预防兽医学

  • 多联重组痘苗病毒的构建及鉴定

    李一权;兰添;胡宁宁;姜爽;李敏;曹亮;曹佳媛;范园园;李霄;金宁一;

    构建含有埃博拉出血热病毒(Ebola hemorrhagic fever virus,EHFV)小片段分泌蛋白S基因、马尔堡出血热病毒(Marburg hemorrhagic fever virus,MHFV)GP基因、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus,SNV)G2糖蛋白基因及非洲欧尼恩病毒(Africa O’nyong nyong virus,O’NNV)E2蛋白基因的重组痘苗病毒。设计含EGFP筛选标记和4种外源基因的穿梭质粒,并利用同源重组技术、荧光筛选技术和Cre/LoxP敲除系统,最终获得四联重组痘苗病毒。使用PCR方法鉴定重组痘苗病毒及其遗传稳定性;用透射电镜观察病毒形态。结果显示:所构建的多联重组痘苗病毒rVTT-J~-4~+具有良好的遗传稳定性,并且具备痘苗病毒的完整形态。结果表明:成功构建了含有4种外源基因的重组痘苗病毒rVTT-J~-4~+,为后续多联疫苗的研究奠定了基础。

    2016年07期 v.36;No.235 1081-1085+1091页 [查看摘要][在线阅读][下载 1439K]
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  • PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞免疫表型及Th1/Th2偏转潜能的影响

    刘金玲;魏澍;沈国顺;赵玉军;潘树德;刘丽霞;

    为了研究PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞成熟及Thl及Th2型细胞因子分泌水平的影响,进一步探讨PRRSV调控树状细胞Th1和Th2型免疫应答的潜在机制,揭示PRRSV感染对机体免疫机能的影响。我们从猪外周血分离单核细胞,诱导培养为树突状细胞后接种PRRSV共培养,显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析细胞表面的共刺激分子,半定量RT-PCR法检测Thl型细胞因子IL-12和Th2型细胞因子IL-10的mRNA转录水平。结果显示:经鉴定证实获得形态及表型典型的树突状细胞;流式分析结果表明PRRSV接种组树突状细胞表面的SLA-II-DR类分子、CD40分子、CD80分子均明显低于未接种组,差异极显著(P<0.01);RT-PCR半定量结果表明PRRSV接种组的IL-12mRNA转录水平低于未接种组,差异显著(P<0.05),而IL-10mRNA转录水平高于未接种组,差异显著(P<0.05)。结果表明:PRRSV感染影响树突状细胞的成熟,并能通过高效表达Th2型细胞因子IL-10降低Th2型细胞因子Th1而影响Thl/Th2的平衡。

    2016年07期 v.36;No.235 1086-1091页 [查看摘要][在线阅读][下载 1515K]
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  • 基于CMV启动子构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统

    徐彦召;王青;胡建和;张慧辉;

    构建了一种利用CMV启动子的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)反向遗传操作系统。在获得XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA的基础上,将CMV真核启动子序列置于该病毒全长cDNA的5′端,获得含有CMV启动子和XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA克隆的重组质粒,将重组质粒直接转染MARC-145宿主细胞拯救病毒。结果显示:转染细胞后获得了拯救病毒,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性,且拯救病毒序列含有不同于亲本病毒的分子标记(突变产生的MluⅠ酶切位点)。本试验建立了一种简单、操作方便、节约时间和成本的HP-PRRSV反向遗传操作系统的方法,为进一步开展HP-PRRSV的相关研究奠定了基础。

    2016年07期 v.36;No.235 1092-1097页 [查看摘要][在线阅读][下载 1166K]
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  • 江西省猪细环病毒1型和2型流行情况调查及全基因组克隆与序列分析

    田光玲;何后军;张黎;王伟松;叶丽娜;吴靖;蔡高峰;

    目前在我省许多地区猪群中是否存在TTSuV感染尚未见相关报道,为更好的了解猪细环病毒1型和2型在猪群中进化情况以及进一步研究其遗传变异,根据NCBI已发表的猪细环病毒两种基因型全基因组序列,在序列保守区域用设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)进行该病毒的检测及全基因的扩增。通过将扩增产物胶回收后进行T-A克隆,然后进行序列测定和同源性与系统进化分析。本试验检测出猪群TTSuV1型和TTSuV2型在猪群中的感染情况,全基因测序得到的序列确定为TTSuV1和TTSuV2全基因序列。对测得序列进行同源性分析与遗传进化分析,分析结果表明,分离株(JX TTSuV)与国内外不同地域TTSuV全基因组序列之间差异较大,同源性为67.8%~97.2%;进化分析表明,JX TTSuV与其他株TTSuV参考株亲缘关系远近各不相同,与日本分离株(AB076001)和巴西分离株(AY823991)亲缘关系较近。

    2016年07期 v.36;No.235 1098-1102+1144页 [查看摘要][在线阅读][下载 1584K]
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  • 绵羊痘病毒的分离与鉴定

    安维雪;李建;李娜;涂明亮;张志丹;王艳杰;张七斤;

    利用羔羊睾丸细胞、Marc-145、Vero细胞对病毒进行分离和培养,通过动物回归试验、组织病理学切片的观察、透射电镜观察、PCR鉴定等方法进行病毒的鉴定,并参照GenBank中绵羊痘病毒P32基因序列设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的P32基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行同源性比对分析。结果显示:透射电镜下观察到典型的痘病毒粒子;动物回归试验中试验动物临床症状为典型的羊痘症状;组织病理学切片中观察到羊痘病毒嗜酸性包涵体;通过DNASTAR与参考毒株进行同源性比对,与参考株同源性为97.2%~99.5%。结果表明:该分离株为绵羊痘病毒,并命名为SPPV-NeiMengG2015。

    2016年07期 v.36;No.235 1103-1108+1114页 [查看摘要][在线阅读][下载 3612K]
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  • 小反刍兽疫病毒H蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

    栾志舫;陈妍;吴锦艳;王光祥;田宏;尹双辉;杨顺利;尚佑军;张志东;刘湘涛;

    利用原核表达系统表达了小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)血凝素蛋白(H)作为ELISA包被抗原,建立了PPR抗体检测的间接ELISA方法,并对所建立方法的相关条件进行了优化。优化结果显示:抗原的最佳包被质量浓度为20mg/L;血清最佳稀释度为1∶80;酶标二抗的最佳浓度为1∶20 000;抗原抗体反应时间和酶标二抗孵育时间均为45min。批内及批间重复试验结果变异系数均小于10%,说明该方法具有较好的可重复性。检测羊口疮、羊痘、蓝舌病和山羊支原体血清结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。检测临床血清样品80份,并与国外c-ELISA试剂盒比较,符合率为93.75%。因此,本方法可以用于小反刍兽疫的临床血清抗体检测及流行病学调查。

    2016年07期 v.36;No.235 1109-1114页 [查看摘要][在线阅读][下载 597K]
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  • 雁鹅小鹅瘟病毒的分离及其组织嗜性

    汪凯;王传均;王浩;邵红霞;潘玲;祁克宗;秦爱建;刘红梅;王桂军;

    从安徽省某雁鹅养殖场疑似小鹅瘟死亡的雁鹅肝脏中分离获得1株病毒,经过电镜观察、琼脂扩散和PCR试验证实分离病毒株为小鹅瘟病毒(gosling plague virus,GPV),命名为Yan-2株。全基因组扩增与测序分析表明Yan-2株基因组为5 106bp;与省内番鸭源GPV Y株和大雁源GPV SHFX1201株的亲源关系最近,与国内疫苗株SYG61v以及国外B株的亲源关系较远。单抗免疫组化试验还发现,Yan-2株病毒主要分布于雁鹅的肝细胞、肠上皮细胞、神经细胞等细胞胞浆内。这些结果不仅表明雁鹅可以作为GPV的自然宿主,而且证明雁鹅的肝、肠和神经组织对GPV有明显的亲嗜性,为进一步研究GPV的宿主范围、致病机理打下了基础。

    2016年07期 v.36;No.235 1115-1118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1831K]
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  • 广东省水禽源大肠杆菌Ⅰ型整合子的检测分析

    张济培;韦庆兰;谭华龙;牛森;陈建红;

    为了解广东省水禽源大肠杆菌中Ⅰ型整合子基因盒流行情况,本试验对251株广东地区水禽源大肠杆菌的Ⅰ型整合子进行了检测分析。采用PCR方法扩增Ⅰ型整合酶基因和Ⅰ型整合子基因盒,经限制性内切酶酶切和测序鉴定基因盒插入区。结果显示:98%水禽大肠杆菌检测到Ⅰ型整合酶基因,但只有67.7%大肠杆菌扩增出Ⅰ型整合子基因盒。携带Ⅰ型整合子的大肠杆菌共扩增出8类(A、B、C、D、E、F、G和H)不同的基因盒插入区,其中C类(插入基因为dfrA1-aadA1)检出率最高,高达57.1%(97/170),而A类和H类检出率最低,仅1.15%(2/170)。52株大肠杆菌扩增出2个基因盒,2株大肠杆菌扩增出3个基因盒,分别占携带Ⅰ型整合子大肠杆菌的30.6%和1.15%。结果表明:大肠杆菌Ⅰ型整合子插入的耐药基因盒较多,结构较复杂,促进细菌多重耐药菌株的进化。

    2016年07期 v.36;No.235 1119-1122+1139页 [查看摘要][在线阅读][下载 534K]
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  • 肉鸡气管阻塞呼吸系统细菌多样性分析

    李玉保;王守荣;刘玉庆;朱明霞;吴伟胜;朱育玮;

    采用第2代Miseq高通量测序方法对发病和健康鸡只的肺脏和气管内微生物进行检测,并分析各样品中菌种类别、群落组成、不同样品之间物种差异以及与疾病发生的关系。结果显示:肺脏和气管内共检测到270种细菌,它们隶属于13门23纲39目74科140属;病例气管中细菌数比肺脏高,同时也比健康气管略有增多,而多数病例肺脏内细菌数比健康肺脏少。结果表明:不同样品之间存在一定的物种差异,地域对样品中细菌组成影响较大,引发肉鸡气管阻塞的细菌病原体也存有不同,主要有支原体、大肠杆菌、志贺菌、里氏杆菌、棒状杆菌、葡萄球菌、鸟杆菌和肠球菌等;此外,所占比例较大的乳酸球菌和乳酸杆菌是益生菌。

    2016年07期 v.36;No.235 1123-1130页 [查看摘要][在线阅读][下载 2066K]
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人兽共患病

  • 绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和精氨酸支原体多重PCR检测方法的建立及应用

    郑佳琪;黄海碧;王晓晖;刘文浩;麻昌姣;岳全占;郝永清;

    根据GenBank登陆的绵羊肺炎支原体(MO)、丝状支原体山羊亚种(MmC)和精氨酸支原体(M.arg)的相关基因序列,分别设计了扩增MO hsp70基因、MmC hsp70基因和M.arg ADI基因片段的特异性引物,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了MO、MmC和M.arg的多重PCR检测方法。特异性试验结果显示:该方法能同时扩增出MO 703bp、MmC 385bp和M.arg223bp的特异性目的片段,而对其他病原的DNA扩增为阴性。敏感性试验结果显示:该方法对这3种支原体的最低核酸检出量均为10pg。55份临床样品检测结果表明:三重PCR检测结果与分离培养诊断方法一致,均能检测出样品中的病原菌。本试验建立的多重PCR方法能为MO、MmC和M.arg的感染提供正确快速诊断方法。

    2016年07期 v.36;No.235 1131-1134页 [查看摘要][在线阅读][下载 398K]
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  • 羊传染性脓疱病毒疫苗株和野毒株VIR基因的比较分析

    王玲玲;刘永杰;郑海学;张克山;刘湘涛;

    羊传染性脓疱(Orf)是由羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)感染引起的一种人兽共患传染病。VIR是ORFV编码的抗干扰素基因。为比较分析ORFV疫苗弱毒株和野毒株编码的VIR基因的特征,本试验扩增并测定了ORFV疫苗株和野毒株的VIR基因序列,比较分析了两者核酸水平和氨基酸水平的变异情况以及二、三级蛋白结构。结果表明:本次测定的ORFV疫苗株与野毒VIR基因核苷酸序列相似性为94.6%,氨基酸序列相似性为91.8%,两者在Z-DNA结合结构域和ds-RNA结合结构域均有突变。

    2016年07期 v.36;No.235 1135-1139页 [查看摘要][在线阅读][下载 1345K]
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  • H9亚型禽流感病毒山西株的分离鉴定及其HA基因的遗传进化分析

    李红丽;王红宝;郭雪丽;张国权;王毅;

    从山西省某些鸡场采集疑似病料,接种SPF鸡胚后分离病毒,采用A型流感病毒通用引物进行HA基因的扩增,并连接T载体克隆后进行序列测序和遗传进化分析。结果显示:获得4株H9亚型禽流感病毒完整HA序列,开放阅读框1 683nt,编码560个氨基酸,各自之间核苷酸同源性较高,达95.5%~99.6%,且推导的氨基酸同源性介于92.0%~99.6%之间;遗传进化分析结果显示该4株属4.2.5分支,与国内常用疫苗株4.2.3分支存在一定差异,但仍属于4.2大分支;HA蛋白的裂解位点氨基酸顺序为RSSR↓GLF,为低致病性禽流感病毒,并且含有7个潜在的N-糖基化位点以及8个受体结合位点。结果表明:本试验分离的H9亚型禽流感病毒与近年来流行毒株HA基因同源性及蛋白关键位点相似性较高。

    2016年07期 v.36;No.235 1140-1144页 [查看摘要][在线阅读][下载 761K]
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  • 半滑舌鳎致病性荧光假单胞菌的分离鉴定及其感染的病理损伤

    高桂生;张艳英;吉志新;史秋梅;陈娟;高光平;秦凌暄;韩红升;宋青春;朱建新;

    2015年6月,河北省秦皇岛市某养殖场半滑舌鳎发生以腹水、烂尾、内脏器官肿大、出血与坏死为特征的疾病。从自然发病的半滑舌鳎肝脏与肾脏中分离到1株细菌,通过细菌形态观察、培养特性、生化特性分析、动物试验和16SrRNA基因序列分析等方法,对该病原菌进行了分析鉴定。结果显示:致病菌株为革兰阴性杆菌,培养特性、生化特性分析与荧光假单胞菌较接近,以16SrRNA基因为遗传标记构建系统发育树,致病菌菌株与荧光假单胞菌菌株相似性为99%。结果表明:本次引起半滑舌鳎腹水烂尾病的病原菌为荧光假单胞菌。对分离到的菌株进行了常用抗药物的药敏试验,该菌对氧氟沙星、氨曲南、红霉素等药物高度敏感,对利福平、妥布霉素等药物中度敏感,对卡那霉素、新霉素不敏感。组织病理学观察发现,荧光假单胞菌感染半滑舌鳎对多个组织器官都造成明显的病理损伤,尤其是肝脏、肾脏、脾脏、肠及脑的损伤较为严重,表现为明显的淤血、出血,变性、坏死及炎症细胞浸润。

    2016年07期 v.36;No.235 1145-1150页 [查看摘要][在线阅读][下载 2030K]
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  • 兔脑炎原虫引起脑细胞凋亡与血脑屏障破坏的关系

    潘耀谦;李瑞珍;梁莹莹;郝军红;张中华;全锁配;

    为了研究兔脑炎原虫如何破坏血脑屏障,侵入脑组织并引起脑肉芽肿形成,本试验采用IG染色、MGP染色,TUNEL染色和anti-GFAP染色等方法对26只有典型脑炎原虫病神经症状的病兔和10只健康兔的脑组织进行了详细研究。结果显示:病兔大脑皮质有少部分锥体细胞、血管内皮细胞及星形胶质细胞发生不同程度的凋亡。病损的血管旁有时检出兔脑炎原虫集落,附近的脑组织有巨噬细胞和小胶质细胞聚集形成的细胞性肉芽肿。用特殊染色可在血管内皮细胞、单核细胞和巨噬细胞中检出大量脑炎原虫和集虫泡。大量星形胶质细胞在病损的脑组织部位增生,包绕在聚集的巨噬细胞和小胶质细胞周围形成了肉芽肿。其粗大的足突在血管周围形成了厚层血脑屏障。总之,兔脑炎原虫通过导致血管内皮细胞和星形胶质细胞凋亡的方式而破坏了血脑屏障;通过侵入血管内皮细胞和单核细胞的方式进入脑组织,引起脑损伤。

    2016年07期 v.36;No.235 1151-1156页 [查看摘要][在线阅读][下载 2101K]
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基础兽医学

  • 不同药物对树突状细胞捕获猪细小病毒样颗粒的影响

    邸晶美;左玉柱;申小强;顾文源;刘宝京;罗尚星;代飞;常嫣嫣;孔园园;范京惠;

    通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离树突状细胞(DC),经低渗和钾离子缺乏处理或与氯丙嗪、二甲基氨基吡咪、松胞素D、菲律平等药物分别在37℃下作用1h后,再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPVVLPs-E290)在37℃下作用4h,应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示:钾离子缺乏及氯丙嗪对DC的捕获效率无影响,而经二甲基氨基吡咪、菲律平、及松胞素D处理的DC对PPV-VLPs-E290捕获效率明显下降。结果表明:DC对PPV-VLPs-E290的捕获与肌动蛋白及巨胞饮、小窝蛋白介导的方式有关,而与网格蛋白介导的方式无关。

    2016年07期 v.36;No.235 1157-1162页 [查看摘要][在线阅读][下载 1245K]
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  • 猪TLR3 mRNA的表达特征与调控分析及其与感染蓝耳病的关系

    王鹏飞;刘根;李艳平;孙亿;刘浩;张萍;姜运良;

    克隆了猪Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)的部分编码区,分析了其在物种间的同源性;检测了不同组织及感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)前后不同品种猪肺组织TLR3基因mRNA水平的表达变化,分析了猪TLR3基因5′调控区对转录的影响。结果显示:猪与牛、绵羊等哺乳动物TLR3的同源性较高,与鸡、斑马鱼的同源性较低;TLR3mRNA在猪肝脏、肾脏和小肠组织中的表达较高,而在心脏、子宫、淋巴结、大脑、肌肉、大肠和肺组织中的表达较低,在小脑和扁桃体中几乎检测不到其表达;TLR3基因在抗蓝耳病的大蒲莲猪和对蓝耳病易感的杜大长杂交猪肺组织中的表达存在显著差异,大蒲莲猪中的表达量均显著高于杜大长杂交猪(未攻毒,P<0.05;攻毒,P<0.01);攻毒大蒲莲猪肺组织TLR3mRNA表达量升高,杜大长杂交猪的表达量下降;荧光素酶分析表明,5′调控区-2 952bp至-2 603bp、-1 632bp至-1 079bp区段有增强TLR3表达的顺式元件。结果表明:TLR3的高表达可能与猪对蓝耳病的抗性有关。

    2016年07期 v.36;No.235 1163-1167页 [查看摘要][在线阅读][下载 635K]
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  • 主动脉弓狭窄小鼠心脏的病理形态学观察

    白慧称;姜俊兵;尚海豹;刘庆春;李军;朱德生;

    利用B超观察主动脉弓狭窄(transverse aortic constriction,TAC)小鼠心脏随着手术时间的延长所发生的动态变化,探索如何利用病理学方法判断心脏肥厚性改变。以微创手术小鼠TAC模型为研究对象,同步采集不同时间点动物心脏进行B超和组织切片观察,通过心脏B超找出针对该模型动物心脏肥厚的病理学诊断方法。结果显示:病理切片采集的室间隔、左心室厚度与B超采集的相应指标,不具有相关性;而室间隔/右室壁厚度比与B超采集的室间隔、左心室厚度具有明确的相关性,随着手术后时间的延长,心肌细胞也逐渐增大。结果表明:小鼠在接受微创主动脉狭窄手术后,单独B超检查就可以准确地发现心肌肥厚性的改变,而从病理组织学观察来看,单纯的左心室厚度不能作为心肌肥厚的标准,而通过室间隔/右室壁厚度比,以及心肌细胞的大小,可以更准确的反应心肌的肥厚性改变。

    2016年07期 v.36;No.235 1168-1172页 [查看摘要][在线阅读][下载 1145K]
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  • 肉牛宰前运输应激对其血液理化指标及免疫机能的影响

    芦春莲;李妍;曹玉凤;李建国;高艳霞;李秋凤;杨静;蔡华林;

    选择20头体质量500kg左右的西门塔尔杂交牛进行试验,研究肉牛宰前运输应激对其血液理化指标及免疫机能的影响。结果表明:与运输前相比,运输后体质量极显著降低(P<0.01),体温极显著升高(P<0.01);血清谷草转氨酶(P<0.01)、肌酸激酶(P<0.05)、乳酸脱氢酶(P<0.05)和碱性磷酸酶(P<0.05)水平均显著升高;血清葡萄糖(P<0.01)和乳酸(P<0.05)含量显著升高;尿素氮、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、牛羟丁酸、非酯化脂肪酸和总蛋白运输前后变化不大(P>0.05),血清pH值、钾、钠、钙及氯离子浓度无显著变化(P>0.05);血清皮质醇水平显著上升(P<0.05),促肾上腺皮质激素及肾上腺素水平运输前后均差异不显著(P>0.05);血清IgM、IgG水平均显著升高(P<0.05),C-反应蛋白(P<0.01)IL-6(P<0.05)和干扰素(IFN-γ)(P<0.05)显著降低,血清IgA、IL-1β和肿瘤坏死因子运输前后均变化不大(P>0.05)。

    2016年07期 v.36;No.235 1173-1177页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K]
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  • 家兔Ⅰ型肽载体(PepTⅠ)基因的克隆与原核表达

    宁良川;刘磊;吴振宇;伏春燕;李福昌;

    用real-time PCR方法扩增家兔PepTⅠmRNA序列,通过原核表达体外获得家兔PepTⅠ蛋白,旨在制备多克隆抗体。试验通过RT-PCR方法成功扩增出2 001bp的家兔PepTI基因片段,设计特异性引物成功扩增出抗原表位相对集中的1 071bp大小的片段,构建重组表达质粒,获得融合蛋白。结果显示:家兔PepTⅠ基因片段成功的连接到pMD18-T载体上,重组克隆载体双酶切后回收目的片段分别连接到原核表达载体pET-32a、pET-28a,经转化提取质粒测序验证后表明,成功构建原核表达载体pET-32a-P、pET-28a-P,将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)后IPTG诱导,成功表达出PepTⅠ融合蛋白,目的蛋白相对分子质量大小约为44 000,与预期试验结果相符。结果表明:本试验成功扩增出家兔PepTⅠmRNA序列,并且通过原核表达获得家兔PepTI融合蛋白。

    2016年07期 v.36;No.235 1178-1182页 [查看摘要][在线阅读][下载 541K]
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  • 不同杂交组合肉牛背最长肌FAS mRNA表达及其对肌内脂肪沉积的影响

    曲桂娟;董晓庆;孟轲音;杨连玉;丁尚红;秦贵信;

    为了研究不同杂交组合肉牛肌肉FAS mRNA的表达规律及其对肌内脂肪沉积的影响,本试验选择16月龄的西杂、利杂、利草杂交共43头肉牛为研究对象,饲喂相同营养水平的日粮。于试验的第90、180、270天屠宰取背最长肌,索氏提取法测定肌内脂肪含量,荧光定量PCR方法检测FAS mRNA表达水平,分析不同屠宰阶段FAS mRNA变化规律及其对IMF沉积的影响。结果显示:随着肥育时间的延长,IMF含量呈升高的趋势,并且存在种间差异,利杂牛含量最高;FAS mRNA表达量呈升高趋势,相关分析表明,FAS mRNA表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.01)。

    2016年07期 v.36;No.235 1183-1185+1211页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]
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  • 胚盘下腔显微注射慢病毒载体制备转基因鹌鹑

    张自富;赵瑜;胡静;贺东阳;刘锦妮;李洵;章平;刘纪成;张广强;陈培荣;

    利用显微注射法给每枚新鲜鹌鹑种蛋胚盘下腔注射滴度为1×109 TU/mL人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)慢病毒载体1μL,直接封口后孵化出雏,应用倒置荧光显微镜及分子生物学方法检测。结果显示:在注射慢病毒后第4天,倒置荧光显微镜下观察到发育胚胎卵黄膜上绿色荧光蛋白较强表达;试验操作240枚鹌鹑种蛋,孵化出雏34只,孵化率为14.1%;对新出雏鹌鹑解剖后,可检测到喙部、眼部、羽毛、肝脏、肾脏、盲肠、肺脏、小肠、大肠、输卵管、心脏、胸肌及大脑等内脏器官中绿色荧光蛋白广泛性表达,但在性腺中绿色荧光蛋白表达信号较弱;对发育到性成熟期的G0代19只雄性鹌鹑精液基因组聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测,其中3只为阳性,阳性率为15.7%(3/19);在3只阳性雄性鹌鹑的236只后代中,有4只经PCR及印迹杂交(Southern-blot)检测为阳性,阳性率为1.69%(4/236)。结果表明:利用慢病毒载体胚盘下腔注射成功生产出转基因鹌鹑,为转基因禽类制备提供了一种简便易行的好方法。

    2016年07期 v.36;No.235 1186-1192页 [查看摘要][在线阅读][下载 1931K]
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  • 苦参碱对奶牛乳房炎产膜表皮葡萄球菌Ⅰ类整合酶基因表达量的影响

    乔霞;李雪;何芳;卢金霞;周学章;

    为探究苦参碱对产膜表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)Ⅰ类整合酶基因(class 1integrase gene,intI1)的影响,本试验采用二倍稀释法分别测定苦参碱、苦豆子碱、卡那霉素和头孢西汀对SE的最低抑菌浓度(MIC);利用棋盘滴定法测定4种药物对SE的联合作用的效果;用XTT法测定不同质量浓度下药物对产膜阳性菌株的抑菌效果并绘制其抑制曲线;采用荧光定量PCR方法分析药物对生物膜状态下intI1在mRNA水平表达的影响。结果显示:苦参碱、苦豆子碱、卡那霉素和头孢西汀对产膜阳性菌株的MIC分别是12.5g/L、20g/L、512mg/L、128mg/L;它们在亚抑菌浓度下均对产膜阳性菌株有一定的抑菌作用;取1/2MIC的药物质量浓度对产膜阳性菌株作用2h和4h,发现苦参碱作用4h后intI1基因表达量下调,表明苦参碱对在生物被膜状态下的SE中intI1在mRNA水平上有抑制作用,提示苦参碱对被膜状态下的SE的整合酶基因表达量有一定的抑制作用,从而影响整合子在生物被膜状态下捕获耐药基因的能力。

    2016年07期 v.36;No.235 1193-1196+1246页 [查看摘要][在线阅读][下载 572K]
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  • 甘草提取物对左氧氟沙星在鸡体内药动学的影响

    杨锐;袁定胜;李旭廷;王斌;李思聪;张敏;李金良;

    将20只鸡随机分成对照组和试验组,对照组单剂量灌胃给予左氧氟沙星(levofloxacin,LVLX)10mg/kg;试验组左氧氟沙星10mg/kg与甘草提取物0.3g/kg合用。采用HPLC法测定血药质量浓度,并以DAS2.0软件计算并比较主要药动学参数。结果显示:对照组和试验组左氧氟沙星的主要药动学参数C_(max)分别为(1.415±0.116)、(1.321±0.165)mg/L,t_(max)分别为(1.983±0.172)、(2.365±0.325)h,AUC_(0~36h)分别为(8.659±0.852)、(9.415±1.176)mg·L~(-1)·h~(-1),t_(1/2)分别为(3.714±0.674)、(8.341±0.853)h,MRT_(0~36h)分别为(4.116±0.238)、(6.648±0.676)h,Vz/F分别为(3.154±0.296)、(3.315±0.436)L/kg。与对照组相比,试验组药动学参数C_(max)降低,AUC_(0~36h)、Vz/F增大,但差异均不显著(P>0.05);t_(max)、t_(1/2)、MRT_(0~36h)均极显著增大(P<0.01)。结果表明:合用甘草提取物和左氧氟沙星,甘草提取物能减慢左氧氟沙星在体内的吸收和消除速度,延长药物在体内的作用时间。

    2016年07期 v.36;No.235 1197-1200页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K]
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临床兽医学

  • Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型的构建与验证

    刘丹丹;张伟;朱浩;马晓宇;姜梦如;毕凯璇;丁飞;刘艳成;王炼;杨英;

    将171只体质量200~250g 7周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(Ⅰ组,25只)和Ⅱ型糖尿病模型组(Ⅱ组,146只),采用高脂高糖饲料喂养结合STZ腹腔注射的方法建立Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型,定期对大鼠体质量、空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素及胰腺组织等指标进行检测。结果显示:第42天,与正常对照组相比,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.05),血糖无明显差异(P>0.05),糖耐量曲线下面积增大(P<0.05),胰腺外分泌腺内大量脂肪异位沉积;第56天,与正常对照组相比,模型组体质量显著降低(P<0.05),血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.05),糖耐量曲线下面积显著增大(P<0.05),胰岛素敏感指数显著降低(P<0.05),胰岛减小、减少,胰岛形状不规整,部分胰岛细胞内脂质沉积;模型组成模率70%、死亡率5%、淘汰率25%。结果表明:对SD大鼠采用高脂高糖配方饲料结合低剂量链脲佐菌素腹腔注射可成功制备Ⅱ型糖尿病大鼠动物模型,并具有Ⅱ型糖尿病基本特征胰岛素抵抗及胰岛β细胞轻度损伤同时出现的临床特点,是研究Ⅱ型糖尿病及其新药开发的理想动物模型。

    2016年07期 v.36;No.235 1201-1205页 [查看摘要][在线阅读][下载 501K]
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  • 产褥期子宫炎对奶牛抗氧化能力、部分细胞因子、结合珠蛋白的影响

    查斯图;张帅洋;刘颖;冯平;李云章;

    通过检测顺产后患产褥期子宫炎奶牛抗氧化能力、细胞因子变化和结合珠蛋白变化情况,为后期产褥期子宫炎治疗保健研究提供参考。选用20头产后健康荷斯坦奶牛为对照组(N组),产褥期子宫炎5例(PM),产后前10d检测体温;分别在产后3、7、14、21d经颈静脉采血,用试剂盒检测抗氧化能力、部分细胞因子和结合珠蛋白。结果显示:PM组体温在4~10d之间高于N组,其中第5、8天差异显著;PM组CAT、T-AOC、GSH-Px分别在3、7、7d显著高于N组,2组SOD、MDA差异不显著;N组IL-6、TNF-α分别在21、14d显著高于PM组。结果表明:产褥期子宫炎奶牛CAT、T-AOC、GSH-Px等抗氧化指标升高,细胞因子IL-6、TNF-α降低,进行药物对奶牛产褥期子宫炎的治疗保健效果评价试验时可参考上述变化显著的指标。

    2016年07期 v.36;No.235 1206-1211页 [查看摘要][在线阅读][下载 343K]
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  • 复合抗菌肽“态康利保”对断奶仔猪组织抗氧化功能的影响

    金海涛;但启雄;袁威;田春雷;邓惠丹;邓又天;任志华;梁珍;高爽;邓俊良;

    选取90头25日龄健康的杜长大三元杂交断奶仔猪,按体质量相近、公母各半原则随机分成5组,对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,Ⅱ组基础日粮+黄芪多糖400mg/kg,Ⅲ~Ⅴ组基础日粮+复合抗菌肽"态康利保"250、500、1 000mg/kg。检测断奶仔猪第39、53日龄时脾脏、肝脏、肺脏和肾脏组织SOD、GSH-Px、CAT活性和T-AOC、抑制OH·能力及MDA含量,探讨复合抗菌肽"态康利保"对断奶仔猪组织抗氧化功能的影响。结果显示:添加黄芪多糖和不同质量浓度"态康利保"均能明显提高断奶仔猪脾脏、肝脏、肺脏和肾脏组织SOD、GSH-Px、CAT活性和TAOC、抑制OH·能力,降低组织MDA含量(P<0.05或P<0.01),且有剂量依赖效应;Ⅳ组和Ⅴ组抗氧化指标优于黄芪多糖Ⅱ组,以Ⅴ组效果更佳。结果表明:复合抗菌肽"态康利宝"能够有效提高断奶仔猪组织抗氧化能力,提高仔猪抗氧化应激能力。

    2016年07期 v.36;No.235 1212-1217+1258页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K]
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  • 迷迭香提取物对京海黄鸡生长性能、免疫器官指数和血清抗氧化性的影响

    刘亚楠;李爱华;谢恺舟;张跟喜;戴国俊;王金玉;

    选取同一批次孵化的1日龄京海黄鸡800只,随机分成10个组,1~9组为试验组,10组为对照组,每组4个重复,每个重复20只(公、母各半)。1~3试验组分别在基础日粮中添加水溶性迷迭香提取物100、150、200 mg/kg,4~6试验组分别在基础日粮中添加脂溶性迷迭香提取物100、150、200mg/kg,7~9试验组分别在基础日粮中添加混合(水溶性+脂溶性)迷迭香提取物(50+50)、(75+75)、(100+100)mg/kg构成各试验组日粮,10组饲喂基础日粮。试验期112d。结果显示:迷迭香提取物能显著改善京海黄鸡生长性能(P<0.05);提高京海黄鸡胸腺指数(P<0.05),但对脾脏和法氏囊指数无显著影响(P>0.05);200mg/kg脂溶性迷迭香提取物添加水平显著提高了血清的总抗氧化能力(P<0.05),200 mg/kg混合迷迭香提取物添加水平显著降低了血清丙二醛含量(P<0.05)。由此可知,200mg/kg脂溶性和混合迷迭香提取物添加水平能够提高京海黄鸡血清的抗氧化能力。

    2016年07期 v.36;No.235 1218-1223+1272页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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动物科学

  • 钼对子代小鼠卵母细胞发育潜能及卵巢超微结构的影响

    王宏伟;周变华;曹晓丹;宋超;刘凤军;张才;

    在饮水中添加终质量浓度分别为100、200、400mg/L的钼,于试验处理第90天时,将试验雌性鼠与健康雄性昆明鼠合笼,产生子代(F1和F2代),分析子代小鼠2-细胞、囊胚、怀孕率、产仔数和仔鼠初生质量,采用HE染色和透射电镜观察钼对子代小鼠卵巢组织形态学和卵巢细胞超微结构变化。结果显示:过量的钼显著降低了F1和F2代雌鼠的怀孕率、产仔数和仔鼠初生质量,使卵母细胞和受精卵发生了明显的病理形态学损伤,诱导了小鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞超微结构的损伤。结果表明:过量的钼降低了小鼠卵母细胞的发育潜能,具有较强的雌性生殖毒性。

    2016年07期 v.36;No.235 1224-1228页 [查看摘要][在线阅读][下载 1934K]
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  • 水牛精子蛋白质图谱的构建及生物信息学

    黄德伦;付强;官俊良;黄愉淋;陈富美;王焕景;赵秀玲;黄凤玲;梁贤威;张明;

    以水牛为研究对象,应用SDS-PAGE电泳分离和LTQ-Orbitrap高分辨率组合式质谱构建水牛精子蛋白质图谱,鉴定出了1 074个精子蛋白质。用生物信息学手段对水牛精子蛋白质进行GO分类,其中参与细胞代谢的蛋白质所占比例最大,说明了成熟精子进行着旺盛的代谢活动,为其受精等活动提供能量准备。生物信息学分析结果显示,参与翻译后修饰的蛋白质有36%,说明成熟的精子在RNA转录和翻译水平上基本处于沉默状态时,主要靠蛋白质的翻译后修饰来实现细胞的功能。本试验为水牛精子细胞增殖发育研究、提高水牛精子活力以及受精机理研究提供了新的手段和信息。

    2016年07期 v.36;No.235 1229-1233页 [查看摘要][在线阅读][下载 1114K]
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  • 济宁青山羊生后乳腺GHR和IGF-ⅠR的分布及其mRNA表达的发育性变化

    常新侠;王树迎;于学浩;黄丽波;侯衍猛;

    采用SABC法检测济宁青山羊生后发育过程中生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)与胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin like growth factorⅠreceptor,IGF-ⅠR)在乳腺组织中的分布;GAPDH作为内参基因,qRT-PCR法检测GHR mRNA与IGF-ⅠR mRNA相对表达量。结果显示:GHR和IGF-ⅠR阳性物质主要在乳腺组织内的导管上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞的胞质中表达,细胞核偶有表达;GHR和IGF-ⅠR阳性细胞光密度值与其mRNA表达趋势基本一致,但IGF-ⅠR的表达量低于GHR;GHR和IGF-ⅠR在出生当天表达水平较低,60日龄(初情期)和120日龄(性成熟)出现峰值(P<0.05),120日龄后逐渐下降。结果表明:济宁青山羊生后发育时期,GHR与IGF-ⅠR对乳腺的生长发育具有重要的调节作用,初情期和性成熟期可能是乳腺生长发育最快的阶段。

    2016年07期 v.36;No.235 1234-1240页 [查看摘要][在线阅读][下载 3241K]
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  • 甘加型藏羊发情周期阴道细胞变化规律

    韩志磊;史军红;何玉琴;火静萍;王文芳;刘英;

    采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细胞、不完全角化上皮细胞、完全角化上皮细胞、白细胞和细胞碎片。发情期角化细胞所占比例最高,显著高于发情前期、发情后期和间情期(P<0.05);发情前期表层上皮细胞所占比例显著高于其他三个时期(P<0.05);间情期和发情后期白细胞所占比例显著高于发情前期和发情期;中间层上皮细胞在各时期所占比例差异不显著(P>0.05)。结果表明:根据涂片中阴道细胞种类和各类细胞所占比例的变化特点可以简便、快速准确地鉴定和区分甘加母羊发情周期的不同阶段,阴道凃片是高效、准确的发情鉴定方法。

    2016年07期 v.36;No.235 1241-1246页 [查看摘要][在线阅读][下载 870K]
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  • 提高茸鹿冻精质量关键技术

    韩欢胜;赵列平;姜昊;魏巍;柴孟龙;张嘉保;高利;

    为进一步提高茸鹿冻精质量,对影响精液冷冻效果的关键因素进行了试验。结果评估得出:精液冷冻宜采用两步冷冻法,细管距液氮面2~3cm,冷冻时间5~7min;冷冻稀释液优先顺序为Trilady>TrisB>TrisA,Trilady稀释液从经济适用和冷冻效果上看最优;鲜精质量与冷冻效果密切相关,鲜精活力与冻存复苏率、解冻后精子活力呈正相关,R2分别为0.630 6和0.990 2;平衡时间在4℃宜平衡2~3h;平衡方法宜采用水浴中逐渐降温的方法。结果表明:通过进一步优化精液冷冻关键影响因素,可明显提高茸鹿冻精质量。

    2016年07期 v.36;No.235 1247-1250页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K]
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综述

  • 猪支原体肺炎疫苗研究进展

    付启欢;丁红雷;吴建云;

    <正>猪支原体肺炎(mycoplasmal pneumonia of swine,MPS),又称为猪地方性肺炎(porcine enzootic pneumonia)、猪喘气病或猪气喘病,它是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)引起的一种慢性、接触性传染病,通过呼吸道在猪和猪群之间传播,不同性别、年龄、品种的猪均能感染,严重影响饲料报酬和日增重,且容易造成与其他病原微生物的混合感染和继发感染,引起猪呼吸系统疾病

    2016年07期 v.36;No.235 1251-1255页 [查看摘要][在线阅读][下载 131K]
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  • 西班牙非洲猪瘟根除计划的经验与借鉴

    戈胜强;孙成友;吴晓东;张志城;张永强;赵永刚;梅凝香;刘华雷;王志亮;

    <正>非洲猪瘟(African swine fever,ASF)于1921年由Montgomer[y1]首次报道。1928年,Steyn等[2]发现该病也在南非出现。此后有报道称,1933年到1934年发生于南非的非洲猪瘟疫情共涉及11 000头猪,其中8 000多头死亡,2 000多头销毁,只有862头存活,其严重程度可想而知[3]。该病发现的早期只限流行于东非和南非部分地区,而在1957年,该病从安哥拉传入葡萄牙的里斯本,虽然很快被扑灭,但在1960年该地区又暴发疫情,并在亚平宁半岛广泛流行。随后西班牙(1960年)、法国

    2016年07期 v.36;No.235 1256-1258页 [查看摘要][在线阅读][下载 102K]
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  • 自体红细胞凝集试验及其在动物传染病诊断中的应用

    王力波;赵武;马玲;吴健敏;

    <正>自体红细胞凝集试验(autologous erythrocyte agglutination,AGEN)由澳大利亚学者Kemp等[1]于20世纪80年代末期首次提出,是一种针对血液中被检物快速筛查的方法,已成功应用于人类艾滋病病毒Ⅰ型抗体、的检测。自体红细胞凝集试验的反应原理还是基于抗原抗体的特异性结合,能够和凝集反应一样,出现肉眼可见的颗粒凝集。但是,它

    2016年07期 v.36;No.235 1259-1265页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K]
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  • Hedgehog、p53和NF-κB信号通路在病原微生物入侵机体时的免疫应答机制

    任奇杰;程龙;丁向真;杨易;周学章;刘晓明;李勇;

    <正>病毒、细菌等致病病原微生物一旦入侵机体,免疫系统会迅速启动抗感染免疫应答反应,但长期困扰免疫学界的问题是免疫系统通过什么样的细胞与分子机制特异性感知外源病原微生物入侵,并有效地启动免疫应答效应以杀伤、清除病原微生物,以及能否准确预测外源病原体入侵时机体做出的应答。以往的研究发现,免疫细胞识别与应答病原体时,Toll样受体(TLR)可通过病原相关分子模式

    2016年07期 v.36;No.235 1266-1272页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K]
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