,轮廓模糊,有少量核溶解、核破裂现象,部分区域炎性细胞浸润。肾脏部分区域炎性细胞浸润,少量肾小球萎缩。结果表明,90d暴露纳米氧化锌能影响小鼠的抗氧化系统,并对小肠、肝脏、肾脏、心脏等脏器产生损伤作用。
2016年05期 v.36;No.233 827-832页 [查看摘要][在线阅读][下载 399K] [下载次数：145 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 高文文;王亚洲;赵志波;刘欢;张世奇;王哲;李心慰;刘国文;
本试验旨在探讨非酯化脂肪酸(Nonestesterified fatty acid,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞线粒体功能以及罗格列酮对NEFAs诱导的线粒体功能紊乱的影响。体外添加NEFAs(1.8mmol/L)处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测线粒体呼吸链复合体IV(COX IV)蛋白水平及mRNA水平的影响。另外选取细胞,罗格列酮(10nmol/L)预处理细胞24h后添加NEFAs(1.8mmol/L)处理9h。运用Western blot和qRT-PCR方法检测PGC-1α、Mfn-2的蛋白表达水平及COX IV mRNA表达水平。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0h组相比,NEFAs处理5h以上时COX IV蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),处理7~12h时COX IV mRNA表达水平呈显著降低(P<0.05)。添加罗格列酮后,罗格列酮可极显著增加COX IV mRNA水平,PGC-1α、Mfn-2蛋白表达水平(P<0.01)。结果表明,NEFAs可诱导犊牛原代肝细胞发生线粒体功能紊乱,罗格列酮可缓解由NEFAs诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱。
2016年05期 v.36;No.233 833-838页 [查看摘要][在线阅读][下载 233K] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 曹赞;高振华;陈广信;黎秋平;陈彩文;黄志鹏;范葶莉;
本试验通过二因子二次回归正交旋转组合设计,以代谢能和粗蛋白作为2个试验因子,旨在研究22~42日龄肉仔鸡代谢能和粗蛋白水平的最佳组合效应。试验选取健康、体质量接近的22日龄科宝肉鸡480只,随机分为12个组,每组4个重复,每个重复10只鸡,公母各半,其中1~8组为试验组,9~12组为中心组(即零水平组),试验期为21d。分别以代谢能和粗蛋白水平为自变量,以生产性能各项指标作为因变量拟合回归方程。结果表明,饲粮代谢能和粗蛋白水平可显著改善22~42日龄肉仔鸡的平均日增重、料重比(P<0.05)。从非线性回归分析及响应面图显示,当粗蛋白水平在20.00%左右时,代谢能水平10.80~12.80 MJ/kg之间时,平均日增重处于较高水平,但当代谢能水平在14.21~14.80MJ/kg之间时,平均日增重有下降趋势;当代谢能和粗蛋白水平为12.70MJ/kg,19.78%时,可达到最大平均日采食量;当代谢能和粗蛋白水平为12.65 MJ/kg,20.16%时,料重比最小为1.95。综上所述,当22~42日龄科宝肉鸡饲粮代谢能和粗蛋白水平分别为12.65~12.96 MJ/kg和19.78%~20.25%时,可以获得较好的生产性能,饲粮养分表观代谢率及肠道消化酶活性均较高,饲料转化率也较高。
2016年05期 v.36;No.233 839-846页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K] [下载次数：473 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：1 ] - 付强;杨丽;官俊良;黄德伦;梁贤威;张明;
本研究开展了水牛的高低活力精子差异蛋白质组分析,利用Percoll法分离水牛高、低活力精子后分别提取总蛋白质,通过双向电泳技术获得了高活力精子和低活力精子的双向电泳图谱,图像分析表明,高、低活力精子中存在差异蛋白质18个,以高活力精子为对照组,其中6个蛋白质在低活力精子中表达量下调或缺失,12个蛋白质表达量上调。使用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)对差异蛋白质进行鉴定,成功鉴定了3种蛋白质:精子尾部结构蛋白2、α-ATP合成酶、α-琥珀酰辅酶A合成酶。这些蛋白质与精子结构形成和线粒体能量代谢有关。该研究发现了水牛高、低活力精子的蛋白质变化,为解释精子活力低下的分子机制提供的新的线索。
2016年05期 v.36;No.233 847-851页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：1 ] - 黄后双;赵魁;张頔;张月香;张希牧;周艳龙;徐宝成;魏广兴;宋德光;高丰;
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol kinase 3-kinase,PI3Ks)蛋白家族参与对细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞功能的调节。课题组前期利用Illumina/Solexa高通量测序技术对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染OFTu细胞前后mRNA表达谱进行比较分析发现,PI3K在感染后宿主细胞中显著上调表达。为进一步验证,利用荧光定量PCR、Western blot方法分别从基因转录水平和蛋白表达水平对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染不同时间段(0、3、6、12、24、48、72h)Hela细胞中PI3K的表达变化规律进行分析,与未接毒细胞相比,PI3K在感染后不同时间段均呈上升趋势,且随着感染时间延长而增加,该结果与表达谱分析结果一致。为进一步明确PI3K对ORFV侵染复制的影响,利用PI3K特异性抑制剂LY294002对PI3K进行抑制处理后接种ORFV,收集感染后不同时间段(12、24、48、72h)细胞进行定量PCR检测和TCID50测定,结果显示,加入LY294002处理的Hela细胞,其病毒滴度低于未处理细胞中的病毒滴度,由此可见阻断PI3K对ORFV的入侵具有抑制作用。上述研究结果表明,PI3K对ORFV在宿主细胞中的复制增殖具有明显的促进作用。该研究结果不仅有助于对参与ORFV侵染过程相关信号通路的研究,而且将为深入揭示ORFV致病分子机制奠定基础。
2016年05期 v.36;No.233 852-858页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K] [下载次数：169 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：2 ]
- 韩昱;王军军;单安山;刘娣;李纯锦;颜桥;袁桃林;吴国超;周勇锋;房恒通;金永成;赵云;于浩;张晶;
选取妊娠第45天民猪母猪12头,随机分成2组,每组6个重复,每个重复1头母猪。Ⅰ组(对照组)饲喂基础饲粮,Ⅱ组(试验组)饲喂基础饲粮+1%L-精氨酸。采取初生仔猪小肠,制作切片,进行小肠形态学观察,并测定小肠IL-2基因的表达量。结果显示,试验组初生仔猪十二指肠绒毛高度、绒毛宽度和微绒毛长度均有升高的趋势,而绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高,隐窝深度较对照组显著降低。空肠绒毛宽度以及微绒毛长度均有升高趋势,而绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值和隐窝深度较对照组分别显著升高22.89%、64.15%和降低37.12%(P<0.05)。回肠绒毛宽度以及微绒毛长度均有不同程度的提高,而绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值及隐窝深度较对照组分别极显著增加34.38%、86.75%及降低40.63%(P<0.01);试验组初生仔猪十二指肠IL-2基因表达量显著升高(P<0.05),空肠IL-2基因表达量极显著升高(P<0.01),而回肠该基因表达量呈现升高趋势,但无显著差异(P>0.05)。结果表明,妊娠母猪饲粮中添加精氨酸能够有效提高初生仔猪的肠道免疫力及促进肠道发育。
2016年05期 v.36;No.233 859-863页 [查看摘要][在线阅读][下载 462K] [下载次数：256 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：1 ] - 王晓婷;樊文杰;查光明;郭豫杰;钟凯;李和平;
本试验以猪十二指肠cDNA为模板,通过PCR、酶切鉴定克隆Viperin基因,利用非酶连接技术将其连接丙酸诱导型表达载体pEX5,经丙酸钠诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting进行表达蛋白鉴定。结果显示,成功克隆了猪Viperin基因,包括完整开放阅读框ORF,其长度为1 046bp,将扩增得到的序列成功连接到载体pEX5,构建了pEX5-Viperin;SDS-PAGE和Western-blotting。6×His-NusA-TEV-LIC-Viperin融合蛋白主要以包涵体形式表达,其相对分子质量约96 500。结果表明,pEX5-Viperin的成功构建,为后续猪Viperin蛋白的纯化,Viperin基因与病毒互作关系及信号通路调控机制的研究奠定了基础。
2016年05期 v.36;No.233 864-868页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 余燕;李元晓;李旺;丁轲;李东平;王小芳;曹志军;李胜利;
为了更加经济便捷,微观科学地研究成年牛瘤胃生理及营养代谢机制,本试验着手建立成年牛瘤胃上皮细胞(ruminal epithelium cell,REC)的原代培养方法,其主要分为瘤胃微生物去除和细胞分离培养两部分。首先用9种不同种类和剂量的抗生素洗涤液,冲洗瘤胃上皮组织。根据微生物去除结果,确定最佳种类和剂量的抗生素洗涤液;然后采用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA在不同条件下对瘤胃上皮进行连续消化和分步消化以及先用0.1%胶原酶I消化再用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA在37℃分步消化,根据所得的细胞特征以及细胞增殖活性来确定适合成年牛瘤胃上皮细胞的分离方法。结果表明,瘤胃上皮需分别经过6倍青链霉素和6倍庆大两性霉素洗涤液的清洗后能有效去除瘤胃上皮表面微生物。而瘤胃上皮先经过0.1%胶原酶I消化30min再经0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA分步消化后可获得较多的上皮细胞,且活性较好,分离效果较理想。本试验为成年牛瘤胃上皮细胞的原代培养提供了参考方法。
2016年05期 v.36;No.233 869-874页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K] [下载次数：475 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1 ] - 潘韵致;王大力;白春艳;蔡飞翔;刘鑫;周梦娇;孙博兴;
猪剩余采食量(Residual Feed Intake,RFI)是一个有效评价生猪饲料效率的新性状,用剩余采食量来提高生猪饲料效率是当前养猪界的重要研究方向。本试验测定了2个世代198头军牧1号公猪的周采食量、日增重(ADG)和背膘(BF)等性状,和母猪453头母猪日增重(ADG)和背膘(BF)等性状,然后建立了饲料效率育种值估计模型,以剩余采食量(RFI)为主选性状,ADG和BF为辅助约束性状,通过遗传评估按育种值高低分为高RFI和低RFI 2个群体。在这2个分化群体内进行同质选配2个世代后计算其遗传进展。结果显示,RFI、ADG、BF的遗传力分别为0.15、0.22、0.28。G0代选择群体高、低RFI之间,RFI、ADG、BF性状的育种值差异分别是1.48、0.40、0.56个标准差;G1代高、低RFI测定群体之间3个性状的育种值差异分别是1.52、0.56、0.18个标准差。原始群体与G1代测定群体相比,高RFI群体的RFI、ADG、BF的遗传进展分别是0.732、-0.274、0.101个标准差,低RFI群体的RFI、ADG、BF的遗传进展是-0.788、0.283、-0.079个标准差。此外,肉质检测结果显示2群体间无显著差异。结果表明,用RFI作为主选性状可有效改变猪的饲料效率,建立饲料效率分化品系,遗传进展良好。
2016年05期 v.36;No.233 875-879页 [查看摘要][在线阅读][下载 167K] [下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：1 ] - 徐嘉君;岳媛;李红波;闫向民;杜玮;周振勇;张金山;张杨;姜昊;张嘉保;
本试验利用RNAi方法抑制牛卵丘细胞中JARID2基因mRNA的表达水平,通过免疫荧光方法检测H3K4me3、H3K9me3、H3K27me3、H3K36me3的甲基化程度。结果表明,在牛卵丘细胞中存在JARID2的表达,并且存在H3K9me3、H3K27me3的甲基化修饰,但没有检测到H3K4me3、H3K36me3的甲基化修饰。通过siRNA对牛卵丘细胞中JARID2 mRNA的表达进行成功抑制后,转染组JARID2的表达量明显下降,但H3K4me3、H3K27me3表达量无明显变化,而H3K9me3、H3K27me3表达量明显下降,即JARID2在mRNA水平上能够影响H3K9me3、H3K27me3的甲基化修饰程度,而对H3K4me3、H3K36me3的甲基化修饰无明显作用。
2016年05期 v.36;No.233 880-884页 [查看摘要][在线阅读][下载 374K] [下载次数：217 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ]